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穿山龙总皂苷提取方法研究【摘要】目的探讨穿山龙中总皂苷的提取方法，为后续的提取工艺研究奠定基础。
方法以总皂苷含量和浸膏得率为指标，考察超声提取法、回流提取法、索氏提取法，确定最佳提取方法。
结果超声提取法总皂苷含量8.67%，浸膏得率为3.66%；回流提取法总皂苷含量13.16%，浸膏得率为7.46%；索氏提取法总皂苷含量11.22%，浸膏得率为6.10%。
结论最佳提取方法为回流提取法。
【关键词】穿山龙；总皂苷；薯蓣皂苷元；提取方法穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣（dioscorea nipponica makino）的干燥根茎，味甘苦温，具有祛风湿，止痛，舒筋活血，止咳平喘祛痰功效[1]。
主治风湿性关节炎，筋骨麻木，大骨节病，跌扑损伤，慢性支气管炎、咳嗽气喘。
现代药理研究证明，其总皂苷类成分具有调节免疫、改善心血管功能、祛痰、抗肿瘤、抗炎镇痛等多种药理作用[2]。
穿山龙主要成分是甾体皂苷类，包括薯蓣皂苷（dioscin）、纤细皂苷（gracillin）和水溶性皂苷等[3]。
本品是近30年来从民间搜集而逐步广泛应用的，民间多用其浸酒或煎服，为治疗风湿病的三大常用药之一[4]。
有报道用穿山龙注射液治疗风湿和类风湿关节炎，有效率达89%[4]。
可见该药的用途是极其广泛的，开发利用穿山龙的前景广阔，因此其提取及含量测定的工艺方法至关重要。
本实验拟以总皂苷含量和浸膏得率为指标，考察超声提取法、回流提取法、索氏提取法，确定最佳提取方法。
为后续的单因素及正交相结合的方法确定穿山龙总皂苷最佳工艺研究奠定基础。
1材料与仪器穿山龙药材购于广州清平药材市场，经广东药学院中药鉴定教研室李书渊教授鉴定均为薯蓣科薯蓣属穿龙薯蓣（dioscoreanipponica makino）的干燥根茎。
uc-1800型紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；tc-15型恒温电热套（海宁市华星仪器厂）；dfy-400型摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；岛津ay120托盘电子分析天平；hh-6恒温水浴锅（江苏省金坛市宏华仪器厂）；上海亚荣生化仪器厂旋转蒸发仪。
设计性试验穿山龙薯蓣皂苷的提制和鉴识穿山龙为薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Makino的根状茎，又名穿龙薯蓣、野山药、串地龙，能舒筋活血，止咳化痰，祛风止痛。
中医用于腰腿疼痛、风湿关节痛、筋骨麻木、跌打损伤、气管炎、支气管炎。
穿山龙的有效成分主要是是甾体皂甙（薯蓣皂苷：dioscin C45H72O16；纤细薯蓣皂苷：gracillin C45H72O17）和水溶性皂苷。
其总皂苷含量在3%左右本实验经提取，可得到薯蓣皂苷。
他们的物理性质如下：薯蓣皂苷，白色粉末，熔点294～296℃，薯蓣皂苷不溶于水、石油醚、苯，可溶于甲醇、乙醇、醋酸，微溶于丙酮、戊醇。
纤细薯蓣皂苷，白色粉末，熔点287～289℃(分解);298～302℃; 290～293℃。
纤细薯蓣皂苷不溶于水、石油醚。
一、实验目的1．掌握各种苷与苷元的分离纯化方法，包括水溶性苷与水难溶性苷分离，不同极性水难溶性苷的分离，水难溶性苷与苷元的分离。
2．学习苷与苷元的各种鉴识方法，包括：层析方法（TLC），沉淀反应等。
3．学习各种实验技能提取：超声提取分离：柱层析鉴识：层析法、化学法二、实验原理根据薯蓣皂苷不溶于水、石油醚、苯，可溶于甲醇、乙醇的特性，提取分离脂溶性总皂苷和水溶性蛋白质、多糖，利用薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷结构上的差别，用吸附柱层析分离二者。
本实验涉及的知识点有：溶剂提取法、色谱法等。
三、实验流程穿山龙药材总皂苷薯蓣皂苷四、实验步骤1.总皂苷的提取称取穿山龙药材200g ，研碎，量取80%乙醇溶液500mL ，浸泡20min,超声提取1h,T=70℃，减压抽滤至无醇味。
第二次提取，加400mL 乙醇，二次超声30min,减压抽滤至无醇味，合并滤液。
滤液用正丁醇萃取（50ml ×3），回收正丁醇，得穿山龙中总皂苷粗品。
