实验室基本操作规范、规程
为保证化验工作质量，保证人身及设备安全，规范化验操作步骤，特制定本规程。
一操作安全
（一）化验室用电炉、酒精灯等热源设备，操作人员一定要注意严防火灾发生。
（二）化验室用高压灭菌设备等，操作人员一定要严格按规程操作，防止蒸汽灼伤。
（三）操作人员配制和使用强腐蚀性药品时，必须做好相应的防护，严防人身伤害的发生。
二环境和卫生
（一）基本要求
1 进入化验室前必须换上专用拖鞋。
2 化验室内不得有蚊蝇。
3 化验室要保持清洁、有序；各房间要定期打扫，消毒；物品要定点放置且摆放整齐。
4 活体微生物要及时处理，废弃的平板要先洗完再灭菌。
5 化验室人员要注意个人卫生，勤洗衣服，勤洗澡，勤剪指甲等。
（二）无菌室使用要求
1 无菌室使用前须先关闭紫外灯管，打开风机，半小时后即可进行无菌操作。操作前要先用75％酒精棉球消毒手
部、腕部等，对放在工作台上的物品也要用棉球擦拭，然后严格按无菌要求进行操作，要尽量缩短操作时间。
2 使用完毕后，要将台面清理干净，关闭风机，再次将台面用酒精棉球擦拭干净，然后打开紫光灯离开。
3 无菌室应每周清扫一次，用来苏水对地面及门窗进行擦拭，如必要时采用甲醛薰蒸法。
三基本操作
（一）器皿的洗涤与包扎
1 新器皿因含有游离碱，先用1%盐酸处理一夜，再用清水洗，也可用水煮0.5-1小时后，取出再用水清洗干净。
2 常用玻璃仪器如三角瓶、培养皿、试管、漏斗、烧杯等，先用毛刷沾洗衣粉或肥皂粉刷洗，然后用自来水冲洗干净，放入70-80烘箱中烘干或自然晾干，放入清洁柜内备用。检查器皿的内壁，若水均匀分布成一薄层而不出现水珠，说明油污已除净，即可烘干备用。
3 用来做油镜观察的玻片，可以先用滤纸先把油污轻轻地擦去，然后放入肥皂水或洗衣粉水中浸泡，然后用清水冲洗，晾干备用，用时浸泡在75%浓度洒精中。
4 移液管的使用一般先用水冲洗，再插入洗液中，浸泡数十分钟后取出，用自来水冲洗干净即可。
5 接种瓶使用时先用水冲洗，然后用洗衣粉刷洗干净，再用清水冲洗，然后晾干；接种瓶口和胶管口用棉塞塞住，然后盖以纱布、牛皮纸进行包扎，放入蒸柜中进行灭菌。（二）高压蒸汽锅的使用方法
1 往灭菌锅内加水至高水位处；
2 将待灭的物品放在灭菌锅内，物品之间留有适当的间隙，以利蒸汽的畅通；
3 将灭菌物品最上方盖几层报纸，拧紧上盖；
4 将电源打开，加热至夹层水沸腾，盖上夹层放气阀，将干燥阀扭向消毒方向，至放气阀排大气3分钟，关闭；继续升温至0.1Mpa压力时，使压力保持恒定，并开始计时；
5 30分钟后关闭电源，让锅自然降压，待压力完全降至“零“后打开上盖，取出灭菌的物品；
6 灭菌锅长时间不用，要放尽锅内水，以免日久腐蚀。（三）培养基的配制
1 根据配方计算出实验中各种药品所需的量，然后分别称取；
2 将药品倒入杯内，加入少量的水进行加热溶解，加热过程中要不断搅拌，待完全溶解后，补足水分到所需的体积；
3 用滴管逐滴加入5％氢氧化钠溶液调节PH，边搅拌边用精密PH试纸测其PH，直到符合要求为止。
4 按实验要求将培养基进行分装，装入试管中的量不宜超过总高度的1/5，装入三角瓶的量以总体积的一半为限；在分装过程中，应注意勿使培养基沾污管口或瓶口，以免弄湿棉塞造成污染。
5 培养基分装好以后，在试管口或瓶口加上一只棉塞，一方面阻止外界微生物进入培养基内而引起的污染，另一方面保证有良好的通气性能，使微生物能不断的从外界获得无菌空气。
6 棉塞塞好以后，在外面包上一层牛皮纸，以防止灭菌时冷水的沾湿和灭菌后的灰尘侵入，贴上标签，注明培养基的名称及配制日期。
7 一般情况下，培养基配好后应立即灭菌，如不及时灭菌，应放入冰箱内保存。
8 灭菌后，固体培养基如需制成斜面，应在未凝固前将试管口方搁置在一根长的玻棒或木条上即可。搁置的斜面要适当。
（四）转接操作
1 斜面接种
（1）接种前在已灭菌的接种试管上贴上标签，注明菌名，接种日期，标签纸要贴在斜面的上方，距离试管口约2-3cm的位置，便于在接种时相核对。
（2）点燃酒精灯，左手食指、中指和无名指分别夹上菌种和斜面（斜面向上），使斜面近水平。先用右手将棉塞旋松，再拿接种环在火焰上烧红，把有可能进入试管的其余部分也过火灭菌，用右手的无名指、小手指和手掌边先后拔出菌种管和待接试管的棉塞，让试管口缓缓过火，将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接菌种管的培养基部分，使环冷却，侍冷却后轻轻沾取少量菌苔，然后将接种环移出菌和管，在火焰旁将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管，从斜面培养基的底部向上做“z“形来回密集划线。接好种的试管口再次过火，盖紧棉塞，将接种环烧红灭菌。
（3）将接好种的斜面放在28℃恒温箱中培养。
2 试管斜面转茄子瓶
（1）先将试管和茄子瓶用75％酒精棉球消毒；
（2）点燃酒精灯，以左手拿茄子瓶和试管（试管放在茄子瓶中部，试管口与茄子瓶对齐，姆指在上按住试管，其余四指托住茄子瓶），将接种环通过火焰灼烧，以右手小指和手掌边缘夹住茄子瓶，小指和无名指同时夹住试管棉塞，迅速在拔火焰旁去，然后将接种环缓缓伸入试管中，靠近试管壁或边缘琼脂冷却一下，待接种环冷却后，挑起菌苔，在火焰旁迅速伸入茄子瓶中由底向上做“z“形划线，尽量将茄子瓶斜面划满，退出接种环，将瓶口及棉塞再次过火并塞紧，最后将接种环烧红灭菌。
（3）一支试管一般接3-5个茄子瓶。
3 试管（茄子瓶）斜面转摇瓶
（1）将试管（茄子瓶）用75％酒精棉球擦拭干净；
（2）点燃酒精灯，一人先将接种环或金属刮棒烧红灭菌，然后用左手拿试管（茄子瓶）靠近火焰，右手拔去棉塞，置于无菌区；另外一人在火焰旁拔去装无菌水或灭菌液体培养基的三角瓶棉塞，向试管（茄子瓶）内倒入少许液体，塞上棉塞，将接种环在火焰旁伸入试管（茄子瓶）内，用水冷却一下，然后将斜面上的菌苔刮下，制成菌悬液，抽出接种环，用火焰灭菌。在无菌区拔去待转接的三角瓶的棉塞，将菌悬液倒入三角瓶中，塞上棉塞，最后置于摇床上培养。
（3）一支试管一般转一个三角瓶，一个茄子瓶一般可以转接数个三角瓶。
4 摇瓶转摇瓶（两人操作）
（1）将摇瓶用75％酒精棉球拭。
