阿霉素大鼠肾病模型的概述

补中益气汤对阿霉素诱导的大鼠肾病的作用郭继光;张海燕;李朝鹏;高飒;李芸【摘要】以阿霉素肾病大鼠模型为研究对象,采用了血液生化学和组织病理学方法,分析了补中益气汤对阿霉素肾病的作用和可能的机制.Wistar雄性大鼠60只,随机分为对照组(n=10)、模型组(n=10)、激素组(n=10)和补中益气汤低剂量组(n=10)、中剂量组(n=10)和高剂量组(n=10).采用阿霉素二次尾静脉注射法(首次6 mg/kg,二次3 mg/kg)制作阿霉素肾病的大鼠模型.在阿霉素注射后7,21,42 d将大鼠置于代谢笼中分别收集24 h尿液,测定24 h尿蛋白.末次给药后,眼眶取血检测肾功能指标,包括肌肝SCR (se-rum creatine)和尿素氮BUN (blood urea nitrogen);处死大鼠并观察肾组织病理改变.结果表明:补中益气汤可以显著减少尿蛋白的排泄并缓解肾皮质上皮细胞的病理学改变.这提示补中益气汤对阿霉素大鼠能够通过改善尿蛋白的排泄,缓解肾脏病理改变,从而起到对肾脏的保护作用.【期刊名称】《河北大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(035)003【总页数】7页(P298-304)【关键词】阿霉素肾病;补中益气汤;24 h尿蛋白;肌酐;尿素氮【作者】郭继光;张海燕;李朝鹏;高飒;李芸【作者单位】河北大学基础医学院,河北保定071000;保定市安新县医院神经内科,河北保定071600;华北制药金坦生物技术股份有限公司质量保证部,河北石家庄050035;高碑店市医院儿科,河北高碑店074000;保定市第三医院护理部,河北保定071000【正文语种】中文【中图分类】Q491;R285.5第一作者:郭继光(1978-)，男，回族，山东曹县人，河北大学讲师，主要从事衰老相关疾病和神经退行性疾病的分子机制的研究.E-mail:****************Key words: Adriamycin nephopathy;Buzhong Yiqi decoction;24-hour urine protein(24 HUP);serum creatine;blood urea nitrogen补中益气汤出自金元四大家的李杲所著的《脾胃论》，具有调补脾胃、升阳益气的作用.药物组成为黄芪、党参、白术、陈皮、升麻、炙甘草、当归、柴胡.方中的黄芪作为君药健脾补气，而它与党参和白术联合使用则在补气之余兼具养阴之功效，也就是说具有补气固精的效果，实际上按照现代中医理论，这种效果的实际作用就包含对尿蛋白的排泄的抑制作用.已经有许多现代药理研究表明黄芪能够改善肾小球疾病患者的蛋白质、脂质代谢，改善肾功能[1].当归是一味常用的补血和血药，能够改善血液循环[2-3]；陈皮能够理气健脾，加强消化和吸收；炙甘草具有气血双补的功效，能够提高机体的免疫功能，抗炎止痛；升麻具有清热解毒和升阳举陷的功效，其作用和柴胡类似.目前，已经有数个临床实验表明补中益气汤可能对肾病起到一定的治疗作用[4-6],但是之前的工作中，都存在样本数量低、缺乏严格的定量测定的问题.本研究根据Deschenes等[7]尾静脉注射阿霉素的方法建立肾病大鼠模型，并使用此模型检测补中益气汤对阿霉素肾病的作用，从而进一步揭示其作用机理.Sprague Dawley大鼠60 只，雄性，体质量约200 g，购自河北医科大学实验动物中心.给药前，先进行适应性饲养约7 d，使用普通饲料喂养，并保证充足的饮水.盐酸阿霉素(Adriamycin，ADR)，Sigma公司，使用时新鲜配置成5 mg/mL.代谢笼，Tecniplast，意大利；考马斯亮蓝G-250，Sigma公司；Albumin Bovine V，Sigma公司.补中益气汤组方：黄芪15 g，党参10 g，白术9 g，陈皮6 g，升麻6 g，当归10 g，柴胡6 g，炙甘草9 g.水提取液制法：按处方比例加10倍量水浸泡30 min，加热煎煮1 h，滤过，滤液备用.药渣再加8倍量水，煎煮30 min，滤过，滤液合并，浓缩至生药质量浓度1 g /mL，静置沉降24 h，滤取上清夜，加热浓缩至生药质量浓度2 g /mL，即得. 按6 mg/ kg的剂量，初次大鼠尾静脉注射阿霉素溶液，1周后，进行第2次尾静脉阿霉素的注射，剂量为3 mg/kg.如果在30 d左右大鼠尚未死亡，则可认为已经成功建立了阿霉素肾病大鼠模型.将60只大鼠分为6 组，即对照组、模型组、激素组和补中益气汤低剂量、中剂量及高剂量治疗组，每组各10只.补中益气汤治疗组大鼠，在首次尾静脉注射阿霉素溶液后，立即进行补中益气汤灌胃，每日1次，持续6周.对照组和模型组使用同补中益气汤等量的生理盐水进行灌胃，同样每日1次，持续6周.补中益气汤成人1日剂量(生药)约为1 g/kg(以人的体质量为70 kg计算).依据Meeh-Rubner公式，换算200 g大鼠1日的等效剂量(生药)大约是人的6倍，即6 g/kg.为了涵盖汤剂的有效给药剂量范围，本实验以此估算剂量为基础，进行了梯度给药.详细的分组给药方式见表1.以首次尾静脉注射阿霉素溶液后第7 ，21，42 d，按照分组给药方式给药结束后，将大鼠转移至代谢笼内，收集24 h的大鼠尿液.用Bradford法测定尿蛋白浓度，并依此计算24 h 尿蛋白(24-hour urine protein, 24 HUP).在首次尾静脉注射阿霉素后第42 天，大鼠眼眶静脉丛取血.通过自动生化分析仪检测血液生化指标，包括SCR和BUN.给药第42 天末，取出肾脏组织，在体积分数10%的福尔马林溶液中固定，之后进行石蜡包埋和切片，切片的染色采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining， HE staining)，最后将染好的切片置于光镜下观察并拍摄肾脏组织的病理形态改变.数据按照均数和标准差的方式进行表示，即Mea n±SD.由于实验分组较多(6组)，因此采用了单因数方差分析(One-Way ANOVA)，分析软件使用的是SPSS，P<0.05认为有统计学意义.造模1周后，注射阿霉素的大鼠开始显得精神委靡、食欲减退、体毛凌乱无光，且出现脱毛现象，并随着时间延长而加剧，尾部出现红肿；在3周后个别大鼠尾部甚至产生了糜烂，且身体开始出现水肿，随着时间的延长水肿也逐渐加剧.相对而言，补中益气汤组虽然较对照组的大鼠在体质量、精神和毛发上都出现了不良反应，但是较模型组则显得更为活跃，食量更多，体质量也要偏高，脱毛和水肿也较为轻微；激素组体质量、精神、食量、水肿和毛发状况则与补中益气汤的中剂量组十分接近.在对大鼠状态进行定性观察和记录的基础上，对大鼠的体质量变化进行定量地跟踪测定.结果表明，在各个时间点注射过阿霉素的大鼠，包括了给药组、激素组和模型组，体质量都明显小于对照组(P<0.01)；从造模后第2周开始相对模型组，给药组和激素组大鼠体质量均有显著增加(P<0.01)，见表2和图1.由图1可知，从第2周开始相对模型组，低中高剂量组和激素组均有显著增加( P<0.01)，其中低剂量组的体质量增加最多.在初始随机分组后，各组大鼠的24 HUP并无统计学差异.在给药后1周、3周和6周末，模型组大鼠24 HUP与对照组相比，出现显著增加(P<0.01)，而补中益气汤治疗组与模型组大鼠24 HUP相比，出现显著减少(P<0.05)，见表3和图2.给药6周后，各组大鼠血清SCR和BUN水平较正常对照组无显著性差异，见表4.光镜下模型组大鼠肾小球系膜硬化及玻璃样变、细胞外基质增生、肾小球细胞空泡样变性、毛细血管丛萎陷及闭塞、肾小球纤维化等，均较正常对照组明显.补中益气汤治疗组大鼠肾小球形态结构较完整，细胞空泡样变性及纤维化程度较模型组轻，见图3.本课题组采用了大鼠二次尾静脉注射阿霉素方式，成功制作出了阿霉素肾病的大鼠模型.阿霉素肾病大鼠模型是一种经过深入研究的啮齿动物慢性肾炎模型，并且已经为揭示深藏其中的病理机制提供了诸多便利[8].阿霉素肾病有多种造模方式，而本课题组选择的方法是二次尾静脉注射阿霉素法.与单次给药造模方式相比此法有不少优点.首先，二次给药法造成的肾脏病理改变复合人的微小病变肾病(minimal change nephropathy, MCN)，在第5周肾脏上皮细胞会出现空泡样变性，采用电镜观察还可以进一步看到足细胞的融合和裂隙的消失.其次，与单次给药类似，此方法在用药很短的时间内就可以造成肾脏损伤，并产生持续的尿蛋白分泌，这种损伤十分稳定，在实验中，所有注射阿霉素的大鼠都出现了尿蛋白分泌的增多.此外，二次给药法造模对大鼠的损伤相对和缓，在实验中除了个别大鼠在后期萎靡不振以外并无一例死亡，这一点给实验带来很好的保障.对大鼠在造模过程中的体质量变化进行了跟踪记录(表2和图1)，结果表明：模型组和给药组大鼠体质量的增加速度始终明显低于对照组(P<0.01)，而且模型组大鼠的健康活跃度降低最为显著，并且出现明显的脱毛和食欲不振的现象.这说明阿霉素对大鼠机体的损伤是十分显著的.而给药组和模型组相比，给药组的大鼠体质量在整个6周内都明显高于模型组，这表明补中益气汤的灌胃对大鼠有一定的保护作用，在一定程度上减轻了阿霉素造成的损伤.蛋白尿是肾脏疾病最常见的临床症状之一，也是阿霉素肾病的典型症状，肾小球滤过屏障破坏是临床上最为常见的引发蛋白尿的因素，其发生与肾小球滤过屏障的结构功能异常有关.近年来的研究揭示出，这层滤过屏障，实际上是由肾小球足细胞(podocyte)形成的足突间的裂隙隔膜(slit diaphragm, SD)来控制滤过功能的.肾小球滤过膜能够根据分子的大小进行选择性地过滤的主要根源就是这层裂隙隔膜.换句话说，SD是肾小球滤过功能的主要结构基础，它的结构的任何程度的损伤和破坏都会严重影响肾小球的滤过功能，从而产生蛋白尿[9].有研究通过电镜观察阿霉素肾病模型中病理改变发现，肾脏毛细血管内皮细胞和足细胞出现肿胀和融合，粗面内质网增大，系膜区有轻微的扩张，并且随着时间的延长，肾小球上皮细胞足突部分融合增多，致使隔膜裂隙的消失[10].蛋白尿不仅是肾脏疾病的病理产物，对肾脏也能造成进一步的损害，可引起系膜细胞损伤、增生，甚至肾小球的硬化，并且它对近曲小管细胞也有毒性作用，可导致小管基底侧释放PDGF，FN和MCP-1，诱导纤维化过程[11].目前，已经有多篇文章在临床上初步验证了补中益气汤加味或者结合其他药物对于肾病具有一定的治疗作用，并能够降低蛋白尿，改善临床症状[12-13]，但是这些工作都没有对使用的补中益气汤进行严格的质量控制；此外在这些工作中引入其他的中西药辅助治疗虽然在临床上有不错的疗效，但也模糊了补中益气汤在治疗过程中起到的作用.在本课题组的工作中，首先在药材上使用的都是同一批次大批量制作出来的生药，保证了重复性，而且并未使用补中益气汤以外的任何药材，以此得出的结论能够很好地证明纯粹的补中益气汤对于肾病的疗效.为了检测补中益气汤具体对阿霉素肾病中典型的蛋白尿的症状的作用，采集并记录了造模开始后1周、3周和6周时的24 HUP.结果表明，在二次注射阿霉素后，大鼠开始表现出明显的尿蛋白分泌增多，其24 HUP在2～6周的时间内随着时间的延长而不断地增多.相对于模型组，补中益气汤治疗组的尿蛋白分泌明显低于模型组(P<0.01).这些实验结果表明，补中益气汤能够对阿霉素肾病导致的蛋白尿产生显著的抑制作用，提示此方可能通过抑制蛋白尿起到对肾脏的保护作用.在本研究中，首次观察到了补中益气汤对肾脏组织病变的改善作用.通过对6周末大鼠肾脏病理组织切片的形态学观察表明，模型组与正常组相比，肾小球系膜出现纤维化，系膜基质出现增生；可见空泡样变性的肾小球细胞；毛细血管出现毒性症状，如闭塞或呈结节状；在局部出现了肾小球硬化；在间质内有大量的炎症细胞浸润；肾小管病理改变明显，其结构出现肿胀和坏死，并在其腔内观察到凝聚的大量蛋白管型(图3).在给药后，可以看出补中益气汤，尤其在中剂量下，能够在一定程度上恢复阿霉素造成的肾脏组织病理改变，这也再次表明了补中益气汤对阿霉素肾病的缓解和治疗作用.已有的研究表明，除了补中益气汤外还有其他的药物能改善肾组织病理改变，比如：六味地黄汤合黄连解毒汤[14]和南洋参[15].综上所述，本研究首次发现并证明补中益气汤能够抑制阿霉素肾病中尿蛋白的分泌，明显减轻肾小球及肾小管间质病变，而起作用机制可能是通过减少尿蛋白分泌，从而减轻了尿蛋白对系膜细胞和肾小管上皮细胞的刺激，最终起到了对肾脏的保护作用.[1] 卢晓峰,黄海燕.黄芪治疗肾脏疾病的药理研究进展[J].现代中西医结合杂志,2008,27:4369-4370.[2] 董超,黄威,耿兆辉,等.血府逐瘀汤对动脉粥样硬化大鼠细胞间黏附分子和脂质过氧化物的影响[J]. 河北大学学报：自然科学版,2012,32(6):650-654.DONG Chao,HUANG Wei,GENG Zhaohui,et al.Effects of Xuefu Zhuyu decoc tion on intercellular adhesion molecule and lipid peroxidation of experime ntal atherosclerosis rats[J].Journal of Hebei University:Natural Science Editi on,2012,32(6):650-654.[3] 赵木昆，刘春蕾.血府逐瘀汤加减治疗崩漏的应用[J].医学研究与教育，2013，30(4)：23-25.ZHAO Mukun, LIU Chunlei. Study on Xuefu Zhuyu Decoction in curing metr orrhagia and metrostaxis[J]. Journal of Hebei Medical College for Continui ng Education, 2013,30(4):23-25.[4] 武铁岩,李丽.补中益气汤在肾病中的应用[J].中国民间疗法,2009,03:33.[5] 祝晶.补中益气汤联合高通量血液透析治疗透析后低热20例[J].光明中医,2013,01:152-153.[6] 李勇坚,丁木.加味补中益气汤治疗原发性肾病综合征临床观察[J].湖北中医杂志,2009,31(5):19-20.[7] DESCHENES G，DOUCET A.Collecting duct Na+/K+-ATPase activity is correlated with urinary sodium excretion in rat nephritic s yndromes[J]. Journal of the American Society of Nephrology,2000,11(4):60 4-615.[8] 郭继光,白杨,周广滨.阿霉素肾病动物模型的研究进展[J].江苏大学学报：医学版, 2014,24(2):181-184.[9]JARAD G,MINER J H.Update on the glomerular filtration barrier[J]. Current Opinion in Nephrology and Hypertension, 2009,18(3):226-232.[10] 邢燕,丁洁,范青锋,等.三种不同药物作用下足细胞分子的变化[J].中华肾脏病杂志,2006,22(5),275-281.XING Yan,DING Jie, FAN Qingfen,et al. Changes of podocyte molecules in t he intervention of three different drugs[J]. Chinese Journal of Nephrology, 2006, 22(5),275-281.[11]SIMERVILLE J A,MAXTED W C, PAHIRA J J.Urinalysis: a comprehensive review[J]. Erratum in American Family Physician, 2005,71(6):1153-1162. [12] 吴祖金.应用玉屏风散加补中益气汤治疗慢性肾炎的临床疗效观察[J].求医问药，2013,11(8):149-150.[13] 李勇坚,丁木.加味补中益气汤治疗原发性肾病综合征临床观察[J].湖北中医杂志，2009,31(5):19-20.[14] 沈岚,俞立强,熊佩华.六味地黄汤合黄连解毒汤对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用及相关机制[J]. 南京中医药大学学报,2013,29(6):553-557.SHEN Lan,YU Liqiang,XIONG Peihua.Protective effect and mechanism of Li uwei Dihuang combined with Huanglian Jiedu decoction on diabetic nephr opathy rats [J].Journal of Nanjing University of Traditional Chinese Medicin e, 2013,29(6):553-557.[15] 韩鹏勋, 易无庸,孙惠力,等.南洋参对阿霉素肾病大鼠肾脏保护作用的初步研究[J].中国中西医结合肾病杂志,2013,14(11):963-965.HAN Pengxun,YI Wuyong,SUN Huili, et al. A preliminary study on the renal protective effect of adriamycin nephropathy rats polyscias fruticosa[J]. Chin ese Journal of Integrated Traditional and Western Nephrology,2013,14(11): 963-965.。

