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DPPH法测定黄芩黄酮的抗氧化活性抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。
目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。
DPPH又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。
它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。
向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。
即通过在517nm波长处检测样品清除DPPH·的效果，来计算抗氧化能力。
实验研究表明，黄芩黄酮中清除DPPH自由基活性的主要成分是黄芩苷[1]，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH反应，反应式如下：N N+O2NO2NNO2H+N NHO2NO2NNO2 DPPH与抗氧化剂反应原理材料：DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）；无水乙醇；仪器：分光光度计1.DPPH贮备液的制备准确称取DPPH试剂3．5mg，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，取2mL至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0178mmol／L DPPH贮备液，置于冰箱中冷藏备用。
2.试液的制备(只作参考)准确称取5.2mg干燥的黄酮提取物（32.75%）,用无水乙醇溶解，并定量转入50ml容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml至100ml容量瓶中，摇匀得浓度为0.0233mmol／L 试液。
3.DPPH·清除率的测定在10mL比色管中依次加入4.0mLDPPH溶液和黄酮提取液，再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。
第25卷第2期2006年3月 食品与生物技术学报Journal of Food Science and Biotechnology Vol.25 No.2Mar. 2006 文章编号:167321689(2006)022******* 收稿日期:2005202223; 修回日期:2005205217.作者简介:李春阳(19662),男,河北秦皇岛人,食品科学与工程博士研究生.DPP H 法测定葡萄籽原花青素清除自由基的能力李春阳1,2, 许时婴1, 王璋1(1.江南大学食品学院,江苏无锡214036;2.江苏省农业科学院农产品加工研究所,江苏南京210014)摘 要:通过DPP H 法测定葡萄籽原花青素抗氧化、清除自由基能力,实验表明:随着葡萄籽原花青素纯化程度的提高,其抗氧化、清除自由基的能力也相应地提高。
葡萄籽原花青素纯化物的抗氧化、清除自由基能力大于VC 和芦丁,葡萄籽粗提物的抗氧化、清除自由基能力略低于VC ,但高于芦丁。
GSP 、GSPP1、GSPP2、GSPP3、GSPP32SP 、VC 、芦丁清除DPP H 自由基的半抑制量分别为118,93,88,86,63,110,170g/kg ,其自由基清除能力A E 分别为0184×10-2、1108×10-2、1114×10-2、1116×10-2、1158×10-2、0159×10-2、0159×10-2。
关键词:葡萄籽;原花青素;DPP H 中图分类号:S 663.1文献标识码:AMeasuring the Antiradical E ff iciency of Proanthocyanidin fromG rape Seed by the DPPH ・AssayL I Chun 2yang 1,2, XU Shi 2ying 1, WAN G Zhang 1(1.School of Food Science and Engineering ,Southern Yangtze University ,Wuxi 214036,China ;2.Agricultural Products Processing Institute of Jiangsu Agricultural Academy ,Nanjing 210014,China )Abstract :The efficiency of antio xidant and antiradical of t he proant hocyanidin ext racted from grape seed was