当前位置：文档之家 › 线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的改进

线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的改进

  • 格式：doc
  • 大小：30.50 KB
  • 文档页数：3

线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的改进
1 材料与方法
1. 1 实验动物与分组
成年健康雄性Wistar 大鼠110 只, 体质量
250～300 g ,由山东省医学科学院动物中心提供。

分别应用Zea Longa 法、刘亢丁法及改良法建立脑
缺血再灌注模型各35 只;假手术组5 只。

均为缺血
2 h 再灌注24 h 取材。

1. 2 改良法建立脑缺血再灌注模型
在Zea Longa 线栓法建立MACO 再灌注动物
模型的基础上进行了改良。

具体改良要点如下:术
中垫高大鼠颈部,小针管吸痰;在分离颈动脉鞘过程
中滴少许5 g/ L 普鲁卡因;选择直径0. 28 mm 的尼龙线直接涂硅胶长约0. 5 cm 使其直径为0. 30 mm (勿烧成圆头) ;显露翼腭突动脉不结扎,在插线过程
中当尼龙线进入颈内动脉时,将颈内动脉轻轻拉紧,
先向外旋转15°～20°再向后旋转10°～15°,术中用
灯泡照射保持肛温36～37 ℃。

1. 3 动物模型成功的评价标准
1. 3. 1 神经功能评分采用Longa 等[4 ] 的方法在术
后24 h 进行5 级制评分。

评分标准:1 级(0 分) 无
神经缺损体征;2 级(1 分) 不能充分屈曲对侧前爪;3
级(2 分) 向麻痹侧转;4 级(3 分) 向麻痹侧倾倒;5 级
(4 分) 不能自发行走,意识丧失。

1. 3. 2 梗死灶及脑水肿的测量断头取脑,四氮唑
( TTC) 染色后正常组织呈红色,梗死组织呈白色。

间隔7μm 作连续冠状切片,测量皮质区、基底核区
和两侧大脑半球的面积[5 ] ,通过数学处理计算梗死
的体积。

2 结果
3 种方法的手术时间、动物死亡率、神经功能评
分、梗死体积结果见表1 。

由表1 可知,改良法的手
术时间短、动物死亡率低、神经缺失体征明显、梗死
灶固定( t = 2. 3～6. 7 ,χ2 = 4. 69 、4. 19 , P < 0. 05) 。

见表1 。

假手术组的动物死亡率、神经功能评分、梗
死体积均为0 ,其手术时间为(25. 0 ±7. 3) min 。

表1 改良法和其他方法结果比较
组别n
手术时间
( t/ min)
神经体征
评分
梗死体积
(V / mm3)
死亡率
(χ%)
Zea Longa 法35 51. 0 ±6. 2 2. 0 ±0. 3 118 ±42 25
刘亢丁法35 50. 0 ±5. 2 2. 3 ±0. 1 236 ±38 20
改良法35 25. 0 ±6. 7 3 △ 3. 5 ±0. 2 3 △240 ±42 3 5 # ☆与Zea Longa 法比较, 3
t = 2. 3～6. 7 , P 均< 0. 05 ; #χ2 = 4. 69 ,
P < 0. 05 ;与刘亢丁法比较, △t = 2. 5 、2. 4 , P 均< 0. 05 ; ☆χ2 = 4. 19 , P < 0. 05
3 讨论
3. 1 MACO 再灌注动物模型的优缺点
线栓法建立MACO 再灌注模型的机制是依靠
插线的前端阻塞大脑前动脉,阻止经大脑前动脉反
流的血液;依靠插线的侧壁阻塞颈内动脉和后交通
动脉,从而使大脑中动脉的血液完全中断。

将插线
抽出后达到再灌注的目的。

其优点:不需特殊设备、
不开颅、栓塞部位易控制、重复性好、栓塞机制与临
床脑血栓的机制较为接近。

其缺点:对动物要求严
格(体质量及鼠龄尽可能一致) ;需要一定的显微外
科技术,手术时间长且动物死亡率高( Zea Longa
法) ;动物血管存在变异,部分动物不出现梗死灶。

