MTT法在检测细胞增殖方面的探讨
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２２ ・ ６
山西医科 大学学报 （ ｈｎ ｉ ｄＵｎ ）２ ０ ＪＳ ａｘ Ｍｅ ｉ ０ ７年 ３月 ，３ （ ｖ ８ ３
文章编 号 ： １ ０ —６ １ （０ ７ ０ —０ ６ ０ ７ ６ １ ２ ０ ）３ ２ ２—０ ２
ＭＴ Ｔ法在 检 测 细胞 增 殖 方 面 的探 讨
还原 法在 测定 细胞 增殖 活性 中 的作 用 。
１ 材 料 和方 法
２ 结果
选 择 适 当的 细 胞 接 种浓 度 ， 般 情 况 下 ，６孔 一 ９ 培养板 内贴 壁细 胞 长 满 时 约 ５×１ ０ —５×１ 个 细 ０ 胞 ｌ Ｊ经 药物 干 预后 ， 入 二 甲基 亚砜 或 Ｓ Ｓ裂 ， 加 Ｄ 解 液能 溶解 细胞 中 的紫 色结 晶物 ｆｒ ｚｎ 用 酶 标 ｏｍａａ ，
标 仪 （ ｔ ＢＯ—ＲＡ 。 Ｅ本 Ｉ Ｄ）
１ ２ 方 法 ．
１２ １ 接种、 ．． 培养细胞
使用与酶标仪匹配的 ９ ６
此 法 的主要 原 理 是 活 细 胞 线 粒 体 中 的琥 珀 酸 脱氢 酶 能使外 源性 的 ＭＴ Ｔ还 原 为难 溶 性 的蓝 紫结 晶物 ｆｒ ｚｎ 并 沉 积 在 细 胞 中 ， 死 细 胞 无 此 功 ｏｍａａ ， 而
关键词 ： 比色法 ； 细 胞增 殖 ； ＭＴ Ｔ 中图分类号 ： Ｑ一３ １ ３ 文献标识码 ： Ａ
吸光度 值在 ０ ７ ．５—１ ２ ． ５时 ， 这样才 能保 证数 据有线 性关 ＭＴ 比色法 是一种检测 细胞存 活和增殖性 方面有效 Ｔ
系 ， Ｔ比色法才 可灵敏 、 ＭＴ 准确地反映 出细胞数量上 的变化 。 结论
能。
孑 培养板 ， Ｌ 测定细胞增殖每孑体积 ２０ 含约２００ Ｌ ０ ｌ ０
个 细胞 … 应 根 据所 用 的细 胞 类 型 、 殖 速 度 进 行 １， 增 调节 ， 意设 置 ３个 重 复 孑 和 无 细 胞 培 养 基 对 照 ， 注 Ｌ
３ ７℃培养细胞至合适的时间 ， 然后给予特定的药物
１２２ 加 ＭＴ ．． Ｔ 药物处理结束后 ， 一般每孑 ０ Ｌ ０ ２
ｌ 养基 加入 ２ ｌ Ｔ（ ／ ）３ 培 ０ ＭＴ ５ｍｇｍ１，７℃ 培 养 箱 内继 续孵 育 ４ｈ 血 清 浓度 尽 量不 高 于 ５ ， ， ％ 最好 在 加 ＭＴ ５ｍｇ ｍ１前换 成无 血清 的培 养基 。 Ｔ（ ／ ） １２３ 呈 色 、 ．． 比色 如 果 是 贴 壁细 胞 ， 心 吸 出培 小 养 上清 液 ， Ｌ 每孑 加入 １０ ＭＳ 使结 晶物充 分溶 ０ ｌ Ｄ Ｏ， 解 ， 择波长 测定 ， 选 对悬 浮生 长 的细胞 ， 离 心 １００ 需 ０ ｒｍｉ， ｉ， 后 弃 去孑 内上 清 再 加 １０ ｌ Ｍ— ／ ｎ５ｒ ｎ 然 ａ Ｌ ０ Ｄ Ｓ 或者 直 接 加入 １０ ＤＳ裂 解液 更 为 方 便 ， Ｏ， ０ ｌ Ｓ 在
