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野生和组培川贝母的总生物碱含量测定和定位研究贝母为百合科Liliaceae贝母属Fritillaria L．多种植物的鳞茎，有悠久的使用历史，是我国重要的中药材之一，其功效是清热润肺，化痰止咳。
据报导，目前我国贝母属植物有61种，50个变种，5变型。
川贝母(Fritillaria cirrhosa D．Don)为我省的十大名贵中药材之一，因其质优效佳而名扬海内外。
但由于贝母类药材生物碱的含量低，单体的分离纯化较困难，而且不同种贝母中生物碱的组成复杂，在这种情况下，对川贝母的质量评价很难取得满意的进展。
为了进一步研究开发利用祖国的中草药资源，并为中草药现代化提供科学依据，本论文对川贝母进行了以下的研究工作。
作者对组培川贝母的培养基配方进行了研究，选择出了诱导愈伤组织效果较好的培养基配方和促进组培川贝母鳞茎及愈伤组织良好生长和分化的培养基配方。
测定了市售川贝母、野生川贝母以及组培川贝母不同部位和生长状态下的总生物碱含量。
并应用植物解剖学、组织化学和植物化学的理论和技术相结合的方法对川贝母生物碱进行组织化学定位的研究，初步建立了石蜡切片观察生物碱分布的方法，并应用该方法分析川贝母鳞茎和愈伤组织中生物碱分布的规律。
实验结果表明，川贝母的组织培养中，以MS培养基附加低浓度NAA(1mg／L)与6-BA(0.5mg／L)为最佳诱导愈伤组织的组合；低浓度NAA适宜愈伤组织生长，但高浓度NAA抑制其生长且抑制愈伤组织的诱导；组培川贝母适宜较低蔗糖浓度；病毒唑可能诱导丛生鳞茎和丛生芽的发生。
野生川贝母和组培川贝母各部分的总生物碱含量都较市售川贝母为高。
组培川贝母总生物碱含量几乎都高于野生川贝母鳞茎。
再生鳞茎的折干率和总生物碱含量是组培川贝母各部分中最高的，总生物碱含量为野生鳞茎的1.7倍。
7类样品总生物碱含量从高到低的顺序为：组培再生鳞茎＞带不定根的愈伤组织＞带不定根的褐化愈伤组织＞愈伤组织＞褐化愈伤组织＞野生鳞茎＞市售川贝母。
一种贝母生物碱的提取方法及其抗肺纤维化用途随着生物技术的不断发展，生物化学领域的研究也越来越深入。
贝母生物碱是一种具有重要药用价值的天然生物活性物质，被广泛应用于中药制剂中。
本文旨在介绍一种贝母生物碱的提取方法及其在抗肺纤维化方面的应用。
首先，我们需要了解贝母生物碱的化学结构和生物活性。
贝母生物碱属于天然生物碱类化合物，化学式为C27H35NO9，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，贝母生物碱的提取和应用一直备受关注。
贝母生物碱的提取方法可以采用多种技术，如超声波提取、微波提取、酶解提取、有机溶剂提取等。
其中，超声波提取是一种常用的方法，具有操作简便、提取效率高等优点。
具体操作步骤如下：首先，将贝母样品粉碎成细粉末，然后用70%乙醇浸泡1小时；接着，将混合液放入超声波提取仪中，超声波频率为40kHz，功率为400W，提取时间为30分钟；最后，过滤提取液，用旋转蒸发仪浓缩，得到贝母生物碱提取物。
贝母生物碱提取物具有很强的药理活性，可用于治疗多种疾病。
其中，抗肺纤维化是其一项重要的应用。
肺纤维化是一种常见的肺部疾病，其病因未完全明确，但通常伴随着肺部纤维化和瘢痕组织增生。
贝母
生物碱可通过抑制肺纤维化过程中的炎症反应和氧化应激，达到抗肺纤维化的效果。
一些实验研究表明，贝母生物碱的抗纤维化作用与其调节肺组织的基质金属蛋白酶有关。
总之，贝母生物碱具有重要的药理活性，在中药制剂中应用广泛。
本文介绍了贝母生物碱的提取方法及其在抗肺纤维化方面的应用，希望能够为相关领域的研究提供一定的参考和启示。
第7卷 第3期 大理医学院学报 Vol.7 No.3 1998年7月 J OU RN AL OF DALI M EDICAL COLLEGE J ul.1998云南省产贝母中总生物碱的含量测定*⒇董光平 马晓匡⒇(大理医学院药学系 大理 671000)摘 要 目的:测定云南省产4种贝母的总生物碱含量。
方法:应用两相滴定法测定。
结果:川贝母0.11%,梭砂贝母0.09%,粗茎贝母0.26%,浙贝母0.28%。
