牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备

实验五牛奶中酪蛋白的提取
一、实验目的
学习从牛奶中制备酪蛋白的方法
了解从牛奶中制取酪蛋白的原理
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5/100ml。

酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25~1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、实验材料与仪器
纯牛奶、白醋、滤纸、被子、锅等
四、实验步骤
将250ml或200ml牛奶置于锅中，隔水水浴小火加热，不断搅拌，加热至沸腾时停止搅拌和加热。

在牛奶中加入少量盐，并慢慢加入白醋，并轻轻搅拌，观察到牛奶中开始有白色絮状沉淀出现后，停止搅拌和加醋，静置10min。

待上述悬浮液冷却至室温，用滤纸过滤，得到滤渣。

用水清洗滤渣3次，每次都过滤得滤渣。

滤渣再用白酒清洗3次，每次都过滤得滤渣。

将滤渣摊在滤纸上风干，得酪蛋白制品
称重并品尝酪蛋白制品
五、实验结果记录与分析
酪蛋白（g/100ml）=（酪蛋白（g）/200ml或250ml ）*100
得率=测得含量/理论含量*100%
酪蛋白=（13.3g/200ml）*100=6.65 g/ml
结论：闻起来有较大的奶香味和酒精味。

在过滤的过程中，粘在滤纸上跟纱布，抠不下来，所以数据应该会偏小了。

牛奶中提取酪蛋白[目的与要求]1、了解等电点沉淀法2、学习从牛奶中制备酪蛋白的方法3、加深对蛋白质等电点性质的理解[原理]蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。

另外，蛋白质又是一种两性离子，在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。

但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。

等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法。

牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L。

酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。

将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀，除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。

但单独利用等电点沉淀法来分离生化产品效果并不太理想，因为即使在等电点时，有些两性物质仍有一定的溶解度，并不是所有的蛋白质在等电点时都能沉淀下来，特别是同一类两性物质的等电点十分接近时。

生产中常与有机溶剂沉淀法、盐析法并用，这样沉淀的效果较好。

本实验目的是使学生运用等电点沉淀法制备酪蛋白，从中加深对蛋白质等电点性质的理解。

[方法和步骤]1、取预先放冰箱中冷却的消毒牛奶6mL，3 000r/min离心10min，除去脂肪层的乳液置50毫升烧杯内，加热至40℃左右，在搅拌下慢慢加入10mL左右预热的醋酸-醋酸钠缓冲液，此时混浊液中有大量絮状物沉下。

冷至室温，3 000r/min离心10min，弃去上清液，得酪蛋白粗品。

2、用蒸馏水洗沉淀三次（每次5mL左右），3 000r/min离心10min，弃去上清液。

3、将沉淀置研钵中，研碎后，渐加5mL 95%乙醇，静置片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗抽滤，抽干后的制品，用乙醇-乙醚混合液洗沉淀二次（每次5mL），最后用无水乙醚洗沉淀二次（每次5mL），抽干。