3. 2 MACO 再灌注动物模型的改良
本结果显示,应用Zea Longa 法和刘亢丁法制
备MACO 再灌注模型,手术时间长和动物死亡率
高。

其原因有三条:一是手术过程中,分离、牵拉迷
走神经引起呼吸困难而窒息死亡;二是刺激颈动脉
窦引起迷走减压反射而死亡;三是由于颈内动脉的
分支翼腭突动脉较粗且其走行方向与颈内动脉一
致,在大多数情况下插线比较容易插入此分支而不
能插入颅内,因此必须先处理之。

但该分支位置深,
手术视野极小,结扎非常困难致使手术时间较长(个
别长达1 h) ,手术打击造成动物衰竭死亡。

如应用
电凝烧灼翼腭突动脉,则很容易损伤其周围血管引
起大出血。

我们体会,制备MACO 再灌注模型过
程中,手术时间大于1 h 或术中出血大于10 mL 时, 动物罕有生存。

基于此点,我们对其进行了以下改进: ①术中垫高大鼠颈部,小针管吸痰,以保持呼吸
道通畅。

②分离颈动脉鞘过程中,滴少许5 g/ L 普
鲁卡因,可以减轻或避免刺激颈动脉窦引起迷走减
压反射而死亡。

③选择直径0. 28 mm 的尼龙线直接涂硅胶长约0. 5 cm 使其直径为0. 30 mm (勿烧成圆头) 。

阻塞线粗细适中,光滑均匀可以避免其直接损伤血管。

④显露翼腭突动脉不结扎,在插线过
程中当尼龙线进入颈内动脉时,将颈内动脉轻轻拉紧,先向外旋转15°～20°,再向后旋转10°～15°。

这样可使翼腭突动脉在起点处折叠,既能将阻塞线顺
利地越过翼腭突动脉而插入颅内,又能保证充分的
再灌注。

⑤术中用灯泡照射动物使其保持肛温36～37 ℃(实验证实大鼠在手术过程中体温下降2～
3 ℃) ,以尽可能保持手术过程中大鼠生命体征的稳定。

经过手术改进,整个手术过程时间可缩短至
20～25 min ,动物死亡率大大降低,神经缺失体征较为明显,梗死灶分界明显且位置较固定。

合集下载

复方脑肽节苷脂注射液激活线粒体自噬改善脑缺血再灌注损伤

复方脑肽节苷脂注射液激活线粒体自噬改善脑缺血再灌注损伤

复方脑肽节苷脂注射液激活线粒体自噬改善脑缺血再灌注损伤王明洋;冯璐;范姝婕;郑吉;李冬梅;杨楠;左萍萍;刘雁勇【摘要】目的：观察复方脑肽节苷脂注射液(CPCGI)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用并探讨其机制。

方法 Sprague-Daw-ley大鼠随机分成假手术组、模型组、CPCGI低剂量治疗组、CPCGI高剂量治疗组、阳性药金纳多组，每组10只。

线栓法制备大鼠大脑中动脉梗阻2h后复灌模型，即刻给药，连续14d。

术后1d、3d、7d和14d行神经功能症状缺损评分，术后14d行贴纸去除及平衡木行走实验，Western blotting检测损伤周围脑组织Beclin1、PINK1及Parkin的表达。

结果术后14 d，与模型组相比，各给药组大鼠神经功能缺损评分降低(P<0.05)，大鼠过杆时间明显缩短(P<0.01)，CPCGI给药组去除两侧前肢贴纸的时间缩短(P<0.05)。

模型组皮层组织中Beclin1及Parkin蛋白表达明显下降(P<0.01)，PINK1蛋白表达明显上升(P<0.01)，CPCGI各组均能逆转该作用(P<0.05)。

