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新型结核分枝杆菌核酸检测试剂盒的临床应用初步评价

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结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂临床试验研究要点解析

结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂临床试验研究要点解析

结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂临床试验研究要点解析刘容枝;李耀华
【期刊名称】《中国防痨杂志》
【年(卷),期】2016(038)009
【摘要】结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂具有提高痰涂片阴性肺结核的检出率及肺结核诊断的特异度的优点,并可相对快速地鉴别结核分枝杆菌复合群与非结核分枝杆菌.结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂在临床试验中应注意临床试验机构、对比试剂、样本等的选择,以及样本前处理方法和核酸提取方法的临床验证等问题.作者将主要对该类试剂在临床试验中的上述重点问题进行阐述.
【总页数】3页(P765-767)
【作者】刘容枝;李耀华
【作者单位】100044 北京,国家食品药品监督管理总局医疗器械技术审评中心;100044 北京,国家食品药品监督管理总局医疗器械技术审评中心
【正文语种】中文
【相关文献】
1.蓝谱Loopamp®结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒 [J],
2.结核分枝杆菌复合群脱氧核糖核酸检测试剂分析性能评估浅析 [J], 刘容枝
3.结核分枝杆菌核酸检测试剂生产质量控制与临床研究概述 [J], 陈保文;沈小兵;都伟欣;杨蕾;苏城;王国治
4.新型结核分枝杆菌核酸检测试剂盒的临床应用初步评价 [J], 冯庆芳;何小宁;王小婷;周翠蕃
5.某国产人类免疫缺陷病毒1型核酸定量检测试剂的临床试验研究 [J], 周全华;王越;刘华;廖莉;陈玲;张媛媛;张敏
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结核分枝杆菌实验室检测产品和技术应用进展

结核分枝杆菌实验室检测产品和技术应用进展

目前，结核分枝杆菌检测方法主要包括菌种培养、显微镜检查、分子生物学 技术和免疫学技术等。菌种培养是诊断结核病的金标准，但培养周期长、操作繁 琐，不适用于早期快速诊断。显微镜检查可观察到痰液中结核分枝杆菌的形态， 但灵敏度较低。分子生物学技术如聚合酶链反应（PCR）等具有高灵敏度、快速 等优点，但设备昂贵、操作复杂。免疫学技术如酶联免疫吸附试验（ELISA）等 具有良好的特异性，但易受交叉反应影响。
3、代谢热谱技术代谢热谱技术是一种通过测定样品代谢过程中产生的热量， 实现对目标分子检测的方法。近期，有研究团队利用代谢热谱技术成功检测出结 核分枝杆菌，并初步探讨了不同菌种对热谱的影响。该方法具有无损、快速等优 点，有望为结核病的早期诊断和耐药性分析提供新途径。
三、结论
结核分枝杆菌快速检测方法在近年来取得了显著进展，但仍存在不足之处。 现有的方法在灵敏度、特异性、操作简便性和成本等方面仍需进一步优化。为了 有效控制结核病传播，未来的研究应着重以下几个方面：
3.市场应用前景和政策因素对技 术发展的影响
随着全球结核病疫情的加剧和对结核病诊断与治疗的需求增加，预计未来将 有更多的创新技术在结核分枝杆菌实验室检测领域得到应用和推广。此外，政策 因素也将对技术的发展和应用产生重要影响，如政府对相关研究和开发的支持、 对新技术的引进和推广的政策倾斜等。
总之，结核分枝杆菌实验室检测产品和技术应用进展在提高诊断效率和准确 性、降低检测下限和提升阳性结果的准确率等方面取得了显著成果。未来，随着 传统技术的不断改进和现代技术的不断创新，预计将在结核病的早期诊断、治疗 和预防控制等方面发挥更加重要的作用。
2、生物传感器技术生物传感器是一种将生物分子识别元件与转换元件结合， 用于检测目标分子的分析装置。在结核分枝杆菌检测方面，生物传感器技术显示 出巨大潜力。一种新型的生物传感器可通过电化学信号转换，实现对结核分枝杆 菌的高效检测。该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好等优点，有望实现结 核病的床旁快速诊断。

