野生干蕨菜对亚硝酸盐消除感化研究试验计划[资料] 野生干蕨菜对亚硝酸盐清除作用研究实验方案2.实验方案
2.1.仪器
分光光度计、电子天平、粉碎机、比色皿、移液管、烧杯、棕色容量瓶、三角瓶、恒温水浴锅、精密pH值试纸
2.2(试剂
对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺、亚硝酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、盐酸、氨水均为分析纯，蒸馏水。
对氨基苯磺酸溶液(0.4 %):称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存;
盐酸萘乙二胺溶液(0.2 %):称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存;
亚硝酸钠标准溶液:准确称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于200μg的亚硝酸钠;
亚硝酸钠标准使用液:临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00ml，置于200ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5μg亚硝酸钠;
O.5mol/L柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液(pH=3.0):取0.1mol/L柠檬酸
18.6ml(21.01gm/l)，0.1mol/L柠檬酸钠1.4ml(29.41g/ml)加蒸馏水定容至
100ml。
盐酸(0.1mol/l):量取5ml盐酸(35%-37%)，用水稀释至600ml。
25%氨水;
2.3.原料
野生干蕨菜。
2.4(实验方法
2.4(1. 样品的制备
将干蕨菜粉碎，称取7份5g蕨菜粉，分别加入7个三角瓶中，各加入30ml蒸馏水，在不同条件(温度、时间、配比，pH值)下提取，然后用4000 r/min转速离心10 min，取上清液备用。
2.4(2. 最大吸收波长的确定
准确吸取5μg/ml硝酸钠标准液7ml置于25ml容量瓶中，加入0.4 %对氨基苯磺酸1.0mL，摇匀，静置4min，加入0.5mL0.2 %盐酸萘乙二胺，加水定容至刻度,摇匀，静置15min。另以蒸馏水代替亚硝酸钠，用同样配制方法的溶液作为空白(即参比溶液)，做光谱扫描, 测定最大吸收波长。
2.4(
3. 标准曲线的绘制
分别吸取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00mL亚硝酸钠标准使用液分别置于25ml容量瓶中，加入0.4 %对氨基苯磺酸1.0mL，摇匀,静置
4min，加入0.5mL0.2 %盐酸萘乙二胺，加蒸馏水定容至刻度,摇匀，静置15min于最大波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，另以蒸馏水代替亚硝酸钠，用同样配制方法的溶液作为空白(即参比溶液)。(R=0.999)
2.4(4 .样品提取液对亚硝酸盐的清除能力的测定
准确吸取5μg/mL NaNO7mL，置于25mL容量瓶中，加入5mL蕨菜提取液，反2 应10min，然后加入0.4%对氨基苯磺酸1mL，摇匀，静置4min,再加入0.2%盐酸萘乙二胺0.5mL，摇匀加水定容至25mL，静置15min，用2cm 比色皿于最大吸收波长处测定吸光度A;以蒸馏水代替提取液做空白，测得吸光度A。按下式计算蕨菜12
提取液对亚硝酸盐的清除率。
清除率(%)=(A-A)/A×100%212
A—加蕨菜汁提取液测得值; 1
A—未加蕨菜汁提取液测得值。 2
2.4(5. 浸提温度对清除亚硝酸盐的影响试验
取在不同温度(20?、30?、40?、50?、60?、70?、80?)水浴下提取液7份5mL 于7个25mL容量瓶中，均加入5μg/mlNaNO7ml，在室温下反应10min，2 均加入对氨基苯磺酸，盐酸萘乙二胺定容、显色，测得在最大吸收波长处的吸光值，试验重复三次，计算清除率。
表1不同提取温度对亚硝酸盐的清除率
温度(?) A(n=3) A(n=3) 清除率(%) 12
20(室温) 30
40
50
60
70
80
2.4(6 .蕨菜汁提取液与亚硝酸盐提取时间试验
取在不同提取时间(0min、30min、60min、90min、120min、150min、180min)下提取液7份5mL于7个25mL容量瓶中，均加入5μg/mlNaNO7ml，在室温下反应2
10min，均加入对氨基苯磺酸，盐酸萘乙二胺定容、显色，测得在最大吸收波长处的吸光值，试验重复三次，计算清除率。
表2不同提取时间对亚硝酸盐的清除率
时间(min) A(n=3) A(n=3) 清除率(%) 12
30
60
90
120
150
180
2.4(7. 蕨菜汁用量对亚硝酸盐清除率的影响试验
取在不同提取配比下的提取液(0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml)7份5mL 于7个25mL容量瓶中，均加入5μg/mlNaNO7ml，在室温下反应10min，均加2 入对氨基苯磺酸，盐酸萘乙二胺定容、显色，测得在最大吸收波长处的吸光值，试验重复三次，计算清除率。
表3不同提取用量对亚硝酸盐的清除率
用量(ml) A(n=3) A(n=3) 清除率(%) 12
1
2
3
4
5
6
2.4(8.不同pH值对亚硝酸盐清除试验
取在不同提取pH值(1、2、3、4、5、6、7)下提取液7份5mL于7个25mL容量瓶中，均加入5μg/mlNaNO7ml，在室温下反应10min，均加入对氨基苯磺酸，盐2
酸萘乙二胺定容、显色，测得在最大吸收波长处的吸光值，试验重复三次，计算清除率。
表4不同提取pH对亚硝酸盐的清除率
pH A(n=3) A(n=3) 清除率(%) 12
1
2
3
4
5
6
7 2.4.9.最佳清除条 4 以提取温度、提取时间、提取液用量、提取PH值,做L(3)正交试验，9
确定最佳清除条件。
4表5 L9(3)正交试验结果分析试验号 A B C D 清除率%
1 1 1 1 1
2 1 2 2 2
3 1 3 3 3
4 2 1 2 3
5 2 2 3 1
6 2 3 1 2
7 3 1 3 2
