实验三 穿山龙中薯蓣皂苷元的提取、分离与鉴定

实验三 穿山龙中薯蓣皂苷元的提取、分离与鉴定一、概述穿山龙为薯蓣科穿龙薯蓣（Dioscorea nipponica Makino ）的干燥根茎。

具有活血化瘀、祛风除湿、清肺化痰等功效。

穿山龙中主要化学成分的结构及物理性质：薯蓣皂苷（dioscin ）为无定形粉未或针状结晶，mp275～277℃。

可溶于甲醇、乙醇、甲酸，难溶于丙酮和弱极性有机溶剂，不溶于水。

薯蓣皂苷元（diosgenin ）为白色粉末，mp204～207℃，[]25D α -129。

（C ＝1.4三氯甲烷）。

可溶于有机溶剂及醋酸中，不溶于水。

薯蓣皂苷元 D －葡萄糖 L －鼠李糖 薯蓣皂苷二、实验部分 （一）实验目的要求1、掌握穿山龙中薯蓣皂苷元的提取和精制方法。

2、熟悉薯蓣皂苷及皂苷元的性质和检识方法。

（二）实验原理薯蓣皂苷元在植物体内与糖结合成苷，经水解（酸水解、酶水解）可得薯蓣皂苷元和糖。

利用薯蓣皂苷元不溶于水，溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取，将其从原植物中提取出来。

（三）实验药材、仪器与试剂 1、药材：穿山龙粗粉70g （每组）2、仪器：电热套、圆底烧瓶、冷凝管、纱布、乳钵、PH 试纸、烘箱、试管、水浴锅、索氏提取器等。

HOOOH OCH 3OHOH OHOOHOHOH CH 2OHH,OHH,OH++3、试剂: 浓H2SO4、Na2CO3粉末、蒸馏水、95%乙醇、1%磷钼酸乙醇溶液、石油醚（60-90℃）、醋酐、浓硫酸、三氯甲烷、浓硫酸等。

（三）实验内容1、薯蓣皂苷元的提取、分离和精制穿山龙粗粉（70g）置圆底烧瓶中，加水350ml、浓H2SO430ml，室温浸泡24小时，文火加热回流4～6小时，放冷，倾出酸水液酸性药渣用清水反复漂洗除去余酸，然后将药渣倒入乳钵中，加Na2CO3粉末，反复研磨调PH至中性（用PH试纸测试）、水洗、抽干中性药渣低温（80℃）干燥12小时干燥药渣置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中，以石油醚（60-90℃）150 ml为溶剂，连续回流提取4-5小时10-15ml，迅速倾入48h），抽滤用少量冷石油醚洗二次，抽干薯蓣皂苷元粗品置圆底烧瓶中，加50ml甲醇，在沸水浴上加热回流至完全溶解，趁热抽滤，滤液放入冰箱析晶。

穿山龙总皂苷提取方法研究【摘要】目的探讨穿山龙中总皂苷的提取方法，为后续的提取工艺研究奠定基础。

方法以总皂苷含量和浸膏得率为指标，考察超声提取法、回流提取法、索氏提取法，确定最佳提取方法。

结果超声提取法总皂苷含量8.67%，浸膏得率为3.66%；回流提取法总皂苷含量13.16%，浸膏得率为7.46%；索氏提取法总皂苷含量11.22%，浸膏得率为6.10%。

结论最佳提取方法为回流提取法。

【关键词】穿山龙；总皂苷；薯蓣皂苷元；提取方法穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣（dioscorea nipponica makino）的干燥根茎，味甘苦温，具有祛风湿，止痛，舒筋活血，止咳平喘祛痰功效[1]。

主治风湿性关节炎，筋骨麻木，大骨节病，跌扑损伤，慢性支气管炎、咳嗽气喘。

现代药理研究证明，其总皂苷类成分具有调节免疫、改善心血管功能、祛痰、抗肿瘤、抗炎镇痛等多种药理作用[2]。

穿山龙主要成分是甾体皂苷类，包括薯蓣皂苷（dioscin）、纤细皂苷（gracillin）和水溶性皂苷等[3]。

本品是近30年来从民间搜集而逐步广泛应用的，民间多用其浸酒或煎服，为治疗风湿病的三大常用药之一[4]。

有报道用穿山龙注射液治疗风湿和类风湿关节炎，有效率达89%[4]。

可见该药的用途是极其广泛的，开发利用穿山龙的前景广阔，因此其提取及含量测定的工艺方法至关重要。

本实验拟以总皂苷含量和浸膏得率为指标，考察超声提取法、回流提取法、索氏提取法，确定最佳提取方法。

为后续的单因素及正交相结合的方法确定穿山龙总皂苷最佳工艺研究奠定基础。

1材料与仪器穿山龙药材购于广州清平药材市场，经广东药学院中药鉴定教研室李书渊教授鉴定均为薯蓣科薯蓣属穿龙薯蓣（dioscoreanipponica makino）的干燥根茎。

uc-1800型紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；tc-15型恒温电热套（海宁市华星仪器厂）；dfy-400型摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；岛津ay120托盘电子分析天平；hh-6恒温水浴锅（江苏省金坛市宏华仪器厂）；上海亚荣生化仪器厂旋转蒸发仪。

