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快速液相色谱法与常规高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯及有关物质的比较【摘要】目的比较分析快速液相色谱法(UFLC)与常规液相色谱法(HPLC)测定克林霉素磷酸酯含量及有关物质。
方法 UFLC 法色谱柱采用Waters C18杂化柱(50mm×，μm)，流速/min；HPLC法色谱柱采用Apollo C18(250mm×，5μm)，流速/min。
两方法均以/L磷酸二氢钾(85%的磷酸调)∶乙腈∶甲醇(700∶150∶150)为流动相，检测波长210nm。
结果在UFLC法中，克林霉素磷酸酯在～/ml呈良好线性，r=；最低检测限为20ng；最低定量限为60ng；精密度RSD为%。
与HPLC法相比，该法测定克林霉素磷酸酯含量快速、准确、灵敏度高；但测定有关物质，其专属性、准确性不如HPLC法，杂质检出数目少且部分杂质分离不完全。
结论UFLC法可准确、快速、高效测定克林霉素磷酸酯含量，适合在工作量较大的检测项目如制剂含量、含量均匀度及溶出度中应用；但经简单方法转换建立的UFLC方法通常难以胜任对药物复杂体系如有关物质的分析。
【关键词】快速液相色谱法；高效液相色谱法；克林霉素磷酸酯；有关物质ABSTRACT Objective To compare and analyze the UFLC and HPLC method for determination of the content of clindamycin phosphate and its related substances. Methods UFLC: a Waters C18 hybrid column was used, the flow rate was /min; HPLC: a Apollo C18 Column was applied, the flow rate was /min; /L potassium dihydrogen phosphate (pH was adjusted to by 85% phosphoric acid)∶acetonitrile∶methanol(700∶150∶150, V/V) as mobile phase; the detective wavelength was 210nm. Results The linear range of clindamycin phosphate was ～ mg/ml, r=; the LOD was 20ng and the LOQ was 60ng, and RSD was %. The accuracy of UFLC method indetermination the content of clindamycin phosphate was good, and it was more sensitive and rapid than HPLC, but in determination of related substances, it had a poor performance. Conclusion The UFLC method was proved to be simple, accurate, rapid and high efficient, so it could be applied to rapid analysis of the content of clindamycin phosphate in preparations that need detect the test items such as content, uniformity of dosage units, dissolution and so on, however this UFLC method was not suitable for determination of the related substances in the components.KEY WORDS Ultrafast liquid chromatography method; HPLC; Clindamycin phosphate; Related Substances快速液相色谱(ultrafast liquid chromatography，UFLC)是一种新的快速分析技术，它与超高效液相色谱(ultraperformence liquid chromatography，UPLC)的最大区别是其不需要系统超高压(485～830bar)，在略高于普通液相色谱压力极限(345bar)下即可实现高流速、高分辨率分析，适用于要求高通量、高效率的分析工作，在药物分析领域前景广阔［1，2］。
