顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspase_3表达的影响_孙伟霞
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抗癌药顺铂对小鼠的耳、肾和肝毒性及其机制的研究廖英俊;汤浩;金亚平【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2004(20)1【摘要】目的以小鼠为实验对象建立抗癌药顺铂毒性研究的实验动物模型,并探讨其毒性作用产生的可能机制,为进一步对顺铂毒性作用的防治研究提供科学参考资料.方法选择♂昆明种小鼠,经腹腔连续注射顺铂5 d,观察不同剂量顺铂对小鼠的听力、肾脏和肝脏的毒性作用及肝和肾组织抗氧化系统各指标的变化.结果顺铂可引起小鼠体重明显下降、全频率的听力阈值升高,肝和肾的脏器系数、血清尿素氮(BUN)含量和丙氨酸氨基转换酶(ALT)活性等指标的异常,并呈剂量依赖关系.此外,顺铂还可引起肝和肾抗氧化及氧化损伤指标的异常.结论 3.0~4.0 mg*kg-1 b.w 的顺铂可引起小鼠出现明显的听力、肾和肝组织的损伤.氧化损伤是抗癌药顺铂产生其毒性作用的可能机制之一,但对于不同的脏器和在不同的给药时期,其发挥的作用不同.【总页数】4页(P82-85)【作者】廖英俊;汤浩;金亚平【作者单位】中国医科大学基础医学院生理教研室,沈阳,110001;中国医科大学基础医学院生理教研室,沈阳,110001;中国医科大学公共卫生学院劳动卫生教研室,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.47;R322.61;R322.92;R979.19【相关文献】1.抗癌药顺铂耳毒性机制及防治方法的研究进展 [J], 廖英俊;汤浩2.维生素E对顺铂所致的小鼠肾毒性的影响及其机制研究 [J], 张林;刘伏友;彭佑铭;李大伟;曾妮;武蓉;刘沧桑3.富氢盐水拮抗顺铂对小鼠耳毒性的作用研究 [J], 卢燕;林信衡;蔡友铮;徐浩;王宏波;吴小波;林昶;钟秀荣;孙丽清4.熊果酸对顺铂所致小鼠耳毒性的防护作用研究 [J], 孙美玲;沈天骄;邸阳;田原;王爱梅5.艾叶挥发油致小鼠急性肝毒性作用及其机制研究 [J], 刘红杰;李天昊;詹莎;陈亮;陈灵修;唐树杰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
顺铂损伤后幼年斑马鱼侧线毛细胞STAT3的表达及意义翁宇航;陈飒;周金章;刘惠刚;龙孝斌【摘要】Objective To develop a cisplatin-induced hair cell injury model using the lateral line system of zebrafish larvae and to detect the expression of STAT3 mRNA before and after cisplatin exposure. Methods Zebrafish larvae which were 5 days-post-fertilization were exposed to250μM cisplatin for 3 hours. Yo-pro-1-and Terminal dUTP Nick-End-Label-ing (TUNEL-labeling) were used to examine hair cell densities and apoptosis, respectively. RT-qPCR and in situ hybridiza-tion were used to examine the expression level of STAT3. Results After being exposed to 250μM cisplatin for 3 hours, hair cell densities of the neuromast in the lateral line of zebrafish larvae were significantly decreased (P<0.001), and the num-ber of apoptotic cells significantly increased (P<0.001). Meanwhile, STAT3 expression was up-regulated (P<0.001). Con-clusion STAT3 may be involved in hair cell apoptosis during hair cell injury induced by cisplatin. While apoptosis is activat-ed at the same time, it indicates that STAT3 may be able to induce apoptosis.%目的:建立斑马鱼侧线神经丘的顺铂损伤模型,检测STAT3基因的表达情况,探讨其在毛细胞顺铂损伤过程中所发挥的作用,为抗顺铂耳毒性的研究提供理论依据。
顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞钙蛋白酶表达的影响张立伟;刘芳芳;于利;王爱梅【期刊名称】《听力学及言语疾病杂志》【年(卷),期】2016(024)002【摘要】Objective To investigate the effects of cisplatin on the expressionof calpain in mouse cochlear hair cells in vitro ,and to explore the mechanism of cisplatin-induced apoptosis in mouse cochlear haircells .Meth‐ods A total of 600 cochlear basilar membranes isolated from Kunming mice at postnatal day 3 were cultured for 24 hours ,then randomly divided into control group and 3 cisplatin groups (4 μg/ml ,8μg/ml and 16 μg/ml) .Each group contained 150 basilar membranes .Four groups were continually cultured for another 24 hours .Hoechst 33258 staining was used to detect the apoptosis of cochlear haircell .Immunofluorescent staining and Western blot were carried out forde tecting the expressions of calpain 1 (μ-calpain) and calpain 2 (m-calpain) in mouse cochlear hair cells .Results The percent of apoptotic hair cells in the three cisplatin groups (15 .63% ± 0 .20% ,38 .40% ± 2 .64% and 64 .24% ± 0 .05% ,respectively) was g reater than that of in the control group (5 .55% ± 0 .12% ) , showing a clear dose-response relationship(P<0 .01) .Furthermore ,the expressions of μ -calpain and m -cal‐pain in different cisplatin groups were increased ,and m -calpain expression was great remarkably with increased concentration of cisplatin(P<0 .01) .Conclusion Our results suggest that cisplatin can induce the apoptosis in mouse cochlear hair cells by regulating calpain pathway .This may play a role in the cisplatin-induced ototoxicity .%目的:观察顺铂对离体培养小鼠耳蜗毛细胞钙蛋白酶(calpain )表达的影响,探讨顺铂致耳蜗毛细胞凋亡的机制。
红景天苷改善顺铂引起的小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节神经元损伤的机制李兆龙;徐义策;李泽文;周洁【期刊名称】《听力学及言语疾病杂志》【年(卷),期】2024(32)1【摘要】目的探究红景天苷(SAL)改善顺铂(CIS)引起的耳蜗毛细胞(CHC)和螺旋神经节神经元(SGN)损伤的作用及其与环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP效应元件结合蛋白(CREB)通路的关系。
方法分离新生C57BL/6小鼠的耳蜗基底膜,分为对照组(C组)、CIS组、SAL组、SAL+SQ22536(cAMP抑制剂)组和SAL+H-89(PKA抑制剂)组,每组20条。
C组仅加入无血清BME培养液;CIS组在培养液中加入15μmol/L CIS;SAL组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL;SAL+SQ22536组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和5μmol/L SQ22536;SAL+H-89组在CIS组基础上加入5μmol/L SAL和30μmol/L H-89。
各组在培养箱中孵育48 h后,免疫荧光染色观察各组CHC和SGN损伤;试剂盒检测各组耳蜗基底膜中ROS和cAMP含量;Western blot检测各组PKA、p-CREB、CREB、Bcl-2、BDNF、NF-M蛋白水平。
结果CIS组CHC排列混乱、体积肿大,SGN细胞核破碎、神经突缺失,SAL可减轻CHC和SGNs损伤。
与C组相比,CIS组CHC、SGN数量较少(P<0.05),ROS、cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05);与CIS组相比,SAL组CHC、SGN数量较多(P<0.05),ROS含量较低(P<0.05),cAMP含量、PKA、BDNF、NF-M、Bcl-2蛋白及p-CREB/CREB水平较高(P<0.05)。
