黑曲霉酸性蛋白酶液态发酵实验

新型黑曲霉液体发酵及对黄曲霉毒素B1的脱除张晓雪;孙秀兰;张银志【期刊名称】《食品与生物技术学报》【年(卷),期】2017(036)003【摘要】对经紫外照射诱变制备的新型黑曲霉FS-UV1在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中的pH、蛋白质质量浓度、蛋白酶活性变化以及脱除机制进行了研究.在发酵过程中,pH值不断下降,由初始pH 5.9下降为1.83.蛋白质质量浓度在发酵48 h后达到最大,为10.07 g/L,而酸性蛋白酶活性则在72 h达到最高,为0.98 U/mL.新型黑曲霉FS-UV1孢子悬液对AFB1无脱除效果,而菌丝体对AFB1具有吸附作用,发酵液则对AFB1具有降解作用,其中发挥降解作用的可能是蛋白质.对FS-UV1在pH 7的模拟肠道环境中脱除黄曲霉毒素B1(AFB1)的效果进行了评价.脱除48 h 时,在pH 7的模拟肠道环境中对AFB1的脱除率为87.3％.【总页数】5页(P266-270)【作者】张晓雪;孙秀兰;张银志【作者单位】江南大学食品学院,江苏无锡214122;江南大学食品学院,江苏无锡214122;食品科学与技术国家重点实验室,江南大学,江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】IS201.3【相关文献】1.发酵工艺条件对黑曲霉产黄曲霉毒素B1降解酶的影响 [J], 雷娇;宋宏新;李鹏娟;薛海燕;肖瑜;徐丹2.黑曲霉菌降解黄曲霉毒素B1的影响因素的研究 [J], 陈志辉;徐馨;李仲玉;程宝晶3.饲料发酵耦合黄曲霉毒素B1的生物脱除方法研究 [J], 李加友;褚云峰;陆筑凤;苗圣威;李俊峰;杨青4.响应面优化黑曲霉生物发酵花生粕脱除黄曲霉毒素研究 [J], 邱天宇;王海鸣;朱瑜;杨阳;纪剑;孙秀兰5.黑曲霉降解黄曲霉毒素B1的研究及转录组分析 [J], 杨阳;邱天宇;袁晓;孙嘉笛;张银志;孙秀兰;纪剑因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

黑曲霉产糖化酶液态发酵条件研究孙继祥【摘要】The effects of additives,feeding time and feeding quantity on Saccharifying enzyme production by Aspergillus niger fermentation were investigated throug single factor test with the activity of Saccharifying enzyme as indicator.Then the effects of fermentation conditions on Saccharifying enzyme production were investigated by orthogonal experiments.The results suggested that the addition of（NH4） 2SO4 could enhance 17 % enzyme activity,the optimum feeding time was 48h,the best feeding quantity was 6 mL,feeding could prolong fermenting cycle from previous 96 h to 120 h,and the optimum fermentation conditions were 15 % inoculating quantity,50 mL liquid-filling in 250 mL triangle flask,and initial pH value as 4.5.%以糖化酶活力为指标,通过单因素实验,分别考察了添加物、补料时间和补料量对黑曲霉发酵产糖化酶的影响。

通过正交实验,考察了发酵条件对黑曲霉发酵产酶的影响。

黑曲霉的培养一、实验简介黑曲霉广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中。

是重要的发酵工业菌种，可生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、葡糖酸和没食子酸等。

生长适温37℃，最低相对湿度为88%。

从土壤中获取菌种，接种到查氏培养基中进行培养。

二、实验试剂和材料1、试剂碳酸钠3g磷酸二氢钾硫酸镁1g氯化钾0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g蒸馏水1000ml2、器材培养皿、试管、灭菌锅、三角瓶三、实验过程和步骤（一）、查氏培养基配制1 称量：按照培养基配方，依次准确地称取药品，放入搪瓷杯中。