两种造模方法致大鼠慢性肾病模型的肾功能及病理变化比较李天祎杨扬杨素萍李嘉琦马逸群王家平摘要目的探究两种造模方法对大鼠慢性肾病模型的肾功能影响及病理改变°方法采用单侧肾切除+尾静脉重复注射阿霉素(ADR)法(A组)和二次尾静脉注射ADR法(B组)测定各组大鼠肾功能(血尿素氮、血肌酐)、血清白蛋白°光镜下观察各组大鼠肾脏的病理变化，并分别与正常对照组(N组)进行比较°结果在4、8、12周末，A、B组血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)值均有显著上升(P<0.05),白蛋白降低(P<0.05)，表现为低蛋白血症，部分大鼠合并腹腔积液°光镜下，A、B两组肾小球均有不同程度萎缩、硬化，肾小管受损不均，肾间质均出现炎性改变°单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR诱导的肾脏损伤更为严重°结论单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR诱导的慢性肾病模型与二次尾静脉注射ADR法,均可使大鼠成模，两种方法比较，单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR诱导的病理改变相对较为典型°关键词慢性肾病阿霉素肾功能中图分类号R3文献标识码A DOI10.11969/j.issn.1673-548X.2020.12.014Comparison of Renal Function and Pathological Changes in Rats with Chronic Nephropathy Induced by Two Methods.Li Tianyi,Yang Yang,Yang Suping,et al.The Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Yunnan650101,China Abstract Objective To explore the renal function and pathological changes of chronic kidney disease model in rats by two meth­ods.Methods The methods of unilateral nephrectomy and repeated injection of adriamycin(ADR)in to caudal vein(Group A)and sec­ond injection of ADR into caudal vein(Group B)were used.Under the light microscope,the renal pathological changes of rats in each group were observed and compared with the normal control group(Group N).Results At the end of4,8,12weeks,the blood urea ni­trogen(BUN)and serum creatinine(CR)of group A and group B were significantly higher than those of group n(P<0.05),and the albumin of group A and group B was lower(P<0.05),showing hypoproteinemia.Some rats were complicated with ascites.Under the light microscope,the glomeruli of group A and group B were atrophic and sclerotic in varying degrees,the renal tubules were damaged un­evenly,and the renal interstitium showed inflammatory changes.The renal injury induced by unilateral nephrectomy and repeated tail vein injection of ADR is more serious and typical.Conclusion The chronic nephropathy model induced by unilateral nephrectomy and repeat­ed tail vein injection of adriamycin can change the renal function of pared with the two methods,the pathological changes in­duced by unilateral nephrectomy and repeated tail vein injection of adriamycin are more typical.Key words Chronic kidney disease；Adriamycin；Renal function慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)是影响全球公共健康的主要疾病之一，全球发生率约为8%~16%[1]°临床多表现为蛋白尿、低蛋白血症、水肿以及高脂血症等°因CKD发生率逐渐增高,病程迁延，很难治愈，末期多发展为慢性肾衰竭，只能依靠透析、换肾等仅有的治疗方式缓解,已经逐渐成为威胁人类健康的一类慢性疾病°随着人们对慢性肾病基金项目：云南省卫生和计划生育委员会医学学科带头人培养计划项目(D-201647)作者单位：650101昆明医科大学第二附属医院放射科通讯作者：王家平，电子信箱：1603642110@ 发病机制和病理变化等研究的深入，建立慢性肾病动物模型对研究CKD的肾组织病理形态学变化以及探究治疗CKD的新方法有着重要的意义°目前，国内外公认的模拟慢性肾病效果较好的为阿霉素(adriamycin,ADR)大鼠模型°ADR在大鼠体内代谢较为缓慢,对心脏、肝脏、骨髓、胃肠等具有较强的不良反应，但经尾静脉注射后,其毒性可主要积累于肾脏[2]°因此，应用ADR造模时，应注意注射的方式、剂量等°近年来,应用较为广泛的方法主要有尾静脉注射法(单次或多次)、单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR和肾动脉注射法等°本研究比较单侧肾切除+重复尾静脉注射ADR及二次尾静脉注射-53-ADR 这两种方法，旨在为更好地复制慢性肾病模型提供更加丰富的参考依据。