determined by t he DPP H ・assay.It was found t hat t he efficiency increases wit h t he p urified degree of t he proant hocyanidin from grape seed.The ability of antioxidant and antiradical of t he p roant hocyanidin from grape seed was greater t han t ho se of VC and rutin.The antioxidant and antiradical ability of GSP was slightly lower t han t hose of VC ,but higher t han t hose of rutins.EC 50(50%t he initial DPP H ・concentration )of t he GSP ,GSPP1,GSPP2,GSPP3,GSPP32SP ,VC and rutin ,was 118,93,88,86,63,110,170g/kg DPP H ・respectively ,and t he antiradical efficiency (A E )was 0184×10-2、1108×10-2、1114×10-2、1116×10-2、1158×10-2、0159×10-2、0159×10-2.K ey w ords :grape seed ;p roant hocyanidin ;DPP H ・ 开发和研制天然植物抗氧化剂,消除氧自由基对机体的损害作用,是目前医药和食品研究中的一个重点。
清除DPPH自由基能力检测方法清除DPPH自由基能力是用来评价化合物在体外是否具有抗氧化活性的一种常用方法。
DPPH自由基是一种常用的自由基模型，其具有紫色，可通过其吸收峰的变化来反映清除能力。
以下是常用的几种用于检测清除DPPH自由基能力的方法：1.分光光度法分光光度法是一种常用的检测方法，基本原理是通过测量化合物与DPPH反应后的溶液吸光度的变化来评估清除DPPH自由基能力。
实验过程如下：1）准备1mM的DPPH乙醇溶液。
2）将待测化合物按一定浓度体系添加到相应的试管中。
3）将相同体积的DPPH溶液加入到每个试管中，混匀。
4）放置在室温下，静置反应30分钟。
5）使用紫外可见分光光度计测量反应体系的吸光度，计算清除率。
2.电子顺磁共振法（EPR）电子顺磁共振法是另一种常用的方法，通过测量化合物对DPPH自由基的清除能力，进而评估其抗氧化活性。
实验过程如下：1）准备含有DPPH和待测化合物的溶液。
2）使用电子顺磁共振仪测量样品的EPR信号，同时测量含有DPPH和不含DPPH的样品作为参比。
3）通过比较样品与参比的EPR信号来计算清除率。
3.原子力显微镜方法（AFM）原子力显微镜方法是一种非常灵敏的方法，可以用于直接观察化合物对DPPH自由基的清除作用。
实验过程如下：1）制备DPPH自由基薄膜。
2）将待测化合物沉积到DPPH自由基薄膜上。
3）使用原子力显微镜观察样品的表面形态变化。
4）通过观察DPPH颜色的变化和表面形态的变化来评估清除率。
4.荧光法荧光法是一种快速、灵敏且简便的检测方法，利用化合物与DPPH反应后荧光上转换的变化来评估清除DPPH自由基能力。
实验过程如下：1）制备DPPH乙醇溶液。
2）将待测化合物与DPPH溶液混合。
3）使用荧光光谱仪测量样品的荧光强度的变化。
4）通过荧光强度的变化来计算清除率。
总结：以上所述是几种常用于检测清除DPPH自由基能力的方法，分别基于吸光度、EPR、AFM和荧光等原理。
2024DPPH清除自由基方法2024年，一种新的清除自由基的方法被引入，该方法使用DPPH试剂。
DPPH（1,1-二苯基-2-三甲基-苦基-2-脒基），是一种广泛应用于生物医学研究中的人工氧化剂。
DPPH试剂呈紫色，并且可与捕获自由基反应后转变成无色。
因此，通过测量DPPH试剂的颜色变化，可以评估抗氧化物质对自由基的清除能力。
DPPH清除自由基方法是一种简单、快速且经济的方法。
它适用于各种类型的样品，包括天然产物、食品、药物和化妆品。
使用DPPH试剂测定抗氧化能力的方法主要有两种：溶液试剂法和固相试剂法。
溶液试剂法是最常用的DPPH清除自由基方法之一、在这种方法中，首先将DPPH试剂以适当浓度溶解在溶剂中，通常使用甲醇或乙醇。
然后，将样品与DPPH溶液混合，反应一定时间。
在反应过程中，DPPH试剂将与样品中的抗氧化物质反应，使DPPH试剂转变为无色。
通过测量反应溶液的吸收光谱或测定其吸光度的变化，可以计算出样品的清除自由基能力。
固相试剂法是一种近年来发展起来的新方法。
在这种方法中，固定DPPH试剂在固相载体上，通常使用硅胶或其他吸附剂。