2.总皂苷的分离（无水条件）干燥：烧杯（100ml,2个）、锥形瓶（500ml,1个、50ml,20个）、蒸发皿、玻璃棒（2支）、量筒（100ml,1个、10ml ，1个），色谱柱、滴管2支。
HPLC-ELSD法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量李艳荣;李强;洪霞;潘海峰【摘要】目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定穿山龙中薯蓣皂苷元含量的方法.方法:使用Agilent Eclipse C18(150×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(95:5),柱温:40℃,流速1.0ml/min;蒸发光检测器以N2为载气,载气压力3.5bar,漂移管温度为70℃.结果:薯蓣皂苷元在2.04-0.255mg/ml范围内线性关系良好(r=0.9996),方法重复性好,平均回收率为98.9%(RSD=1.4%).结论:该方专属性强、灵敏、准确,可作为穿山龙的质量控制方法.【期刊名称】《承德医学院学报》【年(卷),期】2011(028)002【总页数】3页(P126-128)【关键词】穿山龙;薯蓣皂苷元;高效液相色谱法;蒸发光检测器【作者】李艳荣;李强;洪霞;潘海峰【作者单位】承德医学院中药研究所,河北承德067000;宽城县医院;承德医学院中药研究所,河北承德067000;承德医学院中药研究所,河北承德067000【正文语种】中文【中图分类】R917穿山龙是薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Mak)的根茎，具有活血舒筋、消食利水、祛痰截疟之功效，用于治疗风寒湿痹、慢性气管炎、消化不良、劳损扭伤等[1]。
民间多用穿山龙浸酒或煎服，治疗筋骨麻木和腰酸腰痛。
近年的研究证明，穿山龙有调节免疫、改善心血管功能、镇咳、祛痰、平喘等多种药理作用，治疗类风湿性关节炎、冠心病心绞痛、慢性气管炎、慢性布鲁菌病、脂肪瘤等，疗效较好[2]。
穿山龙中的薯蓣皂苷元是合成甾体激素的主要原料之一，药用价值日益受到人们的重视[3]。
薯蓣皂苷元为街烯醇，无共扼结构，只在低波长处有紫外吸收，因此采用常用的紫外检测器定量灵敏度较低。
本研究应用蒸发光散射检测器测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量，灵敏、专属性强，明显提高了含量测定的准确度。
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识（一）目的要求学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。
3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。
4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。
5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。
（二）主要化学成分的结构及性质大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。
1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。
黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。
能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。
2．大黄素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。
易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。
3．芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。
易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。
4．大黄酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。
橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。
易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。
5．大黄素甲醚(physcion) 分子式C 16H 12O 5，分子量284.26。
砖红色单斜针状结晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。
万方数据 万方数据穿山龙中薯蓣皂苷元的提取分离及测定方法研究概况作者：姚丽， 刘树民， 王加志， 刘学伟作者单位：姚丽,王加志,刘学伟(黑龙江中医药大学,黑龙江,哈尔滨,750040)， 刘树民(黑龙江中医药大学中医药研究院,黑龙江,哈尔滨,150040)刊名：中华中医药学刊英文刊名：CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE年，卷(期)：2008，26(1)被引用次数：2次1.杜庆鹏;田金改;隗秀荣高效液相色谱法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量 2006(01)2.都述虎;王晓华;夏重道穿龙薯蓣总皂苷元含量的毛细管气相色谱法研究 2001(02)3.刘源反相高效液相色谱法测定穿山龙中薯蓣皂苷的含量[期刊论文]-江西中医学院学报 2004(04)4.Higdon K;Scott A;Tucci M The use of estrogen,DHEA,and diosgenin in a sustained delivery setting asa novel treatment approach for osteoporosis in The ovariectomized adult rat model 20015.王俊;陈钧;杨克迪水解原位萃取薯蓣皂苷元的工艺条件研究[期刊论文]-中国中药杂志 2003(10)6.都述虎;夏重道;付铁军穿龙薯蓣总皂苷水解条件的优化[期刊论文]-中成药 2000(09)7.丁惠玲薯蓣皂苷元提取方法的改进 2002(01)8.刘锡葵;吕春朝;杨崇仁萃提技术在皂素生产中的应用 1999(05)9.张数鑫;周录英;于元杰穿龙薯蓣研究进展[期刊论文]-分子植物育种 2005(01)10.胡湘春;鱼红闪;金凤燮穿山龙薯蓣皂苷的分离提纯[期刊论文]-大连轻工业学院学报 2004(01)11.陈钧;王俊;杨克迪超临界CO2萃取薯蓣皂苷元的研究[期刊论文]-江苏大学学报(自然科学版) 2003(05)12.杜志茂RP-HPLC测定维奥欣片中薯蓣皂苷元的含量[期刊论文]-中成药 2001(09)13.都述虎RP-HPLC法测定穿龙薯蓣总皂苷中薯蓣皂苷元的含量[期刊论文]-中国药科大学学报 2001(01)14.徐雄良;张志荣;柯尊洪RP-HPLC法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量[期刊论文]-中国中药杂志 2003(09)15.鲁鑫焱;赵怀清薯蓣皂苷元的提取与分离分析方法[期刊论文]-沈阳药科大学学报 2003(06)16.Lintner Karl Use of diosgenin in compositions with Cosmetic or dermopharmaceutical use 200217.Yamada T;Hoshino M;Hayakawa T Dietary Diosgen in attenuates subacute intestinal inflammation Associated with indomethacin in rats 1997(02)18.Al Habori M;Raman A;Law rence MJ In vitro effect of fenugreek extracts on intestinal sodium dependent glucose uptake and hepatic glycogen phosphory-laseA 2001(02)19.杨文远;熊楚明;张振秋反相高效液相色谱法测定中草药中薯蓣皂苷元的含量[期刊论文]-分析试验室 2002(01)1.期刊论文李宝德.高晓旭.LI Bao-de.GAO Xiao-xu不同产地穿山龙薯蓣皂苷元含量的比较研究-药学实践杂志2006,24(5)目的:考察不同产地穿山龙薯蓣皂苷元含量,确定穿山龙薯蓣皂苷元的最佳产地.