43
抗Thy1肾炎
Thy-
造模机制
2
Thy1是鼠类胸腺细胞表面糖蛋白，也存在于
大鼠肾小球系膜细胞表面。利用大鼠胸腺细胞作抗
原免疫家兔，制备的兔抗大鼠Thy1抗血清（ATS）
可直接与系膜细胞表面抗原结合，固定补体形成膜
攻击复合物，使细胞溶解，继而引起残存的系膜细
胞增生，制备系膜增生性肾小球肾炎。
44
造模机制
抗Thy1肾炎
大鼠肾小球系膜细胞表面 与
大鼠胸腺细胞表面
具有相同的抗原
(糖蛋白)
大鼠胸 腺细胞
新西兰家兔，
收集家兔血清
大鼠
45
实验动物
雄性成年新西兰家兔； 体重150g左右雄性SD大鼠。
抗Thy1肾炎
46
抗Thy1肾炎
操作步骤
1. 制备大鼠胸腺细胞悬液 2. 兔抗大鼠Thy1.1抗血清（ATS）制备
第3d系膜细胞开始增生； 至第7d增生明显； 第4、5周系膜细胞增生的同时伴有系膜基
质增多，部分毛细血管襻呈分叶状。
50
模型特点
抗Thy1肾炎
1. 本模型与人类系膜增生性肾小球肾炎相似。
2. 单次注射ATS后肾脏病变常为可逆性的，反 复注射后出现明显肾小球硬化和慢性肾功 能衰竭。
51
系膜增生性肾小球肾炎 左：正常； 右：系膜细胞和基质增生， 电子致密物（D）沉积。
65
嘌呤霉素致肾病模型
[方法]-2 一次注射：
用体重280~300g雄性大鼠，静脉或腹 腔注射嘌呤霉素，剂量为130~150mg/kg体 重。10d左右出现蛋白尿。
66
嘌呤霉素致肾病模型
[方法]-3 一次注射：
用体重150~200g雄性SD大鼠，麻醉下行左侧颈 静脉插管，缓慢注射嘌呤霉素生理盐水溶液，剂量 为80mg/kg体重，5min内注完。蛋白尿于注射后3~5 天开始升高，9~11天达高峰，约14天开始下降，至 28天恢复正常。