实验八 甾体皂苷元的提取分离与检识（一）目的要求学习从药材中提取、精制和检识甾体皂苷元，通过实验要求：1．掌握用酸水解，有机溶剂提取和精制皂苷元的方法。

2．熟悉皂苷及皂苷元的性质和检识方法。

（二）主要化学成分的结构及性质甾体皂苷主要存在于百合科、薯蓣科、龙舌兰科等植物中。

某些甾体皂苷元如薯蓣皂苷元、替告皂苷元及海可皂苷元等是制药工业中合成甾体激素类药物及甾体避孕药的重要原料。

穿山龙为薯蓣科植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Mak.的干燥根茎。

具有舒筋活血、消食利水、祛痰截疟的功效。

主治风寒湿痹、慢性气管炎、消化不良、劳损扭伤、疟疾、痈肿。

常被作为提取薯蓣皂苷元的原料，穿山龙总皂苷水解可得1.5％～2.6％薯蓣皂苷元。

1．薯蓣皂苷(dioscin) 分子式C 45H 72O 16，分子量869.08，针状结晶，mp.275～277℃（分解），可溶于甲醇、乙醇、醋酸，微溶于丙酮、戊醇，难溶于石油醚、苯，不溶于水。

1 421rhaO lcrh a薯蓣皂苷2．薯蓣皂苷元(diosgenin) 又称薯蓣皂素,分子式C 27H 42O 3，分子量414.61。

为白色结晶性粉末（乙醇），mp.206～208℃，可溶于常用的有机溶剂及醋酸中，不溶于水。

（三）实验原理本实验是根据药材中的薯蓣皂苷，经酸加热水解可产生薯蓣皂苷元和糖。

因甾体皂苷元不溶于水，可溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取总皂苷元，再用活性炭吸附脱色精制，得到精制薯蓣皂苷元。

（四）实验内容1．薯蓣皂苷元的提取、精制略2．薯蓣皂苷与皂苷元的检识（1）泡沫试验：取穿山龙的水浸液2ml，置于小试管中，用力振摇1分钟，应产生多量泡沫，放置10分钟，泡沫量应无显著变化。

（2）溶血试验：取清洁试管二支，一支加入穿山龙的水浸液0.5ml，另一支加入蒸馏水0.5ml作对照，然后各加入0.8％氯化钠水溶液0.5ml，摇匀，再向每支试管中加入红细胞悬浮液1ml，充分摇匀，静置，观察溶血现象。

植物来源穿山龙皂苷酶的分离提纯及其酶性质
陶媛媛;张波;鱼红闪;金凤燮
【期刊名称】《大连工业大学学报》
【年(卷),期】2007(026)002
【摘要】对从麦麸中提取的穿山龙薯蓣皂苷酶进行分离提纯并对其酶性质进行鉴定.结果表明,该酶的分子质量约为65 ku;该酶不仅能水解穿山龙薯蓣皂苷的α-鼠李糖基,也能水解人参皂苷Rc的20-O-α-阿拉伯糖基和3-O-β-葡萄糖基,酶反应的最佳温度为40 ℃,最适pH值为5.
【总页数】4页(P120-123)
【作者】陶媛媛;张波;鱼红闪;金凤燮
【作者单位】大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连,116034;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连,116034;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连,116034;大连工业大学生物与食品工程学院,辽宁大连,116034
【正文语种】中文
【中图分类】Q946-83;Q946.49
【相关文献】
1.人参皂苷Re酶转化的F1皂苷等产品的分离提纯 [J], 宋建国;肖永坤;王东明;鱼红闪;金凤燮
2.芦丁-α-鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质 [J], 王侃;鱼红闪;金凤燮
3.穿山龙薯蓣皂苷的分离提纯 [J], 胡湘春;鱼红闪;金凤燮
4.人参皂甙-α-鼠李糖苷酶分离提纯及其酶性质 [J], 金赞敏;鱼红闪;金凤燮
5.穿山龙中薯蓣皂苷酶提取工艺的优化 [J], 江慧;孙蓉;汪魏平;徐文科;陆小凤;年四辉
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

设计性试验穿山龙薯蓣皂苷的提制和鉴识穿山龙为薯蓣科薯蓣属植物穿龙薯蓣Dioscorea nipponica Makino的根状茎，又名穿龙薯蓣、野山药、串地龙，能舒筋活血，止咳化痰，祛风止痛。