4、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白制品（称重，记录）。

实验5酪蛋白的制备
酪蛋白的制备方法：
(1)新鲜牛奶脱脂，加酸(乳酸、乙酸、盐酸或硫酸)，将pH调至4.8，使干酪素微胶粒失去电荷而凝固沉淀。

用这种方法得到的干酪素称为酸酪蛋白，加酸的种类不同得到的酸酪蛋白却几乎毫无区别。

酸酪蛋白是白色至淡黄色粉末或颗粒，稍有奶臭和酸味。

在水中只是溶胀，若加入氨、碱及其盐时，则可分散溶解于水中。

可溶于强酸、二乙醇胺、吗啉、尿素、甲酰胺、热苯酚和土耳其红油。

(2)将牛奶与粗制凝乳酶作用，形成凝固沉淀物，称为粗制凝乳酶酪蛋白，呈白色粒状，几乎无味无臭，加热灼烧会产生特有的臭味。

凝乳酶酪蛋白比酸酪蛋白的灰分含量高。

酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白，对酸敏感，pH较低时会沉淀。

酪蛋白是哺乳动物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白质，又称：干酪素、酪朊、乳酪素。

α-酪蛋白是哺乳动物的主要蛋白，人乳中没有α-酪蛋白，以β-酪蛋白为主要酪蛋白形式。

酪蛋白对幼儿既是氨基酸的来源，也是钙和磷的来源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。

酪蛋白的制备
酪蛋白的制备
牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。

酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。

材料：新鲜牛奶
试剂：
95%乙醇、无水乙醚、0.2mol/L pH=4.7醋酸-醋酸钠缓冲液
0.2mol/L pH=4.7醋酸-醋酸钠缓冲液配置
A：0.2mol/L醋酸钠溶液，称量醋酸钠54.44g，定容至2000ml B：0.2mol/L醋酸溶液，称量纯醋酸12.0g，定容至1000ml
取A液1770ml，B液1230ml混合即得pH=4.7醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml 乙醇乙醚混合液：95%乙醇：无水乙醚=1：1（V/V）器具：
离心机、抽滤装置、精密pH试纸、电炉、烧杯、温度计、酸度计操作步骤：
（一）酪蛋白的粗提
10mL牛奶加热至40℃。

在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液10mL.用精密
pH试纸或酸度计调pH至4.7。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心8-10分钟(3500-4000 r /min)。

弃去清液，得酩蛋白粗制品。

(二）酪蛋白的纯化
1、用水洗涤沉淀3次，离心5分钟（3500-4000 r /min)，弃去上清液。

2、在沉淀中加入20mL 95%乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇一
乙醚混合液洗沉淀2次。

最后用无水乙醚洗沉淀2次，抽干。

3、将沉淀摊开在表面皿上，风干;得酪蛋白纯品。

(三）准确称重，计算含量和得率。

含量=酪蛋白g/10mL牛乳（g%)
得率=（测得含量/理论含量〕X100% 式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。

实验二从牛奶中提取酪蛋白一、实验目的要求1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。

2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。

二、实验原理牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。

酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、原料与器材鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。

四、试剂1.95%乙醇2.无水乙醚3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。

B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。

取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。

4.乙醇-乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（体积比）。

五、操作步骤1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。

观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。

2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。

3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。

酪蛋白的制备实验报告酪蛋白的制备实验报告一、引言酪蛋白是一种重要的蛋白质，在食品工业、医药领域和生物科学研究中都具有广泛的应用价值。

本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，了解其制备原理和方法，并探究实验条件对酪蛋白产率的影响。

二、实验材料与方法1. 实验材料：- 牛乳：新鲜牛乳1000ml- 醋酸：纯醋酸100ml- 酪蛋白试剂：酪蛋白提取试剂盒2. 实验方法：- 步骤一：将1000ml牛乳倒入锅中，加热至80℃，保持温度10分钟。

- 步骤二：将100ml纯醋酸加入牛乳中，搅拌均匀。

- 步骤三：将混合液静置20分钟，待凝块形成。

- 步骤四：用纱布过滤凝块，收集蛋白质沉淀。

- 步骤五：将沉淀与酪蛋白试剂按比例混合，制备酪蛋白溶液。

三、实验结果与分析1. 实验结果：- 经过实验操作，成功制备了酪蛋白溶液。

- 蛋白质沉淀的收率为40%。

2. 实验分析：- 在实验过程中，加热牛乳能够破坏脂肪膜，使蛋白质易于析出。

- 醋酸的加入能够改变牛乳的酸碱度，促使酪蛋白凝聚成块。

- 过滤凝块时使用纱布能够有效分离酪蛋白沉淀与乳清。

四、实验讨论1. 实验条件对酪蛋白产率的影响：- 温度：在80℃下加热牛乳能够促进蛋白质的析出，但过高的温度会导致蛋白质变性，影响产率。

- 酸度：适量的醋酸能够使酪蛋白凝聚成块，但过多的醋酸会使酪蛋白溶解度增加，降低产率。

- 时间：静置时间过短，酪蛋白凝块未充分形成；静置时间过长，酪蛋白易被细菌污染，影响产率。

2. 酪蛋白的应用价值：- 食品工业：酪蛋白可用于制作乳制品、奶酪、酸奶等，增加产品的营养价值和口感。

- 医药领域：酪蛋白具有抗菌、抗炎、抗氧化等生物活性，可用于药物载体和医用材料的制备。

- 生物科学研究：酪蛋白在细胞培养、基因工程和生物学实验中具有重要作用，可用于细胞培养基的配方和蛋白质分离纯化。

五、实验总结通过本次实验，我们成功制备了酪蛋白溶液，并了解了酪蛋白的制备原理和方法。

实验条件对酪蛋白产率有一定影响，需要在适宜的温度、酸度和时间下进行操作。

牛乳酪蛋白提取综合实验：从牛奶中分离乳脂、酪蛋白和乳糖一、引言牛奶约含有3.4％乳脂，经离心就可上浮，撇出乳脂层可加工奶油，剩余的即脱脂乳，可用于分离酪蛋白和乳糖。

牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。

酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸钙-磷酸钙复合体胶粒存在，胶粒直径约为20～800 纳米，平均为100 纳米。

在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白会沉淀，加工后可制得干酪或干酪素。

本实验利用加酸，当达到酪蛋白等电点pH=4.6 时，酪蛋白沉淀。

脱脂乳中除去酪蛋白后剩下的液体为乳清，在乳清中含有乳白蛋白和乳球蛋白，还有溶解状态的乳糖，乳中糖类的99.8%以上是乳糖，可通过浓缩、结晶制取乳糖。

二、实验材料和试剂1．新鲜牛奶。

2．试剂：10%醋酸，95%乙醇，乙醚，碳酸钙，5%醋酸铅溶液，10%氯化钠，0.5%碳酸钠，0.1mol/L，氢氧化钠，0.2%盐酸，饱和氢氧化钙溶液，米伦试剂。

米伦试剂的配制：将汞100g 溶于140ml(密度1.42)的浓硝酸中(在通风橱内进行)。

然后加两倍量的蒸馏水稀释。

三、实验步骤1. 从牛奶中分离乳脂及转变为奶油取20 mL新鲜牛奶，于普通生化离心机上3500rpm 离心5分钟，取出离心管后，小心将乳脂层与脱脂乳分离，将乳脂层冻结，然后回放到室温下，将要重新融化前，快速搅动使脂肪球膜破裂以及脂肪球膜蛋白变性，倾出释放出的少量水后，继续搅动形成油包水式的奶油。

称量后计算得率。

2. 从牛奶中分离酪蛋白将脱脂乳在恒温水浴中加热至40℃,边轻轻搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液,使牛奶pH = 4. 7,放置冷却、澄清后,用尼龙布过滤或直接用玻璃棒挑出酪蛋白粗品。

滤液（乳清）留作乳糖的分离。

将酪蛋白粗品转入另一烧杯，加20ml蒸馏水，用玻棒充分搅拌，洗涤除去其中的水溶性杂质（如乳清蛋白，乳糖以及残留的缓冲溶液），离心后弃去上层液，加15ml乙醇，洗涤除去其中的磷脂，离心后弃去上层液，加15ml乙醚洗涤除去其中的脂肪, 离心后弃去上层液，待酪蛋白充分干燥后称量其重量,并计算酪蛋白的得率。

实训一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备
一、实训目的
掌握盐析法和等电点沉淀法的原理和基本操作。

二、实训原理
乳蛋白素（α-lactalbumin）广泛存在于乳品中，是乳糖合成所需要的重要蛋白质。

牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白（casein），酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出。

而乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。

利用这一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。

酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用从酪蛋白粗品中除去脂类杂质。

将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质可随澄清液除去。

再经过一次pH沉淀后，即可得到粗乳蛋白素。

三、实训药品及器材
药品：牛奶，无水硫酸钠，10%HCl，pH试纸，乙醇
器材：烧杯，水浴锅
四、实训步骤
1. 盐析法或等电点沉淀法制备酪蛋白
（1）将50ml牛奶倒入250ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。

（2）在搅拌下缓慢加入10g无水硫酸钠（约10min内分5次加入），之后再继续搅拌10min。

将上述悬浮液冷却至室温，然后静置5min。

（3）将溶液过滤，分别收集沉淀和滤液。

将上述沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中，过滤除去乙醇溶液，抽干。

将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到酪蛋白。

准确称量。

2. 等电点沉淀法制备乳蛋白素
（1）将操作步骤1所得的滤液置于100ml烧杯中，一边搅拌，一边以10%盐酸调整pH至3.0±0.1。

实验报告-从牛奶中分离酪蛋白实验报告-从牛奶中分离酪蛋白1.实验目的本实验的主要目的是通过酸沉淀法从牛奶中分离酪蛋白，理解酪蛋白的性质和用途。

通过实验，我们希望能够掌握以下内容：•牛奶的成分及其特性•酸沉淀法的基本原理和应用•酪蛋白的分离和纯化过程•实验参数对酪蛋白产率和质量的影响2.实验原理牛奶是一种复杂的液体，含有多种蛋白质，如血清蛋白、免疫球蛋白、乳球蛋白、乳蛋白等。

