下载文档原格式
小鼠胚胎操作实验手册小鼠胚胎操作实验手册目录1. 引言1.1 胚胎操作实验的意义1.2 实验前的准备工作2. 实验器材和试剂准备2.1 实验器材清单2.2 试剂准备和储存要点3. 小鼠胚胎操作步骤3.1 小鼠交配和胚胎收集3.2 胚胎培养和处理3.3 胚胎移植和植入3.4 胚胎标记和观察4. 数据记录和结果分析4.1 数据记录要点和格式4.2 结果分析和统计方法5. 安全注意事项和实验规范5.1 生物安全操作要求5.2 实验规范和伦理要求6. 实验故障排除和常见问题解决6.1 常见操作问题和解决方案6.2 实验故障排除建议7. 参考文献和扩展阅读7.1 相关研究文献推荐7.2 扩展阅读和资源推荐引言1.1 胚胎操作实验的意义胚胎操作实验是研究胚胎发育和基因功能的重要手段，通过对小鼠胚胎的操作和处理，可以揭示胚胎发育的机制和影响因素。
1.2 实验前的准备工作在进行胚胎操作实验之前，需要进行充分的准备工作，包括实验器材和试剂的准备、实验操作流程的熟悉、实验动物的选取和饲养等。
实验器材和试剂准备2.1 实验器材清单列举常用的器材和仪器，并说明其用途、规格和供应商信息，包括显微镜、离心机、培养皿、吸管、移液器等。
2.2 试剂准备和储存要点介绍常用的试剂，包括培养基、胚胎染色剂、抗体等，说明其配制方法、储存条件和稳定性要求。
小鼠胚胎操作步骤3.1 小鼠交配和胚胎收集阐述小鼠交配的方法和时间安排，以及胚胎的收集和处理步骤，包括解剖、体外培养和胚胎筛选等。
3.2 胚胎培养和处理详细描述胚胎的培养方法和处理步骤，如细胞培养、转染、基因敲除、基因表达等实验操作。
3.3 胚胎移植和植入介绍胚胎移植和植入的方法和注意事项，包括手术操作、不同器官的移植方式和移植成功率的评估等。
3.4 胚胎标记和观察说明如何对胚胎进行标记和观察，包括荧光染料标记、显微镜观察和胚胎发育阶段的划分等。
数据记录和结果分析4.1 数据记录要点和格式指导实验者如何记录实验过程中的数据和结果，包括实验条件、样本信息、实验数据和观察结果等，并规范化数据记录格式。
发育生物学实验Experiments of Development Biology【课程编号】 【课程类别】限选课程【学分数】 3 学分 【适用专业】 生物科学【学时数】 96 学时 【编写日期】2009年9月15日一、教学目标通过本实验教学，使学生能掌握基本的发育生物学实验操作方法、正确使用仪器、准确取得实验数据，学会实验数据处理和科学表达实验结果的方法。
在确保基础实验训练的基础上，强化综合性实验技能训练，注重学生创新思维的培养和综合技能训练。
使学生对自己所学的解剖学, 生物化学，分子生物学等实验技术充分的实践, 学会用传统生物学方法和现代生物学方法验证动植物发育过程中的生物学现象，学会在科学实验中进行协作和配合；提高学生的科研能力，培养良好的科研素质。
二、教学内容和学时分配实验一、鸡胚培养和发育过程观察层次基础性主要内容：学习和掌握鸡胚胎发育所需要的条件，观察鸡胚胎发育的外部形态变化，掌握器官形成的基本规律。
明确环境因素对胚胎发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚发育的大体阶段以及各阶段的形态特征；了解实验室鸡胚胎孵化的基本条件，明确环境对胚胎发育和健康胚胎的重要性。
实验二、鸡胚血管发生的阻断实验层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，利用血管阻断剂，通过鸡胚操作，观察药物对血管发育的影响。
明确环境因素对胚胎血管发育和健康的影响。
教学要求：了解鸡胚血管发育的基本规律和形态特征；掌握实验室鸡胚血管阻断实验的基本方法，明确药物对胚胎血管发育和健康胚胎的重要性。
