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脑损伤后神经细胞凋亡变化及黄体酮保护作用的研究目的观察脑损伤后神经细胞凋亡变化及黄体酮的保护作用。
方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤组和黄体酮治疗组，大鼠脑损伤模型制作是利用改良的Feeney自由落体损伤装置。
各组于伤后24、48、72 h取材。
用免疫组织化学法观察大鼠皮质和海马CA1区半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达水平变化。
结果脑损伤组的Caspase-3阳性细胞数在皮质和海马CA1区较假手术组显著增加，黄体酮治疗组与脑损伤组比较，Caspase-3阳性细胞数明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论黄体酮抑制脑损伤后Caspase-3的表达可能是黄体酮脑保护作用机制之一。
标签：黄体酮；脑损伤；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3脑损伤是严重危害人类健康和威胁生命的疾病之一。
脑损伤后的继发性损伤以往认为主要是神经细胞水肿和坏死，近年发现创伤性脑损伤后存在10%～50%的细胞凋亡，而且主要存在于皮质和海马等部位。
半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）处于细胞凋亡过程中的关键地位，是细胞凋亡过程的最终执行者[1]，在脑损伤后各种病理因素作用下，Caspase-3被激活，通过作用于底物引起细胞凋亡。
对脑损伤后的繼发性损伤，目前尚无有效的治疗药物。
近年研究发现，黄体酮（progesterone，PROG）作为一种神经甾体激素，在体内、体外等多种实验中已经证实具有脑损伤保护作用[2]，但PROG对脑损伤后细胞凋亡的影响存在争议。
本实验通过建立Feeney自由落体大鼠脑损伤模型，利用免疫组织化学技术，探讨PROG对大鼠脑损伤后Caspase-3表达的影响，以阐明PROG对脑损伤的保护作用。
1 材料与方法1.1 实验材料及仪器恒冷箱组织切片机，CM1900型，德国Leica公司；Olympus显微摄影装置，PM-10AD型，日本Olympus公司。
PROG试剂，购自Sigma公司；Caspase-3一抗试剂，购自武汉博士德公司。
两种给药途径致痫大鼠海马神经元超微结构损伤及caspase-3的表达特征孙建英;关新华;张秀清;迟兆富【期刊名称】《神经解剖学杂志》【年(卷),期】2007(23)6【摘要】为了观察两种给药途径致痫大鼠海马神经元超微结构的损伤及caspase-3的表达特征,本研究分别采用海人酸腹膜腔注射(A组)和尾静脉注射(B组)诱发大鼠癫痫持续状态(SE)。
分别于SE终止后3、6、24、48和72h取海马,电镜观察神经元超微结构的变化,免疫组化方法检测caspase-3的表达。
结果显示:两组大鼠均在SE后3h出现线粒体损伤,细胞核的改变出现于SE后24h。
A组致痫的潜伏期为97min±11min,神经元以凋亡为主;B组为48min±13min,神经元以坏死为主。
SE后6～24h,两组大鼠海马内caspase-3的表达由胞浆向胞核逐渐移位,且均在SE后6h明显增高,24h达顶峰;A组高表达持续至72h,B组在48h显著降低。
上述结果提示,线粒体的损伤出现于SE的早期,且可能是神经元损伤的关键环节;致痫方法不同,神经元的死亡形式也不同;而caspase-3的激活是神经元凋亡和坏死的共同通路。
【总页数】6页(P565-570)【关键词】海人酸;癫痫持续状态;神经元超微结构;caspase-3;大鼠【作者】孙建英;关新华;张秀清;迟兆富【作者单位】山东省千佛山医院保健科;山东大学齐鲁医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】Q255【相关文献】1.不同潜伏期致痫大鼠海马神经元线粒体损伤及Fas、Bax、caspase-3的表达 [J], 孙建英;关新华;张秀清;迟兆富2.两种不同给药途径诱发大鼠海马神经元线粒体损伤及Fas、Bax、Caspase-3表达 [J], 孙建英;汤树海;迟兆富;吴伟;刘学伍3.海人酸致痫大鼠海马CA_3区神经元线粒体超微结构损伤及caspase-3的表达变化 [J], 孙建英;迟兆富;吴伟;刘学伍4.海人酸致痫大鼠海马CA3区神经元线粒体与细胞核损伤及caspase-3的表达变化 [J], 孙建英;迟兆富;吴伟;刘学伍;赵秀鹤5.海人酸致痫大鼠海马CA_3区神经元线粒体损伤及caspase-3的表达 [J], 汤树海;孙建英;潘晓军;张丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
双标染色技术在大鼠脑创伤后caspase-3与神经细胞凋亡研究中的应用目的探讨末端标记（TUNEL）法与caspase-3免疫组织化学法双标染色技术在研究大鼠神经细胞凋亡机制中应用的优越性。
方法雄性Wistar大鼠12只随机分成两组，用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤。
切片先按照试剂盒提供的方法行TUNEL染色显示凋亡，再按caspase-3免疫组化试剂盒检测方法继续染色。
结果双标染色显色满意，大鼠海马区大部分TUNEL阳性细胞同时也表现caspase-3阳性。
结论caspase-3与TUNEL双标染色能更好的反映出大鼠脑创伤后caspase-3与凋亡之间的关系，体现了双标染色技术的优越性。