[收稿日期]2021-09-30　[修回日期]2022-07-27[基金项目]湖南省卫生健康委科研课题(202103050979);湖南中医药大学校级科研基金项目(2019XJJJ055)[作者简介]何怡然(1986-),女,硕士,主管药师.[通信作者]欧阳林旗,副主任药师.E⁃mail:oylq03@[文章编号]1000⁃2200(2024)03⁃0286⁃05㊃基础医学㊃禾肾丸通过调控ANGPTL3治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的实验研究何怡然1,欧阳林旗1,徐文峰2,郭宇鸽1,肖望重1,黎　旭1(湖南中医药大学第一附属医院1.药学部,2.肾内科,湖南长沙410013)[摘要]目的:探讨禾肾丸通过调控血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的作用机制㊂方法:50只雄性SD 大鼠随机分为5组,每组10只,空白组:不作特殊处理,仅予以每日清晨蒸馏水灌胃;模型组:造模成功后每日清晨蒸馏水灌胃;禾肾丸组:造模成功后每日清晨以禾肾丸灌胃;对照组:造模成功后每日清晨以泼尼松灌胃;联合用药组:造模成功后每日清晨以泼尼松㊁禾肾丸灌胃,各组均灌胃8周㊂密切观察各组大鼠造模及研究期间各种行为学改变,检测和比较各组大鼠造模前1d 及造模后第2㊁4㊁6㊁8周末24h 尿蛋白水平,同时检测和比较各组大鼠血清总胆固醇(TC)㊁三酰甘油(TG)㊁低密度脂蛋白胆固醇(LDL⁃C)㊁高密度脂蛋白胆固醇(HDL⁃C)等血脂指标及血清ANGPTL3表达水平㊂分析各组大鼠血清ANGPTL3表达水平与血脂指标及造模后第8周末24h 尿蛋白水平的相关性㊂结果:禾肾丸组㊁对照组及联合用药组大鼠造模后第8周各种行为学改变均优于模型组;各组大鼠造模前1d 24h 尿蛋白水平比较差异无统计学意义(P >0.05),造模后第2㊁4周模型组㊁禾肾丸组㊁对照组及联合用药组大鼠24h 尿蛋白水平均明显高于空白组(P <0.05),而组间比较差异无统计学意义(P >0.05),造模后第6㊁8周禾肾丸组㊁对照组大鼠24h 尿蛋白水平明显高于联合用药组和低于模型组(P <0.05),而禾肾丸组与对照组比较差异无统计学意义(P >0.05);模型组㊁禾肾丸组㊁对照组及联合用药组大鼠TC㊁TG㊁LDL⁃C 等血脂指标及血清ANGPTL3表达水平均明显高于空白组(P <0.05),而HDL 均明显低于空白组(P <0.05),且禾肾丸组㊁对照组大鼠TC㊁TG㊁LDL⁃C 及ANGPTL3均低于模型组和高于联合用药组(P <0.05),HDL⁃C 均高于模型组和低于联合用药组(P <0.05),而禾肾丸组与对照组比较差异无统计学意义(P >0.05);各组大鼠血清ANGPTL3表达水平与TC㊁TG㊁LDL⁃C 及24h 尿蛋白均呈正相关关系(P <0.05~P <0.01),而与HDL⁃C 呈负相关关系(P <0.05~P <0.01)㊂结论:禾肾丸可能通过调控ANGPTL3而起到治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的作用㊂[关键词]肾病综合征;血脂代谢紊乱;蛋白尿;禾肾丸;血管生成素样蛋白3;阿霉素肾病大鼠[中图法分类号]R 285.5 [文献标志码]A DOI :10.13898/ki.issn.1000⁃2200.2024.03.002Experimental study of Heshen pill on the treatment of proteinuria and dyslipidemiain rats with adriamycin nephropathy through the regulation of ANGPTL3HE Yiran 1,OUYANG Linqi 1,XU Wenfeng 2,GUO Yuge 1,XIAO Wangzhong 1,LI Xu 1(1.Department of Pharmacy ,2.Department of Nephrology ,The First Affiliated Hospitalof Hunan Chinese Medicine University ,Changsha Hunan 410013,China )[Abstract ]Objective :To investigate the mechanism of Heshen pill in the treatment of proteinuria and dyslipidemia in adriamycin nephropathy rats through the regulation of angiopogenin⁃like protein 3(ANGPTL3).Methods :Fifty male SD rats were randomly divided into 5groups with 10rats in each group.The blank group was given distilled water by gavage every morning without specialtreatment;the model group was given distilled water by gavage every morning after successful modeling;the Heshen pill group was given Heshen pill by gavage every morning after successful modeling;the control group was given prednisone by gavage every morning after successful modeling;the combined treatment group was given prednisone and Heshen pill by gavage every morning after successful modeling.Each group was gavaged for 8weeks.The behavioral changes of rats in each group were closely observed during the period ofmodeling and the research.The levels of 24h urinary protein at 1day before modeling and at the end of 2,4,6,and 8weeks aftermodeling were detected and compared.At the same time,the various serum lipid indexes such as TC,TG,LDL⁃C,HDL⁃C,and serum expression level of ANGPTL3were detected and compared.The correlation between serum ANGPTL3expression level and blood lipidindexes,24h urinary protein level at the end of the eighth week after modeling was analyzed.Results:All behavioral changes of rats in Heshen pill group,control group,and combined treatment group were better than that in model group at8weeks after modeling.There was no significant difference in the24h urinary protein level before1d of modeling among all groups(P>0.05).The24h urinary protein levels in the model group,Heshen pill group,control group,and combined treatment group were all significantly higher than that in blank group at2and4weeks after modeling(P<0.05),while there was no significant difference among each group(P>0.05). The24h urinary protein levels in Heshen pill group and control group were significantly higher than that in combined treatment group and lower than that in model group at6and8weeks after modeling(P<0.05),but there was no significant difference between Heshen pill group and control group(P>0.05).The serum lipid indexes,including TC,TG,LDL⁃C,and the expression level of serum ANGPTL3in model group,Heshen pill group,control group and combined treatment group were significantly higher than those in blank group(P<0.05),while the HDL⁃C in each group was significantly lower than that in blank group(P<0.05).TC,TG,LDL⁃C and ANGPTL3in Heshen pill group and control group were lower than those in model group and combined treatment group(P<0.05). HDL⁃C was higher than those in model group and combined treatment group(P<0.05),while there was no statistical significance between Heshen pill group and control group(P>0.05).The expression level of serum ANGPTL3in each group was positively correlated with TC,TG,LDL⁃C and24h urine protein(P<0.05to P<0.01),while negatively correlated with HDL⁃C(P<0.05to P<0.01).Conclusions:Heshen pill may play a role in treatment of albuminuria and dyslipidemia in rats with adriamycin nephropathy through the regulation of ANGPTL3.[Key words]nephrotic syndrome;dyslipidemia;proteinuria;Heshen pill;angiopoietin like protein3;adriamycin⁃induced nephropathic rats 肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)是一组临床征候群,根据不同的发病原因可分为原发性及继发性[1],其中原发性肾病综合征(primary nephrotie syndrome,PNS)病人病情持续性进展,最终可发展成为终末期肾功能衰竭而死亡[2]㊂目前针对PNS多采用糖皮质激素联合免疫抑制剂方案进行治疗,尽管短时间内可获得较好的疗效,但药物不良反应较多,部分病人无法坚持完成整个疗程[3]㊂近些年中医药以其疗效显著㊁安全性高等特点逐渐应用于PNS的治疗中,其中禾肾丸治疗PNS等慢性肾脏疾病均获得良好的治疗效果,尤其在减轻大量蛋白尿和调节血脂代谢紊乱方面具有特殊的功效,但其具体作用机制尚不明确[4-5]㊂血管生成素样蛋白3 (angiopoietin protein like3,ANGPTL3)是一种糖蛋白,其具有抑制脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase, LPL)的生理学功能,使得血脂表达水平显著性升高,同时还可通过影响肾小球滤过功能而在蛋白尿发生过程中发挥重要的作用[6]㊂阿霉素肾病模型为十分经典的慢性肾脏病模型[7],本研究拟构建阿霉素肾病大鼠动物模型,探讨禾肾丸是否通过调控ANGPTL3而治疗PNS蛋白尿及血脂代谢紊乱,从而为禾肾丸临床应用提供理论依据㊂1　材料与方法1.1　实验动物　50只SD大鼠均购自湖南中医药大学动物实验中心,均为雄性,置于SPF级环境下由专人进行饲养,3月龄,体质量为(197.2±25.7)g,室内温度为22℃,湿度为45%~75%,每日光照12h,每只大鼠均分笼饲养㊂本研究均符合动物实验相关条件及动物实验伦理委员会审核监督㊂1.2　实验药物　阿霉素粉针剂购自广东星昊药业有限公司;强的松购自浙江仙居制药股份有限公司;禾肾丸为湖南中医药大学第一附属医院院内制剂,药物组成成分为沙苑子100g,山药100g,醋炙牡蛎50g,醋炙龙骨50g,莲子100g,芡实50g,大枣50g,黄柏20g,糯米50g㊂所有药物成分均符合相关质量要求并经过专业鉴定㊂上述药物成分粉碎处理成细粉,然后将糯米用水煮开后取汁液,与药物细粉混合均匀后制丸,干燥处理后即制成药丸㊂1.3　造模方法　SD大鼠经3d适应性饲养后置于固定器中,充分暴露鼠尾并采用50℃温水浸泡处理数分钟,使得尾静脉呈充盈状态,将阿霉素粉针剂溶于注射无菌用水中配制成2mg/mL浓度的阿霉素溶液,以6mg/kg的药物剂量注射至大鼠尾静脉,3d后检测大鼠血白蛋白及血脂水平,如出现低白蛋白㊁高血脂等情况提示造模成功㊂1.4　分组研究　50只SD大鼠按数字表法随机分为5组,每组10只,空白组:不作特殊处理,仅予以每日清晨蒸馏水灌胃,剂量为1mL/kg;模型组:造模成功后每日清晨蒸馏水灌胃,剂量为1mL/kg;禾肾丸组:将禾肾丸研碎后溶于蒸馏水中,配制成0.133g /mL 的药物溶液,造模成功后每日清晨以1.8g /kg 剂量灌胃;对照组:造模成功后每日清晨以强的松(药物剂量为6mg /kg)灌胃;联合用药组:造模成功后每日清晨以强的松㊁禾肾丸灌胃,药物剂量同对照组和禾肾丸组㊂各组均灌胃8周㊂1.5　观察指标　1.5.1　行为学改变　密切观察各组大鼠造模及研究期间日常饮食㊁精神状态㊁体毛顺滑程度㊁活动状态㊁大小便㊁水肿严重程度等行为学改变㊂1.5.2　24h 尿蛋白定量检测　分别采集各组大鼠造模前1d 及造模后第2㊁4㊁6㊁8周末的24h 尿液,采集标本当日禁食不禁水,采用酶标仪定量检测24h 尿蛋白水平㊂1.5.3　血清ANGPTL3及血脂相关指标检测　各组大鼠实验第8周末全身麻醉处理后剪开胸腹腔采集5mL 腹主动脉血液,3000r /min 离心处理10min 后采集上层血清备检,采用全自动生化仪检测血清总胆固醇(TC)㊁三酰甘油(TG)㊁低密度脂蛋白胆固醇(LDL⁃C)㊁高密度脂蛋白胆固醇(HDL⁃C)等血脂指标(试剂盒购自北京中山生物技术有限公司),采用酶联免疫吸附法检测血清ANGPTL3表达水平(试剂盒购自美国R&D 公司)㊂1.6　统计学方法　采用方差分析㊁q 检验和相关分析㊂2　结果2.1　各组大鼠造模前后行为学改变比较　各组大鼠造模前行为学未出现异常,造模后第1周模型组㊁禾肾丸组㊁对照组及联合用药组大鼠的活动㊁反应㊁饮食㊁皮毛光亮柔顺等均差于空白组,造模后第8周模型组大鼠出现活动减少㊁反应减弱㊁食欲下降㊁精神倦怠㊁蜷缩成团㊁皮毛光亮柔顺度明显降低㊁脱毛明显增加等行为学改变,而禾肾丸组㊁对照组及联合用药组上述行为学改变优于模型组㊂2.2　各组大鼠不同时间点24h 尿蛋白水平比较　各组大鼠造模前1d 24h 尿蛋白水平比较差异无统计学意义(P >0.05),造模后第2㊁4周模型组㊁禾肾丸组㊁对照组及联合用药组大鼠24h 尿蛋白水平均明显高于空白组(P <0.05),而组间比较差异无统计学意义(P >0.05),造模后第6㊁8周禾肾丸组㊁对照组大鼠24h 尿蛋白水平明显高于联合用药组和低于模型组(P <0.05),而禾肾丸组与对照组比较差异无统计学意义(P >0.05)(见表1)㊂表1　各组大鼠不同时间点24h 尿蛋白水平比较(x ±s ;g /d )分组n 造模前1d 造模后第2周造模后第4周造模后第6周造模后第8周空白组1016.79±2.1516.87±2.2416.95±2.3117.03±2.3217.15±2.43模型组1017.05±2.22109.36±12.51*132.40±19.16*294.26±77.08*532.34±129.17*禾肾丸组1017.12±2.26106.90±13.07*129.56±17.21*219.15±26.32*#270.46±33.06*#对照组1016.87±2.18111.75±15.12*128.91±16.87*217.41±25.63*#265.91±35.77*#联合用药组1016.93±2.27107.82±14.73*127.33±16.25*180.54±21.73*#▲211.63±24.32*#▲F 0.04104.33104.2968.2086.26P >0.05<0.01<0.01<0.01<0.01MS 组内4.913167.144243.4571553.7083930.943 q 检验:与空白组比较*P <0.05;与模型组比较#P <0.05;禾肾丸组比较▲P <0.05;与对照组比较■P <0.052.3　各组大鼠血脂相关指标及血清ANGPTL3表达水平比较　模型组㊁禾肾丸组㊁对照组及联合用药组大鼠TC㊁TG㊁LDL⁃C 血脂指标及血清ANGPTL3表达水平均明显高于空白组(P <0.05),而HDL⁃C 均明显低于空白组(P <0.05),且禾肾丸组㊁对照组大鼠TC㊁TG㊁LDL⁃C 及ANGPTL3均低于模型组和高于联合用药组(P <0.05),HDL⁃C 均高于模型组和低于联合用药组(P <0.05),而禾肾丸组与对照组比较差异无统计学意义(P >0.05)(见表2)㊂2.4　各组大鼠血清ANGPTL3表达水平与24h 尿蛋白及血脂相关指标的相关性分析　各组大鼠血清ANGPTL3表达水平与TC㊁TG㊁LDL⁃C 及24h 尿蛋白均呈正相关关系(P <0.05~P <0.01),而与HDL⁃C 呈负相关关系(P <0.05~P <0.01)(见表3)㊂3　讨论3.1　PNS 的发病机制　PNS 等慢性肾病已成为影响世界各国人民公共健康的重要问题,其中蛋白尿是各种慢性肾病病人病情持续发展的独立危险因素,而足细胞损伤是导致蛋白尿发生的重要原因,也是NS 病人肾脏常见的病理改变[8]㊂足细胞是构建肾小球滤过屏障系统的重要成分,其受到明显损伤后可诱发蛋白尿,进而出现低蛋白血症㊁水肿等临床症状[9]㊂高脂血症等血脂代谢紊乱也是NS 的主要临床症状,可使得病人血液呈高凝病理状态,严重者甚至出现血管栓塞[10]㊂故有效减轻足细胞损伤以改善蛋白尿㊁纠正高脂血症等血脂代谢紊乱对于防治NS 具有重要的意义㊂表2　各组大鼠血脂相关指标及血清ANGPTL3表达水平比较(x ±s )分组n TC /(mmol /L)TG /(mmol /L)LDL⁃C /(mmol /L)HDL⁃C /(mmol /L)ANGPTL3/(ng /mL)空白组10 1.32±0.250.66±0.04 1.37±0.30 3.60±0.787.06±1.37模型组1020.67±4.87*19.16±5.73*17.80±2.61*1.21±0.35*87.32±16.22*禾肾丸组1013.06±2.75*#14.27±3.38*#12.77±2.07*# 2.04±0.61*#45.13±12.53*#对照组1012.92±2.81*#13.89±3.42*#12.43±2.14*# 2.01±0.65*#43.67±12.97*#联合用药组1010.11±1.64*#■9.78±2.12*#▲■9.62±1.57*#▲*#▲■2.68±0.63*#▲■30.53±9.35*#▲■F 57.8539.81100.0020.63863.02P <0.01<0.01<0.01<0.01<0.01MS 组内8.38612.090 3.6460.384135.522 q 检验:与空白组比较*P <0.05;与模型组比较#P <0.05;禾肾丸组比较▲P <0.05;与对照组比较■P <0.05　表3　各组大鼠血清ANGPTL3表达水平与24h 尿蛋白及血脂相关指标的相关系数(r )分组TC TG LDL⁃C HDL⁃C 24h 尿蛋白空白组0.267*0.244*0.277*-0.239*　0.302**模型组0.537**0.495**0.461**-0.437**0.536**禾肾丸组0.516**0.463**0.477**-0.451**0.527**对照组0.522**0.498**0.481**-0.460**0.510**联合用药组0.583**0.512**0.498**-0.475**0.541** *P <0.05;**P <0.013.2　禾肾丸治疗阿霉素肾病的作用　本研究构建阿霉素肾病大鼠模型予以进一步研究,观察各组大鼠造模前后行为学改变发现,禾肾丸组㊁对照组及联合用药组大鼠的各项行为学均优于模型组,提示禾肾丸与泼尼松改善阿霉素肾病大鼠的行为学效果一致㊂对各组大鼠血脂相关指标及不同时间点24h 尿蛋白水平进行检测则发现,禾肾丸组和对照组大鼠24h 尿蛋白水平和血脂相关指标均优于模型组,但较联合用药组差,而禾肾丸组与对照组比较无明显差异性,提示禾肾丸与泼尼松均可有效改善阿霉素肾病大鼠的血脂代谢紊乱和蛋白尿症状,且两者联合应用效果更佳㊂分析原因为禾肾丸是根据PNS 病人脾肾亏虚㊁肾失封藏的病理机制,在既往 金锁固精丸”的药方基础上去莲须加莲子,加山药㊁黄柏㊁大枣及糯米化裁而成,在减少蛋白尿漏出㊁减轻高脂血症等方面均有着较好的治疗效果[4-5]㊂3.3　禾肾丸通过ANGPTL3治疗阿霉素肾病的机制 ANGPTL3是一种具有独特信号肽分子结构的序列,较多研究证实其主要表达在肝细胞,可明显抑制LPL 的活性功能,显著性增加血清极低密度脂蛋白的表达水平,最终导致TG㊁TC 的分解明显减少,血脂水平明显升高,已被研究人员认为是调控机体内血脂生理代谢过程中的关键因子[11-13]㊂此外研究还发现肾小球足细胞也能合成和释放ANGPTL3,后者表达水平与蛋白尿㊁足细胞足突融合程度之间呈正相关关系[14],足细胞合成和释放较多ANGPTL3后,后者可激活活化整合素αVβ3及其相关信号分子,从而导致足细胞骨架蛋白重排㊁活动功能显著性升高,最终在足细胞足突融合及蛋白尿形成过程中发挥重要的作用[15]㊂上述研究均证实,ANGPTL3在PNS 发病过程中同时参与血脂代谢紊乱㊁蛋白尿的形成㊂因此寻找一种能有效抑制ANGPTL3合成和释放的中成药可能起到改善PNS 病人蛋白尿及血脂代谢紊乱的治疗目的㊂相关研究也对禾肾丸的作用机制进行深入研究,但尚未发现其对ANGPTL3的影响[16-17]㊂本研究检测各组大鼠血清ANGPTL3表达水平发现,其与TC㊁TG㊁LDL⁃C 及24h 尿蛋白均呈正相关关系,而与HDL⁃C 呈负相关关系,结果提示ANGPTL3与血脂代谢紊乱及蛋白尿有密切相关性,而禾肾丸可能通过调控ANGPTL3而起到治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿及血脂代谢紊乱的作用㊂本研究还存在某些不足之处,如研究时间相对较短,禾肾丸治疗剂量未区分不同剂量组等;此外禾肾丸通过何种信号通路对ANGPTL3进行调控,是否对肾小球足细胞ANGPTL3表达水平产生直接作用等问题仍需以后进一步研究㊂[参考文献][1]　KOPP JB.Global glomerulosclerosis in primary nephroticsyndrome:including age as a variable to predict renal outcomes[J].Kidney Int,2018,93(5):1043.[2]　HUANG WJ,YANG T,LIU CJ,et al.Traditional Chinesemedicine based on zheng differentiation versus angiotensinreceptor blocker/angiotensin converting enzyme antagonist inefficacy of treating diabetic kidney disease:a meta⁃analysis ofrandomized clinical trials[J].World J Tradit Chin Med,2019,5(1):18.[3]　李艳君.肾病方联合西药治疗原发肾病综合征脾肾两虚证临床观察[J].深圳中西医结合杂志,2017,27(23):25. [4]　蒋玉红,卢岚,马嘉黛,等.禾肾丸联合加味防己黄芪汤治疗肾病综合征疗效及对血清IL⁃8和IL⁃13的影响研究[J].现代中西医结合杂志,2017,26(10):1100.[5]　孙瑶.禾肾丸治疗原发性肾病综合征的临床效果分析[J].中国医药指南,2019,17(24):193.[6]　李鑫,吕慧妍,郝丽荣.血管生成素样蛋白3在肾病综合征中的研究进展[J].临床与病理杂志,2018,38(5):1104. [7]　王娥,赵唐明,郑辉,等.tRF⁃003634对阿霉素肾病小鼠足细胞凋亡的作用和机制研究[J].徐州医科大学学报,2022,42(12):866.[8]　YANG XJ,WU Y,LI QQ,et al.CD36promotes podocyte apoptosisby activating the pyrin domain⁃containing⁃3(NLRP3)inflammasome in primary nephrotic syndrome[J].Med Sci Monit,2018,24(9):6832.[9]　安梦丽,何平.足细胞损伤的机制及与肾小球疾病的关系研究进展[J].中国临床研究,2018,31(10):1427. [10]　苗杰,陈雅斌,王鑫.原发性肾病综合征高脂血症与肾功能的相关性研究[J].国际检验医学杂志,2020,41(7):846. [11]　KERSTEN S.Angiopoietin⁃like3in lipoprotein metabolism[J].Nat Rev Endocrinol,2017,13(12):731.[12]　GRAHAM MJ,LEE RG,BRANDT TA,et al.Cardiovascular andmetabolic effects of ANGPTL3antisense oligonucleotides[J].NEngl J Med,2017,377(3):222.[13]　XU YX,REDON V,YU H,et al.Role of angiopoietin⁃like3(ANGPTL3)in regulating plasma level of low⁃density lipoproteincholesterol[J].Atherosclerosis,2018,58(268):196. [14]　GAO X,XU H,LIU H,et al.Angiopoietin⁃like protein3regulatesthe motility and permeability of podocytes by altering nephrinexpression in vitro[J].Biochem Biophys Res Commun,2010,399(1):31.[15]　刘娇娇,徐虹,戴如凤,等.血管生成素样蛋白3参与肾病综合征高脂血症发生的初步探索[J].中华肾脏病杂志,2015,31(9):669.[16]　杨芳,何泽云.禾肾丸对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾组织nephrin蛋白表达影响[J].中国实验方剂学杂志,2017,23(9):158.[17]　李旭华,何泽云,彭亚军,等.禾肾丸对阿霉素肾病大鼠肾组织PI3K及PENT蛋白表达的影响[J].上海中医药大学学报,2016,30(6):69.(本文编辑　刘畅)(上接第285页)[10]　ZHU S,GILBERT JC,HATALA P,et al.The development andcharacterization of a long acting anti⁃thrombotic von Willebrandfactor(vWF)aptamer[J].J Thromb Haemost,2020,18(5):1113.[11]　ISHIHARA J,ISHIHARA A,STARKE RD,et al.The heparinbinding domain of von Willebrand factor binds to growth factorsand promotes angiogenesis in wound healing[J].Blood,2019,133(24):2559.[12]　努尔巴哈尔㊃热木图拉,彭辉.血管性血友病因子在心血管相关疾病中的研究进展[J].新疆医学,2018,48(11):1234.[13]　王静,吴婵,周睿,等.乙酰肝素酶对血管内皮细胞增殖㊁迁移及血管活性因子表达的影响[J].中国医药生物技术,2018,13(3):213.[14]　阳喜喜,陈庆伟,叶力文,等.microRNA⁃145通过靶向抑制CREB调节内皮细胞增殖和血管新生[J].第三军医大学学报,2018,40(13):1213.[15]　宋凯瑞,李霞.炎症与动脉粥样硬化关系的研究进展[J].医学综述,2021,27(24):4789.[16]　林婷庭,司徒炜宸.急性脑梗死患者MRI表现与炎症㊁凝血及血管新生因子的关系研究[J].海南医学,2021,32(4):430.[17]　陈德才,王雅,马从乾,等.miR⁃23b通过MAPK信号通路对H2O2诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用[J].中国老年学杂志,2019,39(1):136.[18]　朱沈辉,郦俊.过表达HMGA1影响动脉粥样硬化血管内皮细胞凋亡和p38MAPK信号通路[J].中国老年学杂志,2021,41(24):5718.[19]　XU S,YANG BB,TAO TT,et al.Activation of alpha7⁃nAChRsprotects SH⁃SY5Y cells from1⁃methyl⁃4⁃phenylpyridinium⁃induced apoptotic cell death via ERK/p53signaling pathway[J].J cell physiol,2019,234(10Pt.2):18480.[20]　安丽平,于琨,耿海波,等.丹酚酸B抗氧化应激损伤机制的研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2019,25(22):227.(本文编辑　刘畅)。