样品溶液被滴加到载体上，自由基会与固相DPPH试剂发生反应，并转变成无色。
然后，通过测量吸附剂的颜色变化或对比吸附剂的吸光度，可以确定样品的清除自由基能力。
DPPH清除自由基方法的优点之一是它不需要复杂的仪器设备，因此可以应用于各种实验室条件。
此外，DPPH试剂的制备相对简单，价格也相对较低。
这使得DPPH清除自由基方法成为研究抗氧化剂的吸引人选择。
然而，DPPH清除自由基方法也存在一些限制。
首先，DPPH试剂只能评估清除自由基的能力，而不能提供有关抗氧化物质的详细信息。
此外，该方法不能区分不同类型的自由基，因此不能用于研究具体自由基类型的清除能力。
最后，溶液试剂法和固相试剂法都需要一定时间的反应才能得到准确的结果，这可能会造成实验中的误差。
总的来说，DPPH清除自由基方法是一种简单有效的方法，用于评估样品的抗氧化能力。
研究简报用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力3彭长连 陈少薇 林植芳 林桂珠(中国科学院华南植物研究所,广州510650)摘要 几种抗氧化剂的浓度与其清除1,12二苯基苦基苯肼(DPPH)能力呈显著的线性相关.不同抗氧化剂清除DPPH能力差异明显.抗坏血酸与DPPH反应的灵敏性高于其抑制肾上腺素氧化的能力.用DPPH法和亚油酸氧化法同时测定了生长在不同光强下植物叶片抗氧化能力的变化,两种方法所得结论相一致.结果表明清除有机自由基法是一种快速、简便、灵敏的评估植物抗氧化能力的可行方法.关键词 1,12二苯基苦基苯肼(DPPH),植物,抗氧化能力,自由基学科分类号 Q946 生物的抗氧化能力与其抗病性、抗逆性及延缓衰老密切相关.因而从天然植物中寻找有效的抗氧化剂应用于医药、食品、保健品、饮料、化妆品等之中,或从氧化与抗氧化代谢的平衡来探讨生物对变化环境条件的适应性机理,都是当前的研究热点之一. 迄今用于评价植物抗氧化能力的方法虽已有诸如硫氰酸盐(thiocyanate)法[1]、硫代巴比妥酸(TBA)法[2]、ORAC法(automated oxygen radical absorbance capacity assay)[3]等.但这些方法或者手续相当繁琐费时,或者所需试剂或大型仪器的费用昂贵,尚缺乏一种灵敏、简单易行的有效方法.1, 12二苯基苦基苯肼(1,12Diphenyl222picryl2 hydrazyl,DPPH)是一种稳定的有机自由基,通过检测生物试剂对DPPH自由基的清除能力可以表示其抗氧化性的强弱.然而对自由基信号的直接检测需要使用顺磁共振仪而使其难以普及.近年来,国外已有人初步利用DPPH溶液的紫红色吸光度变化作为清除自由基能力的分光光度测定[4,5],但对其准确性、灵敏度和可行性尚未有系统的探讨.本文旨在研究DPPH分光光度法用以评价植物抗氧化能力的可行性,为抗氧化剂的筛选和抗氧化胁迫机理的研究提供新的方法和依据.1 材料与方法111 仪器和试剂 紫外可见分光光度计(Beckman DU27),二苯基苦基苯肼(1,12diphenyl222picrylhydrazyl,DPPH),肾上腺素,硫代巴比妥酸(TBA),亚油酸,外源抗氧化剂抗坏血酸(AsA)、 皮素(QCT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丁基羟基甲苯(BHT),为Sigma公司产品,α2生育酚(α2TP)为Merck公司产品.自由基捕获剂1,22二羟基苯23,52二磺酸钠(Tiron),甲醇,乙醇为国产产品.112 植物材料 试验植物为广东省鼎湖山常绿阔叶林中的乔木黧蒴(Castanopsis f issa)和林下灌木九节(Psycot ria rubra).盆栽幼苗生长于本所试验地的自然光强(100%光)和遮阴降低光强为自然光的36%和16%条件下.012g叶片用50%乙醇浸提,研磨和离心(5000×g,15min),定容至10ml. 113 有机自由基(DPPH)消除能力的测定 参考Larrauri和Y okozawa等[4,5]的方法进行修改.利用DPPH溶液的特征紫红色团的吸收峰,以分光光度法测定加抗氧化剂或植物提取液后A525吸收的下降表示其对有机自由基消除能力.反应体积2ml,DPPH溶于少量甲醇后,以50%乙醇配制为120μmol/L.植物提取液稀释10倍,反应时加011ml稀释的提取液及119ml DPPH.室温下静置20min后测吸光度变化.样品对DPPH 的清除百分比=12[(A-B)/A0]×100%,这里A0为未加样的DPPH(119ml DPPH+011ml 50%乙醇)的吸光度,A为样品与DPPH反应后的吸光度,B为样品的空白(样品011ml+119ml 3中国科学院广州分院及广东省科学院测试基金和中国科学院“九五”重点基金(KZ9522J12105)联合资助. Tel:(020)877056262405,E2mail:pengchl@ 收稿日期:1999211220,修回日期:200020420250%乙醇)的吸光度.