液相色谱法中典型的变动因素
液相色谱法中的典型变动因素包括：
1. 流动相：不同的流动相可以改变化合物在色谱柱中的分离行为。
流动相的pH值、溶剂成分和浓度等都可以对分离结果产
生影响。
2. 色谱柱：色谱柱的种类和特性决定了分离的效果，包括柱型、柱内填充材料、柱长和直径等。
不同的色谱柱适用于不同类型的样品和分析目标。
3. 流速：流速的改变可以影响分离时间和峰形，较小的流速可以提高分离效果，但也会增加分析时间。
4. 进样量：进样量的变化可以影响柱内样品的负荷量，进而影响分离效果和峰形。
5. 柱温：柱温的改变可以通过改变色谱柱内物质的吸附和解吸行为来改变分离效果。
6. 检测器：不同的检测器对不同的化合物有不同的灵敏度和选择性。
选择适当的检测器可以提高分析的准确性和灵敏度。
7. 采样前处理：液相色谱分析前的预处理步骤，如样品提取、浓缩、净化等，可以影响最终的分析结果。
2020年05月2结果与讨论磷钼钒酸的FT-IR 光谱表征数据表明，在700～1100cm -1范围内，有四个Keggin 结构中不同氧原子特征吸收峰。
它们分别是νas (P–O a )=1080cm -1，νas (M =O t )=982cm -1，νas (M –O c -M)=898cm -1和νas (M –O e -M)=797cm -1，这说明钒成功进入了Keggin 骨架中且没有破坏Keggin 结构，从而成功制备了磷钼钒杂多酸。
对于磷钼钒酸离子液体催化剂的FT-IR 光谱表征数据也表明，在700～1100cm -1范围内，有相同的四个Keggin 结构中不同氧原子特征吸收峰。
与此同时，在2850和2950cm -1处的宽峰归因于离子液体中烷基取代基上的C -H 伸缩振动，而在3150cm -1处的峰则对应于乙烯基上不饱和的C -H 振动，在1170,1465和1535cm -1处也出现了分别对应于咪唑环上的C -N 伸缩振动，C -H 剪切振动以及C =N 伸缩振动的对应特征峰。
这表明通过阴离子交换的方式成功地将Keggin 结构的磷钼钒杂多酸与离子液体结合起来，并且不会破坏相互的结构。
学生在本实验过程中可以学习多酸材料的合成方法，巩固掌握固体和液体称量、催化剂洗涤等基本操作，以及红外光谱仪、气相色谱仪的使用和操作方法。
建议用于本催化氧化脱硫实验的最佳条件为：温度120o C,模型油20mL,催化剂([C 4VIM]PMoV 2)0.05g,空气流速100mL/min ，反应时间为5h 。
3结语经多次实验证明，模型油中的硫化物可被有效脱除，脱硫率可达98%以上，并且对于不同种类硫化物均有良好的脱除效果，在循环使用7次后仍然具有良好的脱硫活性。
该脱硫过程中无毒害排放，属于绿色催化范畴。
本实验的开展可以让学生了解绿色催化的理念，在学习基础知识的同时，也能提高环境保护意识。
参考文献：[1]Sattler A,Parkin G,Carbon-sulfur bond cleavage and hy⁃drodesulfurization of thiophenes by tungsten [J].J.Am.Chem.Soc.,2011,133:3748-3751.[2]张富民,郭麦平,葛汉青.合成钼钒磷杂多酸的新方法及其催化性能[J].化工进展,2006,(10):1171-1174.基金项目：国家自然科学基金资助项目“多酸型多孔聚离子液体用于活化空气氧化燃油超深度脱硫的研究”，项目编号为21776116。
