水中粪大肠菌群快速检测方法_固定底物酶底物法与多管发酵法的比较_高瑞坤

地震等自然灾害过后水体会被大量微生物所污染,特别是被粪便污染。

如水体中含有肠道病原菌株,人饮用后会暴发严重疾病。

粪大肠菌群是一类能使乳糖发酵、产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,是水体受人畜粪便污染的最直接指标。

对于粪大肠菌群检测的方法主要为滤膜法和多管发酵法,但试验过程较为繁琐,因此亟需一种快速简便的检测方法。

酶底物法也可用来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌,操作方便,检测时间短,无需确认试验。

但该方法尚未正式列入国家标准,因此,该文通过与多管发酵法相比较,对酶底物法进行验证分析。

1材料与方法1.1试验材料仪器及试剂:乳糖蛋白胨;EC 肉汤;灭菌锅;科立得TM (Colilert R )试剂(美国爱德士生物科技股份有限公司);酒精灯;100mL 无菌取样瓶(里面装有1.5%硫代硫酸钠去除水样中的余氯);3mm 接种环;无菌培养定量盘(97孔);封口机(带97孔定量盘橡胶托垫);97孔阳性标准比色盘;培养箱。

1.2试验方法1.2.1多管发酵法。

参考《生活饮用水标准检验方法(GB/T5750.12-2006)》和《水和废水监测分析方法(第四版)》,将水样分别接种到发酵管中,发酵管中盛有乳糖蛋白胨,在(37±0.5)℃条件下培养(24±2)h ,如果试管产酸或产气,说明试验呈阳性(初发酵试验),将呈阳性结果的发酵管轻微振荡,用灭菌棒或3mm 接种环将培养物转接至EC 培养液中,在(44.5±0.5)℃水浴下培养(24±2)h ,如果发酵管产气即可确认呈阳性(复发酵试验)。

1.2.2酶底物法。

将科立得TM (Colilert R )试剂加入100mL 装有水样的取样瓶中,待试剂完全溶解后,倒入无菌培养定量盘(97孔)中,对其进行封装,然后置于(44.5±1)℃恒温培养箱中培养24h 。

取出后与97孔阳性标准比色盘进行比较,如果为阳性反应,则黄色孔颜色较标准比色盘深,如果有疑虑,可将可疑阳性的试管继续培养4h ,然后观察,之后出现的颜色反应无效。

水中粪大肠菌群测定方法-纸片快速法与多管发酵法的比较黄晓容【摘要】2015年10月国家环境保护部发布了行业标准《水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》（HJ755-2015）（以下简称纸片快速法）。

之前环境监测部门一直在使用国家环境保护部于2007年3月发布的行业标准《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T347-2007）（以下简称多管发酵法）。

纸片快速法操作简单快速,在标准中对采样瓶的处理、样品的保存、水样的稀释接种等做出了详细的规定,而多管发酵法中没有相应规定。

本文对两个标准的异同点进行比较,提出了将这两种方法的优点应用于实际环境监测工作中。

【期刊名称】《生物技术世界》【年(卷),期】2016(000)004【总页数】2页(P33-33,35)【关键词】粪大肠菌群;多管发酵法;纸片快速法【作者】黄晓容【作者单位】重庆市黔江区环境监测中心站，重庆409000【正文语种】中文【中图分类】X8我国地表水体粪大肠菌群含量普遍较高，部分水域含量甚至超过Ⅴ类水质标准数万倍［2］。

我国粪便微生物指标的评价还处于起步阶段，水质评价多以常规理化指标为主，对微生物指标的评价有待进一步加强。

目前水中粪大肠杆菌群检测方法主要有传统的滤膜法及多管发酵法，并且已经列入环保行业标准方法（HJ/T347-2007），此两种传统方法被国内环境监测部门广泛采用，但上述方法操作时间需2-5天，步骤较为繁琐，需验证试验。