结核分枝杆菌TBSA抗体检测试剂盒胶体金法对于结核病的诊断价值评估

结核分枝杆菌TBSA抗体检测试剂盒胶体金法对于结核病的诊断价值评估
４
结核分枝杆菌ＴＢ－ＳＡ抗体检测试剂盒（胶体金法）对于 结核病的诊断价值评估 前言
结核病是一种慢性传染病，严重危害人民健康。对结核病做出快速、准确 的诊断是临床工作中的一个难点。虽然细菌学诊断是结核病诊断的“金标准”，但 由于痰涂片检查抗酸杆菌存在阳性率低，而痰结核分枝杆菌（结核菌）培养又存 在耗时太长的缺点，因而发展快速而准确的诊断方法迫在眉睫，对于结核病病的 早发现、早治疗有积极意义。
５
１材料与方法
１．１考核对象及分组标准
１．１．１Ｉ临床考核对象 根据试验需要，拟选结核病患者、非结核的其他肺部疾病疾病患者及健康志
愿者共计２５０例进行本项临床研究。全部入选病例的年龄为１８．７５岁，男女不限， 无免疫系统疾病。 １．１．２分组标准
上述２５０例研究对象按如下标准分为三组： 结核病组（总共１５０例：菌阳结核５０例，菌阴结核５０例，肺外结核５０例）：
分类号：
Ｂ３墨
ＵＤＣ：
密级：
重庆医科大学
硕士学位论文
结核分枝杆菌ＴＢ－ＳＡ抗体检测试剂盒（胶体金法）对于
论文题目
结核病的诊断价值评估
作者姓名
辛田田
指导教师姓名（职称、单位名称）
黎友伦主任医师
重庆医科大学附属第一医院呼吸内科
申请学位级别
硕士
学科、专业名称 临床医学（内科学）
论文答辩年月２０１３年ຫໍສະໝຸດ 月２０１３年４月６
１．２试剂
试验组试剂为成都赛普克生物科技股份有限公司提供的ＴＢ．ＳＡ抗体检测试剂 盒；对照组试剂为厦门波生生物技术有限公司生产的结核分枝杆菌抗体ＩｇＧ检测 试剂盒。按实际入选例数提供所需结核分枝杆菌ＴＢ－ＳＡ抗体检测试剂盒（胶体金 法）和同类参比试剂。
１．３实验方法

TB快速检测试剂盒的应用评价

TB快速检测试剂盒的应用评价

TB快速检测试剂盒的应用评价摘要】目的结核分枝杆菌是引起结核病的主要原因,结核分枝杆菌的快速诊断尤为重要，它能给临床提供正确的诊断依据，目前市场上检测结核分枝杆菌方法虽多，但灵敏度和特异性参差不齐。

方法我室选用结核快速诊断试剂盒，通过对3285例有发热咳嗽等临床症状的住院和门诊病人初筛与细菌学、CT、胸片、结核菌素实验的比对。

结果快速诊断试验组阳性率明显高于其他组有显著性差异P<0.05，与临床诊断确诊组无显著性差异P>0.05,说明在基层卫生组织尤其是广大农村更快更正确诊断结核病快速切断传染源尤为重要,建议试剂厂家尽快生产出灵敏度强和特异性高的快速诊断试剂盒，以满足临床之急需。

【关键词】结核分枝杆菌快速检测灵敏度结核病是一种古老的传染病。

据世界卫生组织估计，全球每年新发结核病患者880万例，每年因结核病死亡的患者约200万。

我国的结核病人数据世界第三位，患者人数仅次于印度，鉴于我国结核病流行现状，对于结核病的快速诊断显得尤为重要。

我室现用结核杆菌快速诊断试剂盒，对结核病的诊断方便，快速，结果可靠可作参考，相比以前几个厂家的灵敏度和特异性有提高，这次我们对3285例检测结果和胸透、CT、细菌学、结核菌素试验比对有显著性差异P<0.05。

