药敏纸片中药物含量标准

纸片法抗菌药物敏感实验操作标准4.3 标准比浊管用硫酸钡比浊管（0.5麦氏比浊标准），标定接种菌液浓度。

比浊管制备方法如下：（1）0.048mol/L BaCl2，（1.175% w/v BaCl2·2H2O）0.5ml，加到99.5ml的0.18 mol/L（0.36N）H2SO4（1％v/v）溶液中，制成比浊管；（2）用光径为1cm的分光光度计测定光吸收来标定比浊管。

0.5麦氏标准比浊管在625nm波长的吸收光度应为0.08-0.1；（3）选管径与制备菌液试管相同的螺口试管，每管分装4－6ml；（4）将试管帽拧紧，放室温暗处保存；（5）用前，将比浊管在旋转振荡器上混匀。

如出现大颗粒，应更换；（6）每个月更换比浊管或复检比浊管的浊度。

5 操作步骤5.1 制备接种菌液5.1.1 增菌法步骤如下：（1）选琼脂平板上形态相同的菌落至少4－5个，用接种环挑其顶部，移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中；（2）置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度（一般需2－6小时），浓度约1－2×108CFU/ml；（3）用生理盐水或肉汤校正菌液浓度，与比浊管相同。

可用光电比浊。

目测比浊须在适当光照下以黑色线条为反衬。

5.1.2 直接菌悬液法步骤如下：（1）做常规药敏试验，可直接用过夜培养的菌落（必须用无选择性培养基平板，如普通琼脂培养基）在盐水或肉汤中制备接种菌液。

菌液浓度调至0.5麦氏管；(2)此法适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌和链球菌及葡萄球菌的甲氧苯青霉素或苯唑青霉素的耐药试验；（3）当用此法做复方磺胺药的试验时，从平板上直接挑菌落时会携带相当量的拮抗剂，造成敏感菌株的抑菌环内出现轻微的生长菌膜。

5.2 接种平板步骤如下：（1）校正的菌液须在15分钟内使用。

用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次，去掉过多的菌液；（2）用试子涂布整个琼脂平板表面，反复涂布几次，每次将平皿旋转60度，保证涂布均匀。

DB34/T 3399—20199附 录 E（资料性附录）常见药物对常见细菌药敏折点的参考值表E.1 常用药物对气单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片药物 含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--表E.2 常用药物对假单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--DB34/T 3399—201910表E.3 常用药物对肠杆菌科细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 2 4 23.75/1.25 16 13 甲氧苄啶 2 4 5 18 15氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.25 2 10 23 16 环丙沙星 0.25 2 5 26 20酰胺醇类 甲砜霉素 4 8 30 17 17 氟苯尼考 2 8 30 19 14大环内酯类 红霉素 8 32 15 14 10 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 16 12四环素类土霉素 2 8 30 21 13 强力霉素（多西环素） 2 8 30 21 13β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 21 17 表E.4 常用药物对链球菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 1 2 23.75/1.25 18 15 甲氧苄啶 2 4 5 20 17氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.5 2 10 24 18 环丙沙星 0.5 2 5 22 18酰胺醇类 甲砜霉素 2 8 30 22 18 氟苯尼考 2 8 30 24 18大环内酯类 红霉素 0.5 4 15 21 18 氨基糖甙类 新霉素 4 16 10 15 12四环素类土霉素 1 2 30 23 20 强力霉素（多西环素） 1 2 30 23 20β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 22 18_________________________________。

药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。

通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。

一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。

药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。

通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。

一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。

DB34/T 3399—20199附 录 E（资料性附录）常见药物对常见细菌药敏折点的参考值表E.1 常用药物对气单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片药物 含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--表E.2 常用药物对假单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--DB34/T 3399—201910表E.3 常用药物对肠杆菌科细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 2 4 23.75/1.25 16 13 甲氧苄啶 2 4 5 18 15氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.25 2 10 23 16 环丙沙星 0.25 2 5 26 20酰胺醇类 甲砜霉素 4 8 30 17 17 氟苯尼考 2 8 30 19 14大环内酯类 红霉素 8 32 15 14 10 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 16 12四环素类土霉素 2 8 30 21 13 强力霉素（多西环素） 2 8 30 21 13β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 21 17 表E.4 常用药物对链球菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 1 2 23.75/1.25 18 15 甲氧苄啶 2 4 5 20 17氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.5 2 10 24 18 环丙沙星 0.5 2 5 22 18酰胺醇类 甲砜霉素 2 8 30 22 18 氟苯尼考 2 8 30 24 18大环内酯类 红霉素 0.5 4 15 21 18 氨基糖甙类 新霉素 4 16 10 15 12四环素类土霉素 1 2 30 23 20 强力霉素（多西环素） 1 2 30 23 20β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 22 18_________________________________。