结论:综合报道了云南产4种贝母的总碱含量,其中粗茎贝母的总碱含量测定在国内外均属首次。
关键词 贝母;两相滴定法;生物碱中图分类号 R284.1 云南省是全国贝母主产区之一,粗茎贝母为云南省主产,是藏、纳西等民族地区习用的民族药。
贝母的有效成分是生物碱和甾体皂甙类[1],其成分贝母碱(Vcrticinc),去氢贝母碱(Vcrticinonc)、西贝素(impcrialinc)以及生物碱甙具有止咳化痰、补肺润肺作用[2.3]。
对贝母化学成分、总生物碱含量分析虽有报道,但迄今未见对云南产各种贝母总碱含量的综合研究报道,特别是未见对粗茎贝母的化学及总碱含量的测定报道。
本文采用两相滴定法测定了云南产4种贝母总生物碱的含量,对考察云南产各种贝母的内在质量提供了一定依据。
药品及材料1 溴麝香草酚蓝,A.R.,上海新中化学厂。
2 无水硫酸阿托品,A.R.,中国医药公司云南省分公司分装。
3 PH5的苯二甲酸氢钾——氢氧化钠缓冲溶液。
4 贝母生药样品各5克,除去杂质、粉碎,过40目筛,70℃干燥8h,置干燥器中备用。
实验方法与结果1 0.001M溴麝香草酚蓝溶液的配制及标定:将0.624克溴麝香草酚蓝溶于10ml1mol L-1氢氧化钠溶液中,用水稀释至1L,用阿托品标定。
将阿托品在120℃下干燥3h,然后精密称取约0.25克,定溶成500ml,准确量取1ml,加入15ml氯仿及2mlPH5缓冲溶液,用溴麝香草酚蓝溶液滴定至水相呈黄色便到终点。
一种贝母生物碱的提取方法及其抗肺纤维化用途贝母（Fritillaria ussuriensis Maxim.），又称川贝母，是一种常见的中药材，具有止咳化痰、润肺降火等药理作用。
同时，贝母中富含贝母生物碱，也是其主要有效成分之一、贝母生物碱具有多种生理活性，如抗炎、抗氧化和抗肿瘤等作用，对肺纤维化也有一定的抑制作用。
提取贝母生物碱的方法通常包括以下几个步骤：1.制备贝母样品：将贝母干燥后研磨成粉末，可以选择不同粒度的粉末进行提取。
2.提取溶剂选择：选择适合提取贝母生物碱的溶剂，常用的有乙醇、醚类溶剂等。
可以通过试验确定最佳的提取溶剂。
3.提取过程：将贝母粉末与溶剂进行浸泡，在适当的温度条件下进行搅拌或超声波提取，使贝母生物碱溶解到溶剂中。
4.过滤和浓缩：将提取液经过滤纸过滤，去除固体残渣。
然后对过滤液进行蒸发浓缩，得到贝母生物碱的浓缩物。
5.结晶纯化：对浓缩物进行结晶纯化，可以通过加热、冷却或添加其他化学试剂等方法得到纯度更高的贝母生物碱。
提取得到的贝母生物碱可以应用于抗肺纤维化的治疗中。
肺纤维化是一种病理性的肺部疾病，其特征为肺组织纤维化和胶原沉积增多，导致肺功能受损。
已有研究证实，贝母生物碱具有一定的抗纤维化作用，并且能够调节肺组织的炎症反应。
研究表明，贝母生物碱能够通过多种途径发挥抗肺纤维化作用。
首先，贝母生物碱可以减轻炎症反应，抑制炎症细胞的释放。
其次，贝母生物碱可以抑制胶原蛋白的合成和分泌，减少肺间质的纤维化。
此外，贝母生物碱还能够减轻氧化应激反应，抑制肺纤维化过程中产生的自由基。
为了更好地发挥贝母生物碱的抗肺纤维化作用，可以采用口服、注射等不同给药途径。
研究人员还可以根据具体情况，合理地调整贝母生物碱的剂量和使用时间，以达到最佳的治疗效果。
需要注意的是，贝母生物碱的提取方法和抗肺纤维化的应用研究仍处于初步阶段，还需要进一步的临床实验和研究来验证其疗效和安全性。
此外，贝母生物碱作为一种天然产物，与其他药物的相互作用等问题也需要进一步研究。
超高效液相色谱-串联质谱法分析贝母药材中5种生物碱王文文;杨飞;杨中;范蕊;李芳;曹雪琴【摘要】建立了贝母药材中贝母辛、西贝母碱、贝母素乙、贝母素甲和西贝母碱苷的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法.样品经碱化甲醇-三氯甲烷提取,用Acquity UPLC BEH C18色谱柱分离,乙腈-0.1％甲酸溶液为流动相梯度洗脱,多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量.