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Xpert摘要】目的应用结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF）对肺外结核患者的非呼吸系统标本中的MTB及其RIF耐药性进行检测，探讨该方法在肺外结核病诊断中的应用价值，为临床上的应用提供参考。
方法鸡西市传染病医院感染结核二科2017年12月至2018年12月的肺外结核病临床诊断患者171例采集所有非呼吸系统标本，脓液、穿刺液和尿便标本50份，脑脊液及胸腹水标本121份，脓液、穿刺液和尿便进行涂片镜检、结核菌固体培养，对培养阳性的标本进行传统药敏检测，脑脊液及胸腹水只给予常规生化检测，所有标本进行Xpert MTB/RIF 检测,分析该方法与传统涂片、固体培养在不同标本检测结核菌的阳性率，及在浆膜腔积液、脑脊液中的病原检出率。
结果与传统涂片镜检和固体培养对比, Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的敏感度显著高于涂片镜检和固体培养，并且该技术检测结核菌及利福平耐药结果报告时间(2 h)比固体培养大大缩短(6～8周)，在穿刺液、脓液、粪便及尿液中Xpert MTB/RIF检测具有明显优势。
结论 Xpert MTB/RIF检测穿刺液、脓液、粪便及尿液中的MTB灵敏度、特异度均较高，而对于浆膜腔积液及脑脊液并不具优势，但其快速、可检测RIF耐药的优点能为临床肺外结核的诊疗提供帮助。
【关键词】肺外结核；结核分枝杆菌／利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert MTB/RIF）；结核病是威胁人类健康的疾病之一，据世界卫生组织估计，2016年全球约167万例死于结核病，其中肺外结核占10％～42％，由于肺外结核临床症状不典型、临床标本不易获得且含菌量较少，使诊断较为困难。
近年来，结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF）作为核酸检测的一种，已有大量临床研究。
该技术自应用以来已逐步证实了其对肺结核的诊断价值，显示出了较高的敏感性和特异性。
核酸质谱检测结核分枝杆菌耐药方法的建立余艳芳1赵开顺1屠春林1陈娓2梁海鹰2易清清3【摘要】目的建立核酸飞行质谱(MassARRAY)方法检测结核耐药基因突变检测体系，并评估其检测临床耐药结核病的应用价值。
方法收集2016年1月-2019年6日上海市嘉定区中心医院肺科肺结核有治疗经历患者的菌培养样本55例，其中药物敏感样本10例,45例耐多药样本中，耐异烟(、耐氟)诺酮类(左氧氟沙星、莫西沙星)的样本45例、耐二线类注射药物(阿米卡星、卷曲霉素)的样本23例;供试样本均提取核酸，先用一代测序验证质谱检测的准确性，再根据临床药敏试验结果，验证质谱检测复治样本的有效性,主要评价指标为检测的灵敏度、特异性和一致性。
结果与一代测序相比，该体系检测临床菌株异烟(、氟)诺酮类药物和二线注射类药物的灵敏度分别为100%(37/37)、100%(34/34)和100%(10/10)，特异性分别为100%(18/18)、100%(21/21)和100%(45/45)，总一致率100%，—致性检验Kappa值为1#以最低抑菌浓度法(MIC)为金标准，该体系检测临床菌株异烟(、氟)诺酮类药物和二线注射类药物的灵敏度分别为82.2%(37/45)、75.6%(34/45)和45.5%(10/22)，特异性分别为100%(10/10)、100%(10/10)和100%(33/ 33)，两种方法的总一致率为89.1%，一致性检验Kappa值为0.703#结论质谱检测基因突变与最低抑菌浓度法检测结核菌耐药总体具有一定的一致性,可快速检测结核分枝杆菌的耐药性，有望成为复治患者辅助临床治疗的新手段#【关键词】结核分枝杆菌;核酸飞行质谱;复治患者；耐药Establishment of MassARRAY system for detection of drig resistancc of Mycobacterinm thberculosisYU Yan-fang1，ZHAO Kai-shun1，TU Chun-lin，CHEN Wei2，LIANG Hai-ying，YI Qing-ying31.Departmeoi o Respirators Medicinp；2.Departmeoi o Pulmonology；3.Departmeot o Central Laborators，Shanghai Jiading District Ceneal Hospital Afiliated a Shanghai Universita O MePicioo&Healta Sciences，Shanghai 201800，China'Abstract]Objective To establish the detection