然后用公式:[(清除率×反应加入的DPPH 量)/样品质量(μg )]求得单位质量的外源抗氧化剂或植物样品对DPPH 的实际清除量.114 抑制亚油酸氧化能力的测定 最终浓度为0138mmol/L 的亚油酸加0133mmol/L H 2O 2加速氧化,在有或无植物提取液下置于室温放置5h ,不时摇动,随后用硫代巴比妥酸(TBA )法测定所产生的丙二醛(MDA )[6].用抑制MDA 形成的百分数表示抗氧化能力.115 抑制肾上腺素氧化 参照翁元凯等的方法[7],以碱性连二亚硫酸钠产生O ・2,用不同浓度的AsA 抑制O ・2对肾上腺素的氧化,480nm (肾上腺素红的特征吸收峰)检测吸收的下降.2 结果与讨论211 DPPH 的吸收光谱 有机自由基DPPH 溶液有两个特征吸收峰330nm 和525nm ,加入抗氧化剂抗坏血酸(AsA )和 皮素(QCT )后两个吸收峰皆降低(图1),但525nm 吸收的降低较显著,故选用可见光525nm 的吸收来表示DPPH 含量的变化,这与Larrauri 等[4]报道DPPH 吸收峰在517nm 有点差异.图1 DPPH 的吸收光谱212 抗氧化剂浓度与其清除DPPH 的关系 没食子酸(GIP )、 皮素(QCT )、还原型谷胱甘肽(GSH )和α2生育酚(α2TP )是植物体内常见的抗氧化剂,BHT 是人工合成的常用食品抗氧化剂,Tiron 则是人工合成的自由基捕获剂.图2可见这几种抗氧化剂的浓度皆与DPPH 的光吸收呈显著的线性负相关(图2),相关系数r 除BHT 为018977(图2b )外,其余都在019670～019935之间.抗氧化剂浓度越高,清除DPPH 的能力越大.结果说明无论是植物的内源抗氧化剂还是人工合成的抗氧化剂,其抗氧化性都可用DPPH 法作定量评价.图2 几种抗氧化剂与DPPH 吸收峰(A 525)下降的关系(a )■———■:QCT ,y 1=-010872x +110543,r =019904;●———●:GIA ,y 2=-012485x +110843,r =019935;(b )■———■:BHT ,y 3=-010245x +019008,r =018977;●———●:GSH ,y 4=-010149x +110715,r =019918;(C )■———■:α2TP ,y 5=-010233x +018558,r =019788;●———●:Tiron ,y 6=-010212x +017586,r =019670.213 不同抗氧化剂清除DPPH 能力的比较 表1看出计算降低DPPH 吸收50%时抗氧化剂的浓度(IC 50值)或每微克抗氧化剂实际清除DPPH 的数量皆表明,没食子酸的清除能力最强,皮素次之,而GSH 、α2TP 和两种人工合成的抗氧化剂BHT 及Tiron 则较低.这与Cao 等[8]利用ORAC 法的测定指出一些类黄酮比ASA 、α2TP 和GSH 有更强的抗氧化活性结果相一致.表1 几种抗氧化剂清除DPPH 自由基能力的变化抗氧化剂 IC 50(DPPH 吸收降低50%时抗氧化剂的量) ρ/μg c /μmol ・L -1DPPH 清除量/g ・g -1GIP2111612324122QCT 516791317170AsA 8141261535107BHT 13190351132183GSH 34136621121130α2TP 19150221631119Tiron16180381121187214 抗坏血酸清除DPPH 与抑制肾上腺素氧化的比较 抑制肾上腺素氧化也常用作测定抗氧化能力的一种方法.图3比较了肾上腺素法与DPPH 法用于评价抗坏血酸(AsA )抗氧化能力的灵敏度.结果看出AsA 含量与DPPH 吸收之间的斜率为-010638,相关系数为019986(图3b ),而AsA 含量与抑制肾上腺素氧化之间的斜率为-010011,相关系数为019775(图3a ).即DPPH 法的直线斜率和与AsA 含量的相关性皆大于肾上腺素法,表明其更为灵敏与准确.此外,肾上腺素法需在碱性条件下反应,其活性氧(O ・2)源也需通过化学反应产生,而DPPH 法则可直接检测DPPH 自由基的变化.图3 抗坏血酸抑制肾上腺素氧化(a)和清除DPPH (b)的比较(a )y 1=-010011x +011619,r =019775;(b )y 2=-010638x +110962,r =019986.215 DPPH 法和亚油酸氧化法测定植物叶片抗氧化能力的比较 亚油酸氧化法也是测定植物抗氧化能力的常用方法.用它和DPPH 法比较生长在不同光强下森林植物黧蒴和九节叶片的抗氧化能力(图4),可以看出两种方法的结果基本一致.随生长光强的增加,两种植物抗氧化能力都提高.自然光照下九节叶片的抗氧化能力大于黧蒴,而且光强对九节抗氧化能力的影响较黧蒴大,显示前者对光强的敏感性较高.