多管发酵法每100毫升水样中最低检出限为2个粪大肠菌群［1］。

冯青英等人对传统的多管发酵法进行了优化，将水样接种至乳糖蛋白胨培养液后，在44.5℃±0.5℃培养箱中培养24h后直接读取结果［3］。

多管发酵法不受浊度的影响，可以对浊度较大的污水水样进行监测。

纸片法培养时间对阳性管率有明显影响，适用于测定受粪便污染程度较轻的水体［4］。

多管发酵法和纸片快速法均为行业标准，对粪大肠菌群的检测做出了详细的规定，现就两个标准中的异同做以下探讨。

生活饮用水大肠菌群快速纸片法和多管发酵法检测结果比较王琳
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2015(8)8
【摘要】大肠菌群测定是检测生活饮用水情况的重要指标,具有广泛的卫生学意义。

目前,我国环保部门检测大中大肠菌群常用传统的多管发酵法,但该方法准备工作量大,操作复杂,周期长,无法满足大指样品快速检测的需求。

1956年,Forg等提出的快速纸片在餐具消毒等的定性检测中得到了广泛应用,并被列入我国卫生部《生活饮
用水检验规范（2001）》及国家环保总局《水和废水监测分析方法（第4版）》
中的C类方法。

【总页数】1页(P166-166)
【作者】王琳
【作者单位】江西省上饶市疾病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】R15
【相关文献】
1.固定底物酶底物法与多管发酵法和快速纸片法测定水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的比较
2.生活饮用水大肠菌群检测纸片法快速检测与发酵法的结果对比
3.生活
饮用水大肠菌群检测纸片法快速检测与发酵法的结果对比4.地表水粪大肠菌群检
测用纸片快速法和多管发酵法比较5.生活饮用水中总大肠菌群多管发酵法与纸片
法检测方法比较
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中国卫生产业有资料表明:酶底物法试剂盒弥补了多管发酵法的不足,是现代微生物快速检测的发展方向,超过90%以上的美国国家实验室都使用此方法[1]。

目前,国内越来越多的实验室采用酶底物法用于水质大肠菌群的检测,但总体规模还不大,还未被绝大多数检测机构所采用;特别是基层实验室因条件受限,采用酶底物法的比例更少。

作者所处的属于基层实验室,我们借助较为简易的基层条件,分别使用酶底物法和多管发酵法对饮用水中的总大肠菌群进行检测,分析发现两种方法的检测结果有高度的一致性。

现总结报告如下。

1材料与方法1.1样品大英县农村饮用水22份。

1.2试剂酶底物法由株洲鸿润检测技术有限公司提供的总大肠菌群-大肠埃希氏菌测定试剂盒,十管法,批号为20150416。

多管发酵法的乳糖培养基由杭州滨和微生物试剂有限公司提供,批号为20150822,EC 肉汤由北京奥博星生物技术有限责任公司提供,批号为20141222,伊红美蓝琼脂由北京奥博星生物技术有限责任公司提供,批号为20141222。

1.3原理酶底物法是利用大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶,该酶能分解试剂盒中底物邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG),而生成黄色的邻-硝基酚,使培养基呈现颜色变化,颜色会从无色变成黄色,指示有大肠菌群的存在;而大肠埃希氏菌可产生β-葡萄糖醛酸酶,而β-葡萄糖醛酸酶能对试剂中的4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)成份进行代谢,使其产生荧光,可在紫外灯下进行鉴别。

多管发酵法是根据大肠菌群能发酵乳糖,产酸产气及具备革兰氏染色阴性,无芽孢呈杆状等有关特性的菌群组。

1.4方法每份水样分成两份接种以下两种方法,根据污染程度进行稀释。

1.4.1酶底物法采用十管法,直接将水样100mL 加入含有“科立德”酶底物试剂的无菌瓶中,盖上瓶盖,颠倒混匀,使酶底物试剂充分溶解,加样:使用10mL 无菌刻度吸管吸取上述处理好的水样10mL 加入到试剂盒的方格中,共十格,盖上盖子(36±1)℃,培养24h 后进行判读,如果结果可疑,可延长培养时间到28h 进行结果判读,查MPN 检索表报告水样中的MPN 值。