[Abstract] Objective To explore the advantage of double staining TUNEL in situ and immunohistochemical technique of casepase-3 expression following traumatic brain injury(TBI) in rats.Methods 12 male Wistar rats were randomly divided into 2 groups. According to Marmarou, severe closed brain injury was made. After that, TUNEL in situ was applied of the apoptosis cell in hippocampus region. Then immunohistochemical staining with Caspase-3 were performed of hippocampus region. Results Double staining was well showed that TUNEL positive cell appeared in hippocampus and Caspase-3 appeared in the same cell. Conclusion TUNEL and Caspase-3 double staining better reflect the relationship between caspase-3 and apoptosis following TBI in rats. Double staining showes the advantage in the relation of apoptosis and Caspase-3.[Key words] Rats; Immunohistochemistry; Double staining; Apoptosis双标染色技术目前在免疫组织化学已经普遍采用[1，2]，但双标染色技术要求相对较高，切片染色成功率低，尤其对初学者由于细节方面的忽视，难以获得满意的染色结果。
两种不同给药途径诱发大鼠海马神经元线粒体损伤及Fas、Bax、Caspase-3表达孙建英;汤树海;迟兆富;吴伟;刘学伍【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2006(010)038【摘要】背景:癫痫持续状态可导致神经元损伤.目的:观察两种不同给药途径诱发大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构损伤及Fas、Bax、Caspase-3的表达变化,为减轻癫痫后神经元损伤提供理论依据.设计:随机对照动物实验.单位:山东大学齐鲁医院神经内科和麻醉科.材料:实验于2005-03/2005-07在山东省医学科学院病理实验室完成.选择成年雄性SD大鼠150只,体质量260～300 g(由山东大学实验动物中心提供(SCXK20030004),室温,自由进水、进食.方法:选择成年雄性SD大鼠150只,随机数字表法分为海人酸腹腔注射组和尾静脉注射组.分别采用海人酸腹腔注射和尾静脉注射诱发不同潜伏期的大鼠癫痫持续状态.每组再分5个亚组,分别为癫痫持续状态后3,6,24,48及72 h组.每小组取12只诱发成功的大鼠,于癫痫持续状态终止后不同时点取海马.2只用于电镜检查,5只用于Fas和Bax的RT-PCR 检测,5只用于Caspase-3的免疫组化.另取12只鼠作为正常对照,不做任何处理.对照组大鼠于相应癫痫持续状态后24 h点取材,具体分配同各亚组.电镜观察线粒体的超微结构,半定量RT-PCR检测Fas、Bax的mRNA水平,免疫组化检测Caspase-3蛋白的表达.主要观察指标:①超薄切片透射电镜观察结果.②RT-PCR检测结果.③免疫组化检测结果.结果:132只SD大鼠进入结果分折.①电镜观察线粒体的超微结构:海人酸腹腔注射组线粒体肿胀,神经元呈凋亡征;尾静脉注射组线粒体肿胀且伴膜的崩解,神经元呈坏死表现.②对照组及尾静脉注射组未检测到Fas及BaxmRNA;海人酸腹腔注射组Fas及Bax的mRNA表达均于癫痫持续状态后6 h出现,24 h增加,48 h达高峰,并持续至72 h.③两组大鼠均在癫痫持续状态后6 h出现Caspase-3表达增高(10.27±0.34,15.21±0.34;P＜0.001),24 h达顶峰(25.36±0.47,28.23±0.47;P＜0.001);海人酸腹腔注射组高表达持续至72 h,尾静脉注射组在48 h点急剧降低.结论:两种不同的诱发方式导致了大鼠不同程度的线粒体损伤和Fas、Bax及Caspase-3在不同水平的表达,进而决定了神经元死亡的分子机制.%BACKGROUND: Status epilepticus can result in neuronal injury.OBJECTIVE: To observe the mitochondrial ultrastructural damage and the changes of Fas, Bax and Caspase-3 expressions in hippocampal CA3 neurons of rats of different kindling, so as to provide theoretical evidence for the neuronal injury after epilepsy.DESIGN: A randomized c ntrol animal experiment.SETTINGS: Department of Neurology and Department of Anesthesiology,Qilu Hospital of ShandongUniversity.MATERIALS: The experiments were carried out in the pathological laboratory of Shandong Academy of Medical Sciences between March and July2005. Totally 150 adult male SD rats of 260-300 g were provided by the experimental animal center of Shandong University (SCXK20030004), they were raised at room temperature and were free to the access of food and water.METHODS: The adult male Sprague Dawley (SD) rats were divided into intraperitoneal injection of kainic acid group and caudal venous injection of kainic acid group respectively ac cording to the method