1 材料和方法1.1原理本试剂盒以纯化的基因工程克隆、表达结核(TB)特异性蛋白抗原38KD固定于纤维膜表面。

使用时加入待检血清，如样品中含有抗TB特异性抗体，则可与膜表面的相应抗原结合形成复合物，该复合物随即与金标记物结合而呈现紫红颜色。

颜色的强度直接与样品中存在的抗TB特异性抗体lgG的量呈正比。

1.2方法一是测试所需器具：微量加样器，加样吸头。

二是取出测试板，置于一平面操作台上，平衡至室温。

三是加样：微量加样器加样孔(S)加入未稀释的待测血清100μL。

1.3要求血清标本按常规方法由静脉采集。

5天内测定的标本可放置4℃保存。

标本放置在-20℃至少可保存3个月。

结核分枝杆菌巢式PCR诊断技术的建立和初步评价

结核分枝杆菌巢式PCR诊断技术的建立和初步评价

结核分枝杆菌巢式PCR诊断技术的建立和初步评价刘景;陈创夫;张辉;曹旭东;任艳;唐丽燕【期刊名称】《新疆农业科学》【年(卷),期】2008(045)004【摘要】以结核分枝杆菌特有的插入序列IS6110设计巢式PCR引物,对痰样本结核分枝杆菌的基因组DNA进行扩增,建立了检测结核病病原的巢式PCR诊断方法,试验验证有较好的特异性和敏感性,采用此方法扩增结核分枝杆菌可以获得244 bp 的目的片段,对常见病原菌金黄色葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、李氏杆菌、布鲁氏菌等以及无结核病史的痰样本检测阴性,通过扩增不同浓度梯度稀释的模拟阳性痰样本确定了其敏感性为4个拷贝/反应.对送检的41份痰样本采用本方法进行检测,阳性率为60.98%.【总页数】5页(P738-742)【作者】刘景;陈创夫;张辉;曹旭东;任艳;唐丽燕【作者单位】石河子大学动物科技学院,新疆石河子832002;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832002;新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室,新疆石河子832002;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832002;石河子大学医学院,新疆石河子832002;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832002;石河子大学动物科技学院,新疆石河子832002【正文语种】中文【中图分类】R-33【相关文献】1.猴巨细胞病毒巢式PCR检测方法的建立与初步应用 [J], 王莎莎;贺争鸣2.鸡细小病毒半巢式PCR检测方法的建立及初步应用 [J], 奉彬;罗思思;邓显文;谢志勤;刘加波;宋中宝;林二克;谢芝勋;张艳芳;黄娇玲;王盛;范晴;黄莉;谢丽基;曾婷婷3.猪圆环病毒2型巢式PCR检测方法的建立与初步应用 [J], 于静;陈彦永;何小江;代兵;赵阿勇;王晓杜;宋厚辉4.白色念珠菌巢式PCR法的建立和临床应用初步评价 [J], 钱小毛;赵仲农;王亚玲;5.肠道轮状病毒巢式PCR检测方法的建立及初步应用 [J], 刘爱玲; 刘爱胜; 罗小芳; 吴敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析

结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析

结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析快速准确地诊断出结核分枝杆菌感染是控制和治疗结核病的前提和关键。

多年来，结核杆菌的诊断技术在不断地发展和创新，近年来，一些针对结核杆菌检测的新方法陆续被报道，一些新型的诊断技术产品也陆续上市。

本资料综述了结核杆菌的主要诊断方法，并对目前国际市场上广泛应用的商业化诊断技术产品进行了简要分析。

标签：结核分枝杆菌；诊断技术；分析Advance in diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis and analysis of new diagnostic technologies and products in clinical applicationFENG?Meimei1??SU?Wenqin21.Haikou VTI Biological Institute,Haikou 570311,China;2.Department of Pharmacy,Hainan Medical College,Haikou 571199,China[Abstract] Fast and accurate diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection is the key and prerequisite to control and treatment tuberculosis.For many years,the diagnostic techniques of Mycobacterium tuberculosis have been developing and innovating.In recent years,some new techniques for Mycobacterium tuberculosis detection were reported and some new diagnostic products have been listed.This paper reviewed the main diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis,and analysed briefly the commercialized diagnostic products which are used widely in the international market now.[Key words] Mycobacterium tuberculosis;Diagnosis;Analysis结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）是引起结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，以肺结核最多见。

结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药情况研究

结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药情况研究摘要:目的:对结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药性进行分析。

方法：筛选我院在一年之间抽取的120例结核病患者的痰液共360份进行研究，进行涂片镜检、罗氏固体培养、BACT/ALERT3D60液体培养及Genexpert分子检测等4种实验室检测，观察检测结果及药敏实验结果。