I节能环保LOW CARBON WORLD2021/6三种监测地表水中粪大肠菌群标准方法的比较唐微微，罗娅敏，陈瀚,赵志友(四川省成都生态环境监测中心站，四川成都610066)【摘要】多管发酵法、纸片法和酶底物法是目前测定地表水中粪大肠菌群的常用标准方法，通过三种方法对粪大肠菌群标准物质和实际地表水样进行分析检测，结果表明：多管发酵法、纸片法和酶底物法用于粪大肠菌群的检测结果具有一致性；通过三种方法优缺点的对比，多管法成本低适用于常规检测，纸片法高效方便更适用于大批量快速检测，酶底物法操作简单，不受场地限制可直接现场检测,更适用于应急现场监测遥【关键词】多管发酵法；纸片法；酶底物法；粪大肠菌群;地表水【中图分类号】X132【文献标识码】A【文章编号】2095-2066(2021)06-0034-020前言粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，是在44.5益能生长并发酵乳酸产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌⑴。

环境地表水中的粪大肠菌群主要来自粪便的污染，因此通过测定水中粪大肠菌群的含量，可间接得出水体受粪便污染的情况囚,是当前国内外环境监测部门主要监测项目之一，是评价水体污染程度和环境卫生的重要指标，在《地表水环境质量(GB3838—2002)》中，规定I、域、芋、郁及吁类水粪大肠菌群的含量依次臆200、200〜2000、2000〜10000、10000~20000及20000~40000个/L,我国地表水体粪大肠菌群含量普遍较高，部分水域含量甚至超过吁类水质标准。

多管发酵法叫纸片法⑷和酶底物法间是目前国内测定地表水中粪大肠菌群常用的标准方法。

多管发酵法早在1985年就列入《生活饮用水标准检验方法(GB5750-85)》，并于2018年发布修订版，是粪大肠菌群测定的经典方法,它作为《水和废水监测分析方法(第四版)》中的推荐方法向，美国公共卫生协会(APHA)出版的《水和废水标准检验方法(20版)》中方法9221E也采用的是多管发酵法；纸片法在西方发达国家运用较少，主要在一些发展中国家使用，环保部在2015年发布了纸片法的标准方法，它作为《水和废水监测分析方法(第四版)》中的推荐方法(C类方法)叫酶底物法是一种新型酶技术检测方法，已在美、日、韩和欧洲许多国家使用孔2003年从美国引入我国，环保部在2018年发布了酶底物法的标准方法。

测部 门采用 的标 准检 测 方 法 为膜 过 滤 法 （ ＭＦ ） 和 多
酶底物法（ Ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ） 是 利 用
大肠 菌 群能 分解 培 养 液 ， 使 之呈 黄 色 ， 以及 大 肠 埃
希 氏菌使 培 养液 在 波长 ３ ６ ６ ｎ ｌ ｎ紫外 光 下 产生 荧 光
Ｗａ ｎ ｇ Ｙａ ｎ，Ｌ ｏ ｎ ｇ Ｊ ｉ ａ ｈ ｏ ｎ ｇ ，Ｘｕ Ｘ ｉ ｏ ｎ ｇ ｆ ｅ ｉ ，Ｌ ｉ Ｊ ｉ ｎ ｇ
（ Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｏ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ，Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ ４ １ ０ ０ ０ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
第３ ８卷第 ７期 ２ ０ １ ３年 ７月
环 境 科 学 与 管理
ＥＮＶＩ Ｒ０Ｎ 佃 ＮＴＡＬ Ｓ ＣＩ ＥＮＣＥ ＡＮＤ Ｍ ＡＮＡＧＥＭ ＥＮＴ
Ｖ０ １ ． ３ ８ ＮＯ ． ７
Ｊ ｕ ｌ ｙ ２ ０１ ３
文 章编 号 ： １ ６ ７ ４— ６ １ ３ ９ （ ２ Ｏ １ ３ ） Ｏ ７— ０ １ ２ ６— ０ ３
结果ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ稳 定 ， 满 足环 境 监 测技 术 要 求 ， 可 用 以评 价 水 质 微 生 物 污 染 程 度 。
关键 词 ： 酶底物法 ； 多管 发 酵 法 ； 粪 大肠 菌 群 中 图分 类 号 ： Ｘ ８ ３ ０ ． ２ 文 献标 识 码 ： Ｂ
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｆ ｅ ｃ ａ ｌ Ｃｏ ｌ ｉ ｆ ｏ ｒ ｍ ｉ ｎ Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｂ ｙ Ｅｎ ｚ ｙ ｍｅ Ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ａ ｎ ｄ Ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｅ— — ｔ ｕ ｂ ｅ Ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ

水环境粪大肠菌群监测2种分析方法的对比粪大肠菌群是监测水体是否被粪便污染的指示菌,是监测地表水尤其是饮用地表水的重要指标之一。

它是总大肠菌群的一部分,其基本性状和总大肠菌群相似。

在实验时,将培养温度提高到44.5C,我们把可以在此条件下生长并发酵产酸产气的,称粪大肠菌群。

经典的粪大肠菌群的监测方法是采用多管发酵法,但这种方法具有前期准备时间长、任务繁重;培养过程中操作繁琐的缺点,并且事后还要清洗大量的试管,浪费人力、物力、财力。

为此很多厂家研发了大肠菌群的快检纸片。

采用纸片法,大大缩短了实验的时间,并且根本不需要再清理大量的试管,减轻了劳动强度,也节约了宝贵的水资源。

那么,多管发酵法和纸片法的数据究竟有没有相关性?作者采用某厂生产的大肠菌群的快检纸片通过对比实验旨在探讨这个问题。

一、分析方法1、多管发酵法(1)培养基单倍和三倍乳糖蛋白胨培养液(培养液的成分与制备略,下同)EC培养液(2)步骤①水样接种量：将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样的接种量,每个样品至少用3个不同的水样量接种,同一接种水样量要有五管。

如果接种的体积为10ml,则接种于含有三倍浓度5ml的乳糖蛋白胨培养液的试管内,如果接种量为1ml或者小于1ml,则接种于含有单倍浓度10ml的乳糖蛋白胨培养液的试管内。

②初发酵：将接种了水样的试管,在370.5C下培养242h,产酸和产气的发酵管表明实验阳性。

如产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。

③复发酵试验轻微振荡初发酵阳性的发酵管,用3mm接种环将培养物转接到EC培养液中。

在440.5C水浴中培养242h,培养后立即观察。

发酵管产酸产气表明确信试验阳性。

④计算和报告结果根据不同接种量的发酵管所出现的阳性结果的数目,从MPN表中查相应的MPN 指数,计算出每升水中粪大肠菌群的MPN值。

2、纸片法采用某厂生产的大肠菌群快检纸片①水样接种量：将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样的稀释倍数,每个样品至少用3个不同的水样量接种,同一接种水样量要有五个纸片。

f论与综述清洗世界Cleaning World第36卷第12期2020年12月文章编号：1671-8909 ( 2020) 12-0121-003比较快速检测水中粪大肠菌群的方法刘招椿(宁德市环境监测站东侨分站，福建宁德 352 1000)摘要：目的：粪大肠菌群集中产生在温血动物和人的粪便当中，其数量的多少在一定程度上直接代表着水体受粪便污染的具体程度，是目前国际上所通行的对受粪便污染水质监测的重要指示菌，其也是对城市污水特别是 生活污水进行综合评价的关键指标之一。

现阶段，我国环境监测部门主要采用多管发酵法和膜过滤法作为标准的 检测方法，但是这两种方法在检测过程中所花费的时间往往都比较长，一般需要两三天的时间，并且实验步驟十 分繁琐，对于环境的要求非常高。

为此，简便快速的检测方法至关重要。

关键词：水中粪大肠菌群；快速检测；固定底物酶底物法；多管发酵法中图分类号：X 321 文献标识码：A〇引言分析水中粪大肠菌群快速检测方法-固定底物酶底 物法与多管发酵法的比较，进而为实际检测工作提供更 多更好的检测方法。

