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非发酵菌及检验

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非发酵菌及检验

非发酵菌及检验

氧化酶（+） 触酶（+） 不分解任何糖 动力、吲哚、 甲基红、VP 、DNA酶（-） 6.5%NaCL肉汤不生长
+ 二、微生物检验
+ 1.标本采集 + 2.方法与鉴定
+ 临床意义
人和动物黏膜上的正常菌群，也引起社 区和医内感染。本菌是呼吸道感染的主要 致病菌。大多菌株对青霉素、四环素、氨 基糖苷类敏感。
+ 1.标本采集 + 2.方法及鉴定
+ 临床意义
条件致病菌 医院感染常见菌 对广谱抗生素有耐药性，红霉素、克 林霉素、复方磺胺敏感。
鉴定试验
肠杆菌科
非发酵菌
弧菌科
氧化酶
葡萄糖氧化/ 发酵（O/F） 鞭毛
－
F
＋
O／－
＋
F
周鞭毛
单、丛、周
单、丛
+ 脑膜败血性黄杆菌 + 芳香黄杆菌 + 短黄杆菌
+ 水生黄杆菌
+ 嗜糖黄杆菌 + 嗜醇黄杆菌
+ 嗜温黄杆菌
+ F.yabuuchiae
+ 定义：氧化酶阳性、产黄色素、无动力、
吲哚阳性或阴性的非发酵革兰阴性菌。
+ 一、生物学性状 + 1.形态与染色 革兰阴性杆菌 菌体细长
两端略膨大 无动力 无芽胞
发 氧 产
+ 《伯杰系统细菌学手册》（1984）分类法
+ + + + + +
按rRNA和DNA同源性，分5个RNA Ⅰ 铜绿假单胞菌 Ⅱ 洋葱假单胞菌 鼻疽假单胞菌 Ⅲ 食醋假单胞菌 Ⅳ 微小假单胞菌 Ⅴ 嗜麦芽假单胞菌 腐败假单胞菌

dl第二十一章 非发酵菌及检验

dl第二十一章 非发酵菌及检验
新鲜标本（胸腹水、脑脊液、脓汁等），分离培养 可疑菌落可涂片镜检。
分离培养
BAP、SS、MAC
鉴定
初步鉴定（菌落、菌体特征，色素、氧化酶、 KIA），最后鉴定（系统生化、血清学）
药敏试验
粪便
胸腹水 离心 脑脊液 沉淀 尿液 分泌物 血液 （增菌） 体液
分离培养 （SS、MAC）
可 疑 菌 落 初 步 鉴 定
不动杆菌属
不动杆菌属（Acinetobater）为一群不发酵
糖类、氧化酶 - 、无动力的革兰阴性杆菌。 生化反应：氧化酶 - ，MIU - - - ，硝酸盐 还原试验 - 。 耐药性：对全部氨基青霉素、一代二代头 孢菌素和一代喹诺酮类抗生素天然耐药。
鲍曼不动杆菌在BAP上的生长现象
4 2 1
O-F
1
DNA
结果 总值
O
+ + — 6
+ — + 5
+ — — 4
鉴定值：1654
鉴定结果：铜绿假单胞菌
嗜麦芽窄食假单胞菌
嗜麦芽窄食假单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）为条件致病菌，常引起抵抗力
低下患者的各种感染，在假单胞菌的感染 中检出率仅次于铜绿假单胞菌。 生化反应特殊：氧化酶 - ；赖氨酸脱羧酶 +； 氧化分解麦芽糖；水解七叶苷。 耐药性：含有-内酰氨酶，对亚胺培南天然 耐药，临床治疗首选磺胺类（TMP/SMZ）； 喹诺酮类：环丙沙星或替卡西林/克拉维酸。
铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）是假单胞
菌属的代表菌种，为条件致病菌，是医院 感染的主要病原菌。可经多种感染途径、 污染导致多种感染，且对多种抗生素天然 耐药，因此有很重要的临床意义。

非发酵菌的测定实验报告

非发酵菌的测定实验报告

一、实验目的1. 掌握非发酵菌的基本概念及分类；2. 熟悉非发酵菌的鉴定方法；3. 提高实验室操作技能，培养科学思维和严谨的工作态度。

二、实验原理非发酵菌是一类不发酵或不分解糖类的革兰氏阴性杆菌，主要包括假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。