冬枣中果糖、葡萄糖、蔗糖的高效液相色谱分析王庭欣;陈永刚;张晓瑜;夏立娅;李小亭【摘要】为建立冬枣中果糖、葡萄糖、蔗糖的高效液相色谱分析方法,以C18柱为分离柱进行色谱分析.色谱条件为:流动相V(乙腈):V(水)=80:20,流速1.4 mL/min,柱温35℃.样品加标回收率为96％～102％,相对标准偏差小于2.7％.本方法具有回收率高、灵敏度高、精密度高等优点,适用于冬枣中果糖、葡萄糖、蔗糖的检测.%A high performance liquid chromatographic method was developed to determine of fructose, glucose and sucrose in Zizyphus jujube Mill, cv . The method was adopted with acetonitrile and water (80 : 20,V : V) as the eluent. The flow rate was 1. 4 mL/min and column temperature 35 ℃. The recovery rate was in 96%-102% range and the relative standard deviation below 2. 7%. This method is simple, accurate and suitable for the determination of fructose, glucose and sucrose in Zizyphus jujube Mill. cv.【期刊名称】《河北大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(032)005【总页数】4页(P528-531)【关键词】高效液相色谱;果糖;葡萄糖;蔗糖;冬枣【作者】王庭欣;陈永刚;张晓瑜;夏立娅;李小亭【作者单位】河北大学质量技术监督学院,河北保定071000;黄骅市质量技术监督局食品质量安全监督检验中心,河北黄骅061100;河北大学质量技术监督学院,河北保定071000;河北大学质量技术监督学院,河北保定071000;河北大学质量技术监督学院,河北保定071000【正文语种】中文【中图分类】O657.7冬枣（Zizyphusjujube Mill.cv））别名冻枣、雁来红、苹果枣、冰糖枣等［1］，是我国著名的优良鲜食枣品种，主要分布在河北、山东交界的渤海湾地区.在其独特的地理环境和人文环境的影响下，冬枣果肉细嫩多汁、口感甜脆、营养丰富.黄骅冬枣和沾化冬枣在2002年均被国家质检总局批准为冬枣原产地保护品种（后改为地理标志产品）并先后制定了相应的国家标准［2-3］.近几年来冬枣产业发展迅速，但是同时出现了不同产地的冬枣果实品质不一致，甚至品种混杂，将晚熟枣品种都称为冬枣等现象.许多学者对冬枣品质鉴别及保真技术进行了探讨分析［1，4］，这些报道大多集中在聚类分析或感官性状上.本文就冬枣中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量进行了高效液相色谱分析，旨在为冬枣保真方法提供科学依据.1.1 仪器Waters600高效液相色谱仪，附Waters2424蒸发光散射检测器.NEX UP 1000型超纯水仪（韩国HUMAN公司生产）.色谱条件：C18柱，4.6mm×250mm，5μm；柱温35℃；检测器漂移管温度85℃，喷雾器温度34.8℃；流动相V（乙腈）∶V（水）＝80∶20；流速1.4mL／min；进样量20μL.1.2 样品与试剂黄骅冬枣，由河北黄骅质量技术监督局提供；沾化冬枣，由山东沾化冬枣产业办公室提供；乙腈，色谱纯，由保定市博爱欣试剂公司提供；蔗糖、果糖、葡萄糖标准品，Sigma公司提供.1.3 方法1.3.1 样品前处理冬枣去皮去核粉碎后，准确称取10g，加入30mL水，90℃水浴25min，冷至室温后置于100mL容量瓶中定容.8 000r／min离心10min，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤后上机测定.1.3.2 标准曲线准确称取蔗糖、果糖、葡萄糖标准品各5g（精确至0.000 1g）分别置于50mL容量瓶内，制成质量浓度为100mg／mL的工作母液.分别准确吸取果糖、葡萄糖和蔗糖工作母液1mL于50mL容量瓶中定容，制备成果糖、葡萄糖和蔗糖质量浓度均为2mg／mL的混标溶液，用同样的方法制备果糖、葡萄糖和蔗糖质量浓度均为4，6，8，10mg／mL的混标溶液.20μL进样进行色谱分析.1.3.3 回收率及精密度的测定准确称取10g同一样品2份，其中一份作本底，另一份添加果糖、葡萄糖、蔗糖进行加标回收实验，每种糖3个水平，分别加入标准品.