方法：在检测水中粪大肠菌时分别利用固定底物酶 底物法与多管发酵法进行检测，在此基础上对两种方法 的检测结果进行比较。

结果：对大肠菌群进行科学检测 时，利用酶底物法与多管发酵法所检测出来的结果，在 一定程度上具备非常强的相关性，在浓度范围相对较低 的状态下样品浓度所具备的相关性比高浓度范围更好， 二者差异有统计学意义。

结论：利用酶底物法的检测结 果在一定程度上会比多管发酵法的检测结果低，这极有 可能与酶底物法检测的大肠埃希氏菌、多管发酵法检测 的粪大肠菌群所造成的，当置信度控制在95%的条件 下是允许存在差异的，并且与环境各方面的监测要求十 分相符，基于检测水中粪大肠方法成本价格、准确度、 灵敏度、简易性及定量范围的考虑，建议选用97孔定 量盘法与酶底物法检测水中粪大肠菌群。

1实验部分1.1仪器设备和试剂材料(1) 仪器设备。

酶底物法与多管发酵法在水中总大肠菌群测定中的应用价值比较李娜【摘要】目的比较酶底物法与多管发酵法在水中总大肠菌群检测中的应用价值.方法酶底物法与多管发酵法分别检测30份水样本,采用加标检测试验方法比较2种方法对水中总大肠菌群检出率的差异,评估2种检测方法的相关性.结果酶底物法和多管发酵法对30份大肠菌群样水的检出率分别为76.67％(23/30)、60.00％(18/30).2种方法对大肠菌群样水的检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05).酶底物法与多管发酵法对总大肠菌群检测结果呈正相关(r=0.97,P<0.05).结论酶底物法与多管发酵法对水中总大肠菌群的检出率相近,但酶底物法操作快速、简便等,可替代多管发酵法来检测水中总大肠菌群.【期刊名称】《河南医学研究》【年(卷),期】2019(028)009【总页数】2页(P1622-1623)【关键词】总大肠菌群;酶底物法;多管发酵法【作者】李娜【作者单位】淮阳县疾病预防控制中心,河南周口 466700【正文语种】中文【中图分类】R446.5大肠菌群是目前我国评价生活饮用水、地表水及水源水等质量的重要指标。

将大肠菌群在27 ℃培养基中培养24 h可发酵成乳糖，产酸产气，能够在受粪便污染的水体中检出，对评价水质有重要意义[1]。

多管发酵法是检测总大肠菌群的传统方法，检测周期较长，培养基保存时间较短，且针对阳性结果需进行验证试验，操作较繁琐[2]。

酶底物法具有快速检测的特点，可有效弥补传统多管发酵法的不足。

酶底物法通过利用大肠菌群能够产生β2半乳糖苷酶，分解为2-硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)，使培养液变为黄色，检测水样中是否存在大肠菌群[3]。

本研究比较酶底物法与多管发酵法在水中总大肠菌群检测中的应用价值。

1 资料与方法1.1 材料与试剂试验所用标准菌株为大肠埃希菌(中国普通微生物菌种保藏管理中心)，细菌检测所需API20E试剂由生物梅里埃公司提供。

酶底物法和多管发酵法检测水中总大肠菌群的分析发布时间：2021-06-07T12:07:00.517Z 来源：《基层建设》2021年第4期作者：庞元文[导读] 摘要：目的对比分析水内大肠菌群的检测方法，给现实的检测工作中带来更优异地选取检测方法提供借鉴。

湛江市粤海自来水有限公司广东湛江摘要：目的对比分析水内大肠菌群的检测方法，给现实的检测工作中带来更优异地选取检测方法提供借鉴。

方法选择五十一孔定量纸片法、九十七孔定量纸片法、乳糖蛋白胨发酵法、乳糖胆盐发酵法检测水中里面的大肠菌群。

结果131份水样，酶底物法阳性率为73.3%。

乳糖蛋白胨发酵阳性率为61.8%。

乳糖胆盐发酵阳性率为58.8%。

结论五十一孔定量圆盘法的敏捷度优于多管发酵法，但是它的定量面积较窄，九十七孔定量圆盘法的敏捷度和定量面积要优于多管发酵法。

关键词：酶底物法；多管发酵法；检测水中总大肠菌群；分析讨论大肠菌群是一类革兰氏阴性杆菌，能在37℃下发酵乳糖、出酸出气、需氧兼性厌氧菌24小时，可在自然条件下的粪便污染水和营养水中检查出来。