３ 讨 论
１１ 材料与仪器 ．
ＭＴ Ｔ（四甲基 偶氮唑盐 ） 由上
海生工生物工程技术服务有限公司提供 ， ＭＳ 二 Ｄ Ｏ（
甲基亚 砜 ） 由上 海生 工 提 供 ； 置显 微镜 （ 庆 光 学 倒 重
仪器厂 Ｘ Ｚ ２ ； Ｓ —Ｄ ）加样枪（ 加拿大 Ａ ｕａｅ ｅ ； ｃｒ ｔ ） 酶 ｐｔ
目前检测 细胞活性的方法很多 ， 但都 有不足 ， 如： 同位 素 （ Ｔｄ ＩｄＲ）掺 入 法 虽 具 有 灵 敏 ０ Ｈ Ｒ， ｕ 、 度高 、 稳定性 好等 特点 ， 但步骤 较 多， 要特殊 设 需 备， 最大的问题是有放射性， ＭＴ 而 Ｔ法具有灵敏度 高、 稳定性好、 快速 、 操作简便 的特点 ， 现探讨 ＭＴ Ｔ
酶标仪上测定各孑 数值 ， Ｌ 记录结果 ， 以时问为横坐 标， 吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
时， 药液或营养液沿孑 边缓慢加 入 ， Ｌ 但不能加 在细 胞上 ， 细胞培养的每一步操作时尽量避免产生细胞 生长不均匀的各种因素， 这样 ， 才能保证 ＭＴ Ｔ结晶 形成的量与细胞数呈线性关 系。另外要避免血 清
干扰 ， 用含 １ ％胎 牛血 清 培 养 液 培 养 细胞 时 ， ５ 当加 入 ＭＴ 反应 后 会 出 现蛋 白沉 淀 ， 后 的沉 淀 很 难 Ｔ 最
赵嘉惠， 张华学实验室， 太原 ０００） ３０１
摘要 ： 目的 了解 ＭＴ 四甲基偶 氮唑盐 ） 在检 测细 胞增殖 性 方面 的作用 。 方法 采用 酶标 仪 在 ５０ ｎ ｌ Ｔ（ 法 ７ ｉ 波长 附 近 Ｙ （０ —６ ０ｎ 处测 定光吸收值 ， ５ ０ ０ ｍ） 以反映 活细胞 的数 目。 结果 的方 法 ， 具有操作简便 、 经济、 快速 、 自动化 的优点 。 易
或物 理 因素刺 激 。
在进行实验前 ， 对每一种 细胞其贴壁率 、 倍增 时间以及不 同接种细胞数条件下的生长 曲线 ， 确定 实验中每孑 的接种细胞数 和培养时间， Ｌ 以保证培养 终止致细胞过满 ， 但也要注意每孑 内各区的细胞生 Ｌ
长 不 均 匀 可 直 接 影 响结 果 ， 加 药 液 或 换 营养 液 当
仪在 ５ ０ｎ ｌ ７ ｌ 波长附近（０ —６０ｎ 测定其光吸 Ｔ ５０ ０ ｍ）
收值 【３， 围在 ０ ７ —１２ ， Ｔ 结 晶 物形 成 的 ２ 范 ， Ｊ ．５ ．５ ＭＴ 量 与细 胞数 成正 比 ， 殖生 长 旺盛 的 细胞 将 还 原 更 增 多 的 ＭＴ 并 具 有 较 高 的 光 吸 收 值 ； 之 ， 光 吸 Ｔ， 反 则 收度 越 低 。该 方 法 被 广 泛应 用 于 一 些 生 物 活 性 因 子 的活性 检测 、 肿 瘤 药 物 的筛 选 、 胞 毒 性 实 验 抗 细 的测定 等 。