结果：虽然Genexpert分子检测阳性率与液体培养阳性率相似，但分子检测时间更快，使用Genexpert分子检测所需时间更短(P<0.05)；结核分支杆菌对氧氟沙星的耐药性最高。

结论:通过对结核分支杆菌进行实验室检测发现，Genexpert分子检测对结核分枝杆菌的诊断具有重要价值，同时结核分枝杆菌对临床上经常使用的抗结核药物均有一定的耐药性，值得引起重视。

关键词：结核分支杆菌；检测方法；耐药Methodological evaluation of laboratory test and study on drug resistance of Mycobacterium tuberculosisXiao Huixia, Wang Furui, Wang Xiaoping, Liu Jing, Chen Min, Tian XushengReference Laboratory of Tuberculosis, The Fourth People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Yinchuan 750021, ChinaAbstract: Objective: To evaluate the laboratory testing methodology and analyze the drug resistance of Mycobacterium tuberculosis. Method: a total of 360 samples of sputum extracted from 120 tuberculosis patients in our hospital within one year werescreened for study. Four laboratory tests were conducted, including smear microscopy, Roche solid culture, BACT/ALERT3D60 liquid cultureand Genexpert molecular detection, to observe the detection resultsand drug sensitivity test results. Results: Although the positive rate of Genexpert molecular detection was similar to that of liquid culture, the molecular detection time was faster and the detection timerequired by Genexpert molecular was shorter (P<0.05). Mycobacterium tuberculosis showed the highest resistance to ofloxacin. Conclusion: Laboratory testing of Mycobacterium tuberculosis showed that Genexpert molecular testing was of great value in the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis. Meanwhile, Mycobacterium tuberculosis showed certaindrug resistance to anti-tuberculosis drugs frequently used in clinical practice, which was worthy of attention.Key words: Mycobacterium tuberculosis; Detection method; Drug resistanc结核分枝杆菌作为结核病的重要致病菌，在人群中得到广泛传播，在外界的环境中存在比较强的抵抗力，这也就导致耐药菌株比较容易出现[1]。

结核分枝杆菌胶体金法快速诊断试剂的临床应用评价

结核分枝杆菌胶体金法快速诊断试剂的临床应用评价
廖光付;陈敬捷
【期刊名称】《右江民族医学院学报》
【年(卷),期】2005(027)006
【摘要】目的评价结核分枝杆菌胶体金法快速诊断试剂的临床应用价值.方法用该试剂检测166株分枝杆菌,其中结核分枝杆菌123株,牛分枝杆菌2株,非结核分枝杆菌41株.结果该试剂的敏感性为98.40%,特异性为100%,准确度为98.80%.结论该试剂用于结核分枝杆菌复合群与分枝杆菌的快速鉴别具有操作简单、快速、灵敏度高、特异性好,并且不需特殊设备,适于各级实验室使用.
【总页数】1页(P860)
【作者】廖光付;陈敬捷
【作者单位】广西壮族自治区龙潭医院医学检验中心,广西,柳州,545005;广西壮族自治区龙潭医院医学检验中心,广西,柳州,545005
【正文语种】中文
【中图分类】R378.91+1
【相关文献】
1.液体MGIT培养法联合MPB64胶体金法快速检测结核分枝杆菌 [J], 孙黎萍;何鑫;
2.胶体金法快速检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的研究 [J], 白广红;李耀军;焦向阳
3.免疫胶体金渗滤法快速诊断试剂盒对包虫病患者血清的检测 [J], 冯秀丽
4.胶体金快速法检测粪便幽门螺杆菌分泌蛋白的临床应用评价 [J], 贾慧;田秀梅
5.鼠疫胶体金法快速诊断试剂盒的研制 [J], 朱虹;张春华;檀华;何君;赵斌;端青因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