２ ２ 血 生 化指标 ．
实验结束 时 ， 模型 组 表现为 明显 高
脂 血症 及低 蛋 白血症 。见 表 ２ 。
２ ０包头来自医学院
学
报
第２ ７卷
表 ２ 各 组 小 鼠 Ｔ Ｃ 、 Ｐ Ａｌ、 ＵＮ、ｃ 清 水 平 （ ±ｓ） Ｇ、 ｈ Ｔ 、 ｂ Ｂ Ｓｒ血
肾小球基底膜上皮细胞轻度肿胀 ， 部分基底 膜断裂 ， 突广泛融 合。结论 ： 足 一次尾 静脉注 射阿霉 素 ７ ５ｍｓｋ 可 获得 肾 ． ／ ｇ
脏形态改变及临床表现类似于人类 肾病综合征 的阿霉素 肾病小 鼠模 型。 关键词 阿霉素 ； 肾病 ； 鼠； 小 模型
用 阿 霉 素 （ Ｒ） 立 大 鼠 肾 损 害 模 型 已 经 成 ＡＤ 建 为 经 典 方 法 川 ， Ｒ在 体 内药 物 代 谢 酶 的 作 用 下 ， ＡＤ
２ 结 果
１ １ 材料 ．
３ Ｏ只健 康 雄性 昆 明种 小 鼠 ， 重 ２ ． 体 ０ １±
２２ｇ 由贵 阳 医学院 动物室 （Ｋ×Ｋ（ ）０２— ０ １ ． ， Ｓ 黔 ２０ ００ ）
提 供 。阿 霉 素 （ 圳 万 乐 药 业 有 限 公 司 生 产 ， 号 深 批
Ｈ ４ ２３９ 。 ４ ０ ４ ５ ）
皮细胞改变图3模型组电镜检查20000箭头示肾小球基底膜上皮细胞改变3讨论建立adr肾损害是一经典的实验性肾病模型以往实验多用大鼠且复制模型途径及注射药物方法有多种
第 ４期
马宝慧 ， 木樨草素对动脉粥样硬化大 鼠血 浆脂蛋 白的影 响 等．
药 房 ，０ ０２ （ ９ ：８７—１ １ ． ２ １ ，１ １ ） １０ ８０
报告 如下 。
１ 材 料与 方法

ｍ ｍｏｄｅｌ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｆｕｌ ｂｙ ｔｍｉｌａｔｅｍｌ ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｙ ａｎｄ ｉｎｊｅｃａｎｇ ａｄｒｉａｍｙｅｉｎ
ｗｉｔｈ ｆｅｍｏｒａｌ
ｖｅｉｎ岫ｅｃｔｉｏｎ．
ｆＫｅｙ ｗｏｒｄ】Ｇｉｏｍｅｎｒｌｏｓｄｅｏｒｓｉｓ；Ａｄｒｉａｎｒｙｒｉｎ；ＡｎｉｍａＩ ｍｏｄｅｌ
慢性进展性肾病特征是血肌酐渐渐升高，病理表现为局灶节 段肾小球硬化（ＦＳＧＳ）和肾间质纤维化。研究其动态变化及机制， 已成为近几年肾病学领域的研究热点。建立稳定且操作简单易行 的动物模型是这一研究的基础。我们根据文献制作方法，在预实 验中发现制作本模型时给大鼠尾静脉注射难度大，常穿破静脉不
手术后第８天大鼠戊巴比妥钠麻醉后备皮消毒，在假股沟切开皮
肤，分离肌肉，暴露出股静脉，持ｌｍｌ的针筒刺入股静脉，推注阿 霉素４．０ｍｇ／ｋｇ，．注射后压迫止血约１分钟，缝合皮肤。 另钋对照组８只行假手术，打开腹腔，剥离肾脏脂肪包膜，关闭腹 腔，缝合切口。假手术后分别于第８天右股静脉注射蒸馏７Ｊ（ｏ．５１１１１。 ３检测指标与方法
ＨｅＩｉｃｏｂａｃｔｅｒ
ｈｕｍａｎ
ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ
ｇａｌＩｓｔｏｎｅｓ［Ｊ１．Ｓｃａｎｄ
ａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｊ
Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒ０１．２００２，３７（０：１１２－１１９． 【４】
ｐｒｅｓｅｎｃｅ Ｓｉｌｖａ ｏｆ ｃＰ，Ｐｅｒｅｉｒａ－Ｌｉｍａ ｉｎ
ＪＣ．Ｏｌｉｖｅｉｒａ＾Ｇ．ｅｔ
尿蛋白定量测定
分别于手术前一天（造模前）、阿霉素
本实验例数较小有关，有待扩大例数进—步研究本模型死亡率。 总之，通过单侧。肾切除＋阿霉索（４．Ｏｍｇ／ｋｇ）股静脉注射制备 慢性进展性肾病大鼠模型切实可行。该模型有制作方法简单，模型 制备周期短，均一性较高，类似与人类的进行性肾脏病等优点。团 参考文献