2 熔化：量取自来水，加入所需水量的一部分至上述搪瓷杯中，用玻璃棒搅拌，待药品溶解后，加入琼脂，倒入余下的水，在电热板上加热熔化。

3定容：将加热后的培养基导入量筒中，用自来水进行定容，至1000ml。

4 调pH：待培养基稍冷却后，用精密pH试纸测量培养基的原始pH，若偏酸，用1mol/L NaOH边滴加边搅拌，使之达到pH5.0-6.0。

若偏碱，则用1mol/L HCl调节。

5 分装：用分装装置将培养基装入试管，高度为试管总长的1/5，共20支。

余下培养基转入三角瓶中，培养基的量为三角瓶容量的1/3-1/2。

6 加塞、包扎、标记：试管加棉花塞，5支一捆包扎好，棉塞外加一层报纸防灭菌时冷凝水湿润棉塞，在外用线绳扎成活结，；三角瓶用纱布塞住瓶口，并用牛皮纸的线绳包扎好。

用记号笔注明培养基名称、班级、组别、配制日期。

7 灭菌：0.1MPa，121℃，20min高压蒸汽灭菌。

8 搁置斜面：待已灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁置在有合适高度的器具上，使培养基斜面长度不超过试管总长的一半为宜。

9 倒平板：待三角瓶中培养基冷却至50℃左右，倒平板。

10 无菌检查：灭菌培养基放入37℃培养箱中一天，若无细菌污染则说明灭菌彻底。

（三）、接种培养将配置好的土壤悬液10ml接种到装有查氏培养基60ml的锥形瓶中，在恒温培养箱中静置培养6-7天（23～28℃培养），观察培养结果。

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510677600.6(22)申请日 2015.10.19CGMCC No.10789 2015.05.07C12N 1/14(2006.01)C12N 9/62(2006.01)C12R 1/685(2006.01)(71)申请人山东隆科特酶制剂有限公司地址276499 山东省临沂市沂水县城北工业园(72)发明人王兴吉 韩龙 张杰(54)发明名称一株高产酸性蛋白酶的黑曲霉菌株及其液体发酵产酶方法(57)摘要本发明公布了一株高产酸性蛋白酶的黑曲霉突变株及其液体发酵方法，所述黑曲霉突变菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)TP-235，保藏编号为CGMCC 10789，该菌株通过液体深层发酵在50L发酵罐上经补料发酵培养100-120h，产酶水平为21852u/mL。

本发明建立的液态发酵酸性蛋白酶的方法，生产的酸性蛋白酶最适pH 范围为2.5-3.5，最适作用温度范围为55℃-65℃，在60℃保温1h后剩余酶活为78％，80℃保温2h 后剩余酶活为58.4％，具有良好的耐酸性和耐热性，可广泛应用于酿酒、食品、饲料以及皮革加工等行业。

(83)生物保藏信息(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书6页 附图1页CN 105199969 A 2015.12.30C N 105199969A1.一株高产酸性蛋白酶的黑曲霉突变菌株，其特征在于，所述菌株具体为黑曲霉(Aspergillus niger)TP-235，菌株保藏号为CGMCC 10789。

2.如权利要求1所述的一株高产酸性蛋白酶的黑曲霉突变菌株，其特征在于，所述菌株液体发酵平均产酸性蛋白酶活为21800u/mL-21900u/ml。

3.如权利要求1所述的一株高产酸性蛋白酶的黑曲霉突变菌株，其特征在于，所述菌株液体发酵产酸性蛋白酶最适作用pH范围为2.5-3.5，最适作用温度范围为55℃-65℃。

第14卷第3期武汉科技学院学报Vo1.14No.3 2001年9月JOURNAL OF WUHAN INS TITUTE OF SCIE NCE AND TECHNOLOGY Sep.2001黑曲霉植酸酶液体发酵工艺研究王亚林严建芳(武汉工业学院生物与化学工程系武汉430022)摘要研究了黑曲霉液体培养生产植酸酶的发酵工艺,研究了培养基碳源、诱导物、表面活性剂等因素对产酶的影响,对发酵时间、p H变化规律等进行了研究和分析。

关键词植酸酶黑曲霉发酵X中图分类号Q815;Q814.9植酸酶作为一种饲料和食品添加剂,在国内外已开始得到广泛应用,特别是由于其在改善环境方面的作用,更是受到人们的极大关注。

植酸酶主要存在于植物及微生物中,由于在微生物中含量较高而具有较大的开发价值。

目前,美国、荷兰和丹麦等国已先后运用发酵法生产植酸酶,我国也已在进行这方面的研究开发。

可以预计,植酸酶制剂将有良好的市场前景。

1材料与方法1.1菌种黑曲霉(Aspergillus niger)W S201,武汉工业学院微生物室保存。

1.2培养基1.2.1种子培养基:豆芽汁蔗糖培养基。

1.2.2摇瓶发酵培养基(%):葡萄糖3.0,淀粉7.0,NH4NO30.5,蛋白胨0.2,CaCl20.2,MgSO4# 7H2O0.05,KCl0.05,MnSO4.4;H2O0.03,pH值5.5。