system of drug-resistant gene mutation of Mycobacterium tuberculosis(MTB)by MALDAPOF MS(MassARRAY)，td to evaluate its application value in the detection of clinical drug-resistant tuberculosis.Methods Bacte/ai culture of55patients with previously treated were collected eeom puemonaeyiub:ecueosise:ieaim:nipaiinisin ShanghaiJiadingDisieiciC:nieaeHospiiaeeeom sanuaey2016io June2019，including10drug sensitive samples，and45multi drug resistant sampPs.Among them，there were45/ soniazid resistant，fuoroquinolones resistant(Pvoaoxacin，moxi/oxacin)resistant samples，and23second-line in-.eciion eeLiiani(amikacin，capeeomycin)eeLiianiLampeeL.Nuceeicacid waLeyieacied and meaLueed wiih iheeiei generation to ve/fu the accuracy of MALDAPOF MS(MassARRAY)detection.According to the results of clinical drug sensitivity test，the6X6—016$-of mass spectrometry detection of reWeataent samples was verified.The main evaluation indicators were the sensitivity，specificity td consistency of detection.Res p us Compared with the first-generation sequencing，the sensitivity of the system to detect clinical strains isoniazid，fuoroquinolones and second-line injection drugs was100%(37/37)，100%(34/34)td100%(10/10)，the specificity was100%(18/18)，100%(21L21)and100%(45L45)，ihe ioiaeconLi iencywaL100%，and ihekappaeaeueoeiheconLiiencyieLi was1.Taking Minimum Inhibito/Concentration(MIC)as the gold standard，the sensitivity of the system for the detection of clinical strains isoniazid，fuoroquinolones and second-line injection drugs was82.2%(37/45)，75.6% (34/45)and45.5%(10/22)，the specificity was100%(10/10)，100%(10/10)and100%(33/33)，the totaldol:10.3969/j.imn.1009-6663.2021.01.017基金项目:上海市嘉定区卫生健康系统科研项目(No.2017ZD05)；上海市嘉定区科委科研项目(No.JDKW-2019-W03)作者单位)201800上海，上海健康医学院附属嘉定区中心医院1•呼吸内科、2.J市科、3.中心实验室通信作者:屠春林，E-mail:tuchunlin1218@consistency of the too methods was89.1%,and the kappa value of the consistency test was0.703.Conclusion The detection of gene mutabon by MALDVEOF MS(MassARRAY)is consistent with the detection of drug resistance by MIC method in clinical tubercle bacillus(TB)isolates,which can quickly detect the drug resistance of Mycobac-teium tuberculosis,and