评价水质是非常重要的。

该指标具有宽广的卫生学含义。

检查水中大肠菌群的办法有酶底物法、多管发酵法以及滤膜法，当中酶底物法分成五十一孔定量圆盘法以及九十七孔定量圆盘法，多管发酵法可以分成乳糖蛋白胨发酵法方法以及乳糖胆盐发酵法。

酶底物法操作容易，不需要确认证明，可在24小时内得出水样阳性结轮，但本金相比较要高。

多管发酵法的普及率高，但是本金低，但水样的阳性结论应在72小时内上报。

尤其是乳糖蛋白胨的发酵方法，不仅要验证实验，还要转种伊蓝平板以及染色镜检。

一、物料及方法1.1样本源头鉴于检测结果更有代表性，本次取样样品均无消毒剂，水样为湛江市南三镇自制井水式供水，包含工厂用、居民用水和末端用水。

根据无菌条例，在灭菌玻璃瓶中采集样品，在4摄氏度-8摄氏度培养箱中培养4h后固化。

送入实验室进行检测。

1.2仪器、设备及试剂BG-270隔水式恒温培养箱、程控定量封口机PQ封口机；科立得酶底物培养基础、100毫升硫代硫酸钠无菌瓶、五十一孔定量盘，九十七孔定量盘，阳性标准比色板；乳糖蛋白胨培养基单份，双浓缩乳糖蛋白胨培养基、伊红美蓝琼脂平板；单乳糖胆盐培养基、双浓缩乳糖胆盐培养基、亮绿色乳糖胆盐培养基[1]。

的测定原理和实验步骤 ， 比较 固定底物酶底物法与 多管发酵法对于水 中粪大肠菌群 的检测 ， 即使用科立得 Ｔ Ｍ （ Ｃ ｏ ｌ ｉ ｌ ｅ ｒ ｔ ） 试剂和传统 方法检 测比
较两种方法试验结果 ， 最 终 得 出结 论 。
【 关键词 】 粪大肠菌群 多管发酵法 ｉ 固定底物酶底物法
３ 实验结果
选 用 粪 大肠 茵 群 标 准 茵株 ０ ６ ２ ０ １ ６ 一 Ｈ 对 两种 方 法 进 行 比
对。 比对 结果 如 表 ｌ 。
袭 ｌ 两 种 方 法 的 可 储 度 检 验
验 步骤繁琐 ． 实验 环 境 要 求较 高 ． 所 以我 们 需要 寻 找 和 选 择 快
速 简便 的 检 测 方 法 是 十 分 必 要 的 。此 外还 有 最 新 发 布 了一 个
１ ． ２ 设 备和材 料
科 立得 Ｔ Ｍ（ Ｃ ｏ ｌ ｉ ｌ ｅ ｒ ｔ ） 试剂 ， １ ０ ０ ｍ Ｌ无 菌瓶 （ 合有 １ ． ５ ％硫 代 硫 酸钠） ， 封 口机 ， ９ ７孔 定 量 盘 ， ９ ７孔 阳 性 标 准 比 色盘 ， 乳 糖 蛋
白胨 ， Ｅ Ｃ 肉汤 ， ３ ｍ ｍ 接种 环 ，酒精灯 ，培养 箱 （ 控 温 精 确± Ｏ ． ５ ℃） 、 恒 温振 荡 水 浴锅 ， 压力灭菌器 ． 移液枪等 。
【 中图分类号 】 Ｘ ８ ３ ２
【 文献标识码 】 Ａ
【 文章编号 】 ２ ０ ９ ５ — ２ ０ ６ ６ （ ２ ０ １ ７ ） １ ０ — ０ ０ １ ５ — ０ ２
引 言
①用无菌样品瓶量取 １ ０ ０ ｍ Ｌ混匀水样 （ 或 用无菌水适度
， 并加 入 科 立 得 Ｔ Ｍ（ Ｃ ｏ ｌ ｉ ｌ ｅ ｒ ｔ ） 试 剂 充 分 摇 匀溶 解 。 粪 大 肠 菌 群 又 称 耐 热 大肠 茵群 ． 是一群在 ４ ４ ． ５ ℃培 养 ２ ４ ～ 稀释 的水样）