SQ22536和H-89均可逆转SAL对CHC和SGN的保护作用。
顺铂对小鼠淋巴器官和免疫功能的影响
姜丽平;刘军
【期刊名称】《中国公共卫生学报》
【年(卷),期】1998(17)3
【摘要】研究顺铂对小鼠淋巴器官重量、组织形态和免疫功能的影响。
结果显示,给小鼠腹腔内注射CDP0.5、1.0和1.5mg/kg,每天1次,连续7天后,胸腺和脾脏重量减轻;组织形态学检查显示胸腺、淋巴结和脾脏萎缩;天然杀伤(NK)细胞活性明显降低。
提示CDDP可致淋巴器官萎缩,并可抑制NK细胞活性。
【总页数】2页(P147-148)
【作者】姜丽平;刘军
【作者单位】大连医科大学-日中永和协会合作医药科学研究所;大连医科大学-
日中永和协会合作医药科学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R979.1
【相关文献】
1.肺积散对顺铂化疗肺癌小鼠造血及免疫功能的影响 [J], 吴敏;徐小华
2.黄芪多糖对 Lewis 肺癌小鼠细胞因子及顺铂所致免疫功能低下的影响 [J], 明海霞;陈彦文;胡永浩;董晓丽;顾静;李杨
3.参芪抑瘤方联合顺铂对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用及其对小鼠免疫功能的影
响 [J], 曾庆涛;马春林;李海龙;崔淑梅;朱凯敏
4.参芪扶正注射液对肺癌小鼠顺铂化疗后免疫功能的影响 [J], 宋岚;徐朝军;黄春林;张彩平;乔新惠
5.枸杞多糖联合顺铂对肝癌小鼠抑瘤作用及其对免疫功能的影响 [J], 王自闯;陈小永;张娟
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Caspase-3在老年豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的表达熊敏;何青莲;汪建;邓恒山【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2006(015)005【摘要】目的检测caspase-3在老年豚鼠耳蜗的表达.方法实验分两组:实验组和对照组,实验组豚鼠年龄为33至35个月之间,对照组豚鼠年龄为2至3个月.用免疫组织化学方法检测caspase-3在两组豚鼠耳蜗的表达.结果 Caspase-3在实验组耳蜗的表达呈阳性,阳性区域主要存在于耳蜗螺旋神经节细胞.在对照组耳蜗的表达呈阴性.结论 Caspase-3在老年豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞中呈阳性表达,提示caspase-3在豚鼠耳蜗老化过程中起重要作用.【总页数】3页(P547-549)【作者】熊敏;何青莲;汪建;邓恒山【作者单位】广州军区广州总医院耳鼻咽喉科,广州,510010;广州中医药大学第二临床学院病理科,广州,510120;广州军区广州总医院耳鼻咽喉科,广州,510010;广州军区广州总医院耳鼻咽喉科,广州,510010【正文语种】中文【中图分类】R322.92【相关文献】1.顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及caspase-3表达的影响 [J], 孙伟霞;王爱梅;包翠芬;惠丽杰;常志杰2.60CO照射对豚鼠听力及耳蜗螺旋神经节细胞Caspase表达的影响 [J], 谢利红;唐安洲;尹时华;谭颂华;孙贝蒂;钟华林3.强噪声暴露下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡及Caspase-3的表达 [J], 薛秋红;陈佳;龚树生;谢静;罗凌惠4.冲击波对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞Caspase-3的影响及与听阈阈移相关性研究[J], 杨俊慧;王正国;朱佩芳;刘兆华5.补肾方对聋豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞凋亡基因表达的影响 [J], 王枫;赵乌兰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
顺铂体内注射对子代豚鼠耳蜗毛细胞的影响
郝帅; 闫艾慧; 姜学钧
【期刊名称】《《大连医科大学学报》》
【年(卷),期】2011(033)005
【摘要】[目的]了解孕晚期顺铂暴露是否会诱导子代豚鼠耳蜗毛细胞损伤。
[方法]将孕晚期豚鼠12只随机分为两组,在孕50 d至56 d,顺铂组经腹膜腔注射顺铂1.5 mg/kg.d,对照组注射生理盐水1.5 mg/kg.d。
出生后14d,应用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)和Caspase-3免疫组化染色检测毛细胞凋亡情况。
[结果]孕晚期顺铂暴露的子代豚鼠耳蜗毛细胞有凋亡发生及Caspase-3蛋白表达。
[结论]孕期顺铂暴露可诱导子代豚鼠耳蜗毛细胞Caspase-3表达及凋亡发生。
【总页数】4页(P434-436,440)
【作者】郝帅; 闫艾慧; 姜学钧
【作者单位】中国医科大学第一临床医院耳鼻咽喉科辽宁沈阳110001
【正文语种】中文
【中图分类】R764.35
【相关文献】
1.川芎嗪通过调控fas/fasL的表达对顺铂诱导豚鼠耳蜗毛细胞的抗凋亡机制研究[J], 冷辉;孙海波;马贤德;刘宏伟;李媛
2.刺五加注射液对谷氨酸所致离体豚鼠耳蜗外毛细胞内钙浓度的影响 [J], 贾琳琳;杨笑天;张涤;张雪岩;张玚