由此结果进一步表证了DPPH 法研究植物抗氧化能力与植物种类及外界环境因子之间关系的可行性.图4 生长在不同光强下的植物提取物清除DPPH (a)和抑制亚油酸自动氧化(b)的变化□:黧蒴;■:九节. 综上所述,应用DPPH 法来评价外源抗氧化剂和植物抗氧化能力是一种快速(反应时间仅需20min左右)、简便(操作简单,且用一般的分光光度计即可测定)、灵敏(只需要少量的植物样品)、直接(抗氧化剂直接作用于DPPH自由基,测定DPPH吸收的变化,而其他许多方法都是间接测定氧化产物的减少)可行的方法.参 考 文 献1 Osawa T,Namiki M A.Novel type of antioxidant isolated from leaf wax of Eucalypt us leaves.Agric Biol Chem,1981,45(3): 735～7392 Ottolenghi A.Interaction of ascorbic acid and mitochondrial lipides.Arch Biochem Biophys,1959,79:355～3633 Cao G,Alessio H M,Culter R G.Oxygen2radical absorbance capacity assay for antioxidants.Free Radical Biol Med,1993,14(3):303～3114 Larrauri J A,Sanchez2Moreno C,Saura2Calixto F.Effect of temperature on the free radical scavenging capacity of extracts from red and white grape pomace peels.J Agric Food Chem,1998,46(7):2694～26975 Y okozawa T,Dong E,Natagawa T,et al.In vit ro and i n vivo studies on the radical2scavenging activity of tea.J Agric Food Chem,1998,46(6):2143～21506 林植芳,李双顺,林桂珠,等.水稻叶片衰老与超氧歧化酶、脂质过氧化的关系,植物学报,1984,26(6):605～615Lin Z F,Li S S,Lin G Z,et al.Acta Bot Sin,1984,26(6): 605～6157 翁元凯,黄 山,翁念宇.用碱性连二硫酸钠水溶液产生超氧阴离子自由基,生物化学与生物物理进展,1989,16(3): 209Wong Y K,Huang S,Wong L Y.Prog Biochem Biophys,1989, 16(3):2098 Cao G,Sofic E,Prior R L.Antioxidant capacity of tea and common vegetables.J Agric Food Chem,1996,44(11):3426～3431Detection of Antioxidative C apacity in Plants by Scavenging Organic Free R adical DPPH.PEN G Chang2Lian,CHEN Shao2Wei,L IN Zhi2Fang,L IN Gui2Zhu(South Chi na Instit ute of Botany,The Chi nese A cademy of Sciences,Guangz hou510650, China).Abstract A very significant linear relationship was found between the capacity of scavenging DPPH free radical and concentrations of six antioxidants(r= 01898～01994)determined by spectrophotometry. There was an obvious difference in the capacity of scavenging DPPH free radical among different antioxidants.Both scavenging DPPH and inhibiting the oxidation of adrenalin were closely related with the concentration of ascorbic acid.The change of DPPH levels is more sensitive than that of adrenalin in the presence of ascorbate.The antioxidative