oil red staining

胃肠病学2020年第25卷第2期-455-PPARy激动剂通过Nrf2介导的抗氧化通路改善体内外高脂诱导的氧化应激和炎症反应**李晓芸*倪茜茜华静&上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科上海市消化疾病研究所(200001)背景:氧化应激在非酒精性脂肪性肝病的发生、发展中起重要作用。

近年研究表明过氧化物酶体增殖物激活受体y(PPAR y)激动剂具有抗炎、抗氧化活性。

目的:探讨PPAR y激动剂罗格列酮和GW222对体内外高脂诱导的肝细胞氧化应激损伤的保护作用及其可能机制。

方法：C57BL6J小鼠喂饲高脂饮食并予罗格列酮灌胃干预(32me/kg,每日一次，连续4周)；分离小鼠原代肝细胞，以GW229预处理后予混合游离脂肪酸(FFA)孵育。

以HE染色和油红染色评估肝脏组织病理学改变和脂质沉积;测定血清丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;DCFH-DA荧光探针检测肝细胞内活性氧(ROS)含量;Real-time PCR和蛋白质印迹法检测氧化应激和炎症相关基因表达。

结果:高脂饮食小鼠肝脏显著脂肪变性,肝内炎症相关基因表达上调，血清MDA含量升高,SOD活性和GSH含量降低。

罗格列酮干预可显著减轻高脂饮食诱导的肝脏脂质沉积，下调炎症相关基因表达，改善血清氧化应激相关指标。

FFA孵育的原代肝细胞内ROS大量生成，GW229预处理可显著减少FFA诱导的ROS生成和炎症相关基因表达，并上调抗氧化因子核因子E2相关因子2(NrfO)及其下游靶基因血红素氧合酶2(HO2)表达。

结论:体内外高脂环境均可诱导肝细胞脂肪变性，发生显著的氧化应激和炎症反应。

PPAR y激动剂可通过减少ROS产生、激活Nea/HO2抗氧化通路改善高脂诱导的氧化应激损伤和炎症反应。

关键词过氧化物酶体增殖物激活受体Y；氧化应激；活性氧；炎症；罗格列酮；精性性病PPARy Agonists Allyviaty the High Fat-induced Oxidative Stress and Inflammatory Response in vitro and in vivo Through NrE-mediated Anhoxidanh Pathway LI Xiaoyun,NI Xixi,HUA Jing.Division of Gastroenterology and, Hepatology,Reg HospitoO,Schon0of Medicigr,Shanghai Joe Tong Universite;Shanghai Onstitute f Diaestive Disease, Shanghai(200001)Correspondence to：HUA Jina,EmaiO hua」ina88@Background:Oxidative stress is imporAnt foe the deveUpmedt and proeress of vou-21coho/o fatth/vee disease.Receni stuUies have demousAaAd the anti-inVammaAra and800x16800activities of peroxisome proliferaAr-2ctiveAd receptor了(PPARy)agonists.Aims：To ivvestAate the protective effect of PPARy agonists(!'00/0200and GW222) ox high fat-induced hepatocyte oxidative s tress injuf ig vitro and in ie and the underlying mechanism.Methods: C57BL/LJ mice were fed with high-fat P c-and aUministered inAaaasAically with081§/07003。

3T3-L1 Differentiation ProtocolStep 1: 3T3-L1细胞传代于35或60-mm培养板中，使用DMEM-F12培养基培养2 day（以此为基点，即：诱导分化的第0 day）。

Step2: 使用诱导液I诱导3T3-L1分化。

加入配制好的诱导液I于3T3-L1细胞中，培养2 day（诱导分化的第2 day）。

诱导液I：0.5m M IBMX;0.25 μM地塞米松；1μg/ml insulin;含10% FBS 的DMEM-F12。

Step3: 使用无血清培养基清洗细胞，去除残余的IBMX和地塞米松。

使用诱导液II诱导细胞分化，并培养2 day （诱导分化的第4 day）。

诱导液II：1μg/ml insulin;含10% FBS 的DMEM-F12。

Step4: 最后用普通DMEM-F12培养基培养并每2 day 换一次液。

Step5: 每次实验前，用serum-free DMEM-F12 或KRP buffer 培养单层细胞2 h。

Step6: 用于实验的脂肪细胞应该在诱导分化后的8-12 day之间为宜。

这样的条件下≥ 95%的细胞表现为脂肪细胞的表型。

Step7: Oil Red O staining鉴定分化后的脂肪细胞内的脂质，可以使用油红染色。

细胞用PBS轻轻冲洗2次，使用10 %的formalin或4% paraformaldehyde 室温固定30 min。

固定后的细胞使用新配制的Oil Red O solution 染色（注意避光）1 h，之后只用蒸馏水轻轻冲洗3次，最后观察结果。

Oil Red O solution 配制：0.5%（W/V）的Oil Red O-异丙醇溶液。

取0.5%的Oil Red O-异丙醇溶液6份，加入4份的蒸馏水，配制成Oil Red O solution。

Step8: 获得结果并进行后期处理。

Other protocol can be used:美国密歇根大学的3T3-L1细胞分化的PROTOCOL(非常详细)3T3-L1 Differentiation ProtocolMATERIALSDulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM; GibcoBRL-Cat# 11965-084: high glucose, with L-glutamine, with pyroxidine HCl, without sodium pyruvate)Calf Serum (GibcoBRL-Cat#16170-078/Lot #1060198)Fetal Bovine Serum (GibcoBRL-Cat# 10437-028/Lot # 1026566)-filter sterilize (0.22um filter) before mixed into DMEMIsobutylmethylxanthine (IBMX; Sigma I-7018)Dexamethasone (Sigma D-4902)Insulin (Bovine; Sigma I-5500)MEM Sodium Pyruvate (100mM; GibcoBRL Cat#11360-070)Pen/Strep/Glutamine (100x P/S/G; GibcoBRL Cat#10378-016)SOLUTIONS10% Calf Serum/DMEM60mL Calf Serum6mL 100mM MEM Sodium Pyruvate6mL 100x P/S/G500mL DMEM10% FBS/DMEM60mL Fetal Bovine Serum (Filter Sterilized)6mL 100mM MEM Sodium Pyruvate6mL 100x P/S/G500mL DMEMIBMX Solution (make fresh)a)Dissolve IBMX in a solution made of 0.5N KOH to a final concentration of 0.0115g/mL.b)Filter sterilize through a 0.22 mm syringe filter.Insulin Stock Solution167 uM (1mg/mL) in 0.02M HClFilter sterilized through 0.22 mm filterCan store at -20C for long term, 4C short term.Dexamethasone Stock SolutionsFreezer Stock: 10mM of Dex in 100% ethanol (store at -20C)Working Stock: Dilute Freezer stock to 1mM in PBSFilter sterilize and store at 4C.MDI Induction Media (10mL/10cm plate; 5mL/6cm plate)To required volume of 10% FBS/DMEM add:1:100 IBMX1:1000 Insulin1:1000 Dexamethasone working stockInsulin Media (10mL/10cm plate; 5mL/6cm plate)To required volume of 10% FBS/DMEM add:1:1000 InsulinMETHODPreadipocyte maintenance and passage:We plate the cells in 10% CS/DMEM on treated polystyrene culture dishes from Corning (Cat#430167) and incubate them at 37C in 10% CO2. It is important to feed the preadipocytes every couple of days and avoid letting them get too confluent (>70%), if you want to continue to passage them and differentiate them at a later date. So, take care to split them appropriately. They can be split as far as 1:15, though we usually do 1:10 or less depending on need.Adipocyte Differentiation Protocol:1. Grow preadipocytes to confluency in 10% calf serum/DMEM2. Two days post confluency (DAY 0) stimulate the cells with MDI induction media. You will notice a distinct change in the morphology of the cells (become more spindly) in the next 2 days.3. Two days after MDI (DAY 2) change the media to Insulin Media. The media will begin to get more viscous as free fatty acids are produced by the cells and secreted into the media.4. Two days later (DAY 4) change media to 10% FBS/DMEM. Feed cells with 10%FBS/DMEM every two days. Full differentiation is usually achieved by DAY 8.。

3T3-L1 Differentiation ProtocolStep 1: 3T3-L1细胞传代于35或60-mm培养板中，使用DMEM-F12培养基培养2 day（以此为基点，即：诱导分化的第0 day）。