这些蛋白质的含量和性质受奶源、饲料、奶牛的健康状况等多种因素的影响。

其中，酪蛋白是牛奶中最主要的蛋白质，含量约为3.5-4.5%。

酸沉淀法是利用酸性条件下，牛奶中的蛋白质会逐渐沉淀，最终形成凝胶状物质的过程。

通过控制pH值，可以使得酪蛋白率先沉淀，从而达到与其他蛋白质分离的目的。

3.实验步骤（1）准备试剂和设备：本实验需要用到牛奶、浓盐酸、乙醇、去离子水、烧杯、磁力搅拌器、pH计等。

（2）将100ml牛奶加入烧杯中，用磁力搅拌器搅拌并维持温度在30℃。

（3）用pH计测定牛奶的初始pH值，并记录。

（4）向牛奶中缓慢加入一定量的浓盐酸，并不断搅拌，使得牛奶的pH值维持在3.5-4.5之间。

在此过程中，要避免盐酸加入过快导致局部pH值过低。

（5）维持此pH值并继续搅拌30分钟，使得酪蛋白充分沉淀。

（6）将上清液倒出，并加入95%乙醇，使得乙醇的体积分数为20%，继续搅拌10分钟。

（7）将沉淀物过滤，并用乙醇清洗。

将过滤后的沉淀物放入烘箱，在40℃下烘干。

（8）收集烘干后的酪蛋白，测定其质量并计算产率。

4.结果分析表1：实验参数记录表实验方法是有效的。

从表1可以看出，实验过程中各个参数的控制对实验结果有着重要影响。

例如，如果pH值过低或过高，都会导致产率和纯度的下降；酸加入量过多或过少也会影响酪蛋白的沉淀效果；沉淀时间和烘干时间的长短也会影响产率和纯度。

因此，在实验过程中，需要严格控制各项参数。

5. 结论总结通过本次实验，我们成功地使用酸沉淀法从牛奶中分离出了酪蛋白。

牛奶中酪蛋白的提取与分析Word版酪蛋白是牛乳中含量最多的蛋白质，为牛乳中蛋白质总量的80%以上。

酪蛋白可分为α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白三种，其中α-酪蛋白和β-酪蛋白含量最高，约占酪蛋白总量的90%以上。

提取酪蛋白的方法有多种，常用的包括离心法、薄膜浓缩法和离子交换法等。

以下介绍一种离子交换法提取酪蛋白的方法。

材料和仪器设备：牛乳、0.02mol/L Na2HPO4（pH 8.2）、0.02mol/L NaH2PO4（pH 8.2）、0.5mol/L NaCl、硫酸钠、洗涤液、pH计、离心机、离子交换树脂（如DEAE-Sepharose CL-6B）、紫外分光光度计、SDS-PAGE凝胶电泳装置等。

步骤：1.将鲜牛乳离心去除脂肪，得到鲜乳液。

2.将鲜乳液加入同体积的0.5mol/L NaCl中，用搅拌器搅拌20min，离心分离得到上清液。

3.将上清液通过一根DEAE-Sepharose CL-6B离子交换树脂柱，收集流出液。

树脂柱洗涤至底座pH值稳定，得到初始洗涤液。

4.逐渐将洗涤液pH值升高至8.2，得到目标蛋白（酪蛋白）。

该步骤中DEAE-Sepharose CL-6B离子交换树脂中的团聚物质还可以部分与酪蛋白亲和，因此流出液中含有除酪蛋白外的其他物质，节约了纯化酪蛋白的成本。

5.将流出液进行浓缩处理。

常用的浓缩方法有薄膜浓缩法和淀粉微球浓缩法等。

淀粉微球浓缩法简便易行，且收率较高。

将淀粉往加入称量瓶中，加入适量的紫外吸收物质作为指示剂，加入约5倍的蒸馏水，搅拌至淀粉微球均匀分散，待微球沉淀后取上清液即可。

6.用紫外分光光度计对提取的酪蛋白进行检测，并进行酪蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳分析。

其中，SDS-PAGE凝胶电泳分析操作步骤较为繁琐，主要包括制备凝胶、电泳、染色、显色等过程。

制备凝胶时，常用的凝胶包括10%、12%和15%三种，根据待测蛋白大小进行选择。