实验三、小鸡骨骼肌卫星细胞的分离、培养与发育观察层次综合性主要内容：在上述鸡胚胎发育的外部形态变化观察的基础上，在小鸡出壳后24小时， 分离培养肌肉组织的卫星细胞，观察骨骼肌卫星细胞的增殖分化能力。
并对分离得到的鸡骨骼肌卫星细胞表达卫星细胞特异的标志基因Desmin 和 Pax7 进行表达分析。
教学要求：了解鸡胚骨骼肌卫星细胞在发育中的作用，掌握鸡胚骨骼肌卫星细胞分离培养的基本方法。
胚胎工程（含答案）第1课时胚胎工程的理论基础[学习目标] 1.简述受精前精子和卵子的准备以及受精的过程。
2.简述胚胎早期发育的过程及其主要特点。
一、受精1．胚胎工程的概念(1)操作对象：动物生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞。
(2)技术基础：如体外受精、胚胎移植、胚胎分割等。
(3)特点：经过多种显微操作和处理后获得的胚胎，还需移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。
(4)理论基础：哺乳动物受精和早期胚胎发育的规律。
(5)实质：在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。
2．受精(1)概念：精子与卵子结合形成合子(即受精卵)的过程。
(2)场所：哺乳动物的输卵管内。
(3)过程精子获能：在雌性动物的生殖道内完成准备阶段MⅡ期才具备受精能力|↓受精阶段获能后的精子与卵子相遇(精子释放多种酶，以溶解卵细胞膜外的一些结构)精子触及卵细胞膜(透明带发生生理反应，阻止后来的精子进入透明带)(卵细胞膜发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵内)的核膜破裂并形成一个新的核膜，最后形成雄原核成减数分裂Ⅱ，排出第二极体后，形成雌原核|↓雌、雄原核结合(受精完成的标志)受精卵判断正误(1)精子和卵子相遇结合形成受精卵的部位是输卵管()(2)精子和卵子都需要经过获能才能进行受精作用()(3)受精的标志是观察到两个极体；受精完成的标志是雌、雄原核融合形成合子()(4)动物排出的卵子成熟程度不同，都要在卵巢中进一步发育到M Ⅱ期才具备受精能力()答案(1)√(2)×(3)√(4)×解析(2)精子需要经过获能处理才能完成受精过程，而卵子需要在输卵管中经过进一步发育才能与获能的精子完成受精作用。
(4)动物排出的卵子成熟程度不同，都要在输卵管中进一步发育到M Ⅱ期才具备受精能力。
任务一：受精过程1．受精过程中卵子的哪些结构发生生理反应可以防止多精入卵？这有什么意义？提示阻止多精入卵有两道屏障：第一道屏障是透明带发生生理反应，第二道屏障是卵细胞膜发生生理反应。
一、实验目的1. 掌握小鼠胚胎的采集方法。
2. 了解小鼠胚胎的发育过程。
3. 培养实验操作技能。
二、实验原理小鼠胚胎的获得是通过人工操作，将雌鼠的受精卵取出，进行体外培养，直至发育成胚胎。
该实验旨在研究小鼠胚胎的发育过程，为后续的胚胎移植、基因编辑等研究提供基础。
三、实验材料1. 实验动物：雌性小鼠、雄性小鼠2. 实验仪器：显微镜、解剖显微镜、培养箱、离心机、培养皿、手术器械等3. 实验试剂：生理盐水、DEPC水、培养液、抗凝剂、消毒剂等四、实验步骤1. 实验动物处理（1）将雌性小鼠和雄性小鼠分别饲养于清洁、通风的动物房中，保持适宜的饲养条件。
（2）雌性小鼠和雄性小鼠分别进行交配，交配后观察雌性小鼠的阴道涂片，确认受精情况。
2. 胚胎采集（1）雌性小鼠交配后第2天，用解剖显微镜观察雌性小鼠的阴道涂片，确认受精情况。
（2）雌性小鼠交配后第3天，将雌性小鼠麻醉，固定于解剖显微镜下。