ability in leaves extracts of two woody plants grown under different light intensities was measured by either scavenging DPPH or inhibiting the oxidation of linoleic acid.The same conclusion was drawn through these two assays.It is suggested that scavenging DPPH free radical is a rapid,simple,sensitive and practical assay for the evaluation of antioxidative capacity in plants.K ey w ords 1,12diphenyl222picrylhydrazyl(DPPH), plant,antioxidative capacity,free radical中国生物化学与分子生物学会简讯 由中国生物化学与分子生物学会承办的第十五届亚洲大洋洲生物化学家和分子生物学家联合会(FAOBMB)学术会议于10月21日至24日在北京举行。
DPPH.法测定绿原酸清除自由基能力2.1 待测液的制备将绿原酸(纯度56%)、维生素C 和没食子酸分别配制成体积分数为0.1mg/mL 的无水乙醇溶液。
2.1.1 绿原酸母液的配制 称取 9.0 mg 绿原酸，定容到50ml ，即可得到绿原酸的母液0.1mg/mL 。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。
2.1.2 Vc 母液的配制 称取 mg VC ，定容到100ml ，即可得到VC 的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。
2.1.3 没食子酸母液的配制 称取 mg 没食子酸，定容到100ml ，即可得到没食子酸的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成不同浓度的溶液。
分别为 mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml; mg/ml 。
2.1.4 DPPH 母液的配制 称取 mg DPPH ，用无水乙醇定容到100ml ，即可得到DPPH 的母液。
然后，再将所配制的母液按照要求稀释成至一定浓度的溶液。
C DPPH = mg/ml 。
（建议用0.025mg/mL ）2.2 DPPH.溶液的可见光谱以无水乙醇为对照，在分光光度计上对DPPH.溶液进行在440～600nm 下扫描。
A max = nm2.3 抗氧化活性测定DPPH.是一种稳定的自由基，它的乙醇溶液呈紫色，在可见光区最大吸收峰为 nm 。
当DPPH.溶液中加入自由基清除剂时，溶液颜色变浅，517nm 处的吸光度变小，而吸光度变小的程度与自由基被清除的程度呈线性关系。
因此，可用来检测自由基的清除情况，从而评价某物质的抗氧化能力，其能力用清除率(Scavenging Rate,SR)来表示，清除率越大，抗氧化能力越强[4.5]。
DPPH法测定红柳醇提物各组分清除自由基的能力黄晓会;解宁湘;姚遥;张振华;王培香;王妍【摘要】目的通过1,1二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH·)法测定红柳醇提物各组分清除自由基的能力.方法将红柳醇提物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,各组分都配置成相当于原药材50mg·mL-1的溶液,通过DPPH·法测定各组分的清除自由基的能力,并计算各组分的清除50%自由基时样品浓度(IC50).结果正丁醇层清除自由基的能力最强,IC50为0.55mg·mL-1,其次是萃后水层(IC50为1.47mg·mL-1),乙酸乙酯层(IC50为3.96mg·mL-1)和石油醚层(IC50为4.78mg·mL-1).结论红柳醇提物各组分对DPPH·均具有一定清除作用,具有体外抗氧化性,可作为有效的天然自由基清除剂,具有很大的开发利用前景.【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2011(033)006【总页数】3页(P562-564)【关键词】红柳;DPPH·;自由基【作者】黄晓会;解宁湘;姚遥;张振华;王培香;王妍【作者单位】宁夏医科大学基础医学院化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院化学系,银川750004;宁夏医科大学基础医学院化学系,银川750004【正文语种】中文【中图分类】TQ460.7+2红柳学名柽柳,系柽柳科柽柳属柽柳植物(Tamarix chinensis L.)[1],广泛分布于西北沙漠地区及内蒙古,多生于内陆河漫滩、湖盆边缘、固定沙丘、丘间低地、戈壁滩及盐渍化的土壤上,具有抗沙埋、耐干旱、耐盐碱的特性,为沙漠盐碱地造林树种。