结果表明,5种生物碱在0.000 5～0.05 mg/L范围内线性良好(r＞0.999),在1.0、2.5、5.0 mg/kg加标水平下,回收率为78.6％～ 93.1％,相对标准偏差不大于8.6％.5种生物碱的检出限(LOD)为0.03 mg/kg,定量下限(LOQ)为0.1 mg/kg.该方法操作简便,灵敏度高,准确可靠,适用于贝母中上述5种生物碱的同时测定.【期刊名称】《分析测试学报》【年(卷),期】2019(038)004【总页数】5页(P461-465)【关键词】贝母;生物碱;超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)【作者】王文文;杨飞;杨中;范蕊;李芳;曹雪琴【作者单位】新疆维吾尔自治区分析测试研究院,新疆乌鲁木齐830011;新疆维吾尔自治区分析测试研究院,新疆乌鲁木齐830011;新疆维吾尔自治区分析测试研究院,新疆乌鲁木齐830011;新疆维吾尔自治区分析测试研究院,新疆乌鲁木齐830011;新疆维吾尔自治区分析测试研究院,新疆乌鲁木齐830011;新疆维吾尔自治区分析测试研究院,新疆乌鲁木齐830011;中国科学院新疆理化技术研究所,新疆乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】O657.7;R914.1贝母属于百合科(Liliaceae)贝母属(Fritillaria)多种植物的干燥鳞茎，是中国、日本和土耳其传统民间药物的原材料，临床上常用于止咳化痰。
2015版《中国药典》共收载川贝母、平贝母、浙贝母、伊贝母、湖北贝母5种贝母[1]。
《西藏科技)2020年12期(总第333期)动植物研究珍稀药用植物川贝母的研究综述*郭尚磊(西藏自治区高原生物研究所，西藏拉萨850008)摘要：珍稀药用植物川贝母cirrhosa D.Don),藏语"阿贝卡曼巴"，为百合科贝母属植物，是我国传统的名贵中药材。
具有镇咳祛痰、散结消痈、清热润肺等功效。
川贝母历来以采挖野生资源为主，过度的滥采滥挖使其资源量急剧下降，濒临灭绝。
文章对川贝母的生态学特征、含有的主要化学成分及其药理作用、栽培种植技术、组织培养技术、高海拔种植等方面进行综述，以期加强对川贝母的种质资源保护、合理利用、种质保存等方面提供一定参考。
关键词：川贝母化学成分药理作用繁育技术研究综述川贝母(Fritillaria cirrhosa D.Don),藏语“阿贝卡曼巴”，为百合科贝母属植物，是我国传统的名贵中药材。
川贝母是2015版《中华人民共和国药典(一部)》中记载的川贝母基源植物川贝母、暗紫贝母F.uni-bracteata Hsiao et K.C.Hsia、甘肃贝母F.przewalskii Maxim、梭砂贝母F.Delavayi Franch、太白贝母F. taipaiensi s P.Y.Li或瓦布贝母F.unibracteata Hsiao e t K.C.Hsia var.wabuensis(S.Y.Tang et S.C.Yue)Z.D.Liu,S. Wanget S.C.Chen之一，以干燥鳞茎入药⑴。
川贝母作为我国传统的名贵药材,具有镇咳祛痰、散结消痈、清热润肺等功效[2-3],在我国已有两千多年的临床使用历史"5〕。
被列入国务院《野生药材资源保护管理条例》的29种国家重点保护(三级保护)植物药材之一⑷。
1川贝母的生态学特征川贝母，多年生草本植物,植株高15cm~50cm,鳞茎直径1cm~1.5cm。
生于高山草甸、杜鹃灌丛、河滩草地或山坡林下，分布海拔3200m~4500m的青藏高原和川西高原地区。
贝母内生真菌研究进展许勇;张爽;程孝中;蔡标;李舜;董朝阳【摘要】对贝母中的活性成分、贝母内生真菌的多样性以及产物、贝母内生真菌发酵条件等方面的研究进展进行了综述，贝母中主要的活性成分为生物碱，其内生真菌种类具有多样性，其中可筛选出可以产生活性生物碱的菌株，这些菌株的筛选、鉴定、发酵条件探索及代谢产物的分离提纯是研究热点。