Step2: 使用诱导液I诱导3T3-L1分化。

加入配制好的诱导液I于3T3-L1细胞中，培养2 day（诱导分化的第2 day）。

诱导液I：0.5m M IBMX;0.25 μM地塞米松；1μg/ml insulin;含10% FBS 的DMEM-F12。

Step3: 使用无血清培养基清洗细胞，去除残余的IBMX和地塞米松。

使用诱导液II诱导细胞分化，并培养2 day （诱导分化的第4 day）。

诱导液II：1μg/ml insulin;含10% FBS 的DMEM-F12。

Step4: 最后用普通DMEM-F12培养基培养并每2 day 换一次液。

Step5: 每次实验前，用serum-free DMEM-F12 或KRP buffer 培养单层细胞2 h。

Step6: 用于实验的脂肪细胞应该在诱导分化后的8-12 day之间为宜。

这样的条件下≥ 95%的细胞表现为脂肪细胞的表型。

Step7: Oil Red O staining鉴定分化后的脂肪细胞内的脂质，可以使用油红染色。

细胞用PBS轻轻冲洗2次，使用10 %的formalin或4% paraformaldehyde 室温固定30 min。

固定后的细胞使用新配制的Oil Red O solution 染色（注意避光）1 h，之后只用蒸馏水轻轻冲洗3次，最后观察结果。

Oil Red O solution 配制：0.5%（W/V）的Oil Red O-异丙醇溶液。

取0.5%的Oil Red O-异丙醇溶液6份，加入4份的蒸馏水，配制成Oil Red O solution。

Step8: 获得结果并进行后期处理。

Other protocol can be used:美国密歇根大学的3T3-L1细胞分化的PROTOCOL(非常详细)3T3-L1 Differentiation ProtocolMATERIALSDulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM; GibcoBRL-Cat# 11965-084: high glucose, with L-glutamine, with pyroxidine HCl, without sodium pyruvate)Calf Serum (GibcoBRL-Cat#16170-078/Lot #1060198)Fetal Bovine Serum (GibcoBRL-Cat# 10437-028/Lot # 1026566)-filter sterilize (0.22um filter) before mixed into DMEMIsobutylmethylxanthine (IBMX; Sigma I-7018)Dexamethasone (Sigma D-4902)Insulin (Bovine; Sigma I-5500)MEM Sodium Pyruvate (100mM; GibcoBRL Cat#11360-070)Pen/Strep/Glutamine (100x P/S/G; GibcoBRL Cat#10378-016)SOLUTIONS10% Calf Serum/DMEM60mL Calf Serum6mL 100mM MEM Sodium Pyruvate6mL 100x P/S/G500mL DMEM10% FBS/DMEM60mL Fetal Bovine Serum (Filter Sterilized)6mL 100mM MEM Sodium Pyruvate6mL 100x P/S/G500mL DMEMIBMX Solution (make fresh)a)Dissolve IBMX in a solution made of 0.5N KOH to a final concentration of 0.0115g/mL.b)Filter sterilize through a 0.22 mm syringe filter.Insulin Stock Solution167 uM (1mg/mL) in 0.02M HClFilter sterilized through 0.22 mm filterCan store at -20C for long term, 4C short term.Dexamethasone Stock SolutionsFreezer Stock: 10mM of Dex in 100% ethanol (store at -20C)Working Stock: Dilute Freezer stock to 1mM in PBSFilter sterilize and store at 4C.MDI Induction Media (10mL/10cm plate; 5mL/6cm plate)To required volume of 10% FBS/DMEM add:1:100 IBMX1:1000 Insulin1:1000 Dexam ethasone working stockInsulin Media (10mL/10cm plate; 5mL/6cm plate)To required volume of 10% FBS/DMEM add:1:1000 InsulinMETHODPreadipocyte maintenance and passage:We plate the cells in 10% CS/DMEM on treated polystyrene culture dishes from Corning (Cat#430167) and incubate them at 37C in 10% CO2. It is important to feed the preadipocytes every couple of days and avoid letting them get too confluent (>70%), if you want to continue to passage them and differentiate them at a later date. So, take care to split them appropriately. They can be split as far as 1:15, though we usually do 1:10 or less depending on need.Adipocyte Differentiation Protocol:1. Grow preadipocytes to confluency in 10% calf serum/DMEM2. Two days post confluency (DAY 0) stimulate the cells with MDI induction media. You will notice a distinct change in the morphology of the cells (becom e more spindly) in the next 2 days.3. Two days after MDI (DAY 2) change the media to Insulin Media. The m edia will begin to get more viscous as free fatty acids are produced by the cells and secreted into the media.4. Two days later (DAY 4) change media to 10% FBS/DMEM. Feed cells with 10%FBS/DMEM every two days. Full differentiation is usually achieved by DAY 8.。

ADIPOCYTE STAINING WITH OIL RED OREAGENTSOil Red O stockFW 408.5, Sigma O-06250.7 g Oil Red O200 ml IsopropanolStir O/N, then filter with 0.2 μm and store at +4°COil Red O Working Solution6 parts Oil Red O stock4 parts dH2OMix and let sit at room temp for 20 minFilter 0.2 μm10% Formalin in PBSIsopropanol 100%Isopropanol 60%METHODRemove most of the mediumAdd 10% formalin in incubate 5 min, RTDiscard formalin and add the same volume of fresh formalin. Incubate at least 1 hour, or longer. Note: Cells can be kept in formalin for a couple of days beforestaining. Wrap parafilm around the plate to prevent from drying and cover withaluminum foil.Remove all the formalin with small transfer pipetteWash wells with 60% isopropanol.Let the wells dry completelyAdd Oil Red O working solution for 10 min (do not touch walls of the wells)Remove all Oil Red O and IMMEDIATELY add dH2O, wash with H2O 4 times (you can wash under running tap water)Take picktures if desiredRemove all water and let dryElute Oil Red O by adding 100% isopropanol, incubate about 10 min (can be longer) Pipet the isopropanol with Oil Red O up and down several times to be sure that all Oil Red O is in the solutionTransfer to 1.5 ml tubesMeasure OD at 500 nm, 0.5 sec readingAs blank use 100% isopropanol. As control use isopropanol from empty well stained as previously describedPlate Formalin 60% isopropanol Oil Red O 100% isopropanol 24WP 500µl 500µl 200µl 750µl12WP 1ml 1ml 400µl 1.5ml6WP 2.4ml 2.4ml 1ml 3.6ml。

姜黄素联合富硒酵母对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用作者：梁婵华莫丽田重阳唐玉涵来源：《食品安全导刊·下》2024年第03期摘要：目的：探讨姜黄素联合富硒酵母对急性酒精性肝损伤的保护作用。

方法：将60只C57B6L/J小鼠随机分为空白组、模型组、姜黄素组（33.33 mg·kg-1 bw）、富硒酵母組（7.50 mg·kg-1 bw）和联合组（姜黄素33.33 mg·kg-1 bw+富硒酵母7.50 mg·kg-1 bw），每组12只；干预30 d后，一次性灌胃50%乙醇溶液（12 mL·kg-1 bw）建立急性酒精性肝损伤模型；观察小鼠体重、摄食、行为变化；检测小鼠肝脏指数与丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、还原型谷胱甘肽（Glutathione，GSH）和甘油三酯（Triglyceride，TG）水平；油红染色观察小鼠肝脏组织病理学变化。

结果：与空白组比较，模型组小鼠表现出肝脏肿大、肝细胞中脂滴大量堆积病理损伤，肝脏组织MDA和TG水平显著升高（P＜0.05）；姜黄素联合富硒酵母能显著降低小鼠肝脏中MDA和TG表达，提高GSH水平（P＜0.05），减轻小鼠肝脏脂肪沉积。