方法:用RP-HPLC测定穿山龙薯蓣皂苷元的含量.结果:不同产地的穿山龙薯蓣皂苷元含量差异很大,以黑龙江、内蒙、辽宁,所产含量较高,其中黑龙江最高,为1.49%.结论:黑龙江可以定为穿山龙薯蓣皂苷元的最佳产地.2.期刊论文赵春颖.佟继铭.刘玉翠.ZHAO Chun-ying.TONG Ji-ming.LIU Yu-cui穿山龙根茎叶不同生长期薯蓣皂苷元的含量测定-承德医学院学报2008,25(2)目的:检测不同生长期穿山龙地上部分和地下部分薯蓣皂苷元的含量,以确定其地上部分的开发利用价值.方法:采用RP-HPLC法检测不同生长期穿山龙中薯蓣皂苷元的含量.色谱柱:Discovery C18(250mm×4.6mm×5 μm),流动相:甲醇:水(84:16),流量:0.8ml/min,柱温:室温,检测波长:203nm.结果:薯蓣皂苷元在0.10-1.0mg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为97.23%,RSD为0.879%(n=5).地上部分(茎叶果实种子)中薯蓣皂苷元含量在8、9月份较高,分别为2.294%和2.117%;根茎(地下部分)中薯蓣皂苷元含量在9、10月份较高,分别为2.261%和2.576%;结论:穿山龙地上部分采收期应为8、9月份,地下部分采收期应为9、10月份,且地上部分也有较高的开发利用价值.3.期刊论文郭盛磊.王振月.王博.王星星超声波辅助提取穿山龙中薯蓣皂苷元的实验研究-黑龙江医药2010,23(1)目的:研究一种测定穿山龙中薯蓣皂苷元时快速提取薯蓣皂苷元的新方法--超声辅助水解原位萃取法.方法:对影响提取率的重要因素进行了考察,以期建立最佳提取条件.结果:样品在料液比为1:15(g:mL)条件下,用浓硫酸-异丙醇-水(8:22:70)溶液在90℃下超声辅助回流2h,获得最佳的提取率.结论:超声辅助水解原位萃取法省时、操作简便、重现性好.4.期刊论文王俊.杨克迪.陈钧超临界CO2萃取穿山龙中薯蓣皂苷元的研究-中国药学杂志2003,38(8)目的研究超临界CO2萃取穿山龙中薯蓣皂苷元的工艺.方法探讨了萃取压力、萃取温度、萃取时间、携带剂类型及携带剂含量等因素对薯蓣皂苷元收率的影响,确定了超临界CO2萃取穿山龙中薯蓣皂苷元的最佳条件,并将超临界CO2萃取法与传统的有机溶剂提取法进行了比较.结果萃取穿山龙中薯蓣皂苷元的最佳超临界萃取条件:萃取压力35.0 MPa,萃取温度45℃,选择体积分数为95%乙醇为携带剂,携带剂含量为3%,萃取时间3.0 h,CO2流速2 L*min-1.结论超临界CO2萃取法萃取薯蓣皂苷元比传统提取方法收率及纯度均高,且安全高效.5.期刊论文高晓旭.勾勇山.高志光.李宝德.GAO Xiao-xu.GOU Yong-shan.GAO Zhi-guang.LI Bao-de不同产地穿山龙薯蓣皂苷元含量的比较研究-特产研究2005,27(4)用RP-HPLC测定穿山龙薯蓣皂苷元的含量,对不同产地的穿山龙薯蓣皂苷元的含量进行比较研究.结果表明,不同产地的穿山龙薯蓣皂苷元含量差异很大,以黑龙江、内蒙、辽宁所产含量较高,其中黑龙江最高,为1.49%.6.期刊论文王俊.陈钧.杨克迪.WANG Jun.CHEN Jun.YANG Ke-Di测定穿山龙中薯蓣皂苷元的前处理方法的改进-中国药学杂志2005,40(9)目的研究一种测定穿山龙中薯蓣皂苷元时快速提取薯蓣皂苷元的新方法--水解原位萃取法.方法对影响提取率的重要因素进行了考察,以期建立最佳提取条件和适宜的纯化方法.结果样品用含约1.5 mol·L-1硫酸的70%异丙醇水溶液在沸水浴中加热回流4 h,获得了比传统方法更高的提取率.结论水解原位萃取法简单、省时、准确.7.学位论文周磊规范化种植药材的品质评价（Ⅺ）—穿山龙的质量控制研究2005本文对规范化种植穿山龙的质量及其影响因素进行了研究，建立了评价穿山龙规范化种植过程中共性技术及药材内在质量的方法，即采用高效液相色谱法和比色法以薯蓣皂苷元(diosgenin)和总皂苷元(totalsapogenin)为指标，测定二者含量。