3.顺铂体内注射对子代豚鼠耳蜗毛细胞的影响 [J], 郝帅; 闫艾慧; 姜学钧
4.丹参注射液对豚鼠耳蜗毛细胞的影响 [J], 马天宝;李同德;史永芝;张雪梅;康颂建
5.川芎嗪对顺铂诱导豚鼠耳蜗毛细胞模型中JNK/c-JUN信号转导通路调控及Caspase-3表达影响 [J], 冷辉;孙海波;马贤德;刘宏伟;李媛
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第30卷第5期2009年10月西安交通大学学报(医学版)Jour nal of Xi an Jiaotong University (Medical Scie nces )Vol .30No .5Oct .2009顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspase -3表达的影响孙伟霞1,王爱梅1,包翠芬2,惠丽杰1,常志杰1(1.辽宁医学院生理学教研室;2.辽宁医学院科学实验中心,辽宁锦州 121001)摘要:目的 建立小鼠顺铂耳毒性模型,研究不同剂量顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspa se -3表达的影响。
方法 69只昆明小鼠随机分成对照组、顺铂2.5mg /(kg ·d )组、顺铂3.5mg /(kg ·d )组和顺铂4.5mg /(kg ·d )组,腹腔连续注射5d 。
通过听脑干反应(audito ry brainstem respo nse ,A BR )测试观察用药前后小鼠听力的变化;应用免疫组织化学Envision 法检测半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase -3)在耳蜗中的表达。
结果 不同剂量顺铂组小鼠体重和听力明显下降,与对照组比较均有显著性差异(P <0.05,P <0.01);并且随着顺铂给药剂量的增加,小鼠耳蜗中caspase -3表达亦明显增强。
结论 应用顺铂可建立小鼠耳毒性模型;caspase -3参与了顺铂致小鼠耳蜗细胞损伤的过程,提示内耳细胞凋亡可能是顺铂的耳毒性机制之一。
关键词:顺铂;耳蜗;caspase -3;免疫组织化学中图分类号:R764.43 文献标志码:A 文章编号:1671-8259(2009)05-0616-04Effect of cisplatin on ototoxicity and expression ofcaspase -3in mouse cochleaSUN Wei -xia 1,WANG Ai -mei 1,BAO Cui -fen 2,H UI Li -jie 1,CH ANG Zhi -jie1(1.Department of Physiology ;2.Scientific Labo rato rial Cente r ,Liaoning M edical Co lleg e ,Jinzhou 121001,China )ABSTRAC T :Objective To establi sh a m ice m odel of cispla tin -induce d ototoxicity and to investigate the ef fectof cisplatin on the expression of caspase -3in mouse cochle a .Methods Totally 69Kunm ing mice were r andomly divide d into contr ol gr oup ,cisplatin 2.5mg /(kg ·d )group ,c i splatin 3.5mg /(kg ·d )gr oup and cisplatin 4.5mg /(kg ·d )group .Mice wer e injected intr aper itoneally f or 5days .Auditor y br ainstem r esponse (ABR )was m easure d to obser ve the change of he aring .Envi sion me thod of immunohistochemistr y was applie d to de tect the expr ession of caspase -3in cochle a .Results The we igh t and hear ing of mice in dif fer ent dose cisplatin groups were decline dsignif icantly as com pa red with those in contr ol gr oup (P <0.05,P <0.01),and the expression of caspase -3was gr eater r emar kably with m or e cisplatin injected .Conclusion A mouse model of cisplatin -induced ototoxicity could be establi shed .C aspase -3is involved in cisplatin -induced cochlear injur y .I t suggests that apoptosis m ay be one of the mechanisms of cispla tin ototoxicity .KEY WORDS :cisplatin ;cochle a ;caspase -3;immunohistochem istr y 收稿日期:2008-11-05 修回日期:2009-01-06通讯作者:王爱梅,教授,硕士研究生导师.E -mail :aim eiw ang @yah oo .com .cn作者简介:孙伟霞(1981-),女(汉族),在读硕士研究生.研究方向:听觉生理与病理.E -m ail :soffeesw x @ 顺铂(cisplatin ,CDDP )作为一种抗癌药,被广泛用于治疗各种恶性肿瘤。