结论：姜黄素联合富硒酵母能够改善急性酒精灌胃诱导的肝脏脂质异常堆积，减轻氧化应激水平，对急性酒精性肝损伤具有良好的保护作用。

关键词：姜黄素；富硒酵母；急性酒精性肝损伤Protective Effect of Curcumin and Selenium-Rich Yeast on Acute Alcoholic Hepatic Injury in MiceAbstract： Objective： Exploring the protective effect of curcumin combined with selenium-rich yeast on acute alcoholic liver injury. Method： 60 C57B6L/J mice were randomly divided into blank group， model group， curcumin group （33.33 mg·kg-1 bw）， selenium-rich yeast group （7.50 mg·kg-1 bw） and combination group （curcumin33.33 mg·kg-1 bw+selenium-rich yeast 7.50 mg·kg-1 bw）， 12 mice in each group; 30 days after the intervention， a model of acute alcoholic liver injury was established by one-time gavage 50% ethanol solution （12 mL·kg-1 bw）; the weight， feeding and behavior changes of mice were observed; liver index and the levels of malondialdehyde （MDA）， glutathione （GSH） and triglyceride （TG） were detected， and the histopathological changes of the liver were observed by oil red staining. Result： Compared to control group， the model mice showed liver enlargement， massive accumulation of lipid droplets in liver cells， and significantly increased MDA and TG levels （P＜0.05） in liver tissues， while curcumin combined with selenium-rich yeast could significantly reduce the expression of MDA and TG in the liver， increase the level of GSH （P＜0.05）， and reduce the fat deposition in the liver. Conclusion： Curcumin combined with selenium-rich yeast can improve abnormal accumulation of liver lipids induced by acute alcohol gavage， reduce the level of oxidative stress， and have a good protective effect against acute alcoholic liver injury.Keywords： curcumin; selenium-rich yeast; acute alcoholic liver injury酒精性肝病（Alcoholic Liver Disease，ALD）是由于长期大量摄入酒精引起的一系列肝脏疾病，包括以甘油三酯积聚为特征的酒精性脂肪肝，以肝细胞损伤、气球样变、炎症为主要病理改变的酒精性慢性肝炎，最终发展为肝硬化和肝细胞癌[1]。

大鼠腹股沟脂肪间充质干细胞的分离、培养、鉴定及活体标记毕晓娟;马艳;江明【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2011(015)014【摘要】BACKGROUND: Adipose-derived stem cells (ADSCs) are easily collected and abundantly cultured, ADSCs can proliferate rapidly when being cultured in vitro, with multi-directional differentiation potential, ADSCs are expected as seed cells for tissue engineering and cell therapy.OBJECTIVE: To culture rat ADSCs in vitro, and to mark and identify its differentiation.METHODS: Collagenase Ⅰ digestion was used to isolat e ADSCs from rat groin fat pads under sterile condition. ADSCs were passaged and amplified by the trypsin digestion. At the third passage, growth curve of the third passage ADMSCs was drawn by cytometry. Cellular surface antigens HCAM, CD106, CD29, CD49D and CD34 were examined using flow cytometry. Giemsa staining, Feridex-Iabeled and induced to differentiate into osteoblasts and lipocytes. Oil red staining was used to examine lipocyte induction, alizarin red staining wwas used to examine osteoblast induction.RESULTS AND CONCLUSION : In vitro cultured ADSCs were mainly spindle-shaped and whirlpool-shaped arranged. The third passage ADSCs were positive for CD29, but negative for CD34, HCAM, CD49d and CD106. Curve of growth detection had logarithmic phase and platform phase, the positive expression of Feridexreached 80％. ADMSCs were differentiated into lipocytes and osteoblasts under certain conditions. ADSCs isolated from rat epididymal fat pads can be easily cultu red, passaged and amplified, and which can mark alive and differentiate into osteoblasts and adipocytes under certain conditions.%背景:脂肪间充质干细胞具有来源丰富、取材方便、体外有较强增殖能力并具有多向分化的特点,有望成为骨组织工程、细胞治疗等的种子细胞.目的:培养扩增大鼠脂肪源间充质干细胞,以活体标记并鉴定其分化潜能.方法:无菌条件下取大鼠双侧腹股沟脂肪,Ⅰ胶原酶消化法分离培养脂肪源性干细胞,胰蛋白酶消化法传代扩增.取第3代脂肪干细胞进行流式检测HCAM、CD106、CD29、CD49D和CD34,生长曲线测定,吉姆萨染色,菲立磁标记,成脂诱导后油红O染色及成骨诱导后茜素红染色钙结节.结果与结论:细胞呈长梭形漩涡样生长,第3代细胞流式鉴定CD29阳性,CD34、HCAM、CD49d、CD106低表达,生长曲线测定有对数生长期,平台期,菲立磁标记阳性率达80%,并且在一些诱导剂下分化为脂肪细胞及成骨细胞.提示,来源于大鼠腹股沟脂肪分离获得的脂肪源干细胞易于培养和传代扩增,并可活体标记且在特殊条件下可分化为成骨细胞和脂肪细胞.【总页数】5页(P2512-2516)【作者】毕晓娟;马艳;江明【作者单位】新疆医科大学第一附属医院,医学研究中心干细胞研究室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市,830054;新疆医科大学第一附属医院,医学研究中心干细胞研究室,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市,830054;新疆医科大学第一附属医院,血液二科,新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市,830054【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养表型鉴定与标记 [J], 何忠杰;马俊勋;方驰华;杨丽萍2.大鼠脂肪间充质干细胞体外分离培养及CM-DiI标记后的传代示踪 [J], 周虹;郭杏;李丹;高小春;熊爱兵;谭美云3.人髌下脂肪垫来源脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定 [J], 刘玉平;刘涛;王明明;李明;俞光荣4.人髌下脂肪垫来源脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定 [J], 刘玉平;刘涛;王明明;李明;俞光荣;5.大鼠附睾脂肪间充质干细胞的分离培养和鉴定 [J], 刘梦雪;乔虹;姜玉玲;李强;孙玉倩;张巾超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

体内的脂类物质代谢异常时，多余的脂质沉积在血管壁上，并逐渐形成斑块，使血管内皮增厚、变硬，是引起动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS ）的重要原因之一。

载脂蛋白E（apolipoprotein E, apoE ）主要存在于乳糜微粒（chylomicron, CM ）、极低密度脂蛋白（very low desity lipoprotein, LDL ）ApoE -/-小鼠动脉粥样硬化模型的建立欧海龙，张礼林，何晓兰，李红梅，雷霆雯*(贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室，中国贵州贵阳550004摘要：ApoE -基因敲除小鼠（ApoE -/-）经含有21％脂肪和0.15％胆固醇的高脂饲料喂食12周后进行各项血脂胆固醇水平检测，以及整体主动脉油红O 染色与主动脉根部病理切片油红O 染色等动脉粥样硬化病理分析。

结果显示经过高脂诱导的ApoE -/-小鼠的血浆总胆固醇和甘油三酯水平均比未经饮食诱导的ApoE -/-小鼠、经同样饮食处理的野生型小鼠以及未经处理的野生型小鼠均显著升高（P <0.05）；低密度脂蛋白-胆固醇水平与野生型（正常饮食组和高脂组）相比升高了近3倍多；高脂诱导ApoE -/-小鼠的主动脉斑块面积占整体主动脉面积的65％，显著高于ApoE -/-小鼠的正常饮食组（21％）（P <0.05），同时主动脉根部的血管壁明显增厚，管腔变窄。

实验结果表明通过高脂饲料饮食诱导，成功建立了动脉粥样硬化模型小鼠，可为下游的药物筛选、基因治疗以及动脉粥样硬化机理的体内研究提供理想的实验材料。

关键词：ApoE -/-小鼠；动脉粥样硬化；胆固醇；血脂；主动脉中图分类号：R394文献标识码：A 文章编号：1007-7847(201502-0141-04Abstract ：The ApoE gene knockout mice (ApoE -/- were fed with a high-fat (HFdiet containing 21%fat and 0.15%cholesterol for 12weeks to establish atherosclerosis model. After diet induction, the ApoE -/-mice were sacrificed and plasma total cholesterol (TC,triglyceride (TG,low -density lipoprotein -cholesterol (LDL-Cand high-density lipoprotein-cholesterol (HDL-Clevels were measured. The whole aortas and se -quential sections of the aortic root were stained with oil red O. Results showed that the plasma levels of TC and TG from HF diet induced ApoE -/-mice were both dramatically higher than normal diet(ND-fedApoE -/-mice as well as wild-type mice fed with normal diet or HF diet (P <0.05.The contents of LDL-cholesterol in plasma were elevated by three-fold compared with wild-type (NDand HFD. Atherosclerotic lesion sizes were significantly increased in whole aorta (65%as compared with normal diet ApoE -/-mice (21%.Similar result was obtained from cross-sections of the aortic root analysis. The results demonstrated that HF diet treatment greatly enhanced atherosclerosis development in ApoE -/-mice. The establishment of atherosclerosis model mice provides a valuable tool for drug screen, gene therapy and even in vivo mechanism analysis in atherosclerosis disease.Key words ：ApoE -/-mice; atherosclerosis; cholesterol; lipoprotein; aorta（Life Science Research ，2015，19（2）：141～144）收稿日期：2014-08-25；修回日期：2014-10-21基金项目：贵阳医学院博士启动基金项目（2012006）作者简介：欧海龙（1977-），男，福建莆田人，贵阳医学院副教授，博士，主要从事脂代谢与动脉粥样硬化研究; *通讯作者：雷霆雯（1962-）女，贵州贵阳人，贵阳医学院教授，硕士，主要从事基因工程药物研究，E-mail:**************。