of random number table, and the rats were administrated by kainic acid injected intraperitoneally (12 mg/kg) and via caudal vein (10 mg/kg) respectively. Each group was divided into 5 subgroups, which were3, 6, 24, 48 and 72 hours after status epilepticus groups respectively. Twelve successfully induced rats were selected from each subgroup, hippocampi were removed at different time points after the termination of status epilepticus, 2 were used for examination under electron microscope, 5 for the reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) detection of Fas and Bax, and 5 for the immunohistochemical assay of Caspase-3. Another 12 rats were used as normal controls without any treatment. The materials were taken at24 hours after corresponding status epilepticus in the control group, and the specific distributions were the same as those in the subgroups. The mitochondrial structure was observed under electron microscope, the levels of Fas and Bax mRNA were detected with semi-quantitative RT-PCR, and the expression of Caspase-3 protein was determined with the immunohistochemical assay.MAIN OUTCOME MEASURES: ① Results of ultrathin section under transmission electron mcroscope; ② RT-PCR results; ③ Immunohistochemical results.RESULTS: Totally 132 rats were involved in the analysis of results. ①Mitochondrial structure under electron microscope: In the intraperitoneal injection group, the mitochondria swelled, and the neurons showed characters of apoptosis. In the caudal venous injection group, the mitochondria swelled, and accompanied by the membranous collapse, and the neurons manifested the necrosis. ② No expression of Fas and Bax was detected in the control group and caudal venous injection. In the intraperitoneal injection group, Fas expression appeared at 6 hours after status epilepticus, increased at 24 hours, reac hed the peak value at 48 hours, and lasted till 72 hours. ③ TheCaspase-3 expressions began to increase 6 hours after status epilepticus in both the intraperitoneal injection group and caudal venous injection group(10.27±0.34, 15.21±0.34; P ＜ 0.001), and reached the peak values at 24 hours (25.36±0.47, 28.23±0.47; P ＜ 0.001); The higher expression of Caspase-3 lasted till 72 hours in the intraperitoneal injection group, but sharply decreased in the caudal venous injection group.CONCLUSION: Two different methods of administration result in different severity of mitochondrial damage and different expressions of Fas, Bax and Caspase-3, which further determines the molecular mechanisms of neuronal death.【总页数】3页(P181-183)【作者】孙建英;汤树海;迟兆富;吴伟;刘学伍【作者单位】山东大学齐鲁医院,神经内科,山东省,济南市,250012;山东大学齐鲁医院,麻醉科,山东省,济南市,250012;山东大学齐鲁医院,神经内科,山东省,济南市,250012;山东大学齐鲁医院,神经内科,山东省,济南市,250012;山东大学齐鲁医院,神经内科,山东省,济南市,250012【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.