红柳嫩枝含鞣质,也可以提取栲胶。
DPPH法测定葡萄籽原花青素清除自由基的能力李春阳;许时婴;王璋【期刊名称】《食品与生物技术学报》【年(卷),期】2006(025)002【摘要】通过DPPH法测定葡萄籽原花青素抗氧化、清除自由基能力,实验表明:随着葡萄籽原花青素纯化程度的提高,其抗氧化、清除自由基的能力也相应地提高.葡萄籽原花青素纯化物的抗氧化、清除自由基能力大于VC和芦丁,葡萄籽粗提物的抗氧化、清除自由基能力略低于VC,但高于芦丁.GSP、GSPP1、GSPP2、GSPP3、GSPP3-SP、VC、芦丁清除DPPH自由基的半抑制量分别为118,93,88,86,63,110,170 g/kg,其自由基清除能力AE分别为0.84×10-2、1.08×10-2、1.14×10-2、1.16×10-2、1.58×10-2、0.59×10-2、0.59×10-2.【总页数】5页(P102-106)【作者】李春阳;许时婴;王璋【作者单位】江南大学,食品学院,江苏,无锡,214036;江苏省农业科学院,农产品加工研究所,江苏,南京,210014;江南大学,食品学院,江苏,无锡,214036;江南大学,食品学院,江苏,无锡,214036【正文语种】中文【中图分类】S663.1【相关文献】1.DPPH法测定龙眼叶丙酮提取物的自由基清除能力 [J], 李培源;彭炳华;莫媛媛;霍丽妮;秦一兰2.DPPH法测定树上虾丙酮部位自由基清除能力 [J], 李培源;霍丽妮;彭炳华;莫媛媛;秦一兰;黄晓东3.DPPH法测定自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜清除DPPH自由基的能力 [J], 谭曜; 陈平; 许赛慧; 朱杰4.ABTS法和DPPH法测定类胡萝卜素清除自由基能力的适用性 [J], 羌宇; 张耀宗; 余勃; 陆豫5.DPPH法测定莲蓬原花青素清除自由基能力研究 [J], 吴佳红;王建美;姚周平;葛彬洁;林小柯因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
DPPH自由基清除法[文献] Xican Li, Jing Lin, Yaoxiang Gao, Weijuang Han, Dongfeng Chen. Antioxidant activity and mechanism of Rhizoma Cimicifugae. Chemistry Central Journal. 2012; 6(1):140.[原理] DPPH（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical）即1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。
分子中，由于存在多个吸电子的-NO2和苯环的大π键，所以，氮自由基能稳定存在。
N22当DPPH自由基被清除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小。
DPPH这种稳定的自由基为清除自由基活性的检测提供了一个理想而又简单的药理模型。
[实验步骤]1.1 DPPH测试液的配制取DPPH 1mg溶于约20mL溶剂（乙醇、95乙醇或甲醇）中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。
取1mL 该DPPH溶液，在519nm处测A值，使A＝1.2-1.3之间最佳。
该DPPH溶液最好避光保存，3.5小时内用完。
1.2 样品液的配制样品用合适的溶剂溶解，为便于计算，可配成1mg/mL浓度。
溶剂根据样品的极性进行选择，首选95乙醇或无水乙醇，如不溶可用DMSO。
1.3 预试取DPPH溶液2mL，往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。
此加样量即为样品的最大用量，在此最大用量的基础上，往前设置5个用量，使之成等差数列。
【如】在预试过程中，发现加样到200μL时，DPPH溶液颜色基本褪去，则100μL为该样品液的最大用量。
其用量梯度宜设为40、80、120 、160、200μL。
1.4测量A0值的测量：取DPPH溶液2 mL加入到小试管（或玻璃瓶）中，加95乙醇（或无水乙醇）1mL，充分混合，测A值（519nm），此A值为A0（A0多在0.7-0.9之间）。
D P P H自由基清除测定(总2页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--DPPH 法测定黄芩黄酮的抗氧化活性抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。