水中大肠菌群快速检测方法－酶底物法与多管发酵法的比较《卫生研究》2006第3期孙宗科丁培薛金荣陈西平1吴榕2张雅婕3张淑红4遇晓杰5中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所，北京100021摘要：目的比较酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群的检测。

方法应用加标试验和实际水样检测的方式，比较酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群检测结果的一致性，以及假阳性率。

结果酶底物法与多管发酵法用于水中大肠菌群检测结果具有一致性，假阳性率无统计学意义的差别。

结论酶底物法可以用作评价水质微生物污染的标准方法。

关键词：大肠菌群酶底物法多管发酵法快速检测Comparison between rapid detection method of enzyme substrate technique and multiple-tube fermentation technique in water coliform bacteria detectionSun Zongke, Wu Rong, Chen Xiping, et al.Institute for Environment Hygiene and Health Related Product Safety, Chinese Centerfor Disease Control and Prevention, Beijing 100021, ChinaAbstract：In order to compare between rapid detection method of enzyme substrate technique and multiple-tube fermentation technique in water coliform bacteria detection, inoculated and real water samples are included in this experiment.Results demonstrate that enzyme substrate technique shows equivalence with multiple-tube fermentation technique. It is suggested that enzyme substrate technique can be used as a standard method for water microbiological safety evaluation.Key words：coliform bacteria, enzyme substrate technique,multiple-tube fermentation technique, rapid detection目前我国对生活饮用水、水源水、地表水等进行卫生学评价，检测的指标为大肠菌群（coliform bacteria）和粪大肠菌群(faecal coliforms)，以这两种指标作为粪便污染的指示菌。

酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较背景介绍随着人口的不断加添和城市化的进程，水诘责题也越来越受到关注。

其中水中粪大肠菌群是判定水质是否达标的指标之一、因此，快速、精准地测定水中粪大肠菌群已成为保障公共卫生和水环境安全的紧要工作。

在测定水中粪大肠菌群时，目前紧要有三种方法：酶底物法、多管发酵法和纸片法。

本文将对这三种方法进行比较，以便选择适合的方法进行水质检测。

酶底物法酶底物法是利用粪大肠菌群分泌的β—D—半乳糖苷酶对其底物苯基—β—D—半乳苷（X—Gal）水解，产生可见的蓝色色素。

实在试验步骤如下：1.接受分光光度计，读取X—Gal水解产生的蓝色产物的吸取值。

吸取值越高，表明样品中粪大肠菌群的数量越多。

该方法具有快速、精准等优点，但存在确定的局限性，比如无法区分大肠杆菌和其他肠道菌，仅仅只能检测粪生源的水体样品。

多管发酵法多管发酵法是利用粪大肠菌群在固体培育基中进行培育，利用二氧化碳生成的压力变化判定粪大肠菌群的数量。

实在试验步骤如下：1.将含有气管的玻璃管一端紧贴于固体培育基上。

2.向不同的玻璃管中分别加入不同的水样，并进行固体培育。

3.通过察看玻璃管顶端气泡的产生和数量，判定样品中粪大肠菌群的数量。

该方法不仅可以检测含有粪便的水产品中的粪大肠菌群，而且适用范围广，可以检测非点源污染和净化污水等水产品中的粪大肠菌群，但操作多而杂、时间较长。

纸片法纸片法是将覆盖了0.5～1.0 ml水体样品的纤维素纸分别带入含有荧光素β—D—葡萄糖苷（MUG）的细菌培育基中，然后在黑暗中孵育后，通过紫外线灯照射MUG荧光显带样品，察看荧光显带情况，得出粪大肠菌群数量。