脑通汤对缺氧／复氧大鼠海马神经元Bcl－2、Bax和Caspase－3表达的影响[J], 何筑;况时祥;张树森;邹家莉;杨燕;崔冬冰2.锂-匹鲁卡品致癫痫状态大鼠海马神经元线粒体损伤及caspase-3的表达 [J],汤树海;潘晓军;张丽3.不同潜伏期致痫大鼠海马神经元线粒体损伤及Fas、Bax、caspase-3的表达 [J], 孙建英;关新华;张秀清;迟兆富4.不同潜伏期致痫大鼠海马神经元线粒体损伤及Fas和Bax表达 [J], 孙建英;迟兆富;吴伟;刘学伍;赵秀鹤5.海人酸致痫大鼠海马CA_3区神经元线粒体损伤及caspase-3的表达 [J], 汤树海;孙建英;潘晓军;张丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脊髓损伤大鼠脊髓及泌尿生殖道caspase-3和nNOS表达的改变王文婷;周谋望;陈庆山;杨立元;杨磊;黄红拾【期刊名称】《中国康复医学杂志》【年(卷),期】2009(024)009【摘要】目的:观察SD大鼠脊髓损伤后脊髓及泌尿生殖道凋亡促进因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和一氧化氮合成酶(nNOS)表达的改变.方法:成年雄性SD大鼠16只,随机分为对照组(n=8)和脊髓损伤组(n=8);脊髓损伤组采用改良的重物坠落法(Allen法)制作大鼠T9-T10脊髓节段不完全损伤模型.分别行caspase-3免疫组化及nNOS免疫组化染色,用半定量方法评价正常及脊髓损伤大鼠脊髓、膀胱壁及阴茎组织表达caspase-3和nNOS的改变情况.结果:脊髓损伤后大鼠脊髓内nNOS和caspase-3均表达增强(P＜0.001),而膀胱壁及阴茎组织内caspase-3表达增强(P＜0.001),nNOS表达减弱(P＜0.001).结论:脊髓损伤大鼠脊髓及泌尿生殖道表达caspase-3和nNOS发生了改变,但并非同步,机制各有不同.【总页数】4页(P773-775,彩插4)【作者】王文婷;周谋望;陈庆山;杨立元;杨磊;黄红拾【作者单位】北京大学第三医院康复医学中心,100191;北京大学第三医院康复医学中心,100191;北京大学医学部解剖与组胚教研室;北京大学医学部解剖与组胚教研室;北京大学医学部解剖与组胚教研室;北京大学第三医院康复医学中心,100191【正文语种】中文【中图分类】R651.2【相关文献】1.大鼠创伤性脊髓损伤后Caspase-3的表达及其意义 [J], 陈丽丽2.电针脊髓损伤模型大鼠"足三里"与"伏兔"穴神经细胞凋亡因子Caspase-3的表达[J], 魏卫兵; 周宾宾; 张鸿升; 杨宇; 崔俊武; 李振兴3.夹脊电针联合甲基强的松龙对急性脊髓损伤模型大鼠NMDA-NR1、 Calpain-2和cleaved caspase-3表达影响的实验研究 [J], 付豪; 李诺; 李晓宁4.电针脊髓损伤模型大鼠“足三里”与“伏兔”穴神经细胞凋亡因子Caspase-3的表达 [J], 魏卫兵; 周宾宾; 张鸿升; 杨宇; 崔俊武; 李振兴5.三七总皂苷对脊髓损伤大鼠神经元凋亡及Nrf2、caspase-3表达的影响 [J], 谢慕可;许念茹;黄贤胜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠脑缺血再灌注损伤后Survivin和Caspase-3表达与细胞凋亡的关系范红杰;王宗立;何志义【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2010(0)20【摘要】目的探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后Survivin和Caspase-3表达与细胞凋亡的关系.方法将42只成年雄性SD大鼠,体重250～280 g,随机分成对照组(n=3)、假手术组(n=3)和缺血再灌注6 h、12 h、1 d、2 d、3 d和6 d组(n=6).采用栓线法制备大脑中动脉缺血90 min再灌注模型,应用免疫组织化学方法观察Survivin和Caspase-3表达,TUNEL方法检测细胞凋亡.结果对照组及假手术组未见Survivin和Caspase-3表达,仅见凋亡细胞0～2个,缺血再灌注6 h,显示在缺血侧皮层、皮层下纹状体和海马区Survivin和Caspase-3表达增多,凋亡细胞增多,12 h～1 d三者均持续增多,2 d Caspase-3表达及凋亡细胞达到高峰,3～6 d呈下降趋势,而Sur-vivin的表达3 d达高峰,持续至6d有下降趋势(P<0.05).结论大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后诱发Survivin和Caspase-3异常表达.并与细胞凋亡有密切联系.【总页数】5页(P3065-3068,3073)【作者】范红杰;王宗立;何志义【作者单位】中国医科大学附属盛京医院,神经内科,辽宁,沈阳,110004;中国医科大学附属盛京医院,神经内科,辽宁,沈阳,110004;中国医科大学附属第一医院,神经内科,辽宁,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】R-332;Q255【相关文献】1.重组人生长激素对大鼠脑缺血/再灌注损伤后缺血侧大脑皮质Survivin和Caspase-3表达的影响 [J], 郭耀强;白宏英;曾志磊;刘海涛;方李鸿2.大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡与Survivin和IGF-1表达的关系 [J], 刘广义;高淑杰3.奥扎格雷钠减低大鼠急性全脑缺血再灌注损伤后Caspase-3表达及细胞凋亡的研究 [J], 赵晴;于挺敏;邬英全;张葳;王冬华4.补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡和Caspase-3基因表达的影响 [J], 任岩;曹余恒;李杰萍5.腺苷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后Caspase-3的表达及细胞凋亡的影响 [J], 庞艳利; 许二妮; 尉娜; 殷闯; 谭军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