新型结核分枝杆菌核酸检测试剂盒的临床应用初步评价


Ｅ ３ ３ 尤昕 ， 任淑子 ， 李玉花 ， 等． 交 叉 污 染 对 血 清 无 机 磷 测 定 结 果 的 影 响Ｅ Ｊ ３ ． 延边大学医学学报 ， ２ ０ ０ ４ ， ２ ７ （ ２ ） ： １ ３ １ — １ ３ ３ ． Ｅ ４ ３ 汝香 ， 林珊． 雅培 Ｃ ８ ０ ０ ０全 自动 生 化 分 析 仪 的 使 用 体 会 Ｅ Ｊ ３ ． 实 验
验 杂Байду номын сангаас ， ２ ０ ０ ７ ， ２ ５ （ ６ ） ： ４ ０ １ － ４ ０ ３ ．
［ ７ ］陈 强 ． 全 自动 生 化 分 析 仪 试 剂 交 叉 污 染 及 清 洗 实 验 操 作 方 法 的探
讨［ Ｊ ］ ． 临床 和实 验 医学 杂 志 ， ２ ０ ０ ９ ， ８ （ ７ ） ： ６ ０ ６ １ ．
摘 要 ： 目的 通 过 对 比 实验 ， 对 结核 分 枝 杆 菌 （ ＴＢ ） 核 酸 检 测 试 剂 的 临床 使 用 效 果进 行 评 价 。 方 法 用 分 离培 养 法 与 圣 湘
生物 结核 分 枝 杆 菌 （ ＴＢ ） 核酸检测试剂分别对 ２ ０ ２例 临床 收 集 的 样 本 进 行 结 核 分枝 杆 菌 的 检 测 并 对 比其 结 果 ， 同时， 将 两 种 检 测
方 法 的检 测 结 果 分 别 与 测 序 法 结 果进 行 对 比 。 结果
结核 分枝 杆 茵 核 酸 检 测 试 剂 与 培 养 法 的 阳性 一 致 性 百 分 比 为 １ ０ ０ ， 阴性 一
致性 百分比为 ９ ８ ． ６ １ ， 总一 致 性 百 分 比 为 ９ ９ ． ０ １ ； 对２ 例 不符样本进行测序复核 ， 并 对 复核 后 的 结 果 进 行 Ｋ ａ ｐ ｐ ａ 检 验 一 致 性 分 析， 结 果 Ｋａ ｐ ｐ ａ 值为 １ ． ０ ０ ０ ， 表 明结 核 分 枝 杆 茵核 酸检 测 试 剂 结 果 与 金 标 准 分 离培 养 法 的 结 果 具 有 很 好 的 一 致 性 ， 表 现 出较好 的 准 确性 。 结 论 结 核 分 枝 杆 菌核 酸检 测试 剂 与 分 离培 养 法的 结果 具 有 很 好 的 一 致性 ， 且 阳性 率 较 分 离培 养 法 更 高 ， 所需检测 时间 大为缩短 ， 具 有 内标 控 制假 阴性 ， 结果 准确 ， 符 合 临床 检 测要 求 ， 具 有 较 高 的 临床 应 用 价值 。

结核分枝杆菌快速诊断试剂盒

FAST PlaqueTB TM—结核分枝杆菌快速诊断试剂盒（噬菌体法）使用说明Manual of FAST PlaqueTB TMMycobacterium tuberculosis Diagnostic Kits上海金浩科技发展有限公司BIOTEC Laboratories Limited (UK) 1、使用目的F AST PlaqueTB TM试剂盒为一种体外诊断试剂，用于检测待检标本中是否存在活的结核分枝杆菌。

2、背景肺结核是一种因感染结核分枝杆菌（MTB），偶尔为牛分枝杆菌，非洲分枝杆菌而引发的传染病，在低收入地区发病率相对较高。

据WHO统计，全球约1/3的人口感染MTB，每年新增患者900万，并有300万人死于该病。

目前对结核病诊断主要依靠实验室诊断与临床体症相结合。

实验室诊断主要包括涂片法、培养法、分子生物学方法、免疫学方法和噬菌体法。

痰涂片直接镜检是检测抗酸杆菌（AFB）最普遍的实验室诊断方法，特异性较高，但灵敏性较低，涂片中分枝杆菌要达到103～104cfu/ml才可检测出阳性结果，且仅能检出1/2～3/4的活动性结核患者，漏检率相当高；罗氏（LÖwenstein Jensen）培养法是目前检测MTB的“金标准”，但其检测周期长（8周），导致无法及时确诊结核患者，并无法及时治疗；新近发展起来并广泛使用的快培检测技术无疑大大缩短了检测周期，但确诊仍需2～3周，依然无法实现结核病快速诊疗；基于免疫学的检测方法快速，操作简单，成本低廉，但灵敏度有限；而基于核酸扩增的检测方法快速、准确，但成本高昂、技术要求高，难以在发展中国家常规实验室中广泛开展。