AAccelerate 促进剂Accelerator硬化剂，接触剂Acetic acid 醋酸Acetone 丙酮Achromatic color 无彩色Acid stain 丙烯酸树脂Acrylic丙烯酸Acrylics acid resin 丙烯酸（类）树脂Acrylonitrile butadiene styrene resin ABS树脂，丙烯腈-丁二烯-苯乙烯树脂Active agent 活性剂Additive 添加剂Additive mixture 加色混合Adhesive 胶粘剂Adhesive solvent 胶（料）溶剂Adjacent color 类似色Advancing color 进出色Aerosol spraying 简易喷涂After image 残象Air drying 常温干燥Airless spraying 无气喷涂Alcohol stain 酒精着色剂Alert color警戒色Alkyd resin 醇酸树脂Alligatoring 漆膜龟裂Amount of spread 涂胶量Anticorrosive paint 防锈涂料Antifouling paint 防污涂料Antique finish 古式涂料Automatic spraying 自动喷涂BBaking finish 烤漆喷涂Base boat 底漆Blistering 小泡Blushing 白化Body varnish 磨光漆Brilliant 鲜艳的Brushing 刷涂Brushing mark/streak 刷痕Bubbling 气泡Button lac 精致虫胶CCafé咖啡色Carbamide resin adhesive 尿素树脂胶Catalyst 催化剂，触媒，接触剂Chalking 粉化Cherry 樱桃色Chipping 剥落Chromatic color 有彩色Chromaticity 色度Chromaticity coordinates 色度坐标Chromaticity diagram色度圆Clssing 补漆Clear coating 透明涂层Clear lacquer 透明喷漆Clear paint 透明涂料Coarse particle 粗粒Coating 涂料Cobwebbing 裂痕Cocos 可可色Cold water paint 水性涂料Color blindness 色盲Color conditioning 色彩调节Color harmony 色彩调和Color in oil 片种特（调色用）Color matching 调色Color number 色号（色之编号或代号）Color paint 有色涂料Color reaction 显色反应Color reproduction 色重现Color tolerance 色容许差Compatibility 相容性Complimentary color 补色Consistency 稠厚度Contractive color 收缩色Col color 寒色，冷色Cooling agent 冷却剂Covering power 覆盖力Cracking 龟裂，裂纹Cresol resin adhesive 甲酚树脂胶Crimping 皱纹Cure 硬化Curing agent 固化剂Curing temperature 固化温度DDark 暗Deep 深Degumming 脱胶Dewaxed shellac 胶蜡虫胶Diluent 稀释剂，冲淡剂Dilution ratio 稀释比例Dingy 浊色Dipping 浸渍涂层Dipping treatment 变色Discoloring 变色Discord 不调和色Drier 干燥剂Dry rubbing 干磨Drying time 干燥时间Dulling 失光Dusting 粉化EEgg-shell 埴孔亚光，显孔亚光electrostatic spraying 静电涂装emulsion adhesive 乳化胶emulsion paint 乳化涂料enamel 色漆，磁漆end-coating 端面涂层end-gluing 端面胶合epoxy finish环氧效果epoxy resin glue环氧树脂胶ethyl cellulose lacquer乙基纤维素喷漆FFading退色Filler 腻子，埴料，填充剂Finish code 涂料编号Finshing 涂饰Flaking 剥落Flat paint 消光涂料Flatness 消光Floor paint 地板涂料Foam glue 泡沫胶GGelatin 明胶，凝胶Glare 眩目Glue 胶粘剂，胶，胶料Glue and filler bond 动物胶及填料胶结Glue mixer 调胶机Glue spreader 涂胶机Gum 树胶，胶树HHardener 硬化剂Hide 皮胶High solid lacquer 高固体分漆Honey color 蜂蜜色IIlluminant color 光源色JJelly strength 胶质强度Joint strength 胶接强度LLac 虫胶Lac varnish 光漆Lacquer 漆Latex 乳胶Latex paint 合成树脂乳化型涂料Leveling agent 均化剂Light 光亮的Liquid glue 液态胶Long oil varnish 长性清漆Love formaldehyde 低甲醛MMake up paint 调和漆Medium oil varnish 中油度清漆Melamine resin adhesive 三聚氯胺树脂胶，蜜胺树脂胶Melamine resin sheet 三聚氯胺树脂（片）Methyl alcohol 甲醛Multi-color 多彩漆NNatural clear lacquer 清漆N.C lacquer 硝化棉喷漆N.C lacquer enamel 硝色棉色漆N.C lacquer sealer硝化棉底涂料N.C lacquer surfacer 梢化棉中涂整面涂料Nitro-cellulose lacquer 硝化纤维漆，硝基榉Nitro-lacquer 硝基漆Nitrocellulose lacquer 硝化纤维（喷）漆Non toxix finishes无毒喷漆Novolac （线型）酚醛清漆OOff- color 变色的，退色的，不标准的颜色Oil paint 油性漆Oil putty 油性腻子Oil solvent 油溶剂Oil stain 油性着色剂Oil staining 油着色Oil stone 油石Oil varnish 油性清漆，上清漆Opacity 不透明度Opaque paint 不透明涂料PPaint 涂料，油漆Paint film 涂膜Paint nozzle 涂料喷头Penetrant 渗透剂Phenol aldehyde resin 酚醛树脂胶Polishing varish 擦光（亮）清漆Poly Urethane Resin 聚氨酯（PU）Poly ester 聚酯Polyester resin lacquer 聚酯树脂涂料Polypropylene 聚丙烯Polystyrene聚苯乙烯Polyurethane 聚氨酯Polyvinyl acetate adhesive 聚醋酸乙烯（树脂）胶Polyvinyl adhesive 聚乙烯树脂胶Polyvinyl chloride resin 聚乙烯树脂涂层Pre-coating 预涂Procuring 预固化Preservative 防腐剂Primer 底漆（下涂涂料）Putty 腻子Pyroxylin lacquer 硝基漆QQuick drying paint 速干漆RReady mixed paint 调和漆Refined shellac 精制虫胶Resin adhesive 树脂胶Reverse coater 反向涂料器Roller brush 滚筒刷SSample board 样板Sand blast 喷砂Sand pa工业防腐漆产品编号产品名称种类详细内容6101 ARTOPAL FINISH 醇酸面漆更详细6102 ARTOPAL ENAMEL 醇酸磁漆更详细6103 ARTOPAL UNDERCOAT 醇酸中层漆更详细6106 ARTOPOXY FINISH 快干乙烯面漆更详细6107 ARTOPOXY RL PRIMER 快干红丹底漆更详细6108 ARTOPOXY RC PRIMER 快干环保铁红底漆更详细6111 ARTOPAL BITUCOA T 沥青漆更详细6114 ARTOPAL HOLD AL OIL 渗透型铝粉漆更详细6121 ARTOPAL ZINC PHOSPHA TE PRIMER 醇酸磷酸锌底漆更详细6122 ARTOPAL RED LEAD PRIMER 醇酸红丹底漆更详细6150 ARTOPAL ALUMINIUM HR 醇酸铝粉耐热漆250℃更详细6155 ARTOPAL ALUMINIUM HR500 醇酸铝粉耐热漆500℃更详细6201 ARTOPCRYL FINISH 丙烯酸面漆更详细6211 ARTOPCRYL BUILDCOAT 丙烯酸中层漆更详细6212 ARTOPRUBBER MIO COAT 氯化像胶云铁中间漆更详细6231 ARTOPRUBBER A/C 氯化像胶铝粉底漆更详细6232 ARTOPRUBBER ZP PRIMER 氯化像胶底漆更详细6301 ARTOPRUBBER FINISH 氯化像胶面漆更详细6501 ARTOPPOXY TL COATING 高固体环氧漆更详细6502 ARTOPPOXY RC COATING 可重涂环氧漆更详细6503 ARTOPPOXY ZP PRIMER 环氧磷酸锌底漆更详细6504 ARTOPPOXY RC MIO 环氧云母氧化铁底漆更详细6505 ARTOPPOXY W ASH PRIMER 双组份铬酸锌聚乙烯醇缩丁醛底漆更详细6511 ARTOPPOXY MULTI-PURPOSE PRIMER 通用环氧底漆更详细6515 ARTOPPOXY ZINC PRIMER 富锌环氧底漆更详细6516 ARTOPPOXY WS PRIMER 环氧车间底漆更详细6519 ARTOPPOXY ONE CAN ZINC PRIMER 单组份环氧富锌底漆更详细6523 ARTOPPOXY SEALER 环氧封闭漆更详细6524 ARTOPPOXY AR COATING 强化环氧防护漆更详细6531 ARTOPOOXY TAR COAT 焦油环氧漆更详细6537 ARTOPPOUR RC FINISH 覆涂性聚氨酯面漆更详细6540 ARTOPPOXY ST-AL COATING 环氧铝粉带锈漆更详细6544 ARTOPPOXY ST-C COA TING 环氧带锈漆更详细7911 ARTOPSIL 100 无机硅酸锌底漆更详细8101 ARTOPFC COATING 超耐候氟碳漆更详细三蝶防腐涂料目录B0310丙烯酸面漆一种具有最佳保色性的物理干燥型厚膜漆。