正交试验法优选薯蓣皂苷元萃取条件研究王凤芝;荆洪英;孙姝岩【摘要】目的:为明确薯蓣皂苷元的最佳提取工艺,我们采用超临界CO2萃取技术,通过正交试验优化穿山龙中薯蓣皂苷元的提取工艺.方法:探讨萃取压力、萃取温度、分离Ⅰ压力、分离Ⅰ温度等因素对薯蓣皂苷元收率的影响.确定了薯蓣皂苷元的最佳萃取条件.结果:穿山龙中薯蓣皂苷元超临界萃取的最佳条件为萃取压力30 MPa,萃取温度50℃,分离Ⅰ压力13 MPa,分离Ⅰ温度40 ℃.结论:超临界CO2萃取法提取薯蓣皂苷元工艺简单,安全有效.【期刊名称】《中国野生植物资源》【年(卷),期】2010(029)006【总页数】3页(P57-59)【关键词】正交试验法;薯蓣皂甙元;萃取【作者】王凤芝;荆洪英;孙姝岩【作者单位】佳木斯大学附属第一医院,黑龙江,佳木斯,154002;佳木斯大学附属第一医院,黑龙江,佳木斯,154002;佳木斯市中医院,黑龙江,佳木斯,154002【正文语种】中文【中图分类】S567穿龙薯蓣 (Dioscorea nipponica Makino)为薯蓣科薯蓣属植物,其根状茎药用名穿山龙。
具有活血舒筋,消食利水,祛痰截疟之功效,用于治疗风寒湿痹、慢性气管炎,消化不良,劳损扭伤等[1]。
民间多泡酒或水煎服,治疗筋骨麻木和腰腿酸痛。
近年来研究证明穿龙薯蓣有调节免疫、改善心血管功能、镇咳、祛痰、平喘等多种药理作用,治疗类风湿性关节炎、冠心病、心绞痛、慢性气管炎、慢性布鲁菌病、脂肪瘤等疗效较好。
穿龙薯蓣主要有效成分是薯蓣皂苷,水解产物薯蓣皂苷元是合成甾体激素和避孕类药物的主要原料之一[2]。
由于其药理作用越来越被人们所认识,近年来在新药制剂不断开发的同时,也造成了野生资源急剧减少,日趋枯竭,目前已被列为国家二级保护植物[3]。
1 实验材料、仪器与试剂1.1 实验材料穿龙薯蓣根茎 2005年 4月购于黑龙江省佳木斯市金天药店,经本校生药学教研室刘娟教授鉴定。
薯蓣皂苷元的提取、精制与鉴定一、概述穿山龙为薯蓣科穿龙薯蓣（Dioscorea nipponica Makino ）的干燥根茎。
具有活血化瘀、祛风除湿、清肺化痰等功效。
穿山龙中主要化学成分的结构及物理性质：薯蓣皂苷（dioscin ）为无定形粉未或针状结晶，mp275～277℃。
可溶于甲醇、乙醇、甲酸，难溶于丙酮和弱极性有机溶剂，不溶于水。
薯蓣皂苷元（diosgenin ）为白色粉末，mp204～207℃，[]25D α-129。
（C ＝1.4三氯甲烷）。
可溶于有机溶剂及醋酸中，不溶于水。
薯蓣皂苷元 D －葡萄糖 L －鼠李糖薯蓣皂苷二、实验部分 （一）实验目的要求1、掌握穿山龙中薯蓣皂苷元的提取和精制方法。
2、熟悉薯蓣皂苷及皂苷元的性质和检识方法。
（二）实验原理薯蓣皂苷元在植物体内与糖结合成苷，经水解（酸水解、酶水解）可得薯蓣皂苷元和糖。
利用薯蓣皂苷元不溶于水，溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取，将其从原植物中提取出来。
（三）实验药材、仪器与试剂 1、药材：穿山龙粗粉70g （每组）2、仪器：电热套、圆底烧瓶、冷凝管、纱布、乳钵、PH 试纸、烘箱、试管、HOOOH OCH 3OHOH OHOOHOHOH CH 2OHH,OHH,OH++O OO O O CH 3OH OHOH OHCH 2OH O CH 3OH OHOHO OH +水浴锅、索氏提取器等。
3、试剂: 浓H2SO4、Na2CO3粉末、蒸馏水、95%乙醇、1%磷钼酸乙醇溶液、石油醚（60-90℃）、醋酐、浓硫酸、三氯甲烷、浓硫酸等。
（三）实验内容1、薯蓣皂苷元的提取、分离和精制穿山龙粗粉（70g）置圆底烧瓶中，加水350ml、浓H2SO430ml，室温浸泡24小时，文火加热回流4～6小时，放冷，倾出酸水液酸性药渣用清水反复漂洗除去余酸，然后将药渣倒入乳钵中，加Na2CO3粉末，反复研磨调PH至中性（用PH试纸测试）、水洗、抽干中性药渣低温（80℃）干燥12小时干燥药渣置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中，以石油醚（60-90℃）150 ml为溶剂，连续回流提取4-5小时10-15ml，迅速倾入48h），抽滤用少量冷石油醚洗二次，抽干薯蓣皂苷元粗品置圆底烧瓶中，加50ml甲醇，在沸水浴上加热回流至完全溶解，趁热抽滤，滤液放入冰箱析晶。
植物来源穿山龙皂苷酶的分离提纯及其酶性质
陶媛媛;张波;鱼红闪;金凤燮
【期刊名称】《大连工业大学学报》
【年(卷),期】2007(026)002
【摘要】对从麦麸中提取的穿山龙薯蓣皂苷酶进行分离提纯并对其酶性质进行鉴定.结果表明,该酶的分子质量约为65 ku;该酶不仅能水解穿山龙薯蓣皂苷的α-鼠李糖基,也能水解人参皂苷Rc的20-O-α-阿拉伯糖基和3-O-β-葡萄糖基,酶反应的最佳温度为40 ℃,最适pH值为5.