非发酵菌的鉴定主要通过观察菌落特征、进行生化试验、动力与鞭毛观察等手段。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）非发酵菌菌种：假单胞菌、不动杆菌、产碱杆菌、莫拉菌、黄杆菌等；（2）培养基：普通琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板、动力半固体培养基、氧化酶试验培养基等；（3）试剂：葡萄糖、乳糖、酵母提取物、酚红指示剂、氧化酶试剂等；（4）实验仪器：恒温培养箱、显微镜、酒精灯、无菌操作台等。

2. 实验仪器：（1）显微镜：用于观察菌落特征；（2）恒温培养箱：用于培养菌种；（3）酒精灯：用于无菌操作；（4）无菌操作台：用于无菌操作。

四、实验方法与步骤1. 菌落观察（1）将菌种接种于普通琼脂平板、血琼脂平板、麦康凯琼脂平板，分别于30℃、37℃培养24小时；（2）观察菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘、表面、透明度等；（3）记录观察结果。

2. 动力与鞭毛观察（1）将菌种接种于动力半固体培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种在半固体培养基中的生长情况，如是否有鞭毛、菌落是否呈指状、螺旋状等；（3）记录观察结果。

3. 氧化酶试验（1）将菌种接种于氧化酶试验培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种是否产生氧化酶，即菌落周围是否出现绿色；（3）记录观察结果。

4. 氧化-发酵（O/F）试验（1）将菌种接种于氧化-发酵试验培养基，30℃培养24小时；（2）观察菌种是否产生酸，即菌落周围是否出现红色；（3）记录观察结果。

5. 麦康凯琼脂平板生长情况（1）将菌种接种于麦康凯琼脂平板，30℃培养24小时；（2）观察菌种在麦康凯琼脂平板上的生长情况，如是否生长、生长速度等；（3）记录观察结果。

【医学】非发酵菌及检验章节习题及答案

【医学】非发酵菌及检验章节习题及答案

非发酵菌及检验章节习题及答案一、选择题1、有关“铜绿假单胞菌的致病特点”的叙述中，哪一项是错误的（）A、条件致病菌B、具有内、外毒素和侵袭性酶C、多为原发感染D、引起败血症E、感染多见于皮肤黏膜受损部位答案：C2、铜绿假单胞菌引起的医源性感染最常见于（）A、烧伤患者B、胸膜炎患者C、肺炎患者D、恶性肿瘤患者E、肝炎患者答案：A3、不动杆菌属细菌引起的院内感染，最常见的部位是（）A、呼吸道B、消化道C、生殖道D、皮肤伤口E、泌尿道答案：A4、对碳青霉烯类抗生素天然耐药的是（）A、铜绿假单胞菌B、嗜麦芽寡养单胞菌C、恶臭单胞菌D、粪产碱杆菌E、荧光假单胞菌答案：B5.铜绿假单胞菌失去特异性外膜蛋白D2后对亚胺培南耐药，其细菌耐药机制是（）A.青霉素结合蛋白的改变B.药物作用靶位改变C.抗菌药物渗透障碍D.产生钝化酶E.产β-内酰胺酶答案：C6.铜绿假单胞菌培养特性为（）A.专性需氧B.专性厌氧C.兼性厌氧D.微需氧E.兼性好氧答案：A7.铜绿假单胞菌的生化反应正确的是（）A.不分解葡萄糖B.产生吲哚C.产生H2SD.氧化酶试验阳性E.不分解尿素答案：D8.铜绿假单胞菌区别于荧光假单胞菌的试验是（）A.42℃生长试验B.葡萄糖氧化分解试验C.氧化酶试验D.动力试验E.精氨酸双水解酶试验答案：A9.氧化酶试验阳性的对照质控菌（）A.大肠埃希菌B.金黄色葡萄球菌C.铜绿假单胞菌D.肺炎链球菌E.肠球菌答案：C10.还原硝酸盐可产生氮气的细菌是（）A.大肠埃希菌B.奇异变形杆菌C.铜绿假单胞菌D.白色念珠菌E.链球菌答案：C11.人类非发酵菌感染中，主要为（）A.铜绿假单胞菌B.嗜麦芽糖假单胞菌C.荧光假单胞菌D.恶臭假单胞菌E.斯氏假单胞菌答案：A。