结论CPCGI的神经保护作用机制之一可能与激活线粒体自噬，改善线粒体功能有关。

%Objective To investigate the neuroprotective effect and possible mechanism of Compound Porcine Cerebroside and Ganglio-side Injection (CPCGI) on cerebral ischemia-reperfusion injury in rats. Methods Healthy adult male Sprague-Dawley rats were divided into sham group (n=10), model group (n=10), CPCGI low dosage group (n=10) and high dosage group (n=10), and control group (Ginkgo biloba extract, n=10). All the rats was subjected to middle cerebral artery occlusion (MCAO) for two hours and reperfusion except sham group, and received treatment for fourteen days once reperfusion started. They were tested with modified Neurological Severity Score one, three, seven and fourteen days afterMCAO, and adhesive-removal test and beam-walking test fourteen days after MCAO. The expression of Beclin1, PINK1 and Parkin were detected with Western blotting. Results Compared with the model group, the Neurological Severity Score reduced (P<0.05) and the time crossing the beam reduced (P<0.01) in all the medical groups fourteen days after MCAO, and the time removing the adhesive paper reduced in the CPCGI groups (P<0.01). The expression of Beclin1 and Parkin decreased and the PINK1 level increased in the model group (P<0.01), and it was reversed in all the CPCGI groups (P<0.05). Conclusion CPCGI could relieve the cerebral ischemia-re-perfusion injury in rats through the regulation in mitophagy.【期刊名称】《中国康复理论与实践》【年(卷),期】2016(022)007【总页数】4页(P750-753)【关键词】脑缺血再灌注损伤;复方脑肽节苷脂注射液;线粒体自噬;大鼠【作者】王明洋;冯璐;范姝婕;郑吉;李冬梅;杨楠;左萍萍;刘雁勇【作者单位】中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005;中国医学科学院基础医学研究所药理室，北京市100005【正文语种】中文【中图分类】R743.32［本文著录格式］王明洋，冯璐，范姝婕，等.复方脑肽节苷脂注射液激活线粒体自噬改善脑缺血再灌注损伤［J］.中国康复理论与实践，2016，22（7）:750-753. CITED AS:Wang MY，Feng L，Fan SJ，et al.Effect of Compound Porcine Cerebroside and Ganglioside Injection on cerebral ischemia-reperfusion injury in rats［J］.Zhongguo Kangfu Lilun Yu Shijian，2016，22（7）:750-753.脑卒中是目前全球第二大致死性疾病，且致残率最高［1-2］。

消退素D1通过甲酰肽受体2调控小胶质细胞极化改善大鼠脑缺血再灌注损伤

消退素D1通过甲酰肽受体2调控小胶质细胞极化改善大鼠脑缺血再灌注损伤

网络出版时间：２０２１－５－２８１０：１２　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２１０５２７．１４５８．０２０．ｈｔｍｌ消退素Ｄ１通过甲酰肽受体２调控小胶质细胞极化改善大鼠脑缺血／再灌注损伤刘玉莲，巫芳华，杨开令，周　颖，高宇容，刘　微（广州中医药大学基础医学院，广东广州　５１０００６）收稿日期：２０２１－０２－２０，修回日期：２０２１－０４－０５基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１６７３７７２）；广州中医药大学“青年英才培养工程”项目（ＮｏＱＮＹＣ２０１７０１０２）作者简介：刘玉莲（１９９４－），女，硕士生，研究方向：中医药防治心脑血管疾病，Ｅ ｍａｉｌ：１４２４８９５８３９＠ｑｑ．ｃｏｍ；刘　微（１９８０－），女，博士，教授，研究方向：中医药防治心脑血管疾病，通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｗｅｉｌｉｕ１９８０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０２１．０６．０１０文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２１）０６－０７９１－０７中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ３２２ ８１；Ｒ３４１；Ｒ３６４ ５；Ｒ７４３ ３１摘要：目的　探讨消退素Ｄ１（ｒｅｓｏｌｖｉｎＤ１，ＲｖＤ１）是否通过甲酰肽受体２（ｆｏｒｍｙｌｐｅｐｔｉｄｅｒｅｃｅｐｔｏｒ２，ＦＰＲ２）调节小胶质细胞极化，减轻脑缺血／再灌注后的炎症损伤。

方法　运用线栓法建立大脑中动脉栓塞（ＭＣＡＯ）模型，将造模后的大鼠随机分为模型组（ＭＣＡＯ），ＲｖＤ１组和ＲｖＤ１联合ＦＰＲ２抑制剂Ｂｏｃ ２（ＲｖＤ１＋Ｂｏｃ ２）组，另设假手术（Ｓｈａｍ）对照组。