感染性脑水肿
• 检测指标 • 制备脑组织切片后HE染色，在光学显微镜下观察组织病理变化 • 脑组织含水量，按Ellion公式计算脑组织含水量。脑组织含水量
(％)=(湿重．干重)／湿重×100％ • 免疫组化方法检测β1整合素和MMP-2的含量； • RT-PCR检测脑组织β1整合素mRNA的表达：
含水量和EB含量的测定，余5只不注射EB，脑组织标本用于免疫 组化染色和RT-PCR。
感染性脑水肿
• 2．动物模型的制作
• 将实验动物以10％水合氯醛(350mg／kg)腹腔注射麻醉，麻醉成 功后取仰卧位固定，颈正中切口，分离左颈总动脉，左颈内动脉， 左颈外动脉和右颈外静脉。结扎左颈外动脉，动脉夹暂时夹闭左 颈总动脉近心端，LPS组直接从左颈总动脉远心端向脑内注入LPS。 注射EB组随后经右颈外静脉近心端注入2％EB(2ml／kg)，于6h处 死。注射EB的动物观察至相应时间后断脊髓处死，开颅取脑，留 取脑组织标本。未注射EB的动物为使免疫组化背景清晰，观察至 相应时间点行冰生理盐水灌注心脏后断头处死取脑。
每组10只。 • 造模前大鼠于代谢笼内适应性喂养3d。
肾性水肿
• 2 造模方法
• 阿霉素水肿模型
• 首次尾静脉注射阿霉素按照4mg/kg大鼠体重量，第2次于第8d以同样的方法按照3.5mg/kg体重注射， 注射5d。
• 大鼠肾阴虚水肿模型
• 每日按照15mg/100g体重灌胃给予甲状腺素混悬溶液，连续21d。首次尾静脉注射于第1d下午14:00按 照4mg/kg体重注射阿霉素溶液，第2次于7d后以同样的方法按照3.5mg/kg体重注射，注射5d。
感染性脑水肿
• 1．材料与分组 • 1．1实验动物与主要药品与试剂 • 健康1月龄清洁级SD大鼠，雌雄不限，体重70-100g，平均85士

网络出版时间：２０２２－０６－０６１１：２７　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０６５．Ｒ．２０２２０６２７．１４２９．００１．ｈｔｍｌ肾病综合征大鼠体内钠离子分布研究倪良厚１，２，杨　沫１，２，李曼曼１，２，王运来１，２，宣自华１，２，许　钒１，２２０２２－０５－０９接收基金项目：国家自然科学基金（编号：８１９７４５３６、８１５７３７２０）作者单位：１安徽中医药大学药学院，合肥　２３００１２２中药复方安徽省重点实验室，合肥　２３００１２作者信息：倪良厚，男，硕士研究生；许　钒，男，博士，教授，博士生导师，责任作者，Ｅ ｍａｉｌ：８４５５７０８５１＠ｑｑ．ｃｏｍ摘要　目的　探讨阿霉素肾病综合征模型大鼠的潴留钠存储位置及其发生机制。

方法　采用两次尾静脉注射阿霉素（第１周４ｍｇ／ｋｇ、第２周２ｍｇ／ｋｇ）方法建立肾病综合征模型。

检测尿液及血液生化指标；干燥法检测大鼠皮肤含水量；原子吸收光谱法检测皮肤钠含量；ＥＬＩＳＡ法检测糖胺聚糖含量；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测肾皮质张力反应性增强因子结合蛋白（ＴｏｎＥＢＰ），血管内皮生长因子Ｃ（ＶＥＧＦＣ），血管内皮生长因子受体３（ＶＥＧＦＲ３），淋巴管内皮细胞受体 １（ＬＹＶＥ １）表达；免疫荧光法检测肾皮质淋巴管分布。

结果　模型组大鼠尿蛋白排泄增高（Ｐ＜０ ０５或０ ０１），且肾功能、血脂指标异常，提示模型建立成功。

尿Ｎａ＋排泄下降（Ｐ＜０ ０５或０ ０１），皮肤钠含量（Ｐ＜０ ０１）、糖胺聚糖含量升高（Ｐ＜０ ０１），肾皮质ＴｏｎＥＢＰ，ＶＥＧＦＣ，ＶＥＧＦＲ３，ＬＹＶＥ １蛋白表达升高（Ｐ＜０ ０５或０ ０１），肾皮质淋巴管密度增加（Ｐ＜０ ０１）。

结论　肾病综合征大鼠机体发生钠潴留，且潴留的钠存储在皮肤的机制可能与ＴｏｎＥＢＰ／ＶＥＧＦＣ／ＶＥＧＦＲ３有关。

关键词　肾病综合征；钠潴留；淋巴；皮肤；钠离子中图分类号　Ｒ６９２文献标志码Ａ文章编号１０００－１４９２（２０２２）０７－１０５４－０６ｄｏｉ：１０．１９４０５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ１０００－１４９２．２０２２．０７．００８ 钠水潴留是肾病综合征（ｎｅｐｈｒｏｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＮＳ）水肿发生的主要因素［１］。

[标签:标题]肾纤维化动物模型特点与研究进展本文关键词：纤维化，研究进展，模型，动物肾纤维化动物模型特点与研究进展本文简介：摘要：肾纤维化为慢性肾病发展至终末期肾衰所必经的相同病理路径，病理改变分为肾间质纤维化和肾小球硬化。

肾纤维化的理想动物模型对慢性肾病发病机制的研究及其治疗药物的研发等存在现实意义。

目前，肾纤维化动物模型制作包括药物或毒物诱导、手术模型以及基因敲除等多种模型，不同动物模型肾功能、肾组织病理等方面各具特肾纤维化动物模型特点与研究进展本文内容：摘要：肾纤维化为慢性肾病发展至终末期肾衰所必经的相同病理路径，病理改变分为肾间质纤维化和肾小球硬化。

肾纤维化的理想动物模型对慢性肾病发病机制的研究及其治疗药物的研发等存在现实意义。

目前，肾纤维化动物模型制作包括药物或毒物诱导、手术模型以及基因敲除等多种模型，不同动物模型肾功能、肾组织病理等方面各具特点，尚无法完全模拟人类慢性肾疾病，这提示慢性肾疾病发病的复杂性，对于其病理机制认识与防治具有重要意义。

关键词：肾纤维化；肾间质纤维化；肾小球硬化；动物模型；肾纤维化是肾单位损坏，间质中成纤维细胞的大量增生及肌成纤维细胞的形成、细胞外基质生成过度并沉积发生的肾小球硬化（glomerulosclerosis, GS）、肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis, RIF）, 并最终丧失肾功能。

确诊肾纤维化的金指标为肾组织的病理学检查，包括观察肾小管、间质和肾小球基底膜的病理形态。

肾纤维化的大体病理观察主要是：肾脏明显硬化、减小，表面不平整、颗粒样变；镜下观：肾间质炎性细胞弥漫性浸润、间质纤维组织增殖、纤维化形成；肾小球大部分发生硬化、透明样改变，毛细血管破坏，系膜基质增生；由于肾小球血流受阻，而造成肾小管发生萎缩，病变轻处，残余肾代偿性增大；生化检测主要表现在血清尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）、血清肌酐（serum creatinine, SCr）、24 h尿蛋白定量异常[1].诱导肾纤维化的方法主要有药物或毒物（氯化汞、环孢素A、肾毒性药物、氨基糖苷类药物等）、手术（输尿管单侧结扎、5/6肾切除模型、肾缺血-再灌注等）、单侧肾切除复合AngⅡ等复合因素以及转基因模型等等，本文对常见模型综述如下。

１ ２ ２ 实 验方 法 ：１ ２ ｈ尿 蛋 白检 测 ： 全 自动 生 化 分 析 ． ． （）４ 用
仪 检 测 ２ ｈ尿 蛋 白定 量 。２ 血 生 化 检 测 ： 全 自动 生 化 分 析 ４ （） 用 仪 检 测 血 清 总 胆 固醇 （ Ｃ）甘 油 三 酯 （ Ｇ） 总 蛋 白 （ ） 白 Ｔ 、 Ｔ 、 ＴＰ 、
组 注 射 等 量 生理 盐 水 ， ６ ， 集 所 有 大 鼠尿 测 ２ｈ尿 蛋 白 第 天 收 ４
量 。 蛋 白＞ ３ｍｇ ２ ｈ被 视 为 成 功 ， 除 不 符 合 标 准 ４ 。 尿 ０ ／４ 去 只 其 余 肾 病 大 鼠 （２ ） 随 机 分 为 ４ ， 病 模 型组 （ ＝ １ ）强 的 ４只 ， 组 肾 ｎ ２，
１ Ｂ 与 泼尼 松 联 合 治 疗 组 明 显 优 于 两 者 单 一 治 疗 组 ， ８Ｐ Ｉ １ 和 ＩＮ一７在 肾病 进展 中起 重要 作 用 ，Ｌ １Ｂ 可 能 通过 降 低 Ｌ一 ８ Ｆ Ｉ一 ８ Ｐ
Ｉ Ｌ一１ 和 Ｉ Ｎ一７而发 挥 治疗 作 用 。 ８ Ｆ
关键 词 ：阿 霉 素 肾 病 ； 尼 松 ； 泼 白介 素 １ 一 结 合 蛋 白 ； 白尿 ８ 蛋
血 清 Ｉ １ 、Ｆ 一 ７明 显 高 于 对 照 组 （ ＜ ０ ０ ） Ｌ一 ８ Ｉ Ｎ Ｐ ． １ ；而 泼 尼 松 与 Ｉ Ｌ～ １ Ｂ 治 疗 组 分 别 可 降 低 Ｉ Ｎ一 ７和 Ｉ ８Ｐ Ｆ Ｌ一 １ 水 平 ８ （ ＜ ０ ０ ） 但 联 合 治 疗 组 降 低 Ｉ Ｎ一７和 Ｉ 一 １ 水 平 更 明 显 ， 单 一 治 疗 组 比 较 差 异 有 显 著 性 （ 尸 ．１， Ｆ Ｌ ８ 与 Ｐ＜ ０ ０ ） ． １ 。结 论 ：Ｌ一 Ｉ