实验九：非发酵菌

实验九：非发酵菌
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 思考题：鞭毛染色法的原理？
小结
非发酵菌的鉴定要点，尤其是铜绿假单胞菌的鉴定。 1、培养特点及菌落特征：在普通琼脂平板上产生特征性的 蓝绿色水溶性绿脓素和黄绿色青脓素，血平板上形成大而 扁平，湿润，边缘不齐，有金属光泽，有生姜气味的灰绿 色菌落，并形成透明溶血环 最适生长温度35℃，4℃不生长，42℃可生长 2、95%以上的铜绿假单胞菌可通过观察以下几个特征而得 到鉴定： • 氧化酶阳性（10秒内）。 • 菌落较大，生姜样气味。 • 绿脓素产生。 • 少数铜绿假单胞菌可产生其他颜色色素，如红脓素（红 色），黑脓素（棕色到黑色），青脓素（黄色）。
非发酵菌生化编码鉴定管
• 原理：该系列鉴定共有9种生化培养基，共10项试验，参 照下述方法，将试验结果换算成4位数字，加以数值化后 查表。 • 例：某一分离菌株，具有下列鉴定结果，数值化后为1734， 查表得知：可能为施氏假单胞菌和洋葱单胞菌，再按表中 要求做硝酸盐产气补充实验区分。 • 1组 2组 3组 4组 O-F 氧化酶4分 精氨酸4分 硝还4分 厌氧2分 枸橼酸2分 甘露醇2分 DNA酶2分 需氧1分 麦芽糖1分 木糖1分 乙酰胺1分 结果：需氧 + + + - + + + - 得分： 1 7 3 4
实验九：非发酵菌
实验目的
• 掌握非发酵菌的基本特征和鉴定程序 • 掌握非发酵菌分类的鉴别试验
不发酵革兰阴性杆菌
• 假单胞菌属：铜绿假单胞菌 • 不动杆菌属：硝酸盐不动杆菌 • 产碱杆菌属：粪产碱杆菌
不发酵革兰阴性杆菌鉴定程序
• 见检验程序
实验内容
• 一、ＧＳ、氧化酶试验 • 二、接种非发酵菌生化编码鉴定管 • 三、鞭毛染色

非发酵菌 微生物学检验

非发酵菌 微生物学检验

非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。

（1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。

（2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。

（3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。

2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. 非发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。

（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。

（3）麦康凯上生长很差或不生长。

（4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。

4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。

（2）氧化酶试验：（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。

更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。

（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。

（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。

（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。

实验：非发酵菌的鉴定

H2S产生 在42℃ 生长
－
－ ＋
0
0 100
不动杆菌属主要菌种间的鉴别
醋酸钙 葡萄糖氧化 木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 + － ＋ ＋ 鲍曼 + ＋ ＋ ＋ 溶血 琼氏 约翰逊 洛菲 － － ＋ －/＋ － － ＋ － +/－ － +/－ － － ＋ ＋ ＋
鸟氨酸脱羧酶
枸椽酸盐利用 明胶液化 生长温度: 37℃ 41℃ 42℃
实验：非发酵菌的鉴定
实验目的


1.掌握常见非发酵菌的形态、染色特性、生 化反应及鉴定依据； 2.熟悉常见的几种非发酵菌的鉴定程序及鉴 别方法。
器材和试剂


1.菌种：假单胞菌属细菌、不动杆菌属细菌 和窄食单胞菌属细菌； 2.鉴定试验：双糖管，葡萄糖OF管，枸椽 酸盐琼脂，尿素，鸟氨酸、精氨酸、赖氨 酸，明胶、七叶苷，DNA酶，硝酸盐，木 糖，乳糖，蔗糖。
方法：

1.形态观察； 2.菌落观察； 3.生化反应。
常见非发酵菌的鉴定依据

1.铜绿假单胞菌：
＋ ＋ ＋ － ＋/－ 97 97 98 0 85
单端鞭毛（三根以下） 动 力 氧化分解（O-F培养基） 葡萄糖 乳糖、蔗糖 木 糖
氧化酶
赖氨酸脱羧酶 精氨酸双水解酶
＋
－ ＋
100
0 99
鸟氨酸脱羧酶
＋
＋ － ＋ － －
＋
＋ － ＋ ＋ ＋
－
＋ ＋ ＋ － －
－
－ ＋ ＋ －
－
－ － － －
－
－ － ＋ － －
＋/－ ＋
嗜麦芽窄食单胞菌
氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 七叶苷 赖氨酸 – + + +/+ +

