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穿山龙总皂苷提取方法研究【摘要】目的探讨穿山龙中总皂苷的提取方法，为后续的提取工艺研究奠定基础。
方法以总皂苷含量和浸膏得率为指标，考察超声提取法、回流提取法、索氏提取法，确定最佳提取方法。
结果超声提取法总皂苷含量8.67%，浸膏得率为3.66%；回流提取法总皂苷含量13.16%，浸膏得率为7.46%；索氏提取法总皂苷含量11.22%，浸膏得率为6.10%。
结论最佳提取方法为回流提取法。
【关键词】穿山龙；总皂苷；薯蓣皂苷元；提取方法穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣（dioscorea nipponica makino）的干燥根茎，味甘苦温，具有祛风湿，止痛，舒筋活血，止咳平喘祛痰功效[1]。
主治风湿性关节炎，筋骨麻木，大骨节病，跌扑损伤，慢性支气管炎、咳嗽气喘。
现代药理研究证明，其总皂苷类成分具有调节免疫、改善心血管功能、祛痰、抗肿瘤、抗炎镇痛等多种药理作用[2]。
穿山龙主要成分是甾体皂苷类，包括薯蓣皂苷（dioscin）、纤细皂苷（gracillin）和水溶性皂苷等[3]。
本品是近30年来从民间搜集而逐步广泛应用的，民间多用其浸酒或煎服，为治疗风湿病的三大常用药之一[4]。
有报道用穿山龙注射液治疗风湿和类风湿关节炎，有效率达89%[4]。
可见该药的用途是极其广泛的，开发利用穿山龙的前景广阔，因此其提取及含量测定的工艺方法至关重要。
本实验拟以总皂苷含量和浸膏得率为指标，考察超声提取法、回流提取法、索氏提取法，确定最佳提取方法。
为后续的单因素及正交相结合的方法确定穿山龙总皂苷最佳工艺研究奠定基础。
1材料与仪器穿山龙药材购于广州清平药材市场，经广东药学院中药鉴定教研室李书渊教授鉴定均为薯蓣科薯蓣属穿龙薯蓣（dioscoreanipponica makino）的干燥根茎。
uc-1800型紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；tc-15型恒温电热套（海宁市华星仪器厂）；dfy-400型摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；岛津ay120托盘电子分析天平；hh-6恒温水浴锅（江苏省金坛市宏华仪器厂）；上海亚荣生化仪器厂旋转蒸发仪。
设计性试验穿山龙薯蓣皂苷的提制和鉴识穿山龙为薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Makino的根状茎，又名穿龙薯蓣、野山药、串地龙，能舒筋活血，止咳化痰，祛风止痛。
中医用于腰腿疼痛、风湿关节痛、筋骨麻木、跌打损伤、气管炎、支气管炎。
穿山龙的有效成分主要是是甾体皂甙（薯蓣皂苷：dioscin C45H72O16；纤细薯蓣皂苷：gracillin C45H72O17）和水溶性皂苷。
其总皂苷含量在3%左右本实验经提取，可得到薯蓣皂苷。
他们的物理性质如下：薯蓣皂苷，白色粉末，熔点294～296℃，薯蓣皂苷不溶于水、石油醚、苯，可溶于甲醇、乙醇、醋酸，微溶于丙酮、戊醇。
纤细薯蓣皂苷，白色粉末，熔点287～289℃(分解);298～302℃; 290～293℃。
纤细薯蓣皂苷不溶于水、石油醚。
一、实验目的1．掌握各种苷与苷元的分离纯化方法，包括水溶性苷与水难溶性苷分离，不同极性水难溶性苷的分离，水难溶性苷与苷元的分离。
2．学习苷与苷元的各种鉴识方法，包括：层析方法（TLC），沉淀反应等。
3．学习各种实验技能提取：超声提取分离：柱层析鉴识：层析法、化学法二、实验原理根据薯蓣皂苷不溶于水、石油醚、苯，可溶于甲醇、乙醇的特性，提取分离脂溶性总皂苷和水溶性蛋白质、多糖，利用薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷结构上的差别，用吸附柱层析分离二者。
本实验涉及的知识点有：溶剂提取法、色谱法等。
三、实验流程穿山龙药材总皂苷薯蓣皂苷四、实验步骤1.总皂苷的提取称取穿山龙药材200g ，研碎，量取80%乙醇溶液500mL ，浸泡20min,超声提取1h,T=70℃，减压抽滤至无醇味。
第二次提取，加400mL 乙醇，二次超声30min,减压抽滤至无醇味，合并滤液。
滤液用正丁醇萃取（50ml ×3），回收正丁醇，得穿山龙中总皂苷粗品。
2.总皂苷的分离（无水条件）干燥：烧杯（100ml,2个）、锥形瓶（500ml,1个、50ml,20个）、蒸发皿、玻璃棒（2支）、量筒（100ml,1个、10ml ，1个），色谱柱、滴管2支。