安徽医科大学学报 ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ ２０２１Ｊｕｎ；５６（６）
பைடு நூலகம்
·９３３·
２０１７－００６）。随机分为对照组和模型组，模型组大 鼠尾静脉注射阿霉素 ４ｍｇ／ｋｇ，隔周再次注射阿霉 素 ３５ｍｇ／ｋｇ制备肾病模型，整个成型实验连续进 行 ４周［３］。实验过程中，大鼠单独置于特制代谢笼， 禁食不禁水，收集 ２４ｈ尿液，取上清液，采用双缩脲 法测定 ２４ｈ尿蛋白含量。造模前及造模后每周检 测 １次 ２４ｈ尿蛋白，连续 ４周，成模后再连续检测 ８ 周。 １．３ 实验分组给药及肾囊注射术 １．３．１ 实验分组给药 雄性 ＳＰＦ级大鼠，取成模 大鼠随机分为 单 纯 模 型 组 （Ｍｏｄｅｌ组 ）、受 试 药 辅 料 组（Ｅｘｃ组 ）、受 试 药 高 中 低 剂 量 组 （ＤｅｘＩ２８、１４、 ０７ｍｇ／ｋｇ）和地塞米松阳性对照组 （Ｄｅｘ０１ｍｇ／ ｋｇ）。对照组随机分为正常对照（ＷＴ组）和假手术 组（Ｓｈａｍ组 ），假 手 术 组 进 行 手 术 操 作 而 没 有 肾 内 注射，模型组处以手术操作以及 ＤｅｘＩ的肾囊穿刺， 辅料组进行手术操作以及在肾囊内注射对照赋形剂 （１４ｍｇ／ｋｇ，Ａｃｃｅｓｓｏｒｙ组），受试药组分别在肾囊内 一次性地塞米松注射给药 （２８、１４、０７ｍｇ／ｋｇ）。 阳性药对照组采用灌胃给药地塞米松（０１ｍｇ／ｋｇ， ｑｄ），连续给药 ８周。 １．３．２ 肾 囊 注 射 术 水 合 氯 醛 （３００ｍｇ／ｋｇ）麻 醉 大鼠，无菌条件下行背部正中切口，逐层剥离皮肤、 肌肉、腹膜，分别暴露大鼠两侧肾囊，使用特制针进 行药物的肾囊内注射，完成注射后对手术切口逐层 缝合，最后在切口处滴加青霉素注射液（现配现用） 进行消毒［４］。 １．４ 阿霉素肾病大鼠肾功能检测 造模前及造模 后每 ２周进行 １次血肌酐（ｓｅｒｕｍｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ，ＳＣＲ）和 尿素氮 （ｂｌｏｏｄｕｒｅａｎｉｔｒｏｇｅｎ，ＢＵＮ）检 测。 采 样 时 对 大鼠使用内眦静脉取血后处理得到血清，采用碱性 苦味酸法分光光度计检测比 色，测 算 血 清 ＳＣＲ含 量。采用氨基硫脲与二乙酰一肟在磷酸溶液反应方 法分光光度计检测比色，测算血清 ＢＵＮ含量。 １．５ 阿霉素肾病大鼠肾脏 ＨＥ病理组织学检查 实验结束后，麻醉大鼠，用预冷 ０９％氯化钠溶液和 浓度为 ４％多聚甲醛灌注后取肾，依次用 ４％多聚甲 醛及 ２０％和 ３０％蔗糖水溶液固定。按标准操作制 备石蜡切片。每组选择 ４只动物制作切片，使用光 学显微镜（２００×）观察肾皮质，每张动物切片选取 ５ 个高倍视野。。 １．６ 免疫组织化学法检测阿霉素肾病大鼠肾组织 Ｎｅｐｈｒｉｎ的表达 大鼠腹腔注射水合氯醛（３５０ｍｇ／

论著收稿日期:2006-01-23作者简介:孔令媛(1974 ),女,硕士研究生低蛋白血症大鼠模型的建立孔令媛,刘 莉,梅其炳(第四军医大学药理学教研室,陕西西安 710032)摘要:目的:探讨大鼠尾静脉注射阿霉素(A dria m ycin ,ADR )建立低蛋白血症模型的可行性。

方法:SD 大鼠尾静脉一次性注射阿霉素5mg /kg 、7.5mg /kg 及10m g /kg 。

观察给药后大鼠一般情况及尿量,检测尿蛋白、血清总蛋白、白蛋白、胆固醇、甘油三酯等指标,观察肾组织病理学变化,以嘌呤霉素为阳性对照。

结果:阿霉素的三个剂量中,7.5mg /kg 及10m g /kg 组第4天开始出现尿蛋白,第15天血清总蛋白及白蛋白明显下降。

两组大鼠均出现蛋白尿,血清白蛋白及总蛋白明显下降,血清胆固醇及甘油三酯升高,肾脏病理学结果符合低蛋白血症变化,但10m g /kg 组大鼠死亡率高。

嘌呤霉素组亦出现类似变化。

结论:大鼠尾静脉注射阿霉素7.5mg /kg ,15d 后可建立低蛋白血症动物模型。

关键词:低蛋白血症; 动物模型; 阿霉素; 嘌呤霉素中图分类号:R 591.2 文献标识码:A 文章编号:1007-8622(2006)04-0282-03Establish m ent of adriam yc i n -i n duced hypoprotei n e m ia m odel i n ratsKONG L i n g-yuan ,L I U L,i ME I Q i-bing .(D epart m en t of Phar m acology ,Fourth M ilitar y M edicalU niversity ,X ia 'n 710032,China )Abst ract :Objective :To study the feasi b ility of establishm ent of hypoproteine m ia m odel induced by adria myc i n (ADR )i n rats ,and prov ide a considerab le an i m alm ode l for investigati n g the m echanis m and effective t h erapy o f hypoprote i n e m ia .M et hods :SD rats rece i v ed a sing le i n travenous i n jection o fADR v ia ta il vein (5.0m g /kg ,7.5m g /kg ,and 10m g /kg ,respecti v e l y ).A fter the dr ug adm i n istration ,the genera l condition ,ur i n ary production and t h e onset ti m e o f pr o te i n uria w ere observed .The urinary pro teins ,serum tota l protein ,serum a l b um i n ,serum cho lestero l and trig l y ceri d e w ere detected ,and the renal patho log ical exa m i n a ti o n w as perfor m ed .The rat mode l o f hypoprote i n e m ia induced by puro m yci n w as served as positi v e contro l group .R esults :The pr o te i n uria developed on day 4i n 7.5mg /kg and 10m g /kg g r oups .H ypopro teine m ia w as successfully i n duced on day 15,w ith a decrease of ser um album i n and to ta l pr o te i n and an i n crease of ser um cho lestero l and tri g lyceri d e .Renal patho log ica l results w ere consistent w ith the changes of hypoprote i n e m ia ,but t h e death rate i n 10m g /kg group w as h igh .The si m ilar resu lt w as also found i n positive con tro.l C onclusion :The rat m ode l of hypoprotei n e m ia can be successfully i n duced on day 15after sing le i n travenous injection o fADR at the dose of 7.5mg /kg .K ey w ords:H ypopr o te i n e m i a ; An i m a lm ode;l Adria myc i n ; Puro m yci n 低蛋白血症是临床常见症状[1],主要出现于肾病综合征、肝硬化、重度妊高症、肺心病及重型颅脑损伤、严重烧伤等。

C hi n J Cl i ni cia ns( El ect ronic Ed i t ion) ， Ma y 1， 2011， V ol . 5， No. 9
� 2 58 3 �
2］ 是早期诊断急性肾损害的较好指标［1， C ys C 几乎完全被肾小球滤过， 然后由肾小管重吸收， 不受炎性 � 性
别� 肌肉 � 饮食 � 年龄变化的影响� 但 C ys C 在肾小球肾病早期诊断中的作用报道甚少， 本研究通过观察阿霉 素肾病大鼠血清 C ys C � 血清尿素氮 ( BUN) � 血清肌酐 ( Scr ) � 肾组织病理学等各项指标的变化， 探讨普罗布 ， C ys C � 考对阿霉素肾病的保护作用 并探讨 对肾小球肾病的诊断价值 材料与方法 1. 实验动物 : 选择健康雄性 SD 大鼠 40 只， ， 体重 180 200 g 由华中科技大学同济医学院动物实验中心 � 1 ， � 提供 普通饲料喂养 周后 尿蛋白检测均为阴性 2. 药品与试剂: 普罗布考( 畅泰 ) ， 25 g / 由承德颈复康药业集团有限公司生产 ， 剂量为 0. 片， 国药准字 H 10960161 ， 070801 � ， 10 m g / m l ， 生产批号 盐酸阿霉素注射液 剂量为 由意大利法玛西亚普强公司生产 �血 清超氧化物歧化酶 ( sup erox i de di sm uta se， SOD ) 和丙二醛( m al ond i al d ehyd e， MD A) 测定， 用 SOD 和 MD A 检测 试剂盒 ( 武汉科瑞生物科技公司 ) ， 按产品说明书操作步骤进行测定 � 3 . 分组和模型制备: 将 40 只大鼠随机分为正常组( A 组 ) 10 只和造模组 3 0 只� 在不麻醉的状态下， 造 模组大鼠尾静脉一次性注射阿霉素 6 m g / kg ， 制备阿霉素肾病大鼠模型; A 组大鼠尾静脉一次性注射生理盐 水1 m l �1 周后阿霉素肾病大鼠模型制备成功， 将造模组大鼠随机分为模型组( B 组) 和治疗组( C 组) ， 每组