（3）用手术器械取出雌性小鼠的子宫，置于培养皿中。
（4）在解剖显微镜下，用镊子取出受精卵，置于培养皿中。
3. 胚胎培养（1）将受精卵放入培养箱中，在37℃、5%CO2、95%空气的条件下培养。
（2）观察受精卵的发育过程，记录胚胎的形态变化。
4. 实验结果分析（1）观察胚胎的发育过程，记录胚胎的形态变化。
（2）分析胚胎发育过程中各阶段的形态特征。
五、实验结果1. 胚胎发育过程（1）受精卵在培养箱中培养24小时后，可见胚胎开始分裂。
（2）培养24小时后，胚胎发育至桑椹胚阶段。
（3）培养48小时后，胚胎发育至囊胚阶段。
（4）培养72小时后，胚胎发育至原肠胚阶段。
2. 胚胎形态特征（1）受精卵：透明、圆形，直径约100μm。
（2）桑椹胚：细胞数目增多，排列紧密，形成桑椹状。
（3）囊胚：细胞分化明显，形成囊胚腔。
（4）原肠胚：细胞分化更加明显，形成原肠。
六、实验结论1. 通过人工操作，成功获得小鼠胚胎。
2. 小鼠胚胎在体外培养过程中，经历了受精卵、桑椹胚、囊胚、原肠胚等阶段。
第3节胚胎工程第2课时胚胎工程技术及其应用学习目标1.概述胚胎工程技术的主要内容及原理2.简述胚胎工程在生产实践中的应用课前自主探究一、体外受精1．试管动物：通过人工操作使卵子在受精，经培养发育为后，再进行移植产生的个体。
2．体外受精技术的主要步骤：、和。
3.过程卵母细胞的采集(培养至期)↓精子的获取(要在体外进行处理)↓受精4.体外受精的意义（1）提高动物的有效措施。
（2）为胚胎移植提供可用的提醒试管动物和克隆动物的不同(1)生殖方式不同：试管动物属于有性生殖；克隆动物属于无性生殖。
(2)培育的技术手段不同：试管动物需采用体外受精、胚胎移植等技术；克隆动物需采用核移植、胚胎移植技术。
体外受精技术并非胚胎自始至终都在体外发育，而是胚胎发育的初期在培养皿或试管中，培养一段时间后需移植到母体内继续发育。
(3)是否遵循遗传定律：试管动物遵循遗传定律；克隆动物不遵循遗传定律。
二、胚胎移植1．概念：是指将通过及其他方式得到的胚胎，移植到、的雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。
2．步骤：胚胎移植主要包括供体、受体的，配种或人工授精，胚胎的收集、培养或保存，胚胎的，以及移植后的检查等步骤。
3.过程(以牛的胚胎移植为例)4．意义(1)充分发挥雌性优良个体的。
(2) 了供体本身的繁殖周期。
(3)对供体施行处理后，增加后代数量。
教材中的隐性知识(1)源于选择性必修3 P62“相关信息”：超数排卵是指应用外源促性腺激素，诱发卵巢排出比自然情况下更多的成熟卵子。
(2)源于选择性必修3 P62“思考·讨论”：胚胎移植的生理学基础三、胚胎分割1．概念：采用将早期胚胎切割成等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。
2．所需主要仪器设备：和。
3．操作对象及要求：选择发育良好、形态正常的，将它移入盛有操作液的培养皿中，在显微镜下用或分割。
在分割囊胚阶段的胚胎时，要注意。
4．胚胎分割的意义(1)促进优良动物品种的繁殖，产生相同的后代用于遗传学研究。
专题3 胚胎工程3.2 体外受精和早期胚胎培养『课标解读』1、知识方面简述哺乳动物体外受精技术的主要操作步骤。
简述哺乳动物胚胎的早期培养方法。
2、情感态度与价值观方面认同体外受精在家畜快速繁殖中的重要意义。
3、能力方面能够使用通俗语言介绍体外受精何早期胚胎培养技术。