is expected to become a new method of auxiliay clinical Oeatment for previously treated patients.'Key words]Mycobacterium tuberculosis;MALDVEOF MS(MassARRAY)；retreatment patients(previously treated patieno)&drug resistance2019年世界结核报告显示,2018年全球结核潜伏感染人群占全人群的1/4左右（感染人群高达约17亿），其中结核新发病例近1000万，其中中国新发结核患者86.6万;报告显示我国58%初诊结核病例（细菌学上确认）对利福平耐药，复诊患者（有治疗经历的患者）100%耐利福平，耐药结核病（drug-resistant tuberculosis,DRNB）尤其是耐多药结核病（mu/idrug-resistant tuberculosis,MDR-EB）是严重影响中国乃至世界的公共卫生难题［1］。
牛副结核分枝杆菌核酸检测说明书牛副结核是一种由牛分枝杆菌引起的慢性传染病，它不仅给养牛业带来严重损失，还对人类健康构成潜在威胁。
为了有效地控制和防止牛副结核的扩散，牛副结核分枝杆菌核酸检测成为一种非常重要的检测方法。
牛副结核分枝杆菌核酸检测是一种基于分子生物学原理的快速且高效的检测方法。
它通过对牛体组织或分泌物中的DNA进行检测，能够迅速准确地鉴定是否感染牛副结核分枝杆菌。
与传统的培养方法相比，牛副结核分枝杆菌核酸检测具有更高的灵敏度和特异性，能够检测到病菌更早期的感染，从而有助于尽早采取控制措施。
牛副结核分枝杆菌核酸检测方法操作简便，不需要繁琐的培养过程，大大缩短了检测时间。
在进行检测前，首先需要采集牛体组织样本或分泌物样本，如肺组织、鼻分泌物、尿液等。
接着，将样本中的DNA提取出来，并利用特定的引物和酶进行核酸扩增反应。
最后，通过聚合酶链反应（PCR）技术和电泳分离，可以判断样本中是否存在牛副结核分枝杆菌的核酸。
牛副结核分枝杆菌核酸检测不仅可以用于早期诊断，还可以用于病原学研究和流行病学调查。
它能够明确感染的牛只，从而帮助养牛场控制疫情，预防病原菌传播。
此外，通过对感染牛只的检测，可以了解牛副结核的感染率和传播途径，为防控措施的制定提供科学依据。
在进行牛副结核分枝杆菌核酸检测时，需要注意以下几点：1. 严格按照操作规程进行操作，避免污染和交叉感染；2. 使用高质量的试剂和器材，确保检测的准确性和可靠性；3. 做好样本的保存和传递，防止样本的变质和丢失；4. 结合临床症状和其他检测结果，综合判断牛是否存在副结核感染。
总之，牛副结核分枝杆菌核酸检测作为一种快速准确的检测方法，在牛副结核的防控和诊断中具有重要的意义。
通过广泛应用该检测方法，可以有效减少病原菌的传播和牛副结核的发生，保障养牛业的健康发展，同时也为人类的健康提供了保障。
大家应积极采用该检测方法，共同维护养牛业的可持续发展，为建立绿色、安全的畜牧业做出贡献。
磁珠法在痰液结核分枝杆菌核酸检测中的应用研究目的应用配体包被磁珠技术富集痰液中的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）以用于实时荧光定量PCR检测。
方法采用磁珠法富集提取107例临床痰液样本中结核分枝杆菌的DNA，采用ABI 7500 Real-time PCR仪进行核酸定量分析，结果和传统提取方法进行比较。
结果采用磁珠法富集提取的结核分枝杆菌DNA（阳性率66.36%）高于普通DNA抽提方法（阳性率62.62%），也高于罗氏培养（阳性率38.32%），明显高于痰涂片结果（阳性率31.78%）。
结论磁珠法对提高结核分枝杆菌的核酸定量检测阳性率有积极作用，特别对他其他方法检测为弱阳性或者假阴性的病人效果显著。
标签：配体包被磁珠；结核分枝杆菌；核酸第一简介：张时良，男，（1980-05），汉族，籍贯：江苏宜兴，学历：本科，职称：主管技师，研究方向：分子生物学临床工作。
通讯作者：周红，Email：hongzhou0123@。
结核病（Tuberculosis，TB）是当今世界范围内最为重要的传染性疾病之一。
我国是结核病高负担国家之一，患病人群数量巨大，面临着严峻的结核病流行形势[1-2]，目前缺乏有效的早期、快速、特异的诊断手段。
因此，加强结核病的实验室诊断技术研究，对及时发现确诊疾病、有效治疗控制传染源、从而控制结核病的流行具有极为重要的意义。
近年来，随着分子实验诊断技术的不断发展，聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术以其简单快速，成本低廉，灵敏度和特异度高等特点而被广泛应用于传染病的诊断。
相比于传统的临床诊断方法，分子实验诊断技术可以弥补传统临床诊断方法的某些缺陷，能够通过应用PCR技术而缩短临床标本（呼吸系统标本和肺外标本）中检测和鉴别结核分枝杆菌的时间，提高结核分枝杆菌的检出率，从而提高病人的发现率[3-4]。