%The research advances of active ingredients in Fritilaria anhuiensis, diversity of endophytic fungus and products,fermentation condi-tions were reviewed.The main active constituent of Fritilaria anhuiensis was alkaloid.The endophytic fungi species of Fritilaria anhuiensi was va-rious,and some fungal strains of them could generate active alkaloid .The selection and identification of the fungal strains generating active alka-loid,the exploration of fermentation conditions and the separation and purification of metabolite were research hotspots.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(044)028【总页数】2页(P141-141,161)【关键词】贝母;内生真菌;活性成分;多样性;发酵条件【作者】许勇;张爽;程孝中;蔡标;李舜;董朝阳【作者单位】安徽省医学科学研究院，安徽合肥230061;安徽省医学科学研究院，安徽合肥230061;亳州学院，安徽亳州236800;安徽省医学科学研究院，安徽合肥230061;安徽省医学科学研究院，安徽合肥230061;安徽省医学科学研究院，安徽合肥230061【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9贝母(Fritilaria anhuiensis)为多年生草本植物，鳞茎可以作为药用，具有止咳化痰、清热散结等功效。
天然产物研究与开发！2018,30:1149-1154文章编号：1〇〇1'880(2018)7-1149'6一株川贝母内生真菌的分离鉴定及其产贝母类生物碱分析潘峰，苏雪梅，杨楠，蔡世美，侯凯，吴卫！四川农业大学农学院，成都611130摘要:本文利用组织匀浆法从川贝母鳞茎中分离出一株内生真菌C B Y4,采用形态学和分子生物学方法，该菌株被鉴定为采用生物碱显色沉淀反应，高效液相色谱-蒸发光检测器（HPLC-ELSD)色谱法和超高效液相色谱-质谱仪（UPLC-M S)色谱法对其产贝母生物碱特征进行分析，结果显示F C B Y4能够产生贝母类生物碱贝母辛和贝母素乙。
同时利用HPLC蒸L S D测定目标生物碱在发酵液中的产量，其分别为0. 020 6 m g/L和0. 010 4 m g/L。
本文首次报道川贝母内生真菌产生物碱特性，该研究表明内生真FC B Y4通过液体发酵能够产生贝母辛和贝母素乙，并且具有利用生物发酵技术生产贝母辛和贝母素乙的潜在利用价值。
关键词：川贝母;分离鉴定；内生真菌;生物碱中图分类号：R284. 1;Q946.91 文献标识码：A D01: 10. 16333/j. 1001 质880.2018. 7. 009Is o la tio n，Id e n tific a tio n a n d th e A n a ly s is o f F r i t i l l^r i^-t^p e A lk a lo id-p ro d u c in g o f a n E n d o p h y tic F u n g u s fr o m Fritillaria cirrhosa D.D o nPANFeng，SUXue-mei，YANGNan，CAI Shi-mei，H0U K a i，W U W ei*Agronomy College ’Sichuan Agricultural University ’Chengdu 611130 ’ChinaA b stra ct：An endophytic fungus CBY4 was isolated from the bulbus of Fritillaria cirrhosa D. Don (FC) using tissue homogenate metliod. And