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２２ ・ ６
山西医科 大学学报 （ ｈｎ ｉ ｄＵｎ ）２ ０ ＪＳ ａｘ Ｍｅ ｉ ０ ７年 ３月 ，３ （ ｖ ８ ３
文章编 号 ： １ ０ —６ １ （０ ７ ０ —０ ６ ０ ７ ６ １ ２ ０ ）３ ２ ２—０ ２
ＭＴ Ｔ法在 检 测 细胞 增 殖 方 面 的探 讨
还原 法在 测定 细胞 增殖 活性 中 的作 用 。
１ 材 料 和方 法
２ 结果
选 择 适 当的 细 胞 接 种浓 度 ， 般 情 况 下 ，６孔 一 ９ 培养板 内贴 壁细 胞 长 满 时 约 ５×１ ０ —５×１ 个 细 ０ 胞 ｌ Ｊ经 药物 干 预后 ， 入 二 甲基 亚砜 或 Ｓ Ｓ裂 ， 加 Ｄ 解 液能 溶解 细胞 中 的紫 色结 晶物 ｆｒ ｚｎ 用 酶 标 ｏｍａａ ，
标 仪 （ ｔ ＢＯ—ＲＡ 。 Ｅ本 Ｉ Ｄ）
１ ２ 方 法 ．
１２ １ 接种、 ．． 培养细胞
使用与酶标仪匹配的 ９ ６
此 法 的主要 原 理 是 活 细 胞 线 粒 体 中 的琥 珀 酸 脱氢 酶 能使外 源性 的 ＭＴ Ｔ还 原 为难 溶 性 的蓝 紫结 晶物 ｆｒ ｚｎ 并 沉 积 在 细 胞 中 ， 死 细 胞 无 此 功 ｏｍａａ ， 而
关键词 ： 比色法 ； 细 胞增 殖 ； ＭＴ Ｔ 中图分类号 ： Ｑ一３ １ ３ 文献标识码 ： Ａ
吸光度 值在 ０ ７ ．５—１ ２ ． ５时 ， 这样才 能保 证数 据有线 性关 ＭＴ 比色法 是一种检测 细胞存 活和增殖性 方面有效 Ｔ
系 ， Ｔ比色法才 可灵敏 、 ＭＴ 准确地反映 出细胞数量上 的变化 。 结论
能。
孑 培养板 ， Ｌ 测定细胞增殖每孑体积 ２０ 含约２００ Ｌ ０ ｌ ０
个 细胞 … 应 根 据所 用 的细 胞 类 型 、 殖 速 度 进 行 １， 增 调节 ， 意设 置 ３个 重 复 孑 和 无 细 胞 培 养 基 对 照 ， 注 Ｌ
３ ７℃培养细胞至合适的时间 ， 然后给予特定的药物
１２２ 加 ＭＴ ．． Ｔ 药物处理结束后 ， 一般每孑 ０ Ｌ ０ ２
ｌ 养基 加入 ２ ｌ Ｔ（ ／ ）３ 培 ０ ＭＴ ５ｍｇｍ１，７℃ 培 养 箱 内继 续孵 育 ４ｈ 血 清 浓度 尽 量不 高 于 ５ ， ， ％ 最好 在 加 ＭＴ ５ｍｇ ｍ１前换 成无 血清 的培 养基 。 Ｔ（ ／ ） １２３ 呈 色 、 ．． 比色 如 果 是 贴 壁细 胞 ， 心 吸 出培 小 养 上清 液 ， Ｌ 每孑 加入 １０ ＭＳ 使结 晶物充 分溶 ０ ｌ Ｄ Ｏ， 解 ， 择波长 测定 ， 选 对悬 浮生 长 的细胞 ， 离 心 １００ 需 ０ ｒｍｉ， ｉ， 后 弃 去孑 内上 清 再 加 １０ ｌ Ｍ— ／ ｎ５ｒ ｎ 然 ａ Ｌ ０ Ｄ Ｓ 或者 直 接 加入 １０ ＤＳ裂 解液 更 为 方 便 ， Ｏ， ０ ｌ Ｓ 在