1.3培养方法配制培养基时适当加热、摇动或搅拌,使淀粉溶解成液态或胶状,121e灭菌20min。

在30?1e下摇床培养3~5d(转速220~250r/min)。

1.4植酸酶的测定植酸酶活力的定义:37e,pH5.5条件下每分钟从植酸钠中释放出1L mol无机磷所需的酶为1u。

酶活测定方法:取0.1ml含酶液加至一洁净试管中;加入0.9ml反应液,反应液为含0.5%植酸钠的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH5.5),在37e恒温反应30min;加入1ml10%三氯醋酸终止反应;加入2ml显色液,摇匀后静置15~30min显色,显色液由1%钼酸铵50ml与3.66X收稿日期:2001-06-26作者简介:王亚林,男,副教授,在读博士生;研究方向:发酵工程、生化工程32武汉科技学院学报2001年g FeSO4#7H2O混合配制。

酸性蛋白酶降解猪瘦肉肉实验方案一、实验目的①购得黑曲霉发酵生产的酸性蛋白酶，并在其最适条件下进行研究②研究该酸性蛋白酶降解瘦肉的降解肉类效果、对酵母生长的影响。

③根据实验前后的含氮量，研究该酸性蛋白酶对瘦肉的降解度二、实验原理①酸性蛋白酶特性：活力定义：一个酶活力指1g酶粉成1ml酶液在40℃.PH3.0条件下，1分钟水解酪素产生1ug酪氨酸为一个活力单位（u/g或u/ml）pH范围：2.5～4.0（最适PH3.5）最适温度：55℃，低于40℃稳定性状：褐色或灰色粉末，由黑曲霉经发酵提炼而成而成，易溶于水用途：生化研究。

水解蛋白, 具有较强的水解能力能力，能将大分子的蛋白质水解成氨基酸等②水解度(DH)的计算公式:DH( %)) =水解液中总氨基态氮/原料中总氮含量[1]③凯氏定氮法测总氮：凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。

即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量。

三、实验试剂和仪器①实验试剂：新鲜瘦猪肉(市售) ；酸性蛋白酶(5. 0×105IU/ g) (广州市凯升生物有限公司)、凯氏定氮法相关试剂②实验仪器：凯氏定氮蒸馏装置,雷磁酸度计,恒温水浴锅,电子天平、电磁炉四、实验方法①新鲜猪瘦肉预处理从市场上购得猪肉，清水洗净后，用小刀精心除去脂肪，将猪肉用自来水冲洗，去血1h后，冷冻保藏，一段时间后取出并切成块状，然后经高压灭菌灭菌，用无菌水冲洗，放置冰箱冷冻备用[3]。

②猪肉酶解工艺流程猪肉糜(经预处理) →配制pH3.5的柠檬酸缓冲液→按固液比（m/V）1：1匀浆[1、3]→加酶保温酶解→100℃灭酶15min→4500r/min离心 15min→上清液过滤→猪肉蛋白酶解液[3]③单因素实验组别设置在酶解时间5h、 pH3.5条件下实验，设置一个不加入酶的空白对照，每组设置3组平行对照：＊温度条件：55℃、30℃＊酶液加入量：按3%（M/M）（酶：底物）加入量[1]＊酵母培养：加入蛋白酶按6.5U/mL（酶：培养基）比例、不加蛋白酶对照进行液体培养猪瘦肉用量：每组15g，共8组，共120g。

一、实验目的1. 学习并掌握黑曲霉菌的分离与鉴定方法；2. 了解黑曲霉菌的形态特征和生长习性；3. 掌握微生物实验的基本操作技能。

二、实验原理黑曲霉菌（Aspergillus niger）是一种广泛分布于自然界中的真菌，具有较强的发酵能力和酶活性。

本实验通过分离纯化黑曲霉菌，对其进行形态特征观察和生长条件研究，以了解其生物学特性。

三、实验材料1. 实验试剂：改良马丁培养基、葡萄糖酵母膏琼脂培养基、无菌水、无菌棉塞、无菌吸管、无菌培养皿等；2. 实验仪器：恒温培养箱、显微镜、酒精灯、接种环等；3. 实验样品：土壤、谷物、植物性产品等。