目前国内一般都是通过优化核酸提取这一过程来提高PCR的阳性率[5]，国外已经开始通过配体包被磁珠技术（Ligand-coated magnetic bead technology）来富集痰液中的结核分枝杆菌[6，7]，以提高痰涂片的阳性率。
结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌IgG、IgM检测、结核DNA核酸测定、血沉（ESR）测定对肺结核患者诊断的价值研究发布时间：2022-12-19T07:39:21.433Z 来源：《健康世界》2022年21期作者：鲁成娇1 杨艳1 鲁成志2 李彦娴1 彭晓云2 肖明英2 [导读] 目的：分析比较结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌IgG、IgM检测、结核DNA核酸测定、血沉（ESR）测定对肺结核患者的临床诊断价值鲁成娇1 杨艳1 鲁成志2 李彦娴1 彭晓云2 肖明英21.保山中医药高等专科学校临床医学院云南保山 6780002.保山市人民医院感染科云南保山 678000摘要：目的：分析比较结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌IgG、IgM检测、结核DNA核酸测定、血沉（ESR）测定对肺结核患者的临床诊断价值。
方法：回顾性分析2019年1月-12月期间在保山市人民医院分院感染科收治的结核病患者临床资料，比较痰涂片检测肺结核患者对应四种检查方法的诊断效能。
结果：肺结核患者痰涂片检测与结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌IgG、IgM检测、结核DNA核酸测定、血沉（ESR）测定的灵敏度分别为92.6%（25/27）、63.3%（19/30）、68.9%（20/29）、81.6%（31/38），特异度分别为：22.9%（14/61）、73.6%（39/53）、73.4%（47/64）、36.5%（27/74）。
结论：结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）灵敏度明显高于其他检测方法，配合该病临床表现能够提升临床应用价值，该方法可用于肺结核诊断的重要辅助手段。
关键词：结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）；结核分枝杆菌IgG、IgM检测；结核DNA核酸测定；血沉（ESR）；痰涂片抗酸染色技术；肺结核结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，曾在世界范围内广泛传播，被称作“白色瘟疫”，我国是人口大国，结核病发病率高居世界前列。
肺结核属于肺部慢性传染疾病，临床发病率高，该病的主要致病菌为结核分枝杆菌，病程相对较长，会向全身多个脏器累及。
菌阴肺结核指的是通过一次结核杆菌培养以及三次痰涂片检查，结果均显示为阴性的肺结核患者，具有较低的传染性。
大多数患者不了解菌阴肺结核的相关性知识，如果没有采取及时有效的诊断、治疗，患者的病情就会延误，继而转变为阳性，对患者的预后造成不利影响。
目前，临床中对于菌阴肺结核的特异性诊断措施相对缺乏，最常用的方法就是痰或呼吸道采集标本中结核分枝杆菌的检验。
近年来，结核病的发病率及死亡率呈现逐年上升的趋势。
筛选出一种能有效确诊早期结核病的检验方法十分重要。
目前临床上应用于辅助结核病诊断的检验方法以结核分枝杆菌培养和抗酸染色涂片为主，其中培养法作为结核疾病诊断的金标准具有准确性高、特异性高的优势。
结核分枝杆菌痰的分离培养，消耗时间较长，如果利用固体改良罗氏培养基进行培养，一般会需要至少20d，最长可需要60d，如果使用先进的全自动分枝杆菌进行检测，至少需要7d，至多需要20d。
实验室一般会通过痰涂片法进行检测，该方法的操作相对简单，价格较低，但是，操作费时，在基层痰检实验室涂片量过大的时候，一天内无法得到实验结果，这种现象无法满足目前的结核病防治工作。
近些年来，随着染色技术的逐渐先进，荧光染色技术作为新型的实验手段，已经在医学科学领域中广泛应用。
目前，涂片染色法已经成为无菌体液的主要检查方法，但是，通过传统制片以及染色法的检出率相对较低，误诊率以及漏诊率较高。
主要是因为染色时制片以及标本固定环节容易出现误差，而细胞沉淀仪法、改良的抗酸染色法、萋-尼氏抗酸染色法、金胺O荧光染色法、PCR等技术的应用越来越多。
传统方法：获取痰标本后，排除口水痰，然后纳入研究范围，确认纳入的当天，需要在每份痰标本相同位置，取两份，制成痰涂片。
离心处理标本，再在洁净的玻片上涂抹沉渣，涂完一层之后，使其自然干燥，再次涂抹，形成厚涂片，先使用萋尼抗酸染色法进行染色，随后使用石炭酸复红溶液初染，再使用盐酸酒精脱色，然后用美兰复染，寻找红色区域，待涂片干燥后置于显微镜镜检，于蓝色背景中寻找红色的杆状、分枝状细菌。