微生物学--非发酵菌检验


（二）、微生物特性
❖ G-直或微弯曲杆菌，具有端鞭毛1-8根2根或 多根极端丛鞭毛，有动力，无芽孢。
❖ 该菌专性需氧，营养要求不高，可在普通平 板血平板和MAC上生长。血平板上培养1824小时，形成圆形、光滑、湿润、浅黄色菌 落；培养48小时菌落，可呈黄色、绿色或灰 白色，菌落中心可有变透明的趋势，称为“猫 眼”现象。
光滑、半透明、边缘整 齐不溶血的菌落。
（四）、微生物学检验
鉴定： ❖ 氧化酶阳性 ❖ 触酶阳性 ❖ 无动力 ❖ 不分解任何糖类 ❖ 吲哚试验阴性
（五）、药物敏感试验及结果解释
❖ 对青霉素类敏感 ❖ 对头孢类、四环素类、喹诺酮类、氨基糖
甙类药物均为敏感 ❖ 脑炎或脑膜炎、脑脓肿应注意药物通过血
脑屏障的问题
（二）、临床意义
❖ 引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、 脑脓肿、心包炎、心内膜炎及泌尿生殖系 统炎症
（三）、微生物特性
❖ 革兰阴性球杆菌 ❖ 呈双短链状排列，
具有多形性
（四）、微生物学检验
分离培养： ❖ 营养要求较高 ❖ 生长温度32~35℃ ❖ 血琼脂平板上生长良好 ❖ 针尖大小的圆形凸起、
生物学特性
G-杆菌，无芽孢，无荚膜，多数菌有端鞭毛或 丛鞭毛，专性需氧菌，生长温度范围广，最适 30-37度，普通培养基上可以生长，可产各种水 溶性色素。抵抗力强，多种抗生素耐药。
微生物检验
2.鉴定：氧化分解葡萄糖、产酸不产气，触酶 氧化酶阳性，吲哚 、甲基红、VP阴性。
❖分型
1.噬菌体分型 2.血清分型 3.核糖体分型 4.PFGE分型
（二）、微生物检验
❖ 鉴定：氧化酶（-），明胶液化试验（+）， 七叶苷（+），赖氨酸脱羧酶（+）， 氧化分解葡萄糖。

非发酵菌-2010


辅助培养
嗜麦芽窄食单胞菌
鉴定： 氧化酶 动力 明胶 42ﾟC 七叶苷 赖氨酸 麦芽糖
– + + +/+ + O
耐药性
对亚胺培南天然耐药，主要是产金属酶； 经验用药首选磺胺类，但目前磺胺类抗生 素的耐药率已经开始上升。 K-B法可选用的药物有SXT、LEV和MNO。
洋葱伯克霍尔德菌
一般不引起人致病，但易从纤维囊肿病人 中分离，在一些免疫力低下的患者中也可 能分离到。 生物学特性：氧化酶>90%阳性，赖氨酸阳 性，多鞭毛。
＋
＋
97
98
－ ＋/－ ＋ － ＋ － － ＋
0 85 100 0 99 0 0 100
（2）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型 （3）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝 胶电泳分析（PFGE pulsed field gel electrophoresis）、基因芯片、PCR技术、 16SrDNA分型鉴定技术
致病机制
粘附素：粘附 结构成分 荚膜多糖：抗呑噬
内毒素：LPS
毒力因子 毒素 外毒素：A 阻止真核细胞蛋白质合成 S 干扰吞噬杀菌作用 绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧 化物和 过氧化氢产生有毒基团 酶类 弹性蛋白酶:丝氨酸蛋白酶（Las-A） 降解 弹性锌金属蛋白酶（Las-B）蛋白 磷脂酶C: 分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞
3生化反应：OX弱阳性或阴性，H2O2阳性， 能水解明胶，不发酵糖。 4抗原结构：有O抗原和H抗原，O抗原有特 异性。 5.抵抗力：抵抗力强，在水中可存活数月。 对化学消毒剂敏感。
致病性
可引起肺炎型（重症类型）、流感样型 （轻症类型）和肺外感染三种类型； 肺炎型死亡率高 感染后对该菌有一定的抵抗力。

