不同提取方法对槐米多糖抗氧化活性的影响_范巧宁(1)
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多糖经过四次 sevag 法脱蛋白前后溶液中是否含有
蛋白质类杂质。
1.2.4.2 酚类物质检测 参考文献［11］的方法。
1.2.4.3 还原性检测 将干燥后的槐米粗多糖溶解
于适量的蒸馏水中，得粗多糖溶液。取该溶液 2mL，
加入新配制的斐林试剂 2mL，煮沸 2min，观察反应中
颜色的变化。
取粗多糖溶液 2mL，加入新配制的双缩脲 2mL
器有限公司； KQ 3200DE 型超声波清洗器 昆山市
超声波仪器有限公司； TU 1810 紫外－ 可见分光光度
计 北京普析通用仪器有限责任公司； HH－8B 型数
显恒温水浴锅 国华电器有限公司； HHW － 21CU －
600 型电热恒温水槽 上海福玛实验设备有限公司；
800B 型离心机 上海安亭科学仪器厂； FD － 1 冷冻
测多糖含量，考 查 超 声 功 率 对 槐 米 多 糖 得 率 的 影 响
情况。
1.2.3 多糖含量测定及得率计算 多糖含量的测定 采用苯 酚 － 硫 酸 法［10］。精 确 称 取 粗 多 糖 10.0mg 溶
解，定容至 100mL 容量瓶中，吸取该溶液 1.0mL 于试
管中，依次加入 5% 苯酚溶液 1.0、5.0mL 浓硫酸，静置
polysaccharides of ultrasonic extraction to superoxide radical assay （ scavenging rate，70.78% ） and hydroxyl
radical assay（ scavenging rate，75.34% ） was higher than polysaccharides of hot water extraction（ scavenging rate，
Abstract： Polysaccharides from Flos Sophora were obtained and determined by hot water extraction and ultrasonic
extraction，ethanol precipitation and phenol － sulfuric acid method respectively. And antioxidant activity of the
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定其含量。并分别对超声提取法与热水浸提法所得
槐米多糖清除 DPPH 自由基、羟自由基（ ·OH） 、超氧 阴离子自由基（ O2－·） 的清除能力和还原能力进行研 究，以研究其抗氧化活性。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
槐米 产自山东省临沂市费县。
1，1－ 二苯基－2 － 苦苯肼自由基（ DPPH·） 分析
收稿日期： 2014－03－05 作者简介： 范巧宁（ 1989－ ） ，女，硕士研究生，研究方向： 天然活性成分
及食品功能成分的研究。 * 通讯作者： 段玉峰（ 1955－ ） ，男，博士，教授，硕士生导师，研究方向：
天然活性成分及食品功能成分的研究。
用。多糖是由单糖通过糖苷键聚合成的高分子碳水 化合物，多糖不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程 度不同的物质的混合物。多糖具有广泛的生物学性 质［1］ ，包括抗肿瘤、抗 病 毒［2］ 、降 血 糖［3］ 、减 肥［4］ 、提 高 免疫［5］、抗辐射、抗凝血、抗血栓、抗癌和抗氧化等作 用［6］。多糖具有清除自由基的作用，能提高抗氧化酶 活性和抑制 脂 质 过 氧 化 的 活 性，起 到 保 护 生 物 膜 和 延缓衰老的作用［7］。槐米多糖含量丰富［8］，对槐米抗 氧化活性的 研 究，对 槐 米 的 功 效 研 究 以 开 发 利 用 有 重要意义。本文通过超声辅助提取和热水浸提法提 取槐米粗多糖，采用 Sevag 法脱蛋白，苯酚硫酸法测
polysaccharides in virto was investigated by using reducing power，superoxide radical assay，DPPH· scavenge，
activity and hydroxyl radical assay，using Vitamin C and BHT as a positive control.The results showed that the yield
FeCl3 、CuSO4.5H2 O、NaOH、NaOOC （ CHOH ） 2 COOK· 4H2 O、CCl4 、异戊醇 均为国产分析纯。
AL 204 型电子天平 梅特勒 － 托利多仪器 （ 上
海） 有限公司； ＲE52 －3 旋转蒸发器 上海沪西分析
仪器有限公司； 722 型可见分光光度计 上海光谱仪