３ 讨 论
１１ 材料与仪器 ．
ＭＴ Ｔ（四甲基 偶氮唑盐 ） 由上
海生工生物工程技术服务有限公司提供 ， ＭＳ 二 Ｄ Ｏ（
甲基亚 砜 ） 由上 海生 工 提 供 ； 置显 微镜 （ 庆 光 学 倒 重
仪器厂 Ｘ Ｚ ２ ； Ｓ —Ｄ ）加样枪（ 加拿大 Ａ ｕａｅ ｅ ； ｃｒ ｔ ） 酶 ｐｔ
目前检测 细胞活性的方法很多 ， 但都 有不足 ， 如： 同位 素 （ Ｔｄ ＩｄＲ）掺 入 法 虽 具 有 灵 敏 ０ Ｈ Ｒ， ｕ 、 度高 、 稳定性 好等 特点 ， 但步骤 较 多， 要特殊 设 需 备， 最大的问题是有放射性， ＭＴ 而 Ｔ法具有灵敏度 高、 稳定性好、 快速 、 操作简便 的特点 ， 现探讨 ＭＴ Ｔ
酶标仪上测定各孑 数值 ， Ｌ 记录结果 ， 以时问为横坐 标， 吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
时， 药液或营养液沿孑 边缓慢加 入 ， Ｌ 但不能加 在细 胞上 ， 细胞培养的每一步操作时尽量避免产生细胞 生长不均匀的各种因素， 这样 ， 才能保证 ＭＴ Ｔ结晶 形成的量与细胞数呈线性关 系。另外要避免血 清
干扰 ， 用含 １ ％胎 牛血 清 培 养 液 培 养 细胞 时 ， ５ 当加 入 ＭＴ 反应 后 会 出 现蛋 白沉 淀 ， 后 的沉 淀 很 难 Ｔ 最
赵嘉惠， 张华学实验室， 太原 ０００） ３０１
摘要 ： 目的 了解 ＭＴ 四甲基偶 氮唑盐 ） 在检 测细 胞增殖 性 方面 的作用 。 方法 采用 酶标 仪 在 ５０ ｎ ｌ Ｔ（ 法 ７ ｉ 波长 附 近 Ｙ （０ —６ ０ｎ 处测 定光吸收值 ， ５ ０ ０ ｍ） 以反映 活细胞 的数 目。 结果 的方 法 ， 具有操作简便 、 经济、 快速 、 自动化 的优点 。 易
或物 理 因素刺 激 。
在进行实验前 ， 对每一种 细胞其贴壁率 、 倍增 时间以及不 同接种细胞数条件下的生长 曲线 ， 确定 实验中每孑 的接种细胞数 和培养时间， Ｌ 以保证培养 终止致细胞过满 ， 但也要注意每孑 内各区的细胞生 Ｌ
长 不 均 匀 可 直 接 影 响结 果 ， 加 药 液 或 换 营养 液 当
仪在 ５ ０ｎ ｌ ７ ｌ 波长附近（０ —６０ｎ 测定其光吸 Ｔ ５０ ０ ｍ）
收值 【３， 围在 ０ ７ —１２ ， Ｔ 结 晶 物形 成 的 ２ 范 ， Ｊ ．５ ．５ ＭＴ 量 与细 胞数 成正 比 ， 殖生 长 旺盛 的 细胞 将 还 原 更 增 多 的 ＭＴ 并 具 有 较 高 的 光 吸 收 值 ； 之 ， 光 吸 Ｔ， 反 则 收度 越 低 。该 方 法 被 广 泛应 用 于 一 些 生 物 活 性 因 子 的活性 检测 、 肿 瘤 药 物 的筛 选 、 胞 毒 性 实 验 抗 细 的测定 等 。