非发酵菌及检验

1、标本采集：血液、脑脊液、胸腹水、尿 液、痰液、脓汁等。医院环境监控：可采空气、 水、物体表面等。 2、检验程序
3、检先增菌，再转 种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、 尿可直接种于上述培养基分离培养。
（3）鉴定：根据菌落特征、色素、 生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等 作出鉴定。对无色素的菌株应与其他 假单胞菌鉴别。
铜绿假单胞菌的检验程序：
血液 体液
脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 粪便
分离培养 血、麦康凯
增 菌 营养肉汤
直接涂片染色
分离培养 SS、麦康凯
初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、氧化酶
最后鉴定
生化反应
分型：血清学
噬菌体
铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别
试 验 铜绿假 单胞菌 ＋ 荧光假 单胞菌 ＋ 恶臭假 单胞菌 ＋ 斯氏假 单胞菌 ＋ 嗜麦芽 假单胞 ＿ 鼻疽假 单胞菌 ＋/＿ 类鼻疽 假单胞 ＋
挑选可疑菌落
最后鉴定 生化反应
初步鉴定 KIA：底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力
不动杆菌属主要菌种生化反应特征
醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 琼氏不 动杆菌 约翰逊 不动杆菌 洛菲不 动杆菌
葡萄糖氧化
木糖氧化 乳糖氧化 精氨酸双水解酶
＋
＿ ＋ ＋
＋
＋ ＋ ＋
+/_
+/_ ＿ ＋
琼氏不动杆菌
约翰逊不动杆菌
一、生物学性状
形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列， 不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。
最适温度35℃ ，鲍曼不动杆菌42℃可生长。 血平板上 圆形凸起、2~3 mm ，光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 β -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。
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窄食单胞菌属(Stenotrophmonas) 土壤杆菌属
丛毛单胞菌属(Comamonas)
金氏杆菌属(Kingella) 食酸菌属（Acidovorax）
莫拉菌属(Moraxella)
鉴定系统
非发酵菌生化鉴定系统
假单胞菌属
(Pseudomonas)
一、分类 P335
假单胞菌属包括200多个菌种，尤以铜绿假单 胞菌（P.aeruginosa）多见。 恶臭假单胞菌生物变种(P.putica biovars)
• 非发酵革兰阴性菌（非发酵菌）的概念、
二、细菌特性
1. 形态染色
革兰阴性杆菌， 多为球杆状，单个存
在或成双排列，无芽
胞，无鞭毛，粘液型
菌株有荚膜。
2. 培养特性
专性需氧，营养要求不高，最 适生长温度为37℃，但有些 菌株可在42℃生长。 血琼脂平板：菌落圆形、光滑、 边缘整齐、灰白色，多数菌 株不溶血，有些β溶血。
麦康凯琼脂平板：菌落呈粉红 色，但在SS琼脂培养基上只 有部分菌株生长。
四、微生物学检验
胸水、血液 血清间接荧光 抗体染色、 ELISA等 气管分泌物和肺、肝、脾组织 分离培养 BCYE或BCYE＋抗生素 血琼脂平板、巧克力琼脂平板 35℃ 2.5%CO2 24h生长 （非军团菌） 48h后生长 革兰染色 姬美耐染色 革兰阴性菌 革兰阳性菌 非军团菌 直接荧光抗体 PCR、DNA探针 双相培养基 BCYE 增菌培养
