离子色谱法-紫外检测注射液中脱氧核苷酸钠
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图1. 某纯度较差注射液样品及加标谱图对比 （1, 注射液样品; 2, 加标150 mg/L混标）
待测物 dCMP dAMP dTMP dGMP
表3. 标准工作曲线的线性范围、相关系数和检测限
标准拟合方程 y=0.0285x-0.0123 y= 0.0632x -0.0353 y= 0.0286x+ 0.0056 y= 0.0688x -0.0291
1
140
2 mAU
100
50
02 1
-40 0.0
2 - dAMP 1 - dCMP
200mg/l-injection injection+150mg/l
4 - dGMP 3 - dTMP
5.0
10.0
15.0
WVL:260 nm
min
20.0
25.0
Peakname dCMP A dAMP B dTMP C dGMP D
线性范围 (mg/L) 0.5-500 0.5-500 0.5-500 0.5-500
相关系数 (r2) 0.99991 0.99991 0.99996 0.99998
检测限/ (mg/L) 0.3 0.2 0.2 0.1
待测组分 dCMP dAMP dTMP dGMP
表4. 部分样品测定结果及加标回收率
对于脱氧核苷酸的检测，现有药典方法推荐使用 Whatmen Partisil-5 SAX色谱柱分离[1]，分离效果较差，且 硅胶基离子交换柱使用寿命短。本文则着重研究了高分子 聚合物机制的DNAPac 系列阴离子交换色谱柱用于脱氧核 苷酸的分离[2]，并将之应用于多种不同品质的注射用脱氧 核苷酸钠制品的测试。
测试条件
仪器：ICS 3000多功能离子色谱仪包含：四元梯度 泵， DC模块，VWD3400，AS自动进样器
色谱柱： DNAPac PA100, 13 µm, 4 mm×250 mm （P/N: 043010），DNAPa
方法重现性、回收率及样品测试结果
以注射用脱氧核苷酸钠为研究对象，连续十针进 样，重现良好，保留时间的RSD小于1%，而峰高和峰面 积则RSD在1~2%之间。样品经处理后直接进样分析，图 2为某纯度较差注射液样品及加标谱图对比，加标回收率 在101.9～104.8%之间（参见表4），表明样品基体组分 对脱氧核苷酸测定不存在明显影响。
柱温：20 ℃；流速：1.50 mL/min；进样方式：自动 进样；定量环：10 µL；
淋洗液：A, 超纯水；
B, 17mmol/L磷酸钠/ 50mmol/L 氢氧化钠；
C, 270mmol/L高氯酸钠；
D, 100mmol/L高氯酸钠；
梯度淋洗表参见下表：
表1. 梯度淋洗液表
时间 (min)
A
B
C
D
0
96
4
0
0
6
96
4
0
0
6.01
86
14
0
0
15
72
14
0
14
19
16
14
0
70
19.01
6
14
80
0
19.50
6
14
80
0
19.51
96
4
0
0
25
96
4
0
0
检测方式：紫外检测，波长：260 nm。
2
样品前处理
表2. 梯度条件优化后谱图结果
注射用脱氧核苷酸钠50 mg先以2 mL超纯水溶解，并 稀释至200 mg/L ，直接进样。注射液直接用超纯水稀释 至200 mg/L，直接进样。
Application Note C_IC-065
离子色谱法-紫外检测注射液中脱氧 核苷酸钠
李仁勇 赛默飞世尔科技（中国）有限公司
关键词
离子色谱；紫外检测；DNAPac PA100；注射液；脱氧核苷酸钠
Keywords：
Ion Chromatography; UV; DNAPac PA100; injections; deoxynucleotide sodium
Resol.(EP) 1.98 2.28 2.40 20.41 4.07 7.18 7.53 7.23
Asym.(EP) 0.91 0.94 0.83 1.09 1.15 0.92 0.93 0.92
Plates(EP) 6587 7701 9480 5593 43500 38529 33069 59617
标准曲线和方法检出限
dCMP、dAMP、 dTMP和dGMP在0.5-500 mg/L浓 度范围内都具有良好的线性，标准曲线拟合方程见表3 所示，相关系数在0.99991~0.99998。根据3倍信噪比 （Signal/Noise=3）可分别计算出四种待测组分的检出限 分别为0.3，0.2，0.2 和0.1 mg/L。
引言
脱氧核苷酸钠是一种具有遗传特性的化学物质，其在 个体的生长、繁殖、遗传、变异等生理生化功能方面起着 非常重要的作用。目前常用注射用脱氧核苷酸是用脱氧核 糖核酸（DNA）为原料，经生物酶催化水解反应生成脱 氧腺苷酸（dAMP），脱氧鸟苷酸（dGMP）、脱氧胞苷 酸（dCMP）和脱氧胸苷酸（TMP）等四种脱氧核苷酸， 然后经层析分离获得高纯度四种单一脱氧核苷酸产品。医 药常使用复方制剂，组分包含脱氧糖胞嘧啶核苷酸、脱氧 核糖腺嘌呤核苷酸、脱氧核糖胸腺嘧啶核苷酸及脱氧核糖 鸟嘌呤核苷酸钠盐。用于急、慢性肝炎，白细胞减少症， 血小板减少症及再生障碍性贫血等的辅助治疗。
样品测得值 (mg/L) 223.07 227.58 177.79 96.67
加标量 (mg/L) 150.00 150.00 150.00 150.00
加标测得值 (mg/L) 377.48 380.42 334.97 252.81
回收率 102.9% 101.9% 104.8% 104.1%
Application Note C_IC-065
结果和讨论
色谱条件的选择
比较了DNAPac PA100和200对于此类样品的适用能 力，相对比防线，PA100色谱柱对相对保留较弱的dCMP 和dAMP具有更好的分离效果，而在PA200上则非常难 分开这两个主成分后的杂质峰。通过梯度条件的不断改 进，最终可保证四种主成分与四个主要杂质，小分子碱 基和聚核苷酸的良好分离，色谱柱见图1。且峰形尖锐， 柱效高，以组分复杂的脱氧核苷酸注射液为例，选择4个 主峰及4个主杂质峰（每个主峰后对应一个峰）为研究对 象，其相应分离度和峰数据如下表2。
