第二章 高效毛细管电泳
- 格式:ppt
- 大小:8.09 MB
- 文档页数:133


毛细管电泳地基本理论
毛细管电泳基本原理
分离地原因:电泳迁移,电渗迁移
电泳迁移:在高压电场下,带电离子向相反地方向移动.
电渗迁移:当毛细管内充满缓冲溶液时,毛细管壁上地硅羟基发生解离,生成氢离子溶解在溶液中,这样就使毛细管壁带上负电荷与溶液形成双电层,在毛细管地两端加上直流电场后,带正电地溶液就会整体地向负极端移动,这就形成了电渗流.
在操作缓冲溶液中,带电粒子地运动速度等于电泳速度和电渗速度地矢量和,电渗速度一般大于电泳速度,因此即使是阴离子也会从阳极端流向阴极端.
加大缓冲溶液地酸度、在缓冲溶液中加入有机试剂都会减少硅羟基地解离,减小电渗流.
分离模式
毛细管电泳地分离模式有以下几种.
<1)毛细管区带电泳
<2)毛细管凝胶电泳
<3)毛细管等速电泳
<4)毛细管等电聚焦电泳
<5)胶束电动毛细管色谱
<6)毛细管电色谱
在电场作用下,溶液中地带电粒子作定向移动地现象
电渗:在电场作用下,毛细管或固相多孔物质内液体沿固体表面移动地现象.毛细管电泳原理及分析策略
一、毛细管电泳地基本原理
电泳是指电解质中带电粒子在电场力作用下,以不同地速度向电荷相反方向迁移地现象.
高效毛细管电泳
毛细管
HPCE实际上包含电泳、色谱及其相互交叉地内容,是分析科学中继高效液相色谱之后地又一重大进展,它使得分离分析科学从微升级水平进入到纳升级水平,并使得细胞地分析,乃至单分子地分析成为可能.尤其是对样品珍贵,取样极少地生物大分子,毛细管电泳具有绝对地优势.其突出特点是:
<1)所需样品量少;
<2)分析速度快,分离效率高,分辨率高,灵敏度高; <3)分离模式多,开发分析方法容易;
<4)溶剂用量少,经济、环保;
<5)应用范围极广.
毛细管电泳技术可用于分离分析多种组分,如核酸/核苷酸、蛋白质/多肽/氨基酸、糖类/糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小地生物活性分子等地快速分析,以及DNA序列分析和DNA合成中产物纯度测定等,还可用于碱性药物分子及其代谢产物、无机及有机离子/有机酸、手性化合物、单细胞分析、药物与细胞地相互作用和病毒地分析.
高效毛细管电泳技术简介
高效毛细管电泳又称高效毛细管区带电泳(又称毛细管区带电泳),它的分离根据是电场中毛细管内的溶质具有不同的迁移速率。高效毛细管电泳(high
performance capillary electrophoresis, HPCE)是在传统的电泳基础上结合高效液相色谱技术发展起来的一种高效分离分析技术,由于其具有无与伦比的高效.准确和高灵敏性,这项技术广泛运用于有机离子.无机离子,氨基酸,多肽,蛋白质,核酸分子,对映异构体和临床医学分析,同时它在生物工程,药物,环保,食品检验等领域也显示了极其重要的运用前景。
毛细管电泳仪的结构和特点
毛细管电泳仪主要由5个部分组成,毛细管柱.进样系统,高压系统,检测系统和数据采集系统组成。
毛细管电泳的特点
(1) 电泳在细径(25-75um,内径)弹性石英毛细管中进行,其有限长度一般为50cm.
(2) 高电压(10-30KV)加在毛细管两端以产生高电场强度(100-500V/cm).
(3) 分析时间短,数分钟至几十分钟可完成一次分析。
(4) 多种分离模式,应用范围广(从生物大分子至小分子。离子) (5) 样品需求量少,仪器自动化高。
现阶段取得的主要进展
P/ACE MDQ主要用于蛋白质的分析:
毛细管等点聚焦 肽蛋白和糖蛋白的鉴别分析
纯度检测 免疫毛细管电泳检测
SDS-分子量测定 肽谱分析
南医大药物分析总论部分
药物分析(Pharmaceutical Analysis)总结
绪论
药物分析(Pharmaceutical Analysis)药物分析是一门研究和发展药物质量规律和质量控制的学科。运用分析测试手段(化学、物理化学或生物化学),发展药物的分析方法;研究、检验化学结构已经明确的合成药物或天然药物及其制剂的质量控制(quality control,QC)方法,也研究有代表性的中药制剂和生化药物及其制剂的质量控制方法。
药物分析常用的分析方法:
经典的化学分析:容量分析法(酸碱滴定法,氧化还原滴定法,络合滴定法,沉淀滴定法,非水溶液滴定法),重量分析法。
现代仪器分析技术:光谱分析法(紫外-可见分光光度法UV,红外分光光度法IR,原子吸收分光光度法AAS,原子发射分光光度法AES,荧光分析法),色谱分析法(高效液相色谱法HPLC,高效液相色谱-质谱HPLC-MS,气相色谱GC,气相色谱-质谱GC-MS,薄层色谱法TLC),电化学分析法(电导法,电位法,电解法,伏安法,极谱法)。
药物分析新技术:质谱法,高效毛细管电泳法HPCE,联用技术(气-质联用GC—MS,液-质联用HPLC-MS,傅立叶变换-红外分光光度法FT- IR,毛细管电泳-质谱联用CE-MS,等离子-质谱联用ICP-MS)
质量管理规范:
GMP 药品生产质量管理规范Good practices in the
manufacture and quality control of drugs
GLP 药品非临床研究质量管理规范Good laboratory practice
GSP 药品经营质量管理规范Good supply practice
GCP 药品临床试验质量管理规范Good clinical practice
GAP 中药材生产质量管理规范Good agriculture practice 第一章质量研究与药典
毛细管电泳的基本原理及应用
毛细管电泳的基本原理及应用
摘要:毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等。可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等,比HPLC分析高效、快速、微量。
关键词:毛细管电泳 原理 分离模式 应用
1概述
毛细管电泳 (Caillary Electrophoresis)简称 CE,是一类以毛细管为分离通道,以高压直流场为驱动力的新型液相分离分析技术。CE的历史可以追溯到
1967年瑞典Hjerten最先提出在直径为3mm的毛细管中做自由溶液的区带电泳(Capillary Zone Electro-phoresis,CZE)。但他没有完全克服传统电泳的弊端[1]。现在所说的毛细管电泳(CE)是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出,他们使用了75mm的毛细管柱,用荧光检测器对多种组分实现了分离。1984年Terabe将胶束引入毛细管电泳,开创了毛细管电泳的重要分支: 胶束电动毛细管色谱(MEKC)。1987年Hjerten等把传统的等电聚焦过程转移到毛细管内进行。同年,Cohen 发表了毛细管凝胶电泳的工作。近年来,将液相色谱的固定相引入毛细管电泳中,又发展了电色谱,扩大了电泳的应用范围。
毛细管电泳和高效液相色谱(HPLC)一样,同是液相分离技术,因此在很大程度上HPCE与HPLC可以互为补充,但是无论从效率、速度、样品用量和成本来说,毛细管电泳都显示了一定的优势毛细管电泳(C E) 除了比其它色谱分离分析方法具有效率更高、速度更快、样品和试剂耗量更少、应用面同样广泛等优点外,其仪器结构也比高效液相色谱(HPLC)简单。 C E只需高压直流电源、 进样装置、 毛细管和检测器。