3. 生化反应
氧化酶－
O/F试验为氧化型（O）
硝酸盐还原试验－
三、临床意义
条件致病菌，医院感染的常见病
原菌。
可从各种临床标本如血液、尿液、
脓液、呼吸道分泌物及脑脊液等
中分离出来。
鲍曼不动杆菌 P342
• 对全部氨基青霉素，第一、二代头
孢菌素，第一代喹诺酮类抗生素天 然耐药。
四、微生物学检验 P172
状排列，无芽胞，有荚膜，
菌体一端有单鞭毛。
2. 培养特性
• 专性需氧，最适生长温度25~30℃，可
在42℃生长，4℃不生长。
• 营养要求不高，普通培养基上均能生长。
产生多种色素，常见有绿脓素和荧光素。
• 在液体培养基中呈表面菌膜生长，菌液
上层为蓝绿色。
普通琼脂平板：菌落圆形、 大小不一、边缘不整齐、 扁平稍隆起、湿润光滑、 常成融合状态。
之外最常见的非发酵革兰阴性杆菌。
耐药性强
• 对亚胺培南天然耐药
军团菌属 P375 （Legionella）
一、分类
军团菌科，军团菌属。已命名的菌 种共有45种，64个血清型。现已命名
了39种军团杆菌，至少19种是人类肺
炎的病原。其中最常见病原体为嗜肺
军团菌(占病例的85%~90%)。
二、细菌特性
军团菌为细菌性肺炎的前3位病原之 一，早已存在于我们生活中，并对 人群构成了潜在威胁
• 军团菌病是1976年在美国费城首次被发现
的急性呼吸道传染病，当时在退伍军人大 会上暴发流行，导致221人发病，34人死 亡。此后，世界上许多国家均有军团菌病 的发生，每次暴发都引起世人的广泛关注。 世界卫生组织由此把本病列入疾病传报范 围。我国自1982年在南京首次证实军团菌 病例以来，全国已有多起军团菌病的散发 与暴发流行的报道。
常见菌属
假单胞菌属(Pseudomonas) 不动杆菌属(Acinetobacter) 伯克菌属（Burkholderia） 产碱杆菌属(Alcaligenes) 无色杆菌属(Achromobacter) 黄杆菌属(Flavobaterium) 艾肯杆菌属(Eikenella) (Agrobacterium) 黄单胞菌属(Xanthomonas)
呈淡紫绿色，有氨味；
麦康凯琼脂平板：菌落呈淡 黄色。
3. 生化反应
氧化酶试验－ O/F试验：麦芽糖＋，但葡萄糖氧
化分解可阴性
硝酸盐还原试验＋ 赖氨酸脱羧酶＋ DNA酶＋
三、临床意义
广泛分布于自然界中，亦可寄居
于人的呼吸道和肠道中，为条件致
病菌。
临床感染标本中，除铜绿假单胞菌
斯氏假单胞菌（P.stutizeri）
曼多辛假单胞菌(P.mendocina)
产碱假单胞菌(P.alcaligenes)
假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)
二、概述部分（自学）
• 生物学特性 • 致病物质和所致疾病 • 微生物学检验 • 药物敏感试验
三、铜绿假单胞菌
（一）细菌特性 1. 形态染色 革兰阴性杆菌，菌体细长， 且长短不一，有时呈球杆状 或丝状，单个、成对或短链
血琼脂平板 巧克力琼脂平板
生长 （非军团菌） 不生长 可能是军团菌
BCYE琼脂
生长
鉴定： 菌落特征 生化反应 直接荧光抗体染色
自学：产碱杆菌属 P345
• 临床意义 • 生物学特性 • 微生物学检验
思考
特点 ？ • 铜绿假单胞菌的生物学特性及细菌学检 验方法 ？
下次课内容：弧菌科、弯曲菌属和螺杆 菌
1. 形态染色
革兰阴性杆菌，有端鞭
毛或侧鞭毛，动力阳性。 无芽胞，无荚膜
革兰染色
菌落扫描电镜图
免疫荧光染色
2.培养特性
需氧菌，首次分离需5%CO2，
营养要求严格，常用培养基为缓
冲活性炭-酵母琼脂培养基 （BCYE）。 生长缓慢，在BCYE上3～5d形 成直径1～2mm，圆形凸起、灰 白色有光泽的菌落，初期外观呈 刻花玻璃样花纹，继续培养消失。