四、实验方法1. 样品处理（1）取适量样品（如土壤、谷物等）置于无菌培养皿中，加入适量无菌水，用玻璃棒充分搅拌，制成悬浮液；（2）取适量悬浮液，用无菌吸管吸取一定量的样品，涂布于改良马丁培养基上；（3）将涂布好的培养基置于恒温培养箱中，37℃培养24小时。

2. 分离纯化（1）观察培养基上生长的菌落，选取典型的黑曲霉菌菌落；（2）用接种环挑取菌落，分别接种于葡萄糖酵母膏琼脂培养基上；（3）将接种好的培养基置于恒温培养箱中，37℃培养24小时，观察菌落特征。

3. 形态观察（1）用显微镜观察菌落形态特征，包括菌丝、分生孢子梗、分生孢子等；（2）记录菌落颜色、形状、大小、菌丝特征等。

4. 生长条件研究（1）将分离得到的黑曲霉菌接种于葡萄糖酵母膏琼脂培养基上；（2）在不同温度、pH值、营养物质条件下，观察菌落生长情况；（3）记录菌落生长情况，分析生长条件对黑曲霉菌的影响。

五、实验结果与分析1. 分离纯化结果经过涂布培养和分离纯化，成功分离出黑曲霉菌。

菌落呈黑色，表面光滑，边缘整齐，具有明显的放射状沟纹。

2. 形态观察结果显微镜下观察，黑曲霉菌菌丝呈白色，具有分隔，分生孢子梗自菌丝顶端生出，呈直角或锐角，分生孢子球形，褐色。

3. 生长条件研究结果（1）温度：黑曲霉菌在25-37℃范围内生长良好，最适温度为37℃；（2）pH值：黑曲霉菌在pH值4.0-7.0范围内生长良好，最适pH值为6.0；（3）营养物质：黑曲霉菌在葡萄糖酵母膏琼脂培养基上生长良好，适宜的营养物质为葡萄糖、酵母膏。

黑曲霉发酵产酸性蛋白酶江西科技师范学院生物工程专业《化工原理课程设计》说明书题目名称黑曲霉发酵生产酸性蛋白酶专业班级 09级生物工程1班学号 20091466 20091479 20091470学生姓名钟鑫鑫张溧王涛指导教师常军博士2011 年10 月31 日前言蛋白酶做为一种重要的工业酶制剂，作为一种较早被人们了解的酶类现在正在人类的生活中发挥巨大的作用，特别是酸性蛋白酶以其作用的广泛性、高效率越来越多的受到了人们的关注。

在酸性环境下（pH 2.5-5.0）催化蛋白酶水解的酶制剂，适用于酸性介质中水解动植物蛋白质。

该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒酱油造、饲料等。

其使用于酒精、白酒、果酒、啤酒、黄油以可澄清发酵醪液和成熟醪液。

酶作为一种新兴的物质以其高效，清洁的催化效果充斥着当今人类的思想，但是较高的技术要求和特殊菌株获得，使人们在酶这一产业发展中步履蹒跚，特别是发展中国家由于落后的科学技术，使他们在此项技术中发展更加困难，以中国为例在20世纪90年代就已经有酶企业投入生产，但是我的酶制剂销售额在世界市场只占4%，我国企业所用的酶制剂大多数是由丹麦的NOVO所提供的。

就目前情况看，世界各国都投入了大量资金用于酶事业的研究和生产。

相信在不久的将来酶一定会更加广泛的在生活中应用。

设计条件题目:1000L发酵罐，发酵生产酸性蛋白酶。

1发酵工艺1.1菌种的选择本实验选用黑曲霉作为菌种，发酵生产酸性蛋白酶，该霉菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为3．350。

1.3菌种培养基的配制查氏培养基NaNO3 2gK2HPO41gK Cl 0.5gMgSO4 0.5gFeSO40.01g蔗糖30g琼脂15g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min1.2发酵罐培养基的配制一般产酸性蛋白酶的微生物，它们的发酵培养基都基本选择麸皮、米糠、玉米粉、淀粉、饲料鱼粉、豆饼粉、玉米浆等各种碳氮源，按各种不同比例混合，添加无机盐配成各种培养基。

菌种报告—黑曲霉一、黑曲霉简介①、黑曲霉（Aspergillus niger）属于半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，曲霉属真菌中的一个常见种。

可生产淀粉酶、酸性蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、柠檬酸、葡糖酸和没食子酸等，是重要的发酵工业菌种。

②、培养温度23～28℃，好氧二、使用注意事项①、是四类病原微生物，即在通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物。