脑缺血后２４ｈ，运用ＴＴＣ染色法检测脑梗死体积和免疫荧光法检测髓过氧化物酶（ＭＰＯ），免疫荧光双染法进行标记ＦＰＲ２／Ｉｂａ １、ＣＤ１６／Ｉｂａ １和ＣＤ２０６／Ｉｂａ １的表达，ＲＴ ｑＰＣＲ法检测Ｍ１型释放的ＴＮＦ α、ｉＮＯＳ、ＩＬ １β和Ｍ２型释放的Ａｒｇ １、ＴＧＦ β１、ＩＬ １０ｍＲＮＡ的表达。

大鼠脑缺血／再灌注过程中血流量和脑组织含水量的变化趋势

大鼠脑缺血／再灌注过程中血流量和脑组织含水量的变化趋势

均可下调ＣＲＥＢ的表达而缓解肝纤维化，降低α ＳＭＡ的表达水平，其作用强度与秋水仙碱相当，且其疗效有一定的量效关系。

提示抑制ＣＲＥＢ的活性是ＢＹＧ抗ＥＨＦ的机制之一，至于ＢＹＧ对ｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢ信号通路其他关键蛋白及其相关的活性因子的影响尚需进一步研究。

【参考文献】［１］　韦凌霞，丁茂鹏，王志旺，等．ｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢ信号通路调控组织器官细胞纤维化及中医药干预作用的研究进展［Ｊ］．中国现代应用药学，２０２０，３７（８）：１０１９ １０２４．［２］　ＬｉＧＸ，ＪｉａｎｇＱＱ，ＸｕＫＳＨ．ＣＲＥＢｆａｍｉｌｙ：Ａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｒｏｌｅｉｎｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，２０１９（１６３）：９４ １００．［３］　ＰｏｖｅｒｏＤ，ＢｕｓｌｅｔｔａＣ，ＮｏｖｏＥ，ｅｔａｌ．Ｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓ：ａｄｙｎａｍｉｃａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ］．ＨｉｓｔｏｌＨｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ，２０１０，２５（８）：１０７５ １０９１．［４］　王志旺，付晓艳，程小丽，等．育阴软肝颗粒剂对肝纤维化大鼠ＴＧＦ β１表达的影响［Ｊ］．中国应用生理学杂志，２０１８，３４（２）：１６９ １７２．［５］　周　滔，刘成海，陈　园，等．气血理论在慢性肝病肝纤维化治疗中的指导作用［Ｊ］．上海中医药大学学报，２００７，２１（２）：３４ ３６．［６］　陈永红，朱正平．朱正平论肝炎病毒的中医病因学属性及治疗切要［Ｊ］．四川中医，２０１２，３０（５）：６ ７．［７］　ＷｅｎＳＪ，ＷｅｉＹＹ，ＺｈａｎｇＸＬ，ｅｔａｌ．Ｍｅｔｈｙｌｈｅｌｉｃｔｅｒｉｌａｔｅａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓａｌｃｏｈｏｌ ｉｎｄｕｃｅｄｈｅｐａｔｉｃｆｉｂｒｏｓｉｓｂｙｍｏｄｕｌａｔｉｎｇＴＧＦ β１／Ｓｍａｄｓｐａｔｈｗａｙａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１９，７５：１０５７５９．［８］　何丽明，倪赛宏，傅水莲，等．双去甲氧基姜黄素对硫代乙酰胺诱导小鼠肝纤维化的影响及机制［Ｊ］．中药材，２０１９，４２（２）：４３０ ４３４．［９］　窦慧馨，张得钧．酒精性肝病分子发病机制研究进展［Ｊ］．国际消化病杂志，２０１２，３２（１）：４４ ４７．［１０］ＨｉｎｚＢ，ＣｅｌｅｔｔａＧ，ＴｏｍａｓｅｋＪＪ，ｅｔａｌ．Ａｌｐｈａ ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．ＭｏｌＢｉｏｌＣｅｌｌ，２００１，１２（９）：２７３０ ２７４１．［１１］ＳｈａｒｍａＮ，ＬｏｐｅｚＤＩ，ＮｙｂｏｒｇＪＫ．ＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｉｎｔｈｅｋｉｎａｓｅ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｄｏｍａｉｎｏｆＣＲＥＢ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００７，２８２（２７）：１９８７２ １９８８３．［１２］ＹａｎｇＹＲ，ＷａｎｇＨ，ＬｖＸＷ，ｅｔａｌ．ＩｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｃＡＭＰ ＰＫＡｐａｔｈｗａｙｉｎａｄｅｎｏｓｉｎｅＡ１ａｎｄＡ２Ａｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ ｉｎｄｕｃｅｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＨＳＣｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，２０１５，１１５：５９ ７０．［１３］ＷａｎｇＱ，ＤａｉＸＦ，ＹａｎｇＷＺｈ，ｅｔａｌ．Ｃａｆｆｅｉｎｅｐｒｏｔｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔａｌｃｏｈｏｌ ｉｎｄｕｃｅｄｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｂｙｄａｍｐｅｎｉｎｇｔｈｅｃＡＭＰ／ＰＫＡ／ＣＲＥＢｐａｔｈｗａｙｉｎｒａｔｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１５，２５（２）：３４０ ３５２．大鼠脑缺血／再灌注过程中血流量和脑组织含水量的变化趋势张　冉１，马梦尧１，苏欣宇１，孟　想１，姜鲲鹏１，李　曙１△，洪　云２（１．皖南医学院病理生理学教研室，安徽芜湖２４１００２；２．皖南医学院弋矶山医院超声医学科，安徽芜湖２４１００１）【摘要】　目的：研究大鼠脑缺血／再灌注过程中血流量及与脑组织水含量变化的趋势。