很显然，临床实验室急需一种快速、准确、经济，易推广的检测方法用于结核病的检测。

3、测试原理F AST PlaqueTB TM试剂盒采用噬菌体扩增方法检测待检标本中是否存在活的结核分枝杆菌。

痰液标本首先经去污染处理，杀灭痰液中其它杂菌，随后用特异性噬菌体迅速感染结核分枝杆菌，再添加杀毒剂杀灭未感染结核分枝杆菌的噬菌体。

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准确性。结论 结核分枝杆菌核酸检测试剂与分离培养法的结果具有很好的一致性，且阳性率较分离培养法更高，所需检测时 间
大 为 缩 短 ，具 有 内 标 控 制 假 阴 性 ，结 果 准 确 ，符 合 临 床 检 测 要 求 ，具 有 较 高 的 临：结 核 分 枝 杆 菌 ； ＴＢ ＤＮＡ； 聚 合 酶 链 反 应 ； 培 养 法
２．２ 新 型 试 剂 检 测 结 核 患 者 结 果 见 表 ２。 表 ２ 新 型 试 剂 检 测 结 核 患 者 结 果 （ｎ）
新型试剂检测结果
结核患者
菌培阳性
菌培阴性
合计
阳性
５８
２
６０
阴性
０
０
０
总数
５８
２
６０
阳 性 符 合 率 百 分 比 ＝ （５８＋２）／（５８＋２＋０＋０）×１００％ ＝１００％ （即 临 床 诊 断 为 结 核 感 染 的 样 本 中 待 考 评 试 剂 检 测 为 阳 性 的 比 例 ）。
［７］陈强．全自动生化分析 仪 试 剂 交 叉 污 染 及 清 洗 实 验 操 作 方 法 的 探 讨 ［Ｊ］．临 床 和 实 验 医 学 杂 志 ，２００９，８（７）：６０－６１．
（收 稿 日 期 ：２０１３－０３－１０）
新型结核分枝杆菌核酸检测试剂盒的临床应用初步评价
冯 庆 芳 ，何 小 宁 ，王 小 婷 ，周 翠 蕃 （甘肃省定西市岷县中医院检验科，甘肃定西 ７４８４００）
实时荧光定量 ＰＣＲ 仪。分离培养法使用改良罗氏培 养 基（４～ ８周），灵敏度为每毫 升 １０１ ～１０３ 个 菌。 克 隆 测 序 于 ＡＢＩ３１３０ （ＡＢＩ公 司 ，美 国 ）基 因 分 析 仪 上 进 行 。
１．３ 方法 分别采 用 该 新 型 ＰＣＲ 检 测 试 剂 和 分 离 培 养 法 对 ２０２例临床样本（每例样本一分 为 三，保 留 一 份 样 本 作 为 复 检） 进行检测，方法如下：在 样 本 中 加 入 ２～３ 倍 体 积 的 ４％ＮａＯＨ 溶液，震荡混匀后，静置液化３０ｍｉｎ。取 液 化 后 的 样 本 ５００μＬ 于１．５ｍＬ 离 心 管（避 免 吸 出 明 显 的 固 体 杂 质），１２ ０００ｒ／ｍｉｎ， 离心 ３ ｍｉｎ，吸 除 上 清；加 入 １ ｍＬ 无 菌 生 理 盐 水 重 悬 沉 淀， １２ ０００ｒ／ｍｉｎ，离心３ｍｉｎ，吸除 上 清；加 入 ５０μＬ 核 酸 释 放 剂， １００ ℃处理１０ｍｉｎ，１２ ０００ｒ／ｍｉｎ，离心３ｍｉｎ，上清作为待测样 本备用。取５μＬ 作 为 ＰＣＲ 反 应 的 模 板 加 入 ＰＣＲ－ｍｉｘ ４０μＬ 上机检测即可。参考 相 关 文 献 设 计 复 检 引 物，正 义 链：ＴＩＳ－Ｆ： ５′－ＡＣＧ ＧＡＴ ＡＧＧ ＧＧＡ ＴＣＴ ＣＡＧ ＴＡＣ ＡＣ－３′，反 义 链 ：ＴＩＳ－ Ｒ：５′－ＣＧＴ ＣＴＣ ＧＧＣ ＴＡＧ ＴＧＣ ＡＴＴ ＧＴＣ－３′。 将 不 符 合 样 本用复检试剂进行 ＰＣＲ 扩增，并将 ＰＣＲ 产 物 通 过 电 泳 和 克 隆 测序进行复 核。ＰＣＲ 反 应 体 系：总 体 积 ５０μＬ，包 括 ２０ｐｍｏｌ ＰＣＲ 引物，２５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ２，２．５ｐｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰｓ，２μＬ Ｔａｑ 酶及 ＰＣＲ 缓冲液。ＰＣＲ 反应条件：９５ ℃ １５ｍｉｎ；（９５ ℃ ２０ｓ， ６０ ℃ ４０ｓ，７２ ℃ ４０ｓ）３５循环；７２ ℃ ３０ｍｉｎ。 １．４ 统计学处理 数据进行阴阳性一致性分析，灵敏度、特 异 度分析和 ｋａｐｐａ检验一致性分析。 ２ 结 果 ２．１ 分离培养法与新型试剂检测结果 根据金标准分离培 养