this strain was identified as Fusarium tricinctum based on phylogenetic analysis and molecular biology analysis. In addition，the characteristics of fritillaria-type all^aloid ( FTA) production were chromogenic reaction，high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detection ( HPLC-ELSD) andultra performance licjuid chromatography-mass spectrometry ( U PLC-M S)，followed by determining the yield of FTA usingHPLC-ELSD methiod. And the results showed that F. tricinctum CBY4 could produce two peim inine)，and whose yields were 0. 020 6 m g/L，0. 010 4 m g/L in the culture filtrate，respectivvly that thie characteristic o f fritillaria-type all^aloid production of endophytic fungus from FC. And the worl^ showed that endophytic fungal F .tricinctum CBY4 produced peimisine and peiminine，and has the potential value to p and peiminine by fermentation techniques.K ey words ：Fritilldrici cirrhosa D. D on；isolation and identification；endophytic fungi ；all^aloid川贝母（F m r a cirho*D.Don.)为百合科贝 母属植物，又称为卷叶贝母，历年药典均将其收录为 川贝母药材的基源种之一。
其以鳞茎入药，主要功 效为清热润肺，化痰止咳。
因其生长年限长，产量相 对较低，对环境要求苛刻，多生长在海拔3 000 ~ 4 000 m的川西高原，加上市场需求的快速增长，加 重了川贝母资源濒危程度，已成为我国三级保护物 种[1，2]。
贝母鳞茎的主要活性成分是生物碱，而川收稿日期"2017-12质9 接受日期:2018质3-2基金项目：高等学校博士学科点专项(20115103110009)!通<作者Tel:86质8质6290870;E-mai1:ewuwei@ 贝母中已经分离并确定结构的生物碱主要有西贝 碱、贝母辛、贝母素甲、贝母素乙、云贝酮、异梭砂贝 母碱等贝母类生物碱[3]。
如果寻找到可以以其他 技术或者途径生产贝母类生物碱的方法，既能拓展 贝母生物碱的来源，也可减少从川贝母等药材获取 相应生物碱的需求。
植物内生真菌（Endophytic fungi)指存在于健康 植株的组织器官中，对宿主不形成明显侵染的真菌。
宿主植物特殊的内部物理化学环境能够一定程度改 变真菌的代谢产物[4]。
近年来，对葱、蕨类植物、杨 树、龙血树，罗汉松，红豆杉等许多经济、药用植物内 生真菌的研究发现，内生真菌能产生与宿主相同或1150天然产物研究与开发Vo1.30相似的具有生理活性的代谢产物[5]。
例如从红豆 杉内生真菌发现可以产紫杉醇的菌株[)]，从蛇足石 杉内生真菌中发现可产石杉碱甲的菌株[*]。
这对 于一些濒危的药用植物来说，通过筛选可以产生与 其宿主相同或相似的活性成分的内生真菌，并通过 人工改造达到高效地生产生物活性成分，无疑对这 些药用植物的野生资源的保护和其微生物资源的开 发利用有着重要的理论和现实意义。