然而该药具有严重的耳毒性副作用,可造成双侧听力损失,这成为影响顺铂治疗乃至停药的重要因素。
目前,关于顺铂的耳毒性机制尚不十分清楚,因此建立高效的实验动物模型,并在此基础上探讨顺铂的耳毒性机制已势在必行。
据此,本研究旨在选用成年昆明小鼠建立顺铂耳毒性模型,通过听脑干反应(audito ry brainstem respo nse ,ABR )测试和免疫组织化学方法研究顺铂对小鼠耳蜗毒性和caspase -3表达的影响,以进一步探讨顺铂的耳毒性机制。
1 材料与方法1.1 实验动物 健康雄性6周龄昆明小鼠69只,耳廓反射正常,体重28~32g ,由辽宁医学院实验动物中心提供。
动物自由食水,自然光照周期,稳定1周后用于实验。
实验期间所有动物均在安静状态下饲养并给予常规饮食。
1.2 主要试剂与仪器 顺铂注射液(20mg :20mL /甁,批号20070401)由南京制药厂生产;兔抗caspase -35期孙伟霞,王爱梅,包翠芬,等.顺铂对小鼠耳蜗毒性及caspa se-3表达的影响多克隆抗体、免疫组织化学染色试剂盒和DAB显色剂均购自北京中杉试剂公司;Smart EP&OAE听觉诱发电位-耳声发射记录系统由美国智听公司生产。
1.3 动物分组与模型建立 动物随机分为4组,即对照组15只、顺铂2.5mg/(kg·d)组19只、顺铂3.5mg/(kg·d)组20只和顺铂4.5mg/(kg·d)组15只。
用生理盐水将顺铂注射液稀释成0.5m g/m L 溶液,按每公斤体重2.5m g、3.5mg和4.5mg剂量给予腹腔注射,对照组则每天腹腔注射生理盐水0.25m L,各组均连续注射5d。
实验期间每天监测动物体重以调整药量。
1.4 ABR测试 各组动物于给药前及给药第6天分别测试ABR。
操作在隔音屏蔽室内进行。
小鼠用10g/L戊巴比妥钠90mg/kg经腹腔麻醉后,将电极的正极置于动物颅顶正中皮下,负极置于给声侧耳廓后下,接地电极置于对侧耳廓后下。
用Smart EP& OAE听觉诱发电位-耳声发射记录系统给予短纯音(tone burst)刺激,选取8、16、24kH z3个频率分别进行测试并记录ABR阈值(听阈)。
重复率39.1次/s,带通滤波100~3000H z,叠加1024次,扫描时程16.0m s。
声刺激强度从95dB SPL开始,以5dB逐次递减,听阈判定以刚出现ABRⅠ波为准并至少重复2次。
同一刺激频率下给药前后的听阈差值记为ABR阈移。
1.5 耳蜗石蜡切片制备 待各组动物停药并测试完ABR后,立即断头处死,速取听泡。
充分暴露耳蜗后,在解剖显微镜下刺破蜗窗及前庭窗,蜗尖钻孔并缓慢注入含40g/L多聚甲醛的0.1mol/L PBS(pH 7.4),并将标本置于该固定液中4℃下2h。
经PBS 冲洗后放入40g/L EDTA中,4℃下脱钙4~5d。
梯度酒精脱水,二甲苯透明,常规石蜡包埋,沿蜗轴正中行5μm连续切片。
1.6 免疫组织化学检测caspase-3的表达 石蜡切片在58℃孵箱中化蜡2h,常规脱腊至水;蒸馏水冲洗,PBS浸泡5min,用枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)热修复;30mL/L H2O2去离子水孵育10min,以消除内源性过氧化物酶活性;然后滴加一抗,4℃过夜。
取出切片后用PBS冲洗,4min×3次;滴加二抗,室温下孵育30min;PBS冲洗,4min×3次;DAB显色;自来水冲洗5min;苏木素轻度复染、脱水、透明;中性树胶封片。
显微镜下观察照相。
阴性对照染色切片用PBS代替一抗,其他实验步骤不变。
1.7 统计学分析 应用SPSS11.5统计软件包对实验数据进行统计学分析。
数据以均数±标准差(x±s)表示,显著性检验采用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果2.1 体重变化 通过体重监测观察到实验期间各组小鼠的体重变化情况。
结果表明:从给药第4天起,不同剂量顺铂组小鼠的体重均明显下降,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05,P<0.01);并且随着顺铂给药剂量的增加,小鼠体重下降愈显著(P<0.05, P<0.01,图1)。
图1 各组小鼠体重变化的比较Fig.1T he comparison of weight chang es in each g roup*P<0.05,**P<0.01vs.control;■P<0.05,■■P<0.01vs. CDDP2.5mg/k g group;△P<0.05vs.CDDP3.5mg/kg group2.2 顺铂对小鼠A BR阈移的影响 连续给药后,在16kH z和24kH z下,不同剂量顺铂组小鼠的ABR阈移与对照组比较均有显著性差异(P<0.01);并且随着顺铂给药剂量的增加,ABR阈移亦显著增大,呈现明显的量效关系(P<0.05,P<0.01,表1)。