目前对自由基清除剂的研究方法主要有2类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH 法是体外模型中最常用的方法。
DPPH 又称1,1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。
它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm 波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。
向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH ·，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。
即通过在517nm 波长处检测样品清除DPPH ·的效果，来计算抗氧化能力。
实验研究表明，黄芩黄酮中清除DPPH 自由基活性的主要成分是黄芩苷[1]，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH 反应，反应式如下：N N +O 2NO 2N NO2H +N NHO 2N O 2NNO 2DPPH 与抗氧化剂反应原理材料：DPPH （1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）；无水乙醇； 仪器：分光光度计1.DPPH 贮备液的制备准确称取DPPH 试剂3．5mg ，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL 容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，取2mL 至100ml 容量瓶中，摇匀得浓度为／L DPPH 贮备液，置于冰箱中冷藏备用。
2.试液的制备(只作参考)准确称取干燥的黄酮提取物（%）,用无水乙醇溶解，并定量转入50ml 容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml 至100ml 容量瓶中，摇匀得浓度为／L 试液。
dpph自由基清除原理
DPPH自由基清除原理是一种常用的方法，用于评估物质的抗
氧化能力。
DPPH（2,2-二苯基-1-苦味酮肼）是一种紫色自由基，具有不配对电子，可吸收紫外-可见光谱范围内的光线，
发生颜色褪变。
在清除DPPH自由基的过程中，如果物质具
有清除能力，会导致DPPH的颜色变浅，光吸收减弱。
DPPH自由基清除实验可通过光度计来测定。
在实验中，首先
将DPPH固体溶解在适当溶剂中，形成浓度适中的溶液。
随后，向DPPH溶液中加入测试物质。
当测试物质呈现清除DPPH自由基的能力时，DPPH的颜色由紫色逐渐变浅，光吸
收度下降。
DPPH自由基能被多种物质清除，包括天然产物如多酚类和类
黄酮等化合物，以及合成抗氧化剂（例如BHA和BHT）。
这
些物质中含有高的氢供体能力，能将自己的氢原子转移给DPPH自由基，从而中和DPPH的不配对电子。
DPPH自由基清除实验可以定量测定物质的抗氧化能力，常用
抗氧化指标包括DPPH清除率和半数清除浓度（IC50）。
DPPH清除率表示物质清除DPPH自由基的能力，清除率越高，抗氧化能力越强。
IC50值表示使DPPH清除率达到50%所需
的物质浓度，值越低，抗氧化能力越强。
总之，DPPH自由基清除实验是一种简便、快速、可靠的评估
物质抗氧化能力的方法，可用于筛选和比较不同物质的抗氧化活性。
采用DPPH法测定26种植物的抗氧化活性
勾明玥;刘梁;张春枝
【期刊名称】《食品与发酵工业》
【年(卷),期】2010(036)003
【摘要】抗氧化剂在预防疾病和延缓衰老等方面的作用,已广泛引起人们的关注,寻找更好更高效的抗氧化剂更为重要.文中采用DPPH法研究了26种植物的抗氧化
活性,测定了它们的提取液对DPPH自由基的清除能力.实验结果表明:植物的抗氧化活性成分存在于醇溶液中而非水溶液中;在所选26种植物中,地瑜、鸡血藤、赤芍、虎杖4种植物的抗氧化活性较高,其中地瑜的抗氧化活性最高,其IC_(50)为8.89
μg/mL.
【总页数】3页(P148-150)
【作者】勾明玥;刘梁;张春枝
【作者单位】大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学
生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034
【正文语种】中文
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