每个水平进样6次，计算回收率.使用糖质量浓度为6mg／mL的混标溶液，重复进样6次，测定峰面积，计算出果糖、葡萄糖、蔗糖的相对标准偏差.2.1 标准曲线及线性范围以5个浓度梯度的标准溶液进样作HPLC分析，色谱图见图1，以峰面积对进样量进行回归处理.回归方程和相关系数见表1.图1所示，果糖、葡萄糖和蔗糖的保留时间分别为6.677，7.803，11.923min.表1数据表明，在一定的质量浓度范围内，3种糖对照品的峰面积与进样量均呈良好的线性关系.2.2 精密度及回收率经精密度实验得出果糖、葡萄糖、蔗糖的相对标准偏差（RSD）依次为2.2%，1.8%和2.7%.样品加标色谱图如图2，3种糖的平均回收率为96%～102%，结果见表2.2.3 样品测定将制备好的样液20μL注入高效液相色谱，在前述测定条件下记录果糖、葡萄糖、蔗糖的峰面积，依保留时间分别通过标准曲线查得样液中的各组分质量浓度，计算各组分含量，结果见表3.样品色谱图见图3.对2个品种冬枣3种糖含量数据进行统计学分析，黄骅冬枣的果糖含量明显高于沾化冬枣（P＜0.01）；而沾化冬枣的蔗糖含量高于黄骅冬枣；葡萄糖的含量二者无明显差异.3.1 色谱分离条件的选择因糖分子含有极性基团，故选用极性较大的溶剂乙腈作流动相.糖在乙腈中的溶解度较小，故采用乙腈和水的混合溶剂作流动相.实验表明，乙腈与水体积比为80∶20时，分离效果好.实际分析时选择流速为1.4mL／min.3.2 样品的检测结果采用了2个品种共45份冬枣样品进行了3种糖的高效液相色谱分析，测定结果表明，黄骅冬枣果糖含量明显高于沾化冬枣，蔗糖含量则比沾化冬枣低，葡萄糖含量则无明显差异.这可能是2种冬枣口味不同的主要原因.黄骅冬枣和沾化冬枣均属地理标志产品，它们受地理因素和人文因素等多方面的影响，致使其品质和口感有所不同.同时也给冬枣的鉴别带来了一定的困难.本研究结果提示，2种冬枣各自具有自己的优势糖，能否以糖含量作为品种的鉴别指标还有待于进一步的探讨.［1］马庆华，续九如，王贵禧，等.河北和山东冬枣果实品质评价及AFLP分子标记的研究［J］.林业科学研究，2009，22（1）：48-54.MA Qinghua，XU Jiuru，WANG Guixi，et al.Studies on the fruit qualityand AFLPM arkers of Ziziphusjujubacv.Dongzao from Hebei and Shandong Provence［J］.Forest Research，2009，22（1）：48-54.［2］中华人民共和国国家标准GB／T 18740—2008，地理标志产品黄骅冬枣［S］.［3］中华人民共和国国家标准GB／T 18846—2008，地理标志产品沾化冬枣［S］.［4］马庆华，续九如，姚立新，等.不同产地冬枣果实品质差异的研究［J］.河北农业大学学报，2007，30（2）：57-60.MA Qinghua，XU Jiuru，YAO Lixin，et al.Studies on the quality difference of Dongzao jujube from different sources［J］.Journal of Agricultural University of Hebei，2007，30（2）：57-60.【相关文献】［1］马庆华，续九如，王贵禧，等.河北和山东冬枣果实品质评价及AFLP分子标记的研究［J］.林业科学研究，2009，22（1）：48-54.MA Qinghua，XU Jiuru，WANG Guixi，et al.Studies on the fruit quality and AFLPM arkers of Ziziphusjujubacv.Dongzao from Hebei and Shandong Provence［J］.Forest Research，2009，22（1）：48-54.［2］中华人民共和国国家标准GB／T 18740—2008，地理标志产品黄骅冬枣［S］.［3］中华人民共和国国家标准GB／T 18846—2008，地理标志产品沾化冬枣［S］.［4］马庆华，续九如，姚立新，等.不同产地冬枣果实品质差异的研究［J］.