HPLC-ELSD法测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量李艳荣;李强;洪霞;潘海峰【摘要】目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定穿山龙中薯蓣皂苷元含量的方法.方法:使用Agilent Eclipse C18(150×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水(95:5),柱温:40℃,流速1.0ml/min;蒸发光检测器以N2为载气,载气压力3.5bar,漂移管温度为70℃.结果:薯蓣皂苷元在2.04-0.255mg/ml范围内线性关系良好(r=0.9996),方法重复性好,平均回收率为98.9%(RSD=1.4%).结论:该方专属性强、灵敏、准确,可作为穿山龙的质量控制方法.【期刊名称】《承德医学院学报》【年(卷),期】2011(028)002【总页数】3页(P126-128)【关键词】穿山龙;薯蓣皂苷元;高效液相色谱法;蒸发光检测器【作者】李艳荣;李强;洪霞;潘海峰【作者单位】承德医学院中药研究所,河北承德067000;宽城县医院;承德医学院中药研究所,河北承德067000;承德医学院中药研究所,河北承德067000【正文语种】中文【中图分类】R917穿山龙是薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Mak)的根茎，具有活血舒筋、消食利水、祛痰截疟之功效，用于治疗风寒湿痹、慢性气管炎、消化不良、劳损扭伤等[1]。
民间多用穿山龙浸酒或煎服，治疗筋骨麻木和腰酸腰痛。
近年的研究证明，穿山龙有调节免疫、改善心血管功能、镇咳、祛痰、平喘等多种药理作用，治疗类风湿性关节炎、冠心病心绞痛、慢性气管炎、慢性布鲁菌病、脂肪瘤等，疗效较好[2]。
穿山龙中的薯蓣皂苷元是合成甾体激素的主要原料之一，药用价值日益受到人们的重视[3]。
薯蓣皂苷元为街烯醇，无共扼结构，只在低波长处有紫外吸收，因此采用常用的紫外检测器定量灵敏度较低。
本研究应用蒸发光散射检测器测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量，灵敏、专属性强，明显提高了含量测定的准确度。
实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识（一）目的要求学习羟基蒽醌类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。
2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的羟基蒽醌类化合物。
3.掌握蒽醌类化合物的主要检识方法。
4.熟悉蒽醌类化合物的色谱检识方法。
5.了解用柱色谱法分离蒽醌类成分。
（二）主要化学成分的结构及性质大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim. ex Reg.和药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。
大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷，总含量约3％～5％。
1．大黄酸(rhein) 分子式C15H8O6，分子量284.21。
黄色针状结晶（升华法），mp.321～322℃，330℃分解。
能溶于碱水、吡啶，略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醚和石油醚，几不溶于水。
2．大黄素(emodin) 分子式C15H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶(乙醇)，mp.256～257℃，能升华。
易溶于乙醇、碱水，微溶于乙醚、氯仿，几不溶于水。
3．芦荟大黄素(aloe-emodin) 分子式C16H10O5，分子量270.23。
橙色针状结晶（甲苯），mp.223～224℃。
易溶于热乙醇，可溶于乙醚和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸中呈绯红色。
4．大黄酚(chrysophanol) 分子式C15H10O4，分子量254.23。
橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196～197℃，能升华。
易溶于沸乙醇，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙醚和冰醋酸，极微溶于石油醚、冷乙醇，几不溶于水。
5．大黄素甲醚(physcion) 分子式C 16H 12O 5，分子量284.26。