『网络构建』答案：体外受精采集促性腺激素输卵管超声波探测仪腹腔镜活体卵巢假阴道法获能化学诱导血清『重难点归纳』一、卵母细胞采集的方法和操作的要领是什么？方法一：对实验动物小鼠、兔和小家畜猪、羊等卵母细胞采集时，可先用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，然后在适当的时间从输卵管冲取卵子，并使其直接与获能的精子在体外受精。
方法二：从刚屠宰的雌性动物体内摘取卵巢，再从卵巢中采集卵母细胞。
方法三：直接从活体动物的卵巢中采集卵母细胞，叫活体采卵。
需借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜，直接从活的动物卵巢中吸取卵母细胞。
后两种方法适用于大家畜和大动物。
注意：采集的卵母细胞需在体外培养成熟后才能与获能的精子受精。
二、如何选择用于体外培养的卵母细胞？在选择卵母细胞时，无论用哪种方法采集到的卵母细胞，外围一般都应该有数层卵丘细胞所包围，形成一个叫卵丘复合体的结构（COC）。
这种结构对于卵母细胞在体外条件下的成熟是十分重要的。
在对家畜体外受精的操作中，一般把未成熟的卵母细胞分成A、B、C、D四级。
对A级卵母细胞要求是有3层以上的卵丘细胞包围，卵母细胞的细胞质均匀；B级是少于3层卵丘细胞，但卵母细胞质要均匀；C级为没有卵丘细胞包围的卵母细胞，又称裸卵，培养效果很差；D级是退化或死亡的卵母细胞，应淘汰。
A、B两类卵母细胞培养效果较好。
三、采集精子的方法有几种？各有什么具体要求？主要分为假阴道法、手握法和电刺激法。
假阴道法是用特制的假阴道，满足雄性动物交配时对压力、温度和润滑度的要求。
同时要配备有与供精动物相适应的台畜，训练动物爬跨台畜，借假阴道收集精液。
手握法是通过徒手或戴乳胶手套的手，直接把握雄性动物阴茎，施以适当压力和刺激即可引起射精，并可收集富含精子部分的精液。
小鼠胚胎操作手册第三章第三章小鼠胚胎操作手册第一节注射操作在小鼠胚胎培养和研究中，注射是一项关键操作。
正确的注射技术可以确保研究的准确性和成功率。
本节将介绍小鼠胚胎注射的步骤和技巧。
1. 准备工作在进行注射前，确保实验室环境整洁，并准备好所需的实验材料。
这些材料包括显微镜、注射器、胚胎培养培养皿、胚胎移植工具等。
2. 胚胎准备将小鼠产下的胚胎收集到含有去离子水的培养皿中。
使用显微镜观察胚胎的形态和发育情况，并选择符合实验需求的胚胎进行注射。
3. 注射剂准备根据实验需求制备相应的注射剂。
注射剂可以是基因编辑工具，如CRISPR/Cas9系统，也可以是药物或其他化合物。
确保注射剂的浓度和质量符合实验要求。
4. 注射操作将胚胎取出，并放置在培养盐水中以保持湿润。
使用显微镜和细注射器将注射剂缓慢注入胚胎内。
注射时要注意避免损伤胚胎，注入的剂量要准确控制。
5. 胚胎移植完成注射后，将胚胎移植回培养皿中，并放入孵化箱或恒温箱中进行进一步的培养。
确保温度、湿度和氧气供应的稳定。
第二节胚胎培养和观察胚胎培养和观察是小鼠胚胎实验研究中的核心步骤。
本节将介绍胚胎的培养条件和观察方法。
1. 培养条件将注射后的胚胎放置在含有培养基的培养皿中。
培养基应包含足够的养分和生长因子，以满足胚胎的发育需求。
培养皿要保持无菌，并放置在恒温箱中维持稳定的温度。
2. 观察方法使用显微镜观察胚胎的发育情况，并记录下重要的观察结果。
观察胚胎的细胞分裂情况、胚胎囊胚的形成和融合等发育进程。
记录这些数据对于后续的实验分析非常重要。
3. 胚胎存储如果需要长期保存胚胎，可以使用液氮冷冻保存的方法。
在胚胎培养过程中，将胚胎收集到冷冻培养基中，然后放入液氮中冷冻保存。
这样可以保持胚胎的完整性和生理活性。
第三节数据分析和结果解读在小鼠胚胎操作过程中，数据分析和结果解读是至关重要的。
本节将介绍常用的数据分析方法和结果解读的注意事项。
1. 数据分析方法对于进行注射和观察的胚胎数据，可以使用统计学方法进行分析。