TNHH对大鼠全脑缺血再灌注损伤的抗氧化性保护作用

TNHH对大鼠全脑缺血再灌注损伤的抗氧化性保护作用

・技术交流・T NHH 对大鼠全脑缺血再灌注损伤的抗氧化性保护作用于晓彦,魏欣冰,陈　琳,张岫美(山东大学医学院药理学研究所,山东济南250012) 摘　要:目的观察T NHH 对大鼠全脑缺血再灌注损伤的抗氧化性保护作用。

方法以改良的四血管阻塞法(Pulsinelli four 2vessel occlusion m odel )建立大鼠全脑缺血模型,于缺血30min ,再灌注48h 后进行脑组织超氧化物歧化酶(S OD )、丙二醛(M DA )、髓过氧化物酶(MPO )测定。

结果T NHH 能显著降低大鼠缺血损伤脑组织中M DA 含量,降低MPO 活性,提高S OD 活性。

结论T NHH 对大鼠全脑缺血再灌注损伤的具有明显的抗氧化作用。

关键词:脑缺血再灌注损伤;T NHH ;抗氧化 中图分类号:R965 文献标识码:A 文章编号:100521678(2009)0120036203Antioxidant effects of TNHH on whole brain ischemia/reperfusion injury in ratsY U X iao 2yan ,WEI X in 2bing ,CHE N Lin ,ZH ANG X iu 2mei(Department o f Pharmacology ,School o f Medicine ,Shandong Univer sity ,Jinan 250012,China ) Abstract :Purpose T o investigate the antioxidant effects of T NHH on global cerebral ischemia reperfusion injury in rats.Methods M odified Pulsinelli four 2vessel occlusion m odel in rat was prepared to produce the cerebral ischemia reperfusion injury.A fter ischemia for 30min and reperfusion for 48h ,superoxide dismutase(S OD )activity ,malondialdehyde (M DA )level ,and myeloperoxidase (MPO )activity in brain tissue were mea 2sured.R esults T NHH produced significant reductions in M DA content ,MPO activity and elevation in S OD activity.Conclusion T NHH possesses the antioxidant effects in whole brain ischemia reperfusion injury in rats.K ey w ords :brain ischemical reperfusion injury ;T NHH ;antioxidation收稿日期:2008205205作者简介:于晓彦(19832),女,山东菏泽人,硕士研究生,研究方向为脑血管药理学;张岫美,男,通信作者,教授,博士生导师,T el :0531288383146,E 2mail :zhangxm @ 。