中医用于腰腿疼痛、风湿关节痛、筋骨麻木、跌打损伤、气管炎、支气管炎。

穿山龙的有效成分主要是是甾体皂甙（薯蓣皂苷：dioscin C45H72O16；纤细薯蓣皂苷：gracillin C45H72O17）和水溶性皂苷。

其总皂苷含量在3%左右本实验经提取，可得到薯蓣皂苷。

他们的物理性质如下：薯蓣皂苷，白色粉末，熔点294～296℃，薯蓣皂苷不溶于水、石油醚、苯，可溶于甲醇、乙醇、醋酸，微溶于丙酮、戊醇。

纤细薯蓣皂苷，白色粉末，熔点287～289℃(分解);298～302℃; 290～293℃。

纤细薯蓣皂苷不溶于水、石油醚。

一、实验目的1．掌握各种苷与苷元的分离纯化方法，包括水溶性苷与水难溶性苷分离，不同极性水难溶性苷的分离，水难溶性苷与苷元的分离。

2．学习苷与苷元的各种鉴识方法，包括：层析方法（TLC），沉淀反应等。

3．学习各种实验技能提取：超声提取分离：柱层析鉴识：层析法、化学法二、实验原理根据薯蓣皂苷不溶于水、石油醚、苯，可溶于甲醇、乙醇的特性，提取分离脂溶性总皂苷和水溶性蛋白质、多糖，利用薯蓣皂苷和纤细薯蓣皂苷结构上的差别，用吸附柱层析分离二者。

本实验涉及的知识点有：溶剂提取法、色谱法等。

三、实验流程穿山龙药材总皂苷薯蓣皂苷四、实验步骤1.总皂苷的提取称取穿山龙药材200g ，研碎，量取80%乙醇溶液500mL ，浸泡20min,超声提取1h,T=70℃，减压抽滤至无醇味。

第二次提取，加400mL 乙醇，二次超声30min,减压抽滤至无醇味，合并滤液。

滤液用正丁醇萃取（50ml ×3），回收正丁醇，得穿山龙中总皂苷粗品。

2.总皂苷的分离（无水条件）干燥：烧杯（100ml,2个）、锥形瓶（500ml,1个、50ml,20个）、蒸发皿、玻璃棒（2支）、量筒（100ml,1个、10ml ，1个），色谱柱、滴管2支。

摘要：本文对薯蓣皂苷元的提取方法中的酸水解法、酶解法、微生物转化法进行了综述，并对其发展前景进行了展望。

关键词：薯蓣皂苷元；提取方法；展望基金项目：吉林省科技计划项目（20180101259JC ），吉林省高等学校大学生创新创业训练计划项目资助（201610301016）中图分类号：TQ028；TQ461文献标识码：ADOI 编号：10.14025/ki.jlny.2018.07.020张肖冲，李明慧，高岩，宋鑫，徐阳，孙海明，赵桂云*（北华大学化学与生物学院，吉林吉林132013）薯蓣皂苷元由薯蓣皂苷转化而来，而薯蓣皂苷广泛存在于薯蓣科、百合科、石竹科、蔷薇科等植物中，其中薯蓣科植物中含量最多[1]。

薯蓣皂苷元是合成多种甾体激素类药物和甾体避孕药的重要原料，具有多种重要的药理作用[2-4]。

如今对薯蓣皂苷元的提取方法有很多，但在工业生产中主要以酸水解法和自然发酵法为主。

但是由于酸水解法会产生大量的废水，对环境的污染较严重，而自然发酵法的自然发酵时间较长，能耗大且皂苷提取率较低[5]。

本文对薯蓣皂苷元的提取方法进行了总结。

1酸水解法薯蓣皂苷元为薯蓣植物中薯蓣皂苷的配基，酸水解法是将酸与药材直接混合回流水解。

酸的作用是破坏薯蓣植物细胞结构和组成[6]，断开薯蓣皂苷元与糖（纤维素）连接的苷键，使薯蓣皂苷元游离出来，再用有机溶剂提取出来，但对环境污染较大，该方法最早由Rothrok 等[7]提出。

都述虎[8]等对酸水解法的条件进行优化，薯蓣皂苷元提取率提高。

而更多学者在酸水解的基础上又延伸出发酵酸水解法[9-10]、超临界CO 2萃取法[11]、超声辅助提取法[12]等。

随着方法的改进，薯蓣皂苷元的提取率不断增高，但是上述方式需要酸处理来制备薯蓣皂苷元，依然会产生大量的废水，对环境造成污染，也会造成水资源的浪费。

而对于酸水解法的改进较好的是王鹏[13]等的微波辐射下酸功能化离子液体的催化水解，该方法最大的优点是环保，但是其转化率接近于常规盐酸水解，转化率较低。