吴 汉利① 孙 伟② 万毅 刚③ 周 栋② 刘 丽② 邵 家德② 朱 萱 萱② △
［ 摘 要］ 目的： 究雷至胶囊对阿霉素 肾病 大 鼠肾小球 系膜 基质增 生的抑制作 用 ， 讨其抗 系膜基 质增 生的分子机 研 探
制。方法 ： 用阿霉素静脉 注射建立 阿霉素 肾病模型 ， 实验 动物分 为模型组 ， 采 将 雷至胶 囊组及 正常组 ， 别留取各 组第 ０ ２ 分 、、
ｔ ｎ ｍｉ ｉ ｅｔ ｎｍｉ ｏ ｃｐ ｏ ｅ ａ ｔｅｉ ｕｙｏ ｒｃｓｅ ｏ ｏ ｏ ｙｅｗ ｓ ｄ ｅ ｅ ｔ ｙ ａｍｉ ｓ ａｉ ｆ ｅ ｈ ｒ ｓ ｓ ｏ ｅ ｒ ｃ ｓ ｙ ｓ ｗ ｔ ｔ ｈ ｊｒ ｎ ｆ ｐ ｏ ｅｓ ｆ ｄ ｃ ｔ ａ ｉ ｄｉ ｒ ａ ｎ ｌ ｏ ｃ ｒ ｏ ｈ ｄ ｈ ｎ ｍｔ ｓ ｐ ｒ ｖ ｎ ａ ｂ ｄ ｎ ｔ ｔ ｎｏ ｉ ｉ ｉｒ ｏ Ｌ ｚ
４ 实验 室检查
Ａｕ ７ ０ 检测 。 ２０ ）
４２ 光镜 肾组织切 片经 常规脱 水、 ． 脱蜡后行 ｎ 染色 。光 镜 下 观察 肾小球 及 间 质 小 管 的 病 变 程 度 。每张切片在 ４０倍 目镜下 随机取 ６个完整肾小 ０ 球， 应用图像分析系统测定 肾小球面积（ ） Ｇ 与系膜基 质面积（ ， 系膜基质指数（ Ｇ ， Ｍ）计算 Ｍ／ ） 此值 即为肾 小 球基质 相对 面积 。 ４３ 免疫蛋白印迹 用含蛋 白酶抑制剂 的组织 ． 裂解液 （ ０ｍｍｏ／ ｉ，Ｈ ． ，５ ｍｏ／ Ｃ ， ３ ｌＬ Ｔｒ ｐ ７ ５ １ ０ ｍ ｌＬ Ｎａ １ ｓ
材 料 与方法 常， 最终导致肾小球硬化。多种细胞及细胞 因子共 同 １ 药 品 雷 至胶 囊 由雷 公 藤 、 贞 子 等 中药 组 女 参与这一过程 ， 形成相互作用的复杂调控 网络并恶性 循环 ， 重上述 病理 变 化 因此 ， 期 保 护 肾功 能 ， 成 ， 粒含 雷公 藤 ２ｇ 女 贞子 １ｇ和旱 莲草 １ｇ 购 自 加 ２。 早 每 、 ， 由江苏省 中医院制剂室鉴 防止 肾小 球 硬 化 是 慢 性 肾衰 竭 治 疗 中 的 重 要 环 节 。 江苏省卫生医药有限公司 ， 现代 医学抗 肾小 球硬 化治 疗 效果 尚不 理 想 ， 中药 具 有 定 并进 行加 工 ； 阿霉 素 ， 深圳 万乐 药业 有 限公 司生产 。

SD大鼠阿霉素慢性心力衰竭模型的建立与评价吴运香;张野;谢春林;张书杰;解翔;姜凡;陈志武【摘要】Aim To establish and evaluate an adriamycin-induced chronic heart failure model by tail vein injection in Sprague Dawley ( SD ) rats. Methods Adult male SD rats were randomly divided into two groups : the control group ( CON,n = 8 ) and the adriamycin-induced heart failure group ( ADR,n = 20 ).All rats in ADR group received 2 mg · kg-1adriamycin as an intravenous tail vein infusion once a week for 6 weeks at a total dose of 12 mg · kg-1 ; meanwhile in CON group, rats received an equal volume of 0. 9％ sodium chloride intravenously. Transthoracic: echocardiography was performed to observe cardiac function including left ventricular end-diastolic diameter( LVEDD ) and end-systolic diameter ( LVESD ) and calculate left ventricular fractional shortening ( LVFS ) and ejection fraction ( LVEF ) 2 weeks later after the last injection. The pathological c:hange was analyzed by HE and Van Gieson ( VG ) stain. The plasma concentration of brain natriuretic peptide ( BNP ) was determined by euzymelinked immunosorbent assay ( ELISA ). Results Compared with CON group, LVEDD and LVESD were increased in ADR group, and LVFS and LVEF were significantly decreased ( P ＜ 0. 01 ). The pathological changes by HE stain in ADR group were part of myocardial fiber fracture and myocardial periacardial inflammatory infiltration. Collagen volume fraction ( CVF ) and perivascular circumferential collagen area ( PVCA )by VG stain were significantly higher( P ＜ 0. 01 ) than CON group. And the level of plasmaBNP was significantly higher than that in CON group. Conclusions Adriamycin at a multiple intravenous dose of 2. 0 mg · kg-1 can be used to establish a reliable model of non-ischemia chronic heart failure in SD rats and lead to a decline in ventricular function and pathological changes.%目的通过尾静脉注射阿霉素建立SD大鼠慢性心力衰竭模型,并对其进行评价.方法成年♂SD大鼠随机分为两组:正常对照组(CON组,n=8)和阿霉素心力衰竭组(ADR 组,n=20).ADR组尾静脉注射阿霉素2 mg·kg-1,每周1次,计6周,累积剂量达12 mg·kg-1;CON组静脉注射等容积0.9%的氯化钠溶液,周期同前.末次注射2周后超声心动图测定心功能包括左心室舒张末内径(LVEDD)和收缩末内径(LVESD)并计算左室短轴缩短率(LVFS)及射血分数(LVEF);病理学检测包括HE及VG染色观察心肌组织形态学改变;ELISA法测定血浆BNP浓度.结果与CON组相比,ADR组大鼠LVEDD和LVESD增加,LVFS和LVEF明显下降(P<0.01);HE染色可见部分心肌纤维断裂,心肌间质炎细胞浸润;VG染色心肌间质胶原容积分数(CVF)及心肌血管周围胶原面积(PVCA)明显增加(P<0.01),心肌纤维化明显;血浆BNP水平升高(P<0.01).结论静脉多次注射阿霉素能够导致SD大鼠心功能降低和心肌组织形态学改变,成功建立可靠的非缺血性慢性心力衰竭模型.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2011(027)008【总页数】4页(P1170-1173)【关键词】动物模型;大鼠;阿霉素;心力衰竭;超声心动图;脑利钠肽【作者】吴运香;张野;谢春林;张书杰;解翔;姜凡;陈志武【作者单位】安徽医科大学第二附属医院麻醉科,安徽,合肥,230601;安徽医科大学第二附属医院麻醉科,安徽,合肥,230601;安徽医科大学第二附属医院麻醉科,安徽,合肥,230601;安徽医科大学第二附属医院超声诊断科,安徽,合肥,230601;安徽医科大学第二附属医院超声诊断科,安徽,合肥,230601;安徽医科大学第二附属医院超声诊断科,安徽,合肥,230601;安徽医科大学药理学教研室,安徽,合肥,230032【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.11;R363-332;R540.45;R541.61;R979.1慢性心力衰竭是各种心血管疾病发展的终末阶段，近年来呈上升趋势，严重威胁人类的健康。

ｎ ｉ ｓ ｍ ｉ ｎ Ａｄ ｉ ｆ ａ ｍｙ ｅ ｉ ｎ — ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｎ ｅ ｐ ｈ ｒ ｏ ｐ ａ ｔ ｈ ｙ ｒ ａ ｔ ｍｏ ｄ ｅ １ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｔ Ａｄ ｒ ｉ ａ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ｎ ｅ ｐ ｈ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｗ ａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｉ ｎ —
【 摘 要】目的 研 究阿霉 素肾病模 型不同时相 中肾病蛋 白 （ ｎ ｅ ｌ ａ ｈ ｒ ｉ ｎ ） 、 Ｏ ｔ 一 平 滑肌肌 动蛋 白 （ — Ｓ ＭＡ） 、基质 金属蛋 白酶
（ ＭＭ Ｐ ） 一 ９表 达 变 化 。 方 法 采 用 间 隔 ２周 ２次 尾 静 脉 注 射 阿 霉 素 的 方 法 复制 大 鼠 阿霉 素 肾病 模 型 ， 实 验 分 对 照组 （ 正 常大鼠 ２ ８只 ） 和模型组（ 阿霉 素 肾病 大 鼠 ２ ８只 ） ， 观察 ２ 、 ４ 、 ８ 、 １ ２周 各 项 指 标 的变 化 ， 包括 ２ ４ ｈ尿 蛋 白 、 血 浆 白 蛋 白 和 总 胆 固 醇 的检 测 ， 采 用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ — ｂ ｌ ｏ ｔ 法检测肾皮质部 ｎ ｅ ｐ ｈ ｉ ｒ ｎ的蛋 白表 达 ， 采用荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ 检 测 肾组 织 Ｏ ｔ — Ｓ Ｍ Ａ 的 表 达 ，采 用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法 检 测 血 清 ＭＭ Ｐ 一 ９的 表 达 。 结 果 阿 霉 素 肾 病 大 鼠模 型 组 蛋 白尿 持 续 增 加 ， １ ２周末 病理 表 现 为 肾 小
论
著
中 国 医 药 导 报２ ０ １ ３ 年 １ ２ 月 第１ ０ 卷 第 ３ ６ 期
阿霉素肾病模型 中肾病蛋白、 ｏ 【 一平滑肌肌动蛋 白、 基质金属蛋 白酶 一 ９ 表达 的时相变化

Ｅｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｍｅ ｎｔ ｏ ｆ ａ ｒ ａ ｔ ｍｏ ｄｅ ｌ ｏ ｆ ｎｅ ｐ ｈｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ ｄｕｃ ｅ ｄ ｂ ｙ
ｓ ｉ ｎ ｇ ｌ ｅ ｔ ａ ｉ ｌ ｖ ｅ ｉ ｎ ｉ ｎ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｄ ｏ ｘ ｏ ｒ ｕ ｂ ｉ ｃ ｉ ｎ
ｗｉ ｔ ｈ ｉ ｓ ｏ ｔ ｏ ｎｉ ｃ ｓ ａ ｌ ｉ ｎｅ ．１ ２一 ｈ ｏ ｕｒ ｕｒ ｉ ｎｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ａ ｎｄ ｃ ｈ ｅ ｃ ｋ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ １ ２ ｗｅ ｅ ｋｓ ｏ ｎ ｃ ｅ ａ ｗｅ ｅ ｋ ． Ｆｉ ｎ ａ ｌ ｌ ｙ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｔ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ａ ｃ ｉｆ ｒ ｉｃ ｅ ｄ， ｔ ｈ ｅ ｂｌ ｏ ｏ ｄ ｂｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ ｉ ｎ ｄｅ ｘ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｃ ｈ ｅ ｃ ｋ ｅ ｄ，ａ ｎ ｄ ｒ ｅ ｎａ ｌ ｍｏ ｒ ｐ ｈｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｅ ｘ ａ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ｂｙ ｌ ｉ ｇ ｈｔ ａ ｎ ｄ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｎ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ・
ｎａ ｍｉ ｃ ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎｔ ．Ｍ ｅ ｔ ｈｏ ｄｓ Ｔｗｅ ｎ ｔ ｙ — ｓ ｉ ｘ ｍａ ｌ ｅ Ｗｉ ｓ ｔ ａ ｒ ｒ ａ ｔ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｒ ａ ｎ ｄｏ ｍｌ ｙ ｄ ｉ ｖ ｉ ｄｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ａ ｎｄ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕｐ．
单 次 尾 静 脉 注 射 法 阿霉 素 大 鼠 肾病 模 型 的建 立
张勇 ， 张 蓓 ， 宁 华 英 ， 郭云 良 ， 邢广 群 ， 沈 卫