摘 要：目的 通过对比实验，对结核分枝杆菌（ＴＢ）核酸 检 测 试 剂 的 临 床 使 用 效 果 进 行 评 价。 方 法 用 分 离 培 养 法 与 圣 湘
生物结核分枝杆菌（ＴＢ）核酸检测试剂分别对２０２例临床收集的 样 本 进 行 结 核 分 枝 杆 菌 的 检 测 并 对 比 其 结 果，同 时，将 两 种 检 测
［５］ 于雷．生化自动分析仪项目间试剂 的 交 叉 污 染 及 其 避 免 方 法 ［Ｊ］． 临 床 检 验 杂 志 ，２００３，２１（３）：１６８．
［６］ 顾光煜，张葵．临床 化 学 自 动 分 析 的 携 带 污 染 与 解 除 ［Ｊ］．临 床 检 验 杂 志 ，２００７，２５（６）：４０１－４０３．
２．３ 新型试剂检测非结患者结果 非结核病患者，包括与 ＴＢ 症状相似的患者（如肺癌、肺 炎 等 ）、其 他 患 者 （如 哮 喘、气 管 炎 等 ），见 表 ３。
表 ３ 新 型 试 剂 检 测 非 结 核 患 者 结 果 （ｎ）
实验
非结核患者
ＴＢ 症状相似
其他患者
合计
阳性
０
０
６０
阴性
７２
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４１３０．２０１３．１９．０５１
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１６７３－４１３０（２０１３）１９－２６０１－０２
结核分枝杆菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）简 称 为 结 核 杆 菌 （ｔｕｂｅｒｃｌｅ ｂａｃｉｌｌｉ，ＴＢ），是结核病的病原 菌［１］。世 界 上 有 １／３ 的 人 感 染 了 结核分枝杆菌，每 年 有 ８００ 万 新 患 者 出 现，３００ 万 人 死 于 结 核 病，且耐药率的不断上 升，给 结 核 病 的 治 疗 和 控 制 带 来 严 峻 的 挑战［２］。目前对 结 核 病 的 诊 断 需 要 综 合 临 床 表 现 、影 像 学 检 查、结核菌检查等资料。结核菌检查是确诊结核病最特异的 方 法。其中分离培养法 被 认 为 是 临 床 诊 断 结 核 病 的 “金 标 准 ”。 但该方法一般需２～８周方能获得结果，灵敏度较低，且易出 现 漏检，严重影响结核病的早期诊疗［３］。建立快速、准确、可靠 的 结 核 分 枝 杆 菌 的 检 测 方 法 成 为 研 究 热 点 。 ［４－５］ 其 中 实 时 荧 光 定 量 ＰＣＲ 技术以其高灵 敏 度、高 特 异 性 以 及 简 易 的 操 作 受 到 越 来越多的关注和应用［６］。最近，新出现 了 一 种 ＴＢ 核 酸 检 测 试 剂，灵敏度高。该试剂有预防假阴性的内标控制体系和抗污 染 系统，能有效避免同类产品存在的假阴性及气溶胶污染。本 研 究拟通过检测临床样本，将 其 与 分 离 培 养 法 进 行 比 对，来 评 估 这一新试剂的准确性及特异性。 １ 资 料 与 方 法 １．１ 一 般 资 料 本 次 研 究 共 检 测 痰 液 样 本 ２０２ 份，其 中 男 性 病例１０９例（５３．９％），女 性 病 例 ９３（４６．１％），－２０ ℃ 冰 箱 保 存。结核病的诊断标准 参 照 我 国 卫 生 部 发 布 《肺 结 核 诊 断 标 准 》２００８ 年 版 。 １．２ 仪器与试剂 结核分枝杆菌核酸检测试剂购自湖南圣 湘 生物科技有限公司，具 有 内 标 监 控 假 阴 性，最 低 检 测 限 为 每 毫 升１个菌；核 酸 扩 增 仪 采 用 美 国 Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ公 司 的 Ｍｘ３０００Ｐ