【总页数】4页(P120-123)
【作者】陶媛媛;张波;鱼红闪;金凤燮
【作者单位】大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连,116034;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连,116034;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连,116034;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连,116034
【正文语种】中文
【中图分类】Q946-83;Q946.49
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HPLC测定穿龙骨刺片中薯蓣皂苷元的含量
李萍;何筱毅;周佳
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2009(010)006
【摘要】目的:控制穿龙骨刺片的质量.方法:采用高效液相色谱法测定著蓣皂苷元的含量.结果:分离度好;含量测定线性范围0.101～6.06μg(r=1.000 0),平均回收率95.6%,RSD 0.94%(n=6).结论:方法简便、准确、重现性好.
【总页数】3页(P469-471)
【作者】李萍;何筱毅;周佳
【作者单位】四川省药品检验所,成都,610036;四川省药品检验所,成都,610036;四川省药品检验所,成都,610036
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反相高效液相色谱法测定穿龙骨刺片中薯蓣皂苷的含量发表时间：2018-11-27T15:55:06.180Z 来源：《医药前沿》2018年28期作者：喻贵英刘伟霞罗伟洪贇汪杨[导读] 建立反相高效液相色谱法测定穿龙骨刺片中薯蓣皂苷的含量喻贵英刘伟霞罗伟洪贇汪杨（太极集团重庆桐君阁药厂有限公司重庆 401336）【摘要】目的：建立反相高效液相色谱法测定穿龙骨刺片中薯蓣皂苷的含量。
方法：采用安捷伦C18色谱柱(Eclipse XDB-C18，250×4.6mm，5μm)，乙腈-水(50:50)为流动相；检测波长为203nm；柱温30℃。
结果：薯蓣皂苷进样量在0.49423～7.90764μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为100.9%，(RSD为0.6%)。
结论：此法用于测定穿龙骨刺片中薯蓣皂苷的含量，方法简便、专属性高，结果准确可靠。
【关键词】高效液相色谱；穿龙骨刺片；薯蓣皂苷【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）28-0377-03穿龙骨刺片具有补肾、健骨、活血、止痛的功效。
主要用于骨质增生，骨刺疼痛的治疗。
该产品收载于《中国药典》2015年版一部，由穿山龙、淫羊藿、狗脊、川牛膝、熟地黄和枸杞子等6味药物组成。
穿山龙为方中主药，具有祛风除湿，活血通络的功效，临床用于治疗类风湿关节炎。
而薯蓣皂苷为穿山龙药材的主要指标成份。
在《中国药典》2015年版一部穿龙骨刺片质量标准中采用高效液相色谱法测定穿山龙的水解产物薯蓣皂苷元的含量来控制产品质量，该方法中需要使用甲醇、三氯甲烷、乙腈，且用量较大，样品前处理时间较长。
为了减少有毒有害试剂的使用，缩短检验时间，保持与穿山龙药材质量控制指标一致，便于制剂的质量控制，尽可能减少对人体及环境的影响，本文对穿龙骨刺片质量标准进行修订。
1.实验方法1.1 仪器安捷伦高效液相色谱仪HP-1260（自动进样器G1329B、紫外检测器G1315D），KQ-500DBB型数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。
薯蓣皂苷元的提取、精制与鉴定
一、概述
穿山龙为薯蓣科穿龙薯蓣（Dioscorea nipponica Makino ）的干燥根茎。
具有活血化瘀、祛风除湿、清肺化痰等功效。
穿山龙中主要化学成分的结构及物理性质：