河北农业大学学报，2007，30（2）：57-60.MA Qinghua，XU Jiuru，YAO Lixin，et al.Studies on the quality difference of Dongzao jujube from different sources［J］.Journal of Agricultural University of Hebei，2007，30（2）：57-60.Analysis of fructose，glucose and sucrose in Zizyphusjujube Mill.cv by high performance liquid chromatographicWANG Tingxin1，CHEN Yonggang2，ZHANG Xiaoyu1，XIA Liya1，LI Xiaoting1（1.College of Quality and Technical Supervision，Hebei University，Baoding 071000，China；2.Food Quality Safety Supervision and Inspection Center，HuanghuaAdministration of Quality Technology Supervision，Huanghua 061100，China）Abstract:A high performance liquid chromatographic method was developed to determine of fructose，glucose and sucrose in Zizyphusjujube Mill.cv.The method was adopted with acetonitrile and water（80∶20，V∶V）as the eluent.The flow rate was1.4mL／min and column temperature 35℃.The recovery rate was in 96%—102%range and the relative standard deviation below2.7%.This method is simple，accurate and suitable for the determination of fructose，glucose and sucrose in Zizyphusjujube Mill.cv.Key words:HPLC；fructose；glucose；sucrose；Zizyphusjujube Mill.cv.中图分类号：O657.7。
高效液相色谱法测定烟草中的果糖、葡萄糖和蔗糖黄翼飞【摘要】以72%(体积比)乙腈/28%水预混合溶液作流动相,High-Performance Carbohydrate卡套柱作色谱柱,等梯度洗脱,采用带示差折光检测器的高效液相色谱仪测定了烟草中的果糖、葡萄糖和蔗糖含量.结果表明:方法的日内精密度和日间精密度的范围分别为0.46%～1.54%和0.96%-4.74%,回收率97.0%～102.3%,果糖、葡萄糖和蔗糖的检出限(LOD)分别为95,107和105μg/mL(s/N=3∶1),可以满足烟草中果糖、葡萄糖和蔗糖含量的日常检测要求.【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2010(000)001【总页数】4页(P40-43)【关键词】高效液相色谱;示差折光;果糖;葡萄糖;蔗糖;烟草【作者】黄翼飞【作者单位】广东中烟工业有限责任公司技术中心,广州市中山七路333号,510145【正文语种】中文【中图分类】TS411.1目前,烟草中果糖、葡萄糖和蔗糖的测试方法主要有液相色谱法和离子色谱法。
离子色谱法的测定灵敏度高[1],但包括柱平衡在内的色谱运行时间需 1 h以上,而且对色谱柱和流动相管路要进行较多的维护工作,样品处理时间也相对较长,不利于实验室日常检测效率的提高[2]。
YC/Z 240-2008[3]建议制定这 3种糖的高效液相色谱测定方法。
高效液相色谱结合示差折光检测 (HPLC2R I)是一种直接、快速、成本低的测定方法。
现今的 HPLC2R I仪器已经对流速恒定和光学元件温度控制有了一定的改进,有效地提高了检测稳定性。
HPLC2R I法广泛应用于糖类分析[426],对果糖、葡萄糖和蔗糖的检测结果可靠。