［３］ 尤昕，任淑子，李玉 花，等．交 叉 污 染 对 血 清 无 机 磷 测 定 结 果 的 影 响 ［Ｊ］．延 边 大 学 医 学 学 报 ，２００４，２７（２）：１３１－１３３．
［４］ 汝香，林珊．雅培 Ｃ８０００ 全 自 动 生 化 分 析 仪 的 使 用 体 会 ［Ｊ］．实 验 与 检 验 医 学 ，２０１０，２８（２），１８２－１８３．
７０
１４２
总数
７２
７０
１４２
阴性符合率百分比＝（７２＋７０）／（０＋０＋７２＋７０）×１００％ ＝１００％ （即 临 床 诊 断 为 非 结 核 感 染 的 样 本 中 待 考 评 试 剂 检 测 为 阴 性 的 比 例 ）。
２．４ 不符样本的复核结 果 及 其 分 析 根 据 对 比 结 果，有 ２ 例 样 本 新 型 试 剂 与 分 离 培 养 法 检 测 结 果 不 符 ，均 为 培 养 法 结 果 阴 性性，结核分枝杆菌核酸检测试剂检测结果为阳性。自行设 计 设计复核扩增引物对，对这２例样本进行 ＰＣＲ 扩 增，通 过 电 泳 和克隆测序进行复核。发现２例不符样本的扩增产物电泳结 果显示产物为 目 标 长 度，扩 增 产 物 的 克 隆 测 序 结 果 显 示 见 图 １、２。扩增片段 序 列 为 ＴＢ－ＤＮＡ 序 列。 证 明 ２ 例 不 符 合 样 本 中均包含 ＴＢ－ＤＮＡ 序列。两种方法结果 的 差 异 可 能 是 由 于 培 养法检测自身 的 局 限 性 所 导 致 ，由 于 这 些 样 本 的 病 菌 载 量 较 低，培养法在检测低浓度样本时，检测灵敏度限制，容易出现 的 假阴性结果。
方 法的检测结果分别与测序法结果进行对比。结果 结核分枝杆菌核酸检测试剂与培养法的阳性一致性百分比为１００％，阴性一
致性百分比为９８．６１％，总一致性百分比为９９．０１％；对２例不符样本进行测序复核，并对复核后的结果进行 Ｋａｐｐａ检验一致性分
析，结果 Ｋａｐｐａ值为１．０００，表明结核分枝杆菌核酸检测试剂结果与 金 标 准 分 离 培 养 法 的 结 果 具 有 很 好 的 一 致 性，表 现 出 较 好 的
参考文献
［１］ 赵笔辉．应用 ＥＰ７－Ａ２文件对无 机 磷 测 定 的 干 扰 评 价 ［Ｊ］．第 三 军 医 大 学 学 报 ，２０１０，３２（２２）：２４５５－２４５６．
·检验仪器与试剂评价·
［２］ Ｊｏｓｅｐｈ Ｂ，Ｍｉｃｈｅｌｌｅ Ｆ，Ｄａｖｅ Ａ．Ｒｅａｇｅｎｔ ｃａｒｒｙｏｖｅｒ ｓｔｕｄｉｅｓ：ｐｒｅｖｅｎ－ ｔｉｎｇ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｅｒｒｏｒ ｗｉｔｈ ｏｐｅｎ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ｌａｂ Ｍｅｄ，２００５，３６（１１）：７０５－７１０．
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国际检验医学杂志２０１３年１０月第３４卷第１９期 Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１３，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１９