文章编号:１００４￣９２３１(２０１８)１０￣０８７３￣０５实验技术ʌ基金项目ɔ国家重点基础研究发展计划(２０１５ＣＢ５５４００５)ꎻ国家自然科学基金项目(８１３７３０６７)ʌ作者简介ɔ钟晓怡ꎬ女ꎬ硕士研究生在读ꎻ研究方向:肿瘤流行病学ꎻＥ￣ｍａｉｌ:１７７０４７１２６＠ｑｑ ｃｏｍꎻ林云ꎬ男ꎬ硕士研究生在读ꎻ研究方向:肿瘤流行病学ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ｙｌｉｎ７９７７＠１６３ ｃｏｍꎻ郭艳ꎬ女ꎬ硕士ꎬ讲师ꎻ研究方向:肿瘤流行病学ꎻＥ￣ｍａｉｌ:ＧＵＯＹ１９８９０５＠１２６ ｃｏｍꎻ并列第一作者ʌ通信作者ɔ殷建华ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｈａｗｋｙｊｈ１６３＠１６３ ｃｏｍ高脂小鼠脂肪肝组织油红Ｏ特殊染色的应用钟晓怡ꎬ林云ꎬ郭艳ꎬ蒲蕊ꎬ曹广文ꎬ殷建华海军军医大学流行病学教研室ꎬ上海２００４３３摘要:ʌ目的ɔ探讨２种油红Ｏ染色法在非酒精性脂肪肝病中脂肪变性检测的应用ꎮʌ方法ɔ选取非酒精性脂肪肝病动物疾病模型Ｃ５７ＢＬ/６Ｊ小鼠３０只ꎬ安乐死处理后摘取左肝叶ꎬ将肝组织用４％多聚甲醛固定液充分固定后分为２份进行组织学制片ꎬ１份样品制作石蜡切片ꎬ石蜡切片制备完成后进行苏木精－伊红(ＨＥ)染色ꎬ作为脂肪变性的鉴定ꎬ另１份样品用３０％蔗糖溶液脱水后用ＯＣＴ包埋制作冰冻切片ꎬ冰冻切片制备完成后进行２种方法的油红Ｏ染色ꎮ通过盲测的方法ꎬ在光学显微镜下观察油红Ｏ在脂滴细胞的定位情况ꎬ并对２种染色方法进行对比ꎮʌ结果ɔ２种染色方法对组织及细胞没有任何病理性的损伤ꎬ并具有较好的显色与定位作用ꎮʌ结论ɔ运用良好的特殊染色技术ꎬ可以清晰分辨脂滴细胞ꎬ并显示出脂滴细胞的数量ꎬ从而对非酒精性脂肪肝病中的脂肪变性进行定位与半定量的分析ꎮ关键词:脂肪变性ꎻ油红Ｏ染色ꎻ特殊染色ꎻ非酒精性脂肪肝病中图分类号:Ｒ４４６㊀㊀㊀文献标志码:ＡＤＯＩ:１０ １９４２８/ｊ ｃｎｋｉ ｓｊｐｍ ２０１８ １８７２２引用格式:钟晓怡ꎬ林云ꎬ郭艳ꎬ等.高脂小鼠脂肪肝组织油红Ｏ特殊染色的应用[Ｊ].上海预防医学ꎬ２０１８ꎬ３０(１０):８７３￣８７７.Ｏｉｌ￣ｒｅｄＯｓｐｅｃｉａｌｓｔａｉｎｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓａｐｐｌｉｅｄｉｎｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｏｆｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉｃｍｏｕｓｅＺＨＯＮＧＸｉａｏ￣ｙｉꎬＬＩＮＹｕｎꎬＧＵＯＹａｎꎬＰＵＲｕｉꎬＣＡＯＧｕａｎｇ￣ｗｅｎꎬＹＩＮＪｉａｎ￣ｈｕａ(ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙꎬＴｈｅＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＳｈａｎｇｈａｉ２００４３３ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:[Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ]Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｗｏｏｉｌ￣ｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｓｔｅａｔｏｓｉｓｉｎｎｏｎ￣ａｌｃｏ￣ｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ.[Ｍｅｔｈｏｄｓ]ＴｈｉｒｔｙＣ５７ＢＬ/６Ｊｍｉｃｅｍｏｄｅｌｓｏｆｎｏｎ￣ａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｄｉｓｅａｓｅｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ.Ａｆｔｅｒｅｕｔｈａｎａｓｉａꎬｔｈｅｌｅｆｔｌｉｖｅｒｌｏｂｅｗａｓｈａｒｖｅｓｔｅｄｉｍｍｅｄｉａｔｅｌｙꎬｗｈｉｃｈｗａｓｉｍｍｅｒｓｅｄｉｎａｌａｒｇｅｖｏｌｕｍｅｏｆ４％ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅｆｉｘａｔｉｖｅｉｎｃａｃｏｄｙｌａｔｅｂｕｆｆｅｒ.Ａｆｔｅｒｆｉｘａｔｉｏｎꎬｔｈｅｌｉｖｅｒｗａｓｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｓａｍｐｌｅｓｆｏｒｍａｋｉｎｇｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｅｃｔｉｏｎｓ.Ｏｎｅｓａｍｐｌｅｗａｓｍａｄｅｉｎｔｏｐａｒａｆｆｉｎｓｅｃｔｉｏｎｓｆｏｒｈｅｍａｔｏｘｙｉｎ￣ｅｏｓｉｎ(ＨＥ)ｓｔａｉｎｉｎｇｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｓｔｅａｔｏｓｉｓ.ＴｈｅｏｔｈｅｒｗａｓｍａｄｅｉｎｔｏｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆＯＣＴ￣ｅｍｂｅｄｄｅｄｂｌｏｃｋａｆｔｅｒｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｗｉｔｈ３０％ｓｕｃｒｏｓｅｓｏｌｕｔｉｏｎ.Ｔｈｅｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｗｅｒｅｓｔａｉｎｅｄｂｙｔｗｏｏｉｌ￣ｒｅｄＯｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓ.Ｔｈｅｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｏｉｌ￣ｒｅｄＯｉｎｔｈｅｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｂｌｉｎｄｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｕｎｄｅｒｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅꎬａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｔｈｅｔｗｏｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ.[Ｒｅｓｕｌｔｓ]Ｔｈｅｔｗｏｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｐｒｏｖｅｄｔｏｂｅｗｉｔｈｏｕｔｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄａｍａｇｅｔｏｔｉｓｓｕｅａｎｄｃｅｌｌꎬａｎｄｈａｄｇｏｏｄｃｏｌｏｒａｔｉｏｎａｎｄｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔꎬｗｈｉｃｈｐｒｏｖｉｄｅｄｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｎｏｎ￣ａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ.[Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ]Ｂｙｔｈｅｕｓｅｏｆｇｏｏｄｓｐｅｃｉａｌｓｔａｉｎｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬｔｈｅｌｉｐｉｄｄｒｏｐｃｅｌｌｓａｒｅｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｅｄｃｌｅａｒｌｙꎬａｎｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｌｉｐｉｄｄｒｏｐｃｅｌｌｓａｒｅｄｉｓｐｌａｙｅｄ.Ｔｈｅｓｔｅａｔｏｓｉｓｉｎｎｏｎ￣ａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｄｉｓｅａｓｅｉｓｌｏｃａｔｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｗｉｔｈｈａｌｆｑｕａｎ￣ｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｓｔｅａｔｏｓｉｓꎻｏｉｌ￣ｒｅｄＯｓｔａｉｎｉｎｇꎻｓｐｅｃｉａｌｓｔａｉｎｉｎｇꎻｎｏｎ￣ａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ㊀㊀非酒精性脂肪肝病(ＮＡＦＬＤ)是一种病变主要在肝小叶以肝细胞脂肪变性和脂肪贮积为病理特征且无过量饮酒史的临床综合征ꎮ疾病谱包括单纯性脂肪肝㊁非酒精性脂肪性肝炎(ＮＡＳＨ)㊁肝纤维化ꎬ甚至肝硬化㊁肝细胞癌[１￣３]ꎮ在病理学上表现为肝细胞脂肪变性㊁肝实质炎症反应㊁肝细胞气球样变性㊁Ｍａｌｌｏｒｙ小体形成及肝纤维化[４]ꎮ为深入研究其发病机制ꎬ筛选预防和治疗ＮＡＦＬＤ的有效药物ꎬ探讨药物的作用机理ꎬ选择一个与人类病变相似的动物模型极为重要[５]ꎮ采用高脂饮食的方法诱导非酒精性脂肪肝病动物模型最为常见ꎬ高脂诱导模型常用的动物主要有小鼠㊁大鼠等[６]ꎮＮＡＦＬＤ动物模型基本采用肝组织苏木素－伊红(ＨＥ)染色㊁油红Ｏ染色评价病理学改变[７]ꎮ油红Ｏ染色技术可以用来估计该动物疾病模型中肝脏脂肪沉积[８]ꎬ具有细胞定位功能及分析作用ꎬ当前常用的油红Ｏ特殊染色方法有贴片滴染法[９]与贴片浸染法[１０]等ꎮ但这些染色方法都存在非特异性着色ꎬ阳性脂滴丢失及染色背景差等情况ꎮ如今动物模型逐渐走向成熟化和标准化ꎬ在实践中应重视实验的稳定性和可重复性ꎬ本研究通过２种油红Ｏ特殊染色的染色方法比较ꎬ为ＮＡＦＬＤ动物模型的研究选择较为优质的实验方法ꎮ１㊀材料与方法１ １㊀ＮＡＦＬＤ的标本３０只高脂饲料诱导的ＮＡＦＬＤ动物疾病模型Ｃ５７ＢＬ/６Ｊ小鼠[１１￣１２]安乐死处理后ꎬ迅速摘取肝左叶新鲜组织ꎬ并固定于４％多聚甲醛溶液２４ｈ后ꎬ制作４μｍ的石蜡切片及１５μｍ的连续冰冻切片分别制备ＨＥ染色及２种染色方法的油红Ｏ特殊染色ꎮ１ ２㊀试剂的配制油红Ｏ染液:用电子天平称量油红Ｏ粉末０ ５ｇ溶解于１００ｍＬ(含量９８％)异丙醇ꎬ待充分溶解后ꎬ用定性滤纸过滤去除杂质ꎬ即可使用ꎬ该溶液需要现配现用ꎮ０ ０１ＭＰＢＳ缓冲液:用电子天平分别称量８ｇＮａＣｌꎬ０ ２ｇＫＣｌꎬ１ ４４ｇＮａ２ＨＰＯ４和０ ２４ｇＫＨ２ＰＯ４ꎬ溶于８００ｍＬ蒸馏水中ꎬ用ＨＣｌ调节溶液的ｐＨ值至７ ４ꎬ最后加蒸馏水定容至１Ｌ即可ꎮ６０％异丙醇溶液:用量筒盛无水异丙醇溶液６０ｍＬꎬ蒸馏水加至１００ｍＬꎬ摇动容器使溶液充分混匀ꎮ水溶性封片剂:商品化的水溶性封片剂放入３７ħ烘箱内预热ꎬ待封片剂变为流动的水质状态ꎬ方可使用ꎮ１ ３㊀实验方法１ ３ １㊀ＨＥ染色法㊀ＨＥ染色是石蜡切片常用的染色技术ꎮ苏木素染液为碱性染液ꎬ主要是细胞内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色ꎻ伊红染液为酸性染液ꎬ主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色[１３]ꎮ发生脂肪变性的组织在石蜡制片后ꎬ脂肪滴被高浓度酒精和二甲苯等脂溶剂所溶解ꎬ形成空泡ꎬ在ＨＥ染色切片可见到细胞质内有许多大小不等的圆形空泡[１４]ꎮ染色步骤:①石蜡切片６０~６５ħ烤片６０ｍｉｎꎻ②二甲苯脱蜡ꎬ梯度酒精至水化ꎻ③苏木素染液染色１~５ｍｉｎꎻ④自来水洗１ｍｉｎꎻ⑤１％盐酸乙醇分化３０ｓꎻ⑥自来水洗５ｍｉｎꎬ变蓝ꎻ⑦伊红染液染色３０ｓ~５ｍｉｎꎻ⑧自来水洗１ｍｉｎ[１４]ꎻ⑨经酒精脱水ꎬ二甲苯透明ꎻ⑩中性树胶封固ꎮ１ ３ ２㊀油红Ｏ染色法㊀油红Ｏ为脂溶性ꎬ目前被认为是最优良的脂肪染色染料ꎬ染料在脂肪内能高度溶解ꎬ从而通过染色ꎬ能保存组织中的脂肪滴[１５]ꎮ若进行脂肪染色ꎬ标本不能制作石蜡切片ꎬ而需要制作冰冻切片[１４]ꎮ㊀㊀贴片浸染法染色步骤:①冰冻切片机切取１５μｍ的冰冻组织ꎬ将组织裱贴于载玻片ꎬ至切片恢复室温ꎻ②蒸馏水浸洗２ｓꎻ③６０％异丙醇浸洗２ｓꎻ④油红Ｏ染液浸染１０ｍｉｎꎻ⑤６０％异丙醇浸染分色２ｓꎻ⑥蒸馏水洗１ｓꎻ⑦Ｍａｙｅｒ苏木素复染２ｍｉｎꎻ⑧自来水水洗(蓝化)１０ｍｉｎꎻ⑨蒸馏水水洗２ｓ[１４]ꎻ⑩用滤纸吸干周围水分ꎬ水溶性封片剂封固并在盖玻片与载玻片交界边缘用中性树胶封闭ꎮ㊀㊀捞片挑染法染色步骤(珠海贝索生物公司油红Ｏ染色试剂盒操作说明书):①冰冻切片机切取１５μｍ的冰冻组织ꎬ用玻璃钩把切片捞入蒸馏水漂洗ꎻ②组织捞入６０％异丙醇漂洗２ｓꎻ③组织捞入油红Ｏ染液漂染１０ｍｉｎꎻ④组织捞入６０％异丙醇漂染分色２ｓꎻ⑤切片捞入蒸馏水漂洗１ｓꎻ⑥组织捞入Ｍａｙｅｒ苏木素复染１ｍｉｎꎻ⑦组织捞入自来水漂洗(蓝化)２ｍｉｎꎻ⑧组织捞入蒸馏水漂洗２ｓꎻ⑨用毛笔将组织裱片于载玻片上ꎻ⑩用滤纸吸干周围水分ꎬ水溶性封片剂封固并在盖玻片与载玻片交界边缘用中性树胶封闭ꎮ１ ４㊀半定量分析肝细胞脂肪变的范围通过半定量进行评估ꎮ根据肝组织的腺泡结构测算脂肪变的肝细胞百分比:５％~３３％为轻度脂肪变ꎬ３４％~６６％为中度脂肪变ꎬ>６６％为重度脂肪变[１６￣１７]ꎮ细胞形态清晰度分为三级ꎬ分别为:模糊(＋)ꎬ较清晰(＋＋)ꎬ清晰(＋＋＋)ꎮ１ ５㊀统计学分析所有数据均录入到Ｅｘｃｅｌ文档中ꎬ以平均数ʃ标准差(ｘ－ʃｓ)表示ꎬ并使用ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍ６ ０软件进行数据的统计分析ꎮ采用非配对ｔ检验或符号秩和检验ꎬ检验水准α＝０ ０５ꎮ２㊀结果２ １㊀ＨＥ染色结果ＨＥ染色结果显示ꎬ组织细胞结构清晰ꎬ以大泡性脂肪变为主ꎬ即细胞质中出现仅有一个大的脂肪或几个小脂滴将细胞核挤于细胞边缘ꎬ呈空泡状ꎬ并伴有小泡性脂肪变(图１)ꎮ２ ２㊀油红Ｏ染色结果油红Ｏ染色结果显示ꎬ组织细胞中脂滴呈橘红色ꎬ核呈蓝色(图２ꎬ图３)ꎮ２ ３㊀２种实验方法结果比较比较ＨＥ染色中脂肪变性的病理评分与２种油红Ｏ染色法的病理评分ꎬ发现同一个标本在２份油红Ｏ评分中都存有一定程度的非特异性染色及阳性反应丢失ꎬ并在组织形态结构上有略微的图１㊀ＨＥ染色结果(ˑ２００倍镜)图２㊀贴片浸染法油红Ｏ染色结果(ˑ２００倍镜)图３㊀捞片挑染法油红Ｏ染色结果(ˑ２００倍镜)差异性(表１)ꎮ表１㊀２种染色方法实验结果对比(ｘ－ʃｓ)项目标本数贴片浸染法捞片挑染法非特异性染色百分比(％)３０９ ８３ʃ１ １４２ ０６ʃ０ ３７ａ阳性反应丢失率(％)３０１０ ００ʃ１ ０３５ ０７ʃ０ ６０ａ细胞形态清晰度３０＋＋＋＋＋ｂ[注]与贴片浸染法比较ꎬａ.Ｐ<０ ０１ꎻｂ.Ｐ<０ ０５３㊀讨论通过油红Ｏ特殊染色可以证实ＮＡＦＬＤ小鼠模型肝脏组织中的脂肪变性ꎬ特别是纯粹性的小泡性脂肪变在ＮＡＦＬＤ中并不常见ꎬ更需通过油红染色加以证实[１８]ꎮ２种特殊染色的方法都具有良好的染色稳定性㊁操作简易性和可重复性的特点ꎮ本次研究发现ꎬ２种染色方法的非特异性染色百分比㊁阳性反应丢失率及细胞形态清晰度均有差异ꎬ捞片挑染法与贴片浸染法相比具有较大的优势ꎮ捞片挑染法的非特异性染色百分比低于贴片浸染法ꎬ能更好地确保切片背景无着色ꎬ并能够减少实验误差导致的人为诊断的误差ꎮ阳性反应丢失率捞片挑染法低于贴片浸染法ꎬ表明捞片挑染法能使组织充分地与有机溶液接触ꎬ在染色时染料通过有机溶剂转移入脂质而使脂肪染色ꎬ从而增大着色的强度ꎬ并影响染色效果ꎬ能更精准地定位所需检测的脂肪变性ꎮ捞片挑染法的细胞形态清晰度较优于贴片浸染法ꎬ更有利于光学显微镜下的观察及拍摄ꎮ除上述的优势外ꎬ捞片挑染法能减少试剂的损耗ꎬ相比于贴片浸染法所需的染色缸ꎬ捞片挑染法只需２４孔板操作即可ꎬ很大程度上减少了试剂用量ꎬ并同时能满足油红Ｏ染色易发生沉淀需勤更换的实验需求ꎮ在以往的实验过程中ꎬ发现油红Ｏ特殊染色经常出现定位不准㊁脂滴丢失及视觉模糊等现象ꎮ经过染色技术的改进ꎬ这３个方面得到了相应的改善ꎬ能更好地制备优良的病理切片及提供准确的病理诊断结果ꎬ为研究提供精确的验证ꎮ然而ꎬ捞片挑染法在操作方面也存在一些不足之处:①用玻璃钩挑片时ꎬ易导致人为操作致使组织切片缺失ꎮ②用玻璃钩捞片时ꎬ无法控制组织在试剂中停留时间的统一性ꎬ可能造成在６０％异丙醇中的停留时间过长ꎬ细胞内的脂质在有机溶剂中溶解ꎮ因此ꎬ捞片挑染法是否为最优的实验方法ꎬ还有待进一步验证ꎮ油红Ｏ特殊染色除诊断肝㊁肾㊁心等实质脏器的脂肪变性外ꎬ还可以用于鉴别和诊断脂肪组织中所发生的肿瘤及其性质ꎬ例如皮脂腺癌ꎬ卵泡膜细胞癌ꎬ脂肪肉瘤ꎬ颗粒细胞瘤等[１９]ꎮ但本研究中所提及的染色方式是否可用于其他组织的鉴定ꎬ有待于实验验证ꎮ参考文献[１]郝伟荣.祛痰降脂方治疗非酒精性脂肪肝７５例疗效观察[Ｊ].上海预防医学ꎬ２０１１ꎬ２３(４):１８５￣１８７.[２]ＰＡＰＰＡＣＨＡＮＪＭꎬＡＮＴＯＮＩＯＦＡꎬＥＤＡＶＡＬＡＴＨＭꎬｅｔａｌ.Ｎｏｎ￣ａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ:ａｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉｓｔᶄｓｐｅｒ￣ｓｐｅｃｔｉｖｅ[Ｊ].Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅꎬ２０１４ꎬ４５(３):３４４￣３５３. [３]ＧＯＨＶＪꎬＳＩＬＶＥＲＤＬ.ＴｈｅｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔａｓａｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｉｎＮＡＦＬＤ[Ｊ].ＳｅｍｉｎＬｉｖｅｒＤｉｓꎬ２０１３ꎬ３３(４):３１２￣３２０.[４]ＢＲＵＮＴＥＭ.Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ:ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃｆｅａ￣ｔｕｒｅｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ[Ｊ].ＳｅｍｉｎＤｉａｇｎＰａｔｈｏｌꎬ２００５ꎬ２２(４):３３０￣３３８.[５]黄海燕ꎬ辛永宁ꎬ姜曼ꎬ等.非酒精性脂肪性肝病动物实验模型研究进展[Ｊ].临床肝胆病杂志ꎬ２０１４ꎬ３０(９):９４８￣９５３.[６]宣自华ꎬ戴敏.高脂诱导非酒精性脂肪肝动物模型及其病理机制研究进展[Ｊ].安徽医药ꎬ２００９ꎬ１３(３):２３３￣２３６.[７]刘静ꎬ柳银兰ꎬ杨文军ꎬ等.高脂高果糖饮食诱导非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的建立和鉴定[Ｊ].中华肝脏病杂志ꎬ２０１４ꎬ２２(６):４４５￣４５０.[８]ＹＡＭＡＤＡＨꎬＯＨＡＳＨＩＫꎬＳＵＺＵＫＩＫꎬｅｔａｌ.ＬｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌｓｔｕｄｙｏｆｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｍｉＲ￣１２２ｉｎａｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｎｏｎ￣ａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＣｌｉｎｉｃａＣｈｉｍｉｃａＡｃｔａꎬ２０１５ꎬ４４６:２６７￣２７１.