但由于生长快速，极易通过空气扩散污染环境，对产品的生产检验人员与环境构成威胁。

故操作过程要在阳性室生物安全柜中进行。

②、所有的培养物、储存物及其它的废物在释放前，均应121℃，30min湿热蒸汽灭菌。

实验结束后，用0.1%的新洁尔灭擦拭台面，照紫外消毒。

菌种保存方案—黑曲霉（Aspergillus niger）1、实验材料：器具：-80℃冰箱，2～8℃冰箱，试管，电动助吸器，锥形瓶，恒温培养摇床，1ml移液管，10ml移液管，冷冻管，振荡器，棉塞，接种环，250ml盐水瓶，500ml 盐水瓶试剂：冻干菌种，改良马丁培养基，改良马丁琼脂培养基，TSA平板，SDA平板，20%甘油，含0.05%（v/v）聚山梨酯80的生理盐水2、实验步骤：2.1 菌种复苏和复壮（改良马丁培养基）2.1.1 将干菌种（0代）按上述步骤转移到装有100ml改良马丁液体培养基的锥形瓶中复苏（第1代），23～28℃摇床震荡培养5天。

2.1.2 用接种环挑起活化后的孢子悬液，划线到改良马丁琼脂斜面复壮，接种10支试管（第2代），23～28℃静置培养5～7天。

2.1.3 向每支试管中加入5ml含0.05%（v/v）聚山梨酯80的生理盐水，反复吹打洗脱孢子。

将孢子悬液全部转移至250ml盐水瓶中，2～8℃冻存备用。

2.2 稀释倍数探索2.2.1 取1ml孢子悬液加入9ml生理盐水中，混匀得10-1管，同法依次稀释至10-6。

2.2.2 取10-3～10-6梯度稀释孢子悬液，1ml涂布SDA平板，各做3个平行。

黑曲霉液态发酵生产植酸酶的动力学研究石　坚1　孙君社1　苏东海1　经　玲2(1.中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083;2.中国农业大学理学院,北京100083)收稿日期:2002-09-16作者简介:石　坚,硕士研究生;孙君社,博士,教授,研究方向为生物技术在农产品加工中的应用。

摘　要　对黑曲霉(Aspergillus niger N D313)液态发酵生产植酸酶的发酵过程和发酵动力学进行了研究。

在摇瓶试验得到基本发酵工艺参数的基础上,应用10L 生物反应器进行放大试验取得了较好的结果,其最大菌体量(干重)达到1.19g ·100mL -1,酶活力达到3.6u ·mL -1。

试验通过分批补料手段控制比生长速率的变化,得到了描述发酵过程的动力学模型并回归了模型参数。

利用数学计算软件对试验数据与模型进行拟合,结果证明所建立的动力学模型能较好地反映并预测植酸酶的发酵过程。

关键词　黑曲霉;植酸酶;液态发酵;动力学模型中图分类号　T Q 920.1 文章编号　1007-4333(2003)02-0045-04 文献标识码　AKinetics stu dy on the production of phytase in submergedfermen tation by Asp .nigerShi Jian 1,　Sun Junshe 1,　Su Don ghai 1,　Jin g Lin g 2(1.College of Fo od Science &Nutritio nal E n gineerin g ,China A gricu ltural University ,B eijin g 100083,China ;2.College of S cien ce ,China A gricultural U niversity ,Beijin g 100083,China )Abstract Based on the p rimary fermentation p arameters ob tained from flake cultures ,the law of g rowth and m etabolism of Asp .niger ND 313and the fermentation kinetic models were studied in an auto control b ioreactor .The fermentation in bioreactor was successfully p erformed with a maxim al biomass concentration (d ry m ass )of 1.19g ·100mL -1and a maximal enzym e activity of 3.6μ·m L -1.Then the kinetic formula of cell growth rate ,phytase produc -tion rate and glucose consumption rate were inferred by controling the specific biomass growth rate .The results of m athem atic fitting between model cal culated values and experimental val ues p roved the valid i ty and rationality of the kinetic model s .Key words Asp .niger ;phytase ;submerg ed -fermentation ;kinetics m odel 来源于微生物的植酸酶(Phy tase ,EC .3.1.3.8)能催化植酸,使其水解为各级磷酸肌醇、肌醇和正磷酸盐的混合物。