要求
• 1.掌握非发酵革兰阴性菌（非发酵菌）的概念、 •
•
特点及非发酵菌的初步辨认和初步分群方法；掌 握铜绿假单胞菌的生物学特性及细菌学检验方法。 2.熟悉嗜麦芽窄食单胞菌和不动杆菌属的生物学 特性及细菌学检验方法。 3.了解常见非发酵菌在医院感染中的意义，了解 军团菌属的生物学特性及检验方法。
定义：
军团菌属
3.生化反应 触酶阳性
部分菌株氧化酶阳性 液化明胶 不分解糖类 不还原硝酸盐 脲酶阴性 嗜肺军团菌能水解马尿酸盐 多数菌株β-内酰胺酶阳性
4.抵抗力
• 对热和常用化学消毒剂敏感。 • 蒸馏水中可存活100天以上，下水道
污水中可存活1年。
三、临床意义
广泛存在于水和土壤中，在人工管道的水源 中常见，如医院空调器的冷却水、淋浴头和辅 助呼吸机等产生的气溶胶颗粒中常有此菌，是 医院感染的主要病原菌之一。 临床表现多种多样，主要有流感样型（轻症 型）、肺炎型（重症型）和肺外感染三种临床 类型。最常见的是肺炎型。
• 多重耐药，能天然抗多种药物 • 耐药机制：酶、菌体成分、外排泵、
外膜渗透性改变、生物膜等
（三）微生物学检验
脑脊液、脓汁、痰液、尿液 直接涂片检 分离培养 查 （BAP、MAC） 血液、环境用品 粪便
增菌培养
分离培养 （SS、MAC）
可疑菌落
最后鉴定 生化试验 分型试验 色素鉴定 （血清学、噬菌体）
非发酵菌(nonfermenters) 革兰阴性 杆菌， 指一大群不发酵葡萄糖或仅以
氧化形式利用糖类的需氧或兼性厌氧、
无芽胞的革兰阴性杆菌。
主要特点：
属和种 ；
菌属菌种多，在分类学上分别属于不同的科、
大多数不发酵糖类或仅以氧化形式利用糖类；
大多数为专性需氧菌；
是目前医院感染的主要病原菌。
主要存在于外界环境中，大多数为条件致病菌
尿液、痰液、脓汁 直接涂片 革兰染色镜检 分离培养 （BAP、MAC）
35℃ 18～24h
可疑菌落
革兰阴性球杆菌 氧化酶阴性
动力 阴性
KIA
底层斜面 不变色
全面生化反应 最终鉴定
报告
窄食（寡养）单胞菌属
P343
(Stenotrophmonas）
一、分类
寡养单胞菌目前5个种，最重要的是
嗜麦芽寡养单胞菌（S.maltophilia） 。 其分类经过了两次改名：
非发酵革兰阴性杆菌 p335
程曦
复习
• 疑为伤寒沙门菌感染，应如何进行微 • •
•
生物学检验？ Widal test 的定义和结果解释。 根据生化反应和O抗原，可将志贺菌 属怎样分群？ 请解释什么是“外斐试验”。
内容
一．概述 二．假单胞菌属（铜绿假单胞菌和 嗜麦芽窄食单胞菌） 三．不动杆菌属（鲍曼不动杆菌） 四．军团菌属
初步鉴定
形态染色特点 菌落特征 气味 绿脓素 氧化酶 + O/F：O
三、其它假单胞菌
不动杆菌属 (Acinetobቤተ መጻሕፍቲ ባይዱcter) P341
一、分类
归属奈瑟氏菌科。根据DNA-DNA杂交和营养
特征分为32个基因种，但只有10个基因种16种
不动杆菌有菌名，临床常见： 基因种1：醋酸钙不动杆菌(A.calcoaceticus) 基因种2：鲍曼不动杆菌(A.baumannii) 基因种4：溶血不动杆菌(A.haemolyticus) 基因种5：琼氏不动杆菌(A.junii) 基因种7：约氏不动杆菌(A.johnsonii) 基因种8：洛菲不动杆菌(A.1woffi)
假单胞菌属（嗜麦芽假单胞菌）→黄
单胞菌属（嗜麦芽黄单胞菌）→窄食单 胞菌属（嗜麦芽寡养单胞菌）。
二、细菌特性
1. 形态染色 革兰阴性杆菌，有一端或两端
丛鞭毛，多数在三根以上，
无芽胞，无荚膜，可产生菌毛。
2. 培养特性
专性需氧，营养要求不高，
最适生长温度35℃，4℃不
生长。
血琼脂平板：菌落血平板上
• H抗原 • 黏液抗原（S抗原） • 菌毛抗原
（二）临床意义 P338
1. 致病因子 （1）侵袭力： 粘附素、荚膜多糖 （2）毒素： （3）绿脓素 （4）侵袭性酶类：弹性蛋白酶、磷脂酶C 外毒素、内毒素