[９]王肖燕ꎬ王金泉ꎬ姚刚ꎬ等.脂肪组织冰冻切片油红Ｏ滴染法的建立[Ｊ].家畜生态学报ꎬ２０１４ꎬ３５(８):５８￣６０ꎬ９６.[１０]张舵ꎬ寨旭ꎬ贺西京.油红Ｏ染色在大鼠脊髓损伤中的应用[Ｊ].中国骨伤ꎬ２０１５ꎬ２８(８):７３８￣７４２.[１１]ＣＨＵＭＪꎬＨＩＣＫＥＹＡＪꎬＴＡＧＡＬＯＡＳꎬｅｔａｌ.Ｏｂ/ｏｂｍｏｕｓｅｌｉｖｅｒｓｓｈｏｗｄｅｃｒｅａｓｅｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｅｆｆｉ￣ｃｉｅｎｃｉｅｓａｎｄａｎａｅｒｏｂｉｃｃａｐａｃｉｔｉｅｓａｆｔｅｒｃｏｌｄｉｓｃｈｅｍｉａ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１４ꎬ９(６):ｅ１００６０９.[１２]ＫＲＩＳＴＩＡＮＳＥＮＭＮꎬＶＥＩＤＡＬＳＳꎬＲＩＧＢＯＬＴＫＴꎬｅｔａｌ.Ｏｂｅｓｅｄｉｅｔ￣ｉｎｄｕｃｅｄｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓｏｆｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃｓｔｅａｔｏｈｅｐ￣ａｔｉｔｉｓ￣ｔｒａｃｋｉｎｇｄｉｓｅａｓｅｂｙｌｉｖｅｒｂｉｏｐｓｙ[Ｊ].ＷｏｒｌｄＪＨｅｐａｔｏｌꎬ２０１６ꎬ８(１６):６７３￣６８４.[１３]涂琦ꎬ刘勇ꎬ袁晟.苏木素伊红染色一步法的研究及应用[Ｊ].江西医药ꎬ２０１２ꎬ４７(２):１７５￣１７６.[１４]全国卫生专业技术资格考试专家委员会.２０１５全国卫生专业技术资格考试指导￣病理学技术[Ｍ].北京:人民卫生出版社ꎬ２０１４:２３２ꎬ４３８￣４３９.[１５]任秀花ꎬ闫爱华ꎬ任知春.显示肝㊁肾上腺脂类油红Ｏ方法探讨[Ｊ].四川解剖学杂志ꎬ２００１ꎬ９(２):１０４. [１６]ＢＲＵＮＴＥＭꎬＪＡＮＮＥＹＣＧꎬＤＩＢＩＳＣＥＧＬＩＥＡＭꎬｅｔａｌ.Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ:ａｐｒｏｐｏｓａｌｆｏｒｇｒａｄｉｎｇａｎｄｓｔａｇｉｎｇｔｈｅｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｌｅｓｉｏｎｓ[Ｊ].ＡｍＪＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌꎬ１９９９ꎬ９４(９):２４６７￣２４７４.[１７]ＫＬＥＩＮＥＲＤＥꎬＢＲＵＮＴＥＭꎬＶＡＮＮＡＴＴＡＭꎬｅｔａｌ.Ｄｅｓｉｇｎａｎｄｖａｌｉｄａｔｉｏｎｏｆａｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｃｏｒｉｎｇｓｙｓｔｅｍｆｏｒｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃｆａｔｔｙｌｉｖｅｒｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙꎬ２００５ꎬ４１(６):１３１３￣１３２１.[１８]王晓颖ꎬ王立峰.非酒精性脂肪性肝炎的病理学诊断[Ｊ].实用肝脏病杂志ꎬ２０１３ꎬ１６(６):４８６￣４８９.[１９]王玉芳ꎬ徐晓艳ꎬ武彦.常用特殊染色在病理诊断中的应用[Ｊ].实用医技杂志ꎬ２０１３ꎬ２０(１２):１３５７￣１３５８.(收稿日期:２０１８￣０３￣０６)(上接第８７２页)员的风险性㊁局限性和特殊性ꎬ增加公众对医护人员的尊重和理解ꎮ工作场所暴力的发生严重妨碍医院正常工作秩序ꎬ对急诊科医护人员造成严重的心理伤害ꎬ使医疗护理质量下降ꎬ医护人员辞职增加ꎬ导致人力资源短缺ꎮ本次调查结果提示ꎬ工作场所心理暴力的发生对急诊科医护人员健康的危害不容忽视ꎬ采用多手段㊁多渠道来减少或消除工作场所暴力的发生刻不容缓ꎮ为减轻暴力对心理健康的不良影响ꎬ加强对医护人员的心理辅导和心理咨询必不可少ꎮ参考文献[１]ＬＩＮＷＱꎬＷＵＪꎬＹＵＡＮＬＸꎬｅｔａｌ.ＷｏｒｋｐｌａｃｅｖｉｏｌｅｎｃｅａｎｄｊｏｂｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｍｏｎｇｃｏｍｍｕｎｉｔｙｈｅａｌｔｈｃａｒｅｗｏｒｋｅｒｓｉｎＣｈｉｎａ:ｔｈｅｍｅｄｉａｔｏｒｒｏｌｅｏｆｑｕａｌｉｔｙｏｆｌｉｆｅ[Ｊ].ＩｎｔＪＥｎｖｉｒｏｎＲｅｓＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈꎬ２０１５ꎬ１２(１１):１４８７２￣１４８８６. [２]樊霞云ꎬ孙国珍ꎬ陈娟ꎬ等.县级公立医院急诊护士遭受医院暴力的现状与分析[Ｊ].护理管理杂志ꎬ２０１５ꎬ１５(１１):７７３￣７７５.[３]曾伟芳ꎬ赵瑜ꎬ沈雪环.急诊护士遭受工作场所暴力后心理状况调查分析[Ｊ].现代临床护理ꎬ２００９ꎬ８(７):４￣６ꎬ４６.[４]ＢＥＥＣＨＢꎬＬＥＡＴＨＥＲＰ.Ｗｏｒｋｐｌａｃｅｖｉｏｌｅｎｃｅｉｎｔｈｅｈｅａｌｔｈｃａｒｅｓｅｃｔｏｒ:ａｒｅｖｉｅｗｏｆｓｔａｆｆｔｒａｉｎｉｎｇａｎｄｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆｔｒａｉｎ￣ｉｎｇｅｖａｌｕａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｓ[Ｊ].ＡｇｇｒｅｓｓＶｉｏｌＢｅｈａｖꎬ２００６ꎬ１１(１):２７￣４３.[５]ＣＡＩＷꎬＤＥＮＧＬꎬＬＩＵＭꎬｅｔａｌ.ＡｎｔｅｃｅｄｅｎｔｓｏｆｍｅｄｉｃａｌｗｏｒｋｐｌａｃｅｖｉｏｌｅｎｃｅｉｎＳｏｕｔｈＣｈｉｎａ[Ｊ].ＪＩｎｔｅｒｐｅｒｓＶｉｏｌｅｎｃｅꎬ２０１１ꎬ２６(２):３１２￣３２７.[６]戴晓阳.常用心理评估量表手册(修订版)[Ｍ].北京:人民军医出版社ꎬ２０１０:３０ꎬ１５３ꎬ１７１.[７]潘菲ꎬ孙宏玉ꎬ官锐园ꎬ等.急诊护士遭受工作场所暴力后对工作倦怠的影响[Ｊ].中华护理教育ꎬ２０１０ꎬ７(１):２４￣２７.[８]张斌.对医院工作场所暴力事件的思考[Ｊ].中国医院管理ꎬ２００６ꎬ２６(３):２１￣２４.[９]柳黎黎ꎬ管霞飞.急诊护理人员职业倦怠心理的影响因素分析及建议[Ｊ].中国急救复苏与灾害医学杂志ꎬ２０１１ꎬ６(２):１３９￣１４１.[１０]丘宇茹ꎬ王吉文ꎬ吴惠文.急诊医护人员遭受工作场所暴力后心理状况的调查[Ｊ].中国急救复苏与灾害医学杂志ꎬ２０１２ꎬ７(６):５１４￣５１７.[１１]潘红英ꎬ桂蒙ꎬ孙蒋会ꎬ等.急诊护理人员工作场所暴力的应对策略[Ｊ].中华护理杂志ꎬ２０１ｌꎬ４６(５):４４５￣４４７.(收稿日期:２０１８￣０４￣１２)。