示差折光检测器(R ID)的灵敏度相对较低,但烟草中的葡萄糖、果糖和蔗糖含量较高,R ID的灵敏度可以满足日常分析要求。
蔗糖、D(-)-果糖、D-(+)-无水葡萄糖 (纯度≥99.5%,Sigma2Aldrich公司);乙腈(纯度≥99.9%,MERCK公司);超纯水;烟草样品(广东中烟工业有限责任公司提供)。
高速液相色谱法测定果胶酶活性的优化条件果胶酶是一种特殊的水解酶，广泛存在于植物、真菌和细菌中。
其主要功能是分解果胶，促进果实软化，增加果汁浓度和流动性。
果胶酶的活性检测及分析一直是食品工业、饮料业和制药工业中非常重要的研究领域之一。
其中高速液相色谱法是一种快速、简便、准确，且能解决高分子物质分析问题的一种方法。
本文旨在探讨高速液相色谱法测定果胶酶活性的优化条件。
一、色谱柱的选择根据需求选择适当的色谱柱是高速液相色谱法测定果胶酶活性的第一步。
一般可选用聚合物或硅胶固定相的色谱柱，常见的是树脂交联聚合物色谱柱。
这种色谱柱具有较高的稳定性和抗溶液性，使得它能够在不同的实验条件下保持稳定性和准确性。
同时，聚合物色谱柱的多孔性能也保证了准确的分离和纯化果胶酶的效果。
二、流动相的配置高速液相色谱法需要在某些严格的条件下进行，如选择合适的流动相是非常关键的一步。
在测定果胶酶活性时，可以使用一些简单的有机酸盐类溶液作为流动相。
以磷酸二氢钾缓冲液和甲酸铵溶液（pH值为3.5）为例。
三、pH值的控制果胶酶比较适合在酸性条件下进行测定，因此需要严格控制流动相的pH值。
在进行实验前，应首先确定合理的流动相pH值范围。
通常采用pH值为3.5的磷酸二氢钾缓冲液和甲酸铵溶液进行测定。
当然，不同类型的果胶酶可能对不同的pH值有不同的适应性，因此需要根据实际情况进行合理的调整。
四、温度的影响温度是高速液相色谱法测定果胶酶活性的另一个重要参数，直接影响到果胶酶的活性。
一般情况下，室温（20-25℃）下进行实验即可，但需要根据实际情况进行调整。
如在低温（暴冷）下进行实验时，果胶酶的活性会下降，需要将流动相加温以提高温度。
五、测定数据的处理高速液相色谱法测定果胶酶活性后，需要对数据进行处理和分析。
通过对数据的统计和分析，可以得到果胶酶的活性值和一些相关的技术参数。
处理数据时需要注意对数据进行初步筛选和选择，确保获得的结果符合实际情况，同时需要对数据的精度和可靠性进行检查。
高效液相色谱法中流动相组成优化技巧高效液相色谱法（High performance liquid chromatography, HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、食品、医药等领域的分析技术。
在HPLC中，流动相的组成对分析结果有重要影响，因此优化流动相组成是提高HPLC分析效率和准确性的关键。
首先，对于HPLC中流动相的选择，常见的有水溶液、有机溶剂，以及它们的混合物。
合理选择流动相的组成可以提高分析的分离效果、保证柱寿命，同时降低分析时间和成本。
具体选择哪种流动相需要根据被测物性质和分析目的来确定。
一般来说，水溶液多用于极性物质的分析，有机溶剂适用于非极性物质的分析。
其次，流动相中各组分的浓度也需要进行优化。
浓度过高会影响柱寿命，增加压力，同时可能导致测定结果不准确；浓度过低则会降低分离效果。
在优化流动相组成时，需要通过实验找到最佳浓度范围，以获得最佳的分析结果。
除了浓度外，流动相pH值也是需要考虑的因素之一。
pH值的调整可以改变物质的分离行为和保留时间，进而影响到分析结果。
在实际操作中，可以通过改变酸碱度来调整流动相pH值，或者添加缓冲剂来稳定pH值。
根据被测物的性质，选择合适的pH范围可以有效提高分析的精确度和准确性。
此外，温度也会对流动相组成产生影响。
一般来说，温度的升高可以加快分析速度、提高分离效果。
然而，过高的温度可能会导致柱失效，因此需要根据柱的耐温范围来选择合适的温度条件。
在优化流动相组成时，应考虑到被测物的稳定性和分析目的，选择合适的温度条件。
此外，对于复杂样品的分析，可能需要引入梯度洗脱技术。
梯度洗脱是指在分析过程中逐渐改变流动相组成，以增强对复杂混合物的分离能力。
梯度洗脱可以根据被测物的特性来设计，例如从极性溶剂向非极性溶剂逐渐转变，或者反之。
通过优化梯度洗脱条件，可以提高HPLC的分离效果和灵敏度，获得更为准确的分析结果。
在进行HPLC分析时，还需要注意柱的选择和保养。