纯，美 国 Sigma 公 司 产 品； 三 羟 基 甲 基 氨 基 甲 烷
（ Tris） 、邻 苯 三 酚 （ 焦 性 没 食 子 酸 ） 、三 氯 化 铁
（ FeCl3 ） 、六 氰 合 铁 化 钾（ ［K3 Fe （ CN） 6 ］） 、三 氯 乙 酸 （ TCA） 、苯酚、浓硫酸、乙醇（ 95% ） 、抗坏血酸（ VC ） 、磷 酸二氢钠、磷酸氢二双氧水、硫酸亚铁、水杨酸、盐酸、
值，吸光度越高，还原能力越强，三次平行，求其平均
值，以 VC 和 BHT 作为阳性对照。
（ DPPH·） 清除能力的测定 于 0.5mL 不同质量
中图分类号： TS201.2
文献标识码： B
文 章 编 号： 1002－0306（ 2014） 21－0273－05
doi： 10． 13386 / j． issn1002 － 0306． 2014． 21． 050
槐米为豆科植物槐的花蕾，又称为其荚果，与其 他豆类植物不同，肉胶质在种粒之间收缩，形成念珠 状。其体轻，气微，味微苦涩，作为药食两用植物，具 有凉血止 血，清 肝 泻 火 的 药 效。 槐 米 中 的 多 糖 在 抗 病毒、降 血 糖、抗 衰 老、抗 凝 血 等 方 面 均 有 一 定 的 作
30min，在 490nm 条件下测其吸光度值。重复三次，
求其平均值。得率计算公式为：
得率（ % ）
=
C
× M
V
×
100
式（ 1）
式中，C： 溶液中粗多糖浓度； V： 溶液总体积； M：
274
脱脂后槐米质量。
1.2.4 定性测定
1.2.4.1 紫外光谱分析 蛋白质、多肽、核酸等物质
在 260～280nm 处有明显吸收峰，通过紫外扫描鉴别
of Flos Sophora crude polysaccharide derived from ultrasonic extraction increased by 21.6% compared with the
hot water extraction. The scavenging activity of free radical，concentration from 0.125mg / mL to 2.0mg / mL，VC ＞ polysaccharides of ultrasonic extraction ＞ polysaccharides of hot water extraction ＞ BHT.The scavenging activity of
心（ 3000r / min，10min） 得沉淀→溶解、脱蛋白（ sevag 法） →透
析→冷冻干燥。
热水浸提： 取处理后的干槐米粉 5g，置于锥形瓶
中，按文献［8］得 到 的 最 佳 条 件 下 提 取，之 后 按 超 声
波提取工艺中的步骤进行处理。
1.2.2 提 取 分 离 参 考 文 献［9］的 方 法。液 料 比
为 2.5mL 的磷酸盐缓冲液（ pH = 6.6） 和 2.5mL 的铁
氰化钾溶液（ 1% ） ，混匀，50℃ 水浴 20min 后，再加入
2.5mL、10% 的三氯乙酸溶液，然后以 3000r / min 离
心分离 10min，取上层清液 2.5mL，依次加 2.5mL 蒸馏
水和 0.1% FeCl3 溶液 1mL，在 700nm 处测定吸光度
crude polysaccharides of extracts of different methods from Flos Sophora were promising free radical scavenger
and antibacterial activity.
Key words： Flos Sophora； crude polysaccharides； antioxidant activity； free radical； scavenging rate
干燥机 北京博医康技术公司； SHA－ e 型恒温振荡
器 金坛市富华仪器有限公司； T6 新世纪紫外 － 可
见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司。
1.2 实验方法
1.2.1 槐米多糖提取工艺流程 原料处理： 槐米烘干
（ 60℃ ） →粉碎→过筛（ 60 目） →脱脂（ 80% 乙醇）
提取方法： 超声提取→抽滤→浓缩→醇沉（ 过夜） →离
30∶ 温 度 65.78℃ 。
由于以往文 献 没 有 介 绍 超 声 功 率 的 影 响，本 实 验 采
用单因素实验法，取 5g 搓碎槐米，按照上述条件进
行超声 波 提 取 醇 沉 法 提 取 多 糖，超 声 功 率 分 别 为 160、240、320、400W，三 次 平 行 实 验，苯 酚 硫 酸 法［19］
（ 先加 A 试剂 2mL，再加 B 试剂 3～4 滴） ，在沸水浴中
反应 2min，观察反应中颜色的变化［11］。
1.2.5 抗氧化活性测定 总还原能力测定： 采用普
鲁士蓝法［12］，于 1mL 不同质量浓度的粗多糖（ 0.125、
0.25、0.5、1.0、2.0mg / mL） 的样品溶液分别依次 加 入
