【CN110129364A】低温诱导位点特异性重组删除的无标记转化方法【专利】

专利名称：一种蓖麻可低温诱导启动子PDAT1-2P5及其克隆和应用
专利类型：发明专利
发明人：狄建军,黄凤兰,陈永胜,田迅,张继星,李国瑞,何智彪,孙佳欣,于丽丽,徐雅楠,赵华洋,罗蕊,赵永
申请号：CN202010675354.1
申请日：20200714
公开号：CN111778250A
公开日：
20201016
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及基因工程与分子生物学技术领域，具体公开了一种蓖麻可低温诱导启动子PDAT1‑2P5及其克隆和应用。

本发明蓖麻可低温诱导启动子PDAT1‑2P5其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。

上述蓖麻可低温诱导启动子PDAT1‑2P5可在低温诱导下驱动外源基因在拟南芥中特异表达。

本发明获得的新的蓖麻可低温诱导启动子PDAT1‑2P5可以驱动外源基因在低温条件下特异表达，其克隆鉴定将对植物品质改良或以植物作为“生物反应器”异源合成药物蛋白等具有重要的应用价值。

申请人：内蒙古民族大学
地址：028000 内蒙古自治区通辽市霍林河大街22号
国籍：CN
代理机构：北京中北知识产权代理有限公司
代理人：王皎
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611085754.7(22)申请日 2016.12.01(71)申请人 中国科学院华南植物园地址 510000 广东省广州市天河区兴科路723号华南植物园(72)发明人 周瀛　杨子银　曾兰亭　蒋跃明　段学武　(74)专利代理机构 广州市深研专利事务所44229代理人 姜若天(51)Int.Cl.C12N 9/02(2006.01)C12N 15/53(2006.01)C12N 15/82(2006.01)A01H 5/00(2006.01)(54)发明名称一种番茄抗冷害基因及应用(57)摘要本发明公开了一种番茄抗冷害基因及应用。

本发明通过病毒诱导的基因沉默 (V i r u sinduced gene silencing ,VIGS) 技术发现了一种新的番茄抗冷害相关基因SlSLD，该基因的沉默可以导致番茄植株的耐低温能力明显降低。

对该基因编码的氨基酸序列分析证明该基因所编码的蛋白是一种△8-鞘磷脂脱氢酶，与神经鞘脂质代谢相关，该酶在植物抵抗低温胁迫的反应中起重要的作用。

本研究提供了这个基因的核酸序列，及其氨基酸序列，同时还涉及该基因在番茄耐寒育种中的用途。

SlSLD基因可以应用于番茄的抗冻育种，提高番茄优良品种的适应性，扩大其种植范围，促进其稳产和高产。

权利要求书1页 说明书5页序列表3页 附图1页CN 106754769 A 2017.05.31C N 106754769A1.一种番茄△8-鞘磷脂脱氢酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.编码权利要求1所述番茄△8-鞘磷脂脱氢酶基因的番茄△8-鞘磷脂脱氢酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.权利要求1所述番茄△8-鞘磷脂脱氢酶基因在耐寒育种中的应用。

权　利　要　求　书1/1页CN 106754769 A一种番茄抗冷害基因及应用技术领域[0001]本发明属于植物生物技术领域，具体地说，涉及一种番茄抗冷害基因及应用。

专利名称：低温诱导位点特异性重组删除的无标记转化方法专利类型：发明专利
发明人：刘香利,王梅,赵惠贤
申请号：CN201910231220.8
申请日：20190326
公开号：CN110129364A
公开日：
20190816
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种低温诱导位点特异性重组删除的无标记转化方法，该方法首先构建低温诱导WCS120启动子驱动的ParA/MRS位点特异性重组系统植物表达载体；通过农杆菌转化法转化小麦，筛选获得转基因植株；然后进行转基因后代标记基因删除检测和抗旱性检测，建立小麦无选择标记基因转化体系，获得无选择标记基因转化植株。

对小麦基因工程遗传改良有非常重要意义。

申请人：西北农林科技大学
地址：712100 陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号
国籍：CN
代理机构：西安恒泰知识产权代理事务所
代理人：李郑建
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(10)申请公布号 CN 102533722 A(43)申请公布日 2012.07.04C N 102533722 A*CN102533722A*(21)申请号 201010603657.9(22)申请日 2010.12.24C12N 15/09(2006.01)C12N 5/10(2006.01)(71)申请人北京义翘神州生物技术有限公司地址100176 北京市经济技术开发区中和街14号B-203(72)发明人马宁宁 张延静 潘范彬 王文志谢良志(54)发明名称一种通过温度突变提高哺乳动物细胞重组蛋白瞬时表达的方法(57)摘要一种通过改变转染前后细胞所处环境的温度来提高转染效率进而提高重组蛋白瞬时表达的办法，能使瞬时转染重组蛋白的表达量提高37％～56％。

(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书7页 附图6页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 6 页1/1页1.一种通过温度突变增强重组蛋白在哺乳动物细胞中瞬时表达的方法，其特征在于：(1)温度突变发生在将外源DNA 加入细胞培养液之前，升高细胞培养温度，持续至外源DNA 加入细胞培养液后一段时间，再恢复至升高前水平；或(2)温度突变发生在将外源DNA 加入细胞培养液之前，升高细胞培养温度，持续一段时间后，再恢复至升高前水平，然后将外源DNA 加入细胞培养液；或(3)温度突变发生在将外源DNA 加入细胞培养液之后，升高细胞培养温度，持续一段时间后，再恢复至升高前水平。

2.权利要求1中所述的方法，其中温度突变是从35.0～38.0℃，升高到38.5～42.0℃，再恢复至35.0～38.0℃。

3.权利要求1中所述的方法，其中温度突变开始时间发生在外源DNA 加入细胞培养液之前的0-24小时，或之后的0-24小时。

4.权利要求1中所述的方法，其中温度突变持续时间为0-24小时。

5.权利要求1中所述的方法，其中哺乳动物细胞为中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人胚肾细胞(HEK293)、COS 、BHK21、SP2/0或NIH/3T3。