组别抗菌药物纸片含量抑菌环直径，精确到mm说明耐药中介敏感青霉素类A氨苄西林10ug≤1314-16≥17B B B 美洛西林哌拉西林替卡西林75ug100ug75ug≤17≤17≤1418-2018-2015-19≥21≥21≥20U羧苄西林100ug≤1920-22≥23内酰胺/内酰胺抑制剂B B B B 阿莫西林/棒酸氨苄西林/舒巴坦哌拉西林/单菌胺替卡西林/棒酸20/10ug10/10ug100/10ug75/10ug≤13≤11≤17≤1414-1711-1418-2015-19≥18≥15≥21≥20头孢烯类（包括头孢菌素，头霉素碳头孢烯类，和氧头孢烯类）A A 头孢唑林头孢噻吩30ug30ug≤19≤1420-2215-17≥23≥8B B B B 头孢孟多头孢尼西头孢呋辛口服头孢呋辛钠30ug30ug30ug30ug≤14≤14≤14≤1415-1715-1715-2215-17≥8≥18≥23≥18B头孢吡肟30ug≤1415-17≥18B B B B 头孢美唑头孢哌酮头孢替坦头孢西叮30ug75ug30ug30ug≤12≤15≤12≤1413-1516-2013-1515-17≥16≥21≥16≥18B B B 头孢噻肟或头孢唑肟头孢曲松30ug30ug30ug≤22≤21≤1923-2522-2420-22≥26≥25≥23C头孢他定30ug≤1718-20≥21 U氯碳头孢30ug≤1415-17≥18O O 头孢克洛头孢克肟30ug5ug≤14≤1515-1716-18≥18≥19O 头孢泼肟10ug≤1718-20≥21 O头孢普罗30ug≤1415-17≥18 O羟羧氧跣胺菌素30ug≤1415-22≥23 Inv cefdinir5ug≤1617-19≥20 Inv头孢他美酯10ug≤1415-17≥18 Inv头孢布坦30ug≤1718-20≥21碳青霉烯类Doripenem≤1920-22≥23肠菌科抑菌环解释标准Ertapenem≤1920-22≥23B B 亚胺培南或美洛培南10ug10ug≤19≤1920-2220-22≥23≥23单环类C氨曲南30ug≤1718-20≥21氨基糖甙类A庆大霉素10ug≤1213-14≥15 B阿米卡星30ug≤1415-16≥17 C卡那霉素30ug≤1314-17≥18C C O 奈替米星托布霉素链霉素30ug10ug10ug≤12≤12≤1113-1413-1412-14≥15≥15≥15四环素类C O O 四环素Doxycyclinminocyclin30ug30ug30ug≤14≤12≤1415-1813-1515-18≥19≥16≥19喹诺B B U U U U O 环丙氟哌酸或左氟沙星依诺沙星洛美沙星诺氟沙星氧氟沙星依诺沙星5ug5ug100ug10ug10ug5ug10ug≤15≤13≤14≤18≤12≤12≤1416-2014-1615-1819-2113-1613-1515-17≥21≥17≥19≥22≥17≥16≥18O奈啶酸30ug≤1314-18≥19 Inv氟罗沙星5ug≤1516-18≥19 Inv格帕沙星5ug≤1415-17≥18其B复方磺胺 1.25/23.75ug ≤1011--15≥16C氯霉素30ug≤1213-17≥18 U呋喃妥因300ug≤1415-16≥17 U磺胺250或300ug≤1213-16≥17 U TMP5ug≤1011--15≥16 U磷霉素200ug≤1213-15≥16。

呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）
适用范围：本产品采用半定量纸片琼脂扩散法（K-B法）体外检测细菌对呋喃妥因药物的敏感性。

1.1产品型号/规格
20片/瓶，每片含药量为300 µg/片。

2.1 外观
外观应满足如下要求：
a) 呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）包装完整，无破损；外观应整洁，文字符号标识清晰；
b) 呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）呈圆形，黄色、边缘无缺口，表面平整，无裂痕；
c) 呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）的两面均有呋喃妥因的英文名称缩写(FT)和表示含量的数字（300）。

2.2 纸片直径
呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）的直径应为：6.35mm±0.05mm。

2.3 抑菌环直径
用质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC 25923或大肠杆菌ATCC 25922进行纸片琼脂扩散法试验，结果（抑菌环直径）应符合该质控菌株可接受范围(金黄色葡萄球菌ATCC 25923:18-22mm;大肠杆菌ATCC 25922:20-25mm)。

注：抑菌环直径可接受范围参照CLSI M100 规定。

2.4 批内重复性
用同一批号呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法）对质控菌株进行抑菌能力试验重复检测20个纸片，最大抑菌环与最小抑菌环直径之差不大于2.5mm。

2.5 批间重复性
用3个不同批号的呋喃妥因药敏实验纸片（扩散法），对质控菌株进行抑菌能力试验，每个批号各重复检测10个纸片，同一平板上最大抑菌环与最小抑菌环直径之差的平均数不大于4mm。

2.6 稳定性
储存在-20℃以下，有效期12个月，到失效期后2个月检测，检测结果应符合2.3的要求。

抗真菌药敏纸片的使用抗真菌药敏纸片的使用 1. 抗真菌药敏纸片分类和名称类别中文名称英文名称缩写剂量多烯类两性霉素BAmphotericinBAMB10 ug制霉菌素Nystatinum NYS50 ug吡咯类咪唑类咪康唑/达克宁Miconazole MIC10 ug益康唑EnconazoleECO10 ug酮康唑Ketoconazole KET15 ug克霉唑Clotrimazole CLO10 ug三唑类氟康唑Fluconazole FLU15 ug伊曲康唑Itraconazole ITC8 ug其他5-氟胞嘧啶5-FlurocytosineFC1 ug抗真菌药敏专用NCCLS推荐的RPMI-1640平板9cm注:纸片直径9.2 mm，30片/支，2-8?保存，效期见包装。

2. 接种液的配制和接种接种液的配制中，菌液浓度的控制是重要的，过浓会导致吡咯类抑菌圈判定困难出现假阴性。

对于大多数菌株，菌液浓度调成0.5麦氏浊度即可;克柔念珠菌应再稀释5倍;隐球菌属调成1.0麦氏浊度。

用无菌棉拭子沾取菌悬液，略挤压，直接均匀涂布平板，最后沿平皿周边绕两圈，保证涂布均匀。

然后，平皿放35?开盖倒扣干燥15分钟，须待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。

纸片贴上后用镊尖压一下，使其贴平。

建议9cm平皿一般贴直径9.2cm的药敏纸片4-5个。

3. 培养在多数情况下，30-35?培养18-24小时后马上测量抑菌圈，时间过长会使抑菌圈变小而导致假耐药。

如果生长不好，抑菌圈不清(如:新型隐球菌)可适当延长培养时间至抑菌圈清晰为止。

4. 判读标准中文名称敏感( S)中介( I)耐药( R)两性霉素B (10ug)15mm10-14mm10mm制霉菌素 (50ug)15mm10-14mm10mm达克宁(10ug) 咪康唑/ 20mm12-19mm11mm益康唑(10ug) 20mm 12-19mm11mm酮康唑(15ug) 20mm 12-19mm11mm克霉唑(10ug) 20mm 12-19mm11mm氟康唑(15ug) 20mm 12-19mm11mm伊曲康唑(8ug)15mm10-14mm10mm5-氟胞嘧啶(1ug)20mm12-19mm11mm注:l 对于多烯类抗真菌药(AMB和NYS)，测量生长清晰的抑菌圈，抑菌圈内出现的菌落必须视为耐药突变株。