本课题组曾从渐危药用植物川贝母分离了多株 内生真菌，研究发现不同菌株具有不同的研究潜力，其中菌株CBY11表现了良好的抗氧化活性[8]，而菌 株CBY4可以产生生物碱，此外部分菌株的代谢产 物还有良好的抑制酪氨酸酶活性[&]。
更值得的注 意的是本课题组曾从川贝母的近源植物瓦布贝母的 内生真菌中获得可以产贝母类生物碱的菌株，如 WBS007[10]。
这提示从川贝母内生真菌中获取与宿 主植物相同或相似的活性成分具有现实可行性。
为 此，本文对此株产生物碱内生真菌进行了鉴定，然后 对其产生物碱特性，尤其是贝母类生物碱特性进行 了分析，以期获得产贝母类生物碱内生真菌。
1材料和方法1.1植物材料植物材料为成都恩威集团新都桥川贝母基地采 集的3年生川贝母健康鳞茎，采集的植物材料由四 川农业大学农学院吴卫教授鉴定为川贝母（laria cirrhosa B.Boo.)。
1?内生真菌分离川贝母内生真菌的分离步骤参考文献[$]。
消 毒后的贝母鳞茎采用“三印法”（将材料在培养基上 按正-反-正的顺序印三次）置于PD A培养基平板上 培养，于28 °C培养箱中暗培养，3 ~ 4天后观察有无 菌落产生，若发现皿中无菌落生成则证明该材料表 面消毒彻底。
最后将所得菌株转到含P D A的斜面 试管中用石错封存，置4 C冰箱中保存菌种。
1.3形态学特征用打孔器取直径为6 33的菌饼接种到新的 PDA培养基中心，28 C培养7天，挑取少量菌丝，用 乳酸棉兰染色后做成临时装片，在光学显微镜(Model BX51，Olympus，日本）观察菌丝体、孢子、孢子梗等形态特征。
根据《真菌鉴定手册》[11]进行初 步 定。
1?分子生物学鉴定分子生物学鉴定参考文献[8]进行。
对扩增出 来的PCR产物进行切胶纯化后送交成都擎科梓熙 生物技术有限公司（北京，中国$进行测序，将所测 序列提交到NCBI GeoBaok数据库上进行BLAST比对，根据比对结果选取相似度最大且具有代表性菌 株和保藏的标准菌株序列利用MEGA5. 10软件采 用 oeighbor-joioiog#NJ)法进行聚类分析。
Bootstrap 检测值(50%，1 000次重复$。
1 ?内生真菌发酵及供试液及标准液的制备取川贝母内生真菌菌种，挑取少量菌丝，接入 P D A培养基于28 C活化培养4天。
取直径为6 mm 的活化菌块接种到马铃薯葡萄糖培养液P B B中(100 mL/250 mL)，每瓶接种5个菌块，置于28 C 恒温摇床中130 ip m培养4天作为种子液。
然后转 接到PBB液体培养基（150 mIV250 mL)扩大发酵7 天。
发酵完毕，收集培养物过滤后，用浓氨水将发酵 液调pH9 ~11，加二氯甲烷萃取2 ]3次，二氯甲烷 用量为发酵液体积的四分之一，收集二氯甲烷层，水 浴锅中用蒸发皿挥干，残渣用2 m L甲醇复容后用0. 22 %m有机滤膜过滤得所需制备液。
配置贝母辛，西贝母碱和贝母素乙标准品溶液，浓度约为1m;mL，然后混合稀释到合适浓度。
1.菌株筛选及目标成分分析1.6.1 生物碱沉淀显色实验生物碱显色反应操作如下:碘化铋钾试剂、碘- 碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、改良碘化铋钾试剂，其 均参照《中国药典》2010版一部配制。
以贝母辛和 贝母素乙标准品溶液作为阳性对照品。
取样品制备 液和阳性对照品各约0.2 m L分别于1.5 m L离心管 中，每个样品重复4次，分别单独滴加1 ~2滴以下试剂:碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试 剂、改良碘化铋钾试剂，室温下轻轻震荡后观察每一 种试剂单独加入样品后颜色变化，用空培养基为阴 性对照，阳性对照液为阳性对照。
若产生桔黄色沉 淀，则为阳性反应;若产生青褐色浑浊，即为阴性反 应。
1.6.2 HPLC-ELSB分析所用仪器为:安捷伦1260 HPLC系统（Agilent，USA)并串联Alltech ELSB2000ES旋转蒸发光检测 器（Alltech，USA)，并且配备一台SY正01/24空气压 缩机(Shanghai Sheog-yao A ir Compressor Co.，Ltd.，上海，中国）。