薯蓣皂苷（dioscin ）为无定形粉未或针状结晶，mp275～277℃。
可溶于甲醇、乙醇、甲酸，难溶于丙酮和弱极性有机溶剂，不溶于水。
薯蓣皂苷元（diosgenin ）为白色粉末，mp204～207℃，[]25
D α
-129。
（C ＝1.4三氯甲烷）。
可溶于有机溶剂及醋酸中，不溶于水。
薯蓣皂苷元 D －葡萄糖 L －鼠李糖
薯蓣皂苷
二、实验部分 （一）实验目的要求
1、掌握穿山龙中薯蓣皂苷元的提取和精制方法。
2、熟悉薯蓣皂苷及皂苷元的性质和检识方法。
（二）实验原理
薯蓣皂苷元在植物体内与糖结合成苷，经水解（酸水解、酶水解）可得薯蓣皂苷元和糖。
利用薯蓣皂苷元不溶于水，溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取，将其从原植物中提取出来。
（三）实验药材、仪器与试剂 1、药材：穿山龙粗粉70g （每组）
2、仪器：电热套、圆底烧瓶、冷凝管、纱布、乳钵、PH 试纸、烘箱、试管、
HO
O
O
H O
CH 3OH
OH OH
O
OH
OH
OH CH 2OH
H,OH
H,OH
+
+
O O
O O O CH 3
OH OHOH OH
CH 2OH O CH 3
OH OHOH
O O
H +
水浴锅、索氏提取器等。
3、试剂: 浓H2SO
4、Na2CO3粉末、蒸馏水、95%乙醇、1%磷钼酸乙醇溶液、石油醚（60-90℃）、醋酐、浓硫酸、三氯甲烷、浓硫酸等。
（三）实验内容
1、薯蓣皂苷元的提取、分离和精制
穿山龙粗粉（70g）
置圆底烧瓶中，加水350ml、浓H2SO430ml，
室温浸泡24小时，文火加热回流4～6小时，
放冷，倾出酸水液
酸性药渣
用清水反复漂洗除去余酸，然后将药渣倒入
乳钵中，加Na2CO3粉末，反复研
磨调PH至中性（用PH试纸测试）、水洗、抽干
中性药渣
低温（80℃）干燥12小时
干燥药渣
置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中，
以石油醚（60-90℃）150 ml为溶剂，连
续回流提取4-5小时
10-15ml，迅速倾入
48h），抽滤
用少量冷石油醚洗二次，抽干
薯蓣皂苷元粗品
置圆底烧瓶中，加50ml甲醇，在沸水浴上加热回流至
完全溶解，趁热抽滤，滤液放入冰箱析晶。
薯蓣皂苷元精品
2、鉴定
（1）检识反应
①醋酐－浓硫酸反应（Liebermann-Burchard反应）
取样品适量，加冰醋酸0.5ml使溶解，续加醋酐0.5ml搅匀，再于溶液的边沿滴加1滴浓硫酸，观察并记录现象。
②三氯甲烷－浓硫酸反应（Salkowski反应）
取样品适量，加三氯甲烷1ml使溶解，沿试管壁加等量的浓硫酸，分别置可见光及紫外灯下，观察并记录现象。
（2）薄层色谱鉴定
吸附剂：硅胶G-CMC-Na薄层板
样品：1%自制薯蓣皂苷元的乙醇液
对照品：1%薯蓣皂苷元标准品的乙醇液
展开剂：苯-乙酸乙酯（8:2）
显色剂：1%磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。
（四）实验指导及注意事项
1．原料经酸水解后应充分洗涤呈中性，以免烘干时炭化。
2．在干燥水解原料的过程中，应注意压散团块和勤翻动，以利快干。
3．在连续回流提取过程中，由于使用的石油醚极易挥发损失，故水浴温度不宜过高，能使石油醚微沸即可。
此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。
4．回收石油醚的蒸馏操作，不必另换蒸馏装置。
只将索氏提取器中的滤纸筒取出，再照原样装好，继续加热回收烧瓶中的溶剂，待溶剂液面增加至高虹吸管顶部弯曲处1cm处，暂停回收，取下提取器，将其中石油醚移置另外容器中，如此反复操作，即可完成回收石油醚的操作。
5．在连续提取过程中，欲检查有效成分是否提取完全，可取提取器中提取液数滴，滴于白瓷皿中，挥散溶剂，观察有无残留物，然后进行醋酐－浓硫酸反应。
若反应呈阴性，示已提尽。
（五）思考题
1．甾体皂苷可用哪些反应进行鉴定？
2．试设计一种从穿山龙中提取薯蓣皂苷的工艺流程，并说明提取、分离原理。
3．使用石油醚作提取溶剂时，操作中应注意哪些事项？。
