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纸片法抗菌药物敏感实验操作标准4.3 标准比浊管用硫酸钡比浊管（0.5麦氏比浊标准），标定接种菌液浓度。
比浊管制备方法如下：（1）0.048mol/L BaCl2，（1.175% w/v BaCl2·2H2O）0.5ml，加到99.5ml的0.18 mol/L（0.36N）H2SO4（1％v/v）溶液中，制成比浊管；（2）用光径为1cm的分光光度计测定光吸收来标定比浊管。
0.5麦氏标准比浊管在625nm波长的吸收光度应为0.08-0.1；（3）选管径与制备菌液试管相同的螺口试管，每管分装4－6ml；（4）将试管帽拧紧，放室温暗处保存；（5）用前，将比浊管在旋转振荡器上混匀。
如出现大颗粒，应更换；（6）每个月更换比浊管或复检比浊管的浊度。
5 操作步骤5.1 制备接种菌液5.1.1 增菌法步骤如下：（1）选琼脂平板上形态相同的菌落至少4－5个，用接种环挑其顶部，移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中；（2）置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度（一般需2－6小时），浓度约1－2×108CFU/ml；（3）用生理盐水或肉汤校正菌液浓度，与比浊管相同。
可用光电比浊。
目测比浊须在适当光照下以黑色线条为反衬。
5.1.2 直接菌悬液法步骤如下：（1）做常规药敏试验，可直接用过夜培养的菌落（必须用无选择性培养基平板，如普通琼脂培养基）在盐水或肉汤中制备接种菌液。
菌液浓度调至0.5麦氏管；(2)此法适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌和链球菌及葡萄球菌的甲氧苯青霉素或苯唑青霉素的耐药试验；（3）当用此法做复方磺胺药的试验时，从平板上直接挑菌落时会携带相当量的拮抗剂，造成敏感菌株的抑菌环内出现轻微的生长菌膜。
5.2 接种平板步骤如下：（1）校正的菌液须在15分钟内使用。
用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次，去掉过多的菌液；（2）用试子涂布整个琼脂平板表面，反复涂布几次，每次将平皿旋转60度，保证涂布均匀。
DB34/T 3399—20199附 录 E（资料性附录）常见药物对常见细菌药敏折点的参考值表E.1 常用药物对气单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片药物 含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--表E.2 常用药物对假单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--DB34/T 3399—201910表E.3 常用药物对肠杆菌科细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 2 4 23.75/1.25 16 13 甲氧苄啶 2 4 5 18 15氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.25 2 10 23 16 环丙沙星 0.25 2 5 26 20酰胺醇类 甲砜霉素 4 8 30 17 17 氟苯尼考 2 8 30 19 14大环内酯类 红霉素 8 32 15 14 10 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 16 12四环素类土霉素 2 8 30 21 13 强力霉素（多西环素） 2 8 30 21 13β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 21 17 表E.4 常用药物对链球菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 1 2 23.75/1.25 18 15 甲氧苄啶 2 4 5 20 17氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.5 2 10 24 18 环丙沙星 0.5 2 5 22 18酰胺醇类 甲砜霉素 2 8 30 22 18 氟苯尼考 2 8 30 24 18大环内酯类 红霉素 0.5 4 15 21 18 氨基糖甙类 新霉素 4 16 10 15 12四环素类土霉素 1 2 30 23 20 强力霉素（多西环素） 1 2 30 23 20β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 22 18_________________________________。
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