砖红色单斜针状结晶，mp.203～207℃，溶于苯、氯仿、吡啶及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙醚和丙酮。
薯蓣皂苷元的提取、精制与鉴定
一、概述
穿山龙为薯蓣科穿龙薯蓣（Dioscorea nipponica Makino ）的干燥根茎。
具有活血化瘀、祛风除湿、清肺化痰等功效。
穿山龙中主要化学成分的结构及物理性质：
薯蓣皂苷（dioscin ）为无定形粉未或针状结晶，mp275～277℃。
可溶于甲醇、乙醇、甲酸，难溶于丙酮和弱极性有机溶剂，不溶于水。
薯蓣皂苷元（diosgenin ）为白色粉末，mp204～207℃，[]25
D α
-129。
（C ＝1.4三氯甲烷）。
可溶于有机溶剂及醋酸中，不溶于水。
薯蓣皂苷元 D －葡萄糖 L －鼠李糖
薯蓣皂苷
二、实验部分 （一）实验目的要求
1、掌握穿山龙中薯蓣皂苷元的提取和精制方法。
2、熟悉薯蓣皂苷及皂苷元的性质和检识方法。
（二）实验原理
薯蓣皂苷元在植物体内与糖结合成苷，经水解（酸水解、酶水解）可得薯蓣皂苷元和糖。
利用薯蓣皂苷元不溶于水，溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取，将其从原植物中提取出来。
（三）实验药材、仪器与试剂 1、药材：穿山龙粗粉70g （每组）
2、仪器：电热套、圆底烧瓶、冷凝管、纱布、乳钵、PH 试纸、烘箱、试管、
HO
O
O
H O
CH 3OH
OH OH
O
OH
OH
OH CH 2OH
H,OH
H,OH
+
+
O O
O O O CH 3
OH OHOH OH
CH 2OH O CH 3
OH OHOH
O O
H +
水浴锅、索氏提取器等。
3、试剂: 浓H2SO
4、Na2CO3粉末、蒸馏水、95%乙醇、1%磷钼酸乙醇溶液、石油醚（60-90℃）、醋酐、浓硫酸、三氯甲烷、浓硫酸等。
（三）实验内容
1、薯蓣皂苷元的提取、分离和精制
穿山龙粗粉（70g）
置圆底烧瓶中，加水350ml、浓H2SO430ml，
室温浸泡24小时，文火加热回流4～6小时，
放冷，倾出酸水液
酸性药渣
用清水反复漂洗除去余酸，然后将药渣倒入
乳钵中，加Na2CO3粉末，反复研
磨调PH至中性（用PH试纸测试）、水洗、抽干
中性药渣
低温（80℃）干燥12小时
干燥药渣
置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中，
以石油醚（60-90℃）150 ml为溶剂，连
续回流提取4-5小时
10-15ml，迅速倾入
48h），抽滤
用少量冷石油醚洗二次，抽干
薯蓣皂苷元粗品
置圆底烧瓶中，加50ml甲醇，在沸水浴上加热回流至
完全溶解，趁热抽滤，滤液放入冰箱析晶。
薯蓣皂苷元精品
2、鉴定
（1）检识反应
①醋酐－浓硫酸反应（Liebermann-Burchard反应）
取样品适量，加冰醋酸0.5ml使溶解，续加醋酐0.5ml搅匀，再于溶液的边沿滴加1滴浓硫酸，观察并记录现象。
②三氯甲烷－浓硫酸反应（Salkowski反应）
取样品适量，加三氯甲烷1ml使溶解，沿试管壁加等量的浓硫酸，分别置可见光及紫外灯下，观察并记录现象。
（2）薄层色谱鉴定
吸附剂：硅胶G-CMC-Na薄层板
样品：1%自制薯蓣皂苷元的乙醇液
对照品：1%薯蓣皂苷元标准品的乙醇液
展开剂：苯-乙酸乙酯（8:2）
显色剂：1%磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。
实验结果记录：观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。
（四）实验指导及注意事项
1．原料经酸水解后应充分洗涤呈中性，以免烘干时炭化。
2．在干燥水解原料的过程中，应注意压散团块和勤翻动，以利快干。
3．在连续回流提取过程中，由于使用的石油醚极易挥发损失，故水浴温度不宜过高，能使石油醚微沸即可。
此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。
4．回收石油醚的蒸馏操作，不必另换蒸馏装置。
只将索氏提取器中的滤纸筒取出，再照原样装好，继续加热回收烧瓶中的溶剂，待溶剂液面增加至高虹吸管顶部弯曲处1cm处，暂停回收，取下提取器，将其中石油醚移置另外容器中，如此反复操作，即可完成回收石油醚的操作。
5．在连续提取过程中，欲检查有效成分是否提取完全，可取提取器中提取液数滴，滴于白瓷皿中，挥散溶剂，观察有无残留物，然后进行醋酐－浓硫酸反应。
若反应呈阴性，示已提尽。
（五）思考题
1．甾体皂苷可用哪些反应进行鉴定？
2．试设计一种从穿山龙中提取薯蓣皂苷的工艺流程，并说明提取、分离原理。
3．使用石油醚作提取溶剂时，操作中应注意哪些事项？。