文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持.江西科技师范学院生物工程专业《化工原理课程设计》说明书题目名称黑曲霉发酵生产酸性蛋白酶专业班级 09级生物工程1班学号学生姓名钟鑫鑫张溧王涛指导教师常军博士2011 年10 月31 日前言蛋白酶做为一种重要的工业酶制剂，作为一种较早被人们了解的酶类现在正在人类的生活中发挥巨大的作用，特别是酸性蛋白酶以其作用的广泛性、高效率越来越多的受到了人们的关注。

在酸性环境下（pH 2.5-5.0）催化蛋白酶水解的酶制剂，适用于酸性介质中水解动植物蛋白质。

该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒酱油造、饲料等。

其使用于酒精、白酒、果酒、啤酒、黄油以可澄清发酵醪液和成熟醪液。

酶作为一种新兴的物质以其高效，清洁的催化效果充斥着当今人类的思想，但是较高的技术要求和特殊菌株获得，使人们在酶这一产业发展中步履蹒跚，特别是发展中国家由于落后的科学技术，使他们在此项技术中发展更加困难，以中国为例在20世纪90年代就已经有酶企业投入生产，但是我的酶制剂销售额在世界市场只占4%，我国企业所用的酶制剂大多数是由丹麦的NOVO所提供的。

就目前情况看，世界各国都投入了大量资金用于酶事业的研究和生产。

相信在不久的将来酶一定会更加广泛的在生活中应用。

设计条件题目:1000L发酵罐，发酵生产酸性蛋白酶。

1发酵工艺1.1菌种的选择本实验选用黑曲霉作为菌种，发酵生产酸性蛋白酶，该霉菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为3．350。

1.3菌种培养基的配制查氏培养基NaNO3 2gK2HPO41gK Cl 0.5gMgSO4 0.5gFeSO40.01g蔗糖30g琼脂15g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min1.2发酵罐培养基的配制一般产酸性蛋白酶的微生物，它们的发酵培养基都基本选择麸皮、米糠、玉米粉、淀粉、饲料鱼粉、豆饼粉、玉米浆等各种碳氮源，按各种不同比例混合，添加无机盐配成各种培养基。

第27卷第3期江西农业大学学报Vol.27,No.3 2005年6月Acta Agriculturae Universitatis J iangxiensis June,2005文章编号:1000-2286(2005)03-0466-03黑曲霉LH2446产纤维素酶液体发酵条件的研究汪世华1,2,胡开辉2,黄碧芳2,余文英2,彭利民3 (1.福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室,福建福州350002;2.福建农林大学生命科学院开放实验室,福建福州350002;3.武汉隆华生物股份有限公司技术中心,湖北武汉430000)摘要:采用诱变后的黑曲霉LH2446液体发酵生产纤维素酶。

确立了产酶最佳条件:5%稻草粉为碳源,1%的黄豆粉为氮源,培养基起始pH值为pH6.5,250mL三角瓶中装培养基75mL,培养时间为60h,温度为30℃。

在最适条件下产纤维素酶的最高产量为23600U/g。

关键词:纤维素酶;液态发酵;产酶条件中图分类号:Q55 文献标识码:AStudi es on the Opti m u m Conditi ons for Sub merged Fer ment ati on of Aspergillus n iger LH2446to Produce Cellul aseWANG Shi-hua1,2,HU Kai-hui2HUANG B i-fang2,Y U W en-ying2,PENG L i-m in3 (1.Key Laborat ory of B i opesticide and Che m ical B i ol ogy,M inistry of Educati on,China,Fujian,Agri2 culture and Forestry University,Fuzhou350002,China;2.Open Laborat ory of College of L ife Science,Fu2 jian Agriculture and Forestry University,Fuzhou350002,China;3.W uhan Longhua B i otechnol ogy Co. L td.,W uhan430000,China) Abstract:The study was conducted t o exp l ore the op ti m u m conditi ons f or submerged fer mentati on of A s2 pergillus niger LH2446t o p r oduce cellulase.It was f ounded that the op ti m um conditi ons were as foll ows:the carbon s ource was6%stra w power;the nitr ogen s ource was1%bean cake;75mL media were filled in the 250mL flask with medium pH6.5,culture ti m e60h and culture te mperature30℃.Under the op ti m um con2 diti ons,t o the highest out put of cellulase was23600U/g.Key words:cellulase;sub merged fer mentati on;op ti m u m conditi ons纤维素酶是使纤维素降解生成葡萄糖的一组酶的总称,主要有C1酶和Cx酶,C1酶和Cx酶协同作用可将天然纤维素降解为葡萄糖。