实在试验步骤如下：1.制备含有MUG的培育基。

2.将确定数量的水样加入到带有MUG的培育基中并进行培育。

3.在黑暗中察看培育基上产生的荧光显带情况，得出样品中粪大肠菌群的数量。

该方法具有灵敏度高、操作简便等优点，但也有局限性，例如无法检测混合大肠杆菌和其他的大肠杆菌感染和污染的水样。

水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析湖南衡阳421200摘要:多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法是目前国内测定水中粪大肠菌群的常用标准方法。

分别从方法的检出限、方法操作、准确度和方法间的一致性四个方面对水中粪大肠菌群的测定进行了对比研究，总结出各方法的适用范围和优缺点，为分析人员根据实际条件和水样类型选择最佳方法提供参考。

关键词:粪大肠菌群;酶底物法;多管发酵法;滤膜法;纸片快速法粪大肠菌群是在 44．5℃ 温度下能生长并发酵乳糖产酸，产气，需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，主要来自粪便。

粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，可以指示水体是否遭受粪便污染，直接指示生活污水的污染，间接反映肠道致病菌的污染风险，是水质检验中非常重要的卫生指标。

目前，国内测定水中粪大肠菌群的标准分析方法有多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法。

多管发酵法早在 1985 年就列入了《生活饮用水标准检验方法》( GB 5750 －85) ，至今已经沿用了三十多年，是行业内公认的粪大肠菌群测定的经典方法，卫生、水利、环保等行业均有多管发酵法的方法标准。

美国公共卫生协会( APHA) 出版的《水和废水标准检验方法》( 20 版) 中方法 9221E 也采用的是多管发酵法; 滤膜法采用直接计数特征菌落的方式，不同于其它三种方法采用 MPN 法计数，其应用广泛性仅次于多管发酵法，美国 APHA 方法9222D和ISO9308 － 1: 2014采用的是滤膜法; 纸片快速法在西方发达国家采用较少，主要在一些发展中国家使用，环保部在 2015 年发布了测定水中粪大肠菌群的纸片快速法; 酶底物法利用粪大肠菌群在邻硝基苯－β － D －吡喃半乳糖苷培养基上培养产生β － D －半乳糖苷酶，该酶可以分解色源底物释放出黄色的邻硝基苯酚，通过颜色变化定性，MPN 法定量。

我国没有酶底物法测定粪大肠菌群的现行国家和行业标准，美国APHA 方法 9221 E、ISO 9380 － 2: 2012 和 GB5750． 12 －2006均将酶底物法列入标准，但仅限测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌。

纸片快速法与固定底物酶底物法测定环境水样中粪大肠菌群（耐热大肠菌群）的比较作者：傅德瑜高倩倩高韦韦来源：《环境与发展》2017年第03期摘要：粪大肠菌群是环境水体中是否受到粪便污染的重要指标，纸片快速法和固定底物酶底物法是当今环境监测广泛采用的方法，采用两种方法分别对标准菌株和实际水样进行检测，结果表明，纸片快速法和固定底物酶底物法用于粪大肠菌群的检测结果具有一致性。

关键词：纸片快速法；固定底物酶底物法；粪大肠菌群环境监测精密度中图分类号：P332 文献标识码：A 文章编号：2095-672X（2017）03-0184-02DOI：10.16647/15-1369/X.2017.03.099Abstract： Fecal coliforms are an important indicator of whether fecal contamination is caused by fecal water in the environment. The rapid method and the method of fixed substrate enzyme are widely used in environmental monitoring. Two methods are used to compare the standard strains and the actual water The results showed that the results of rapid method and fixed substrate enzyme method for fecal coliform bacteria were consistent.Key words： paper fast method； fixed substrate enzyme substrate method； fecal coliform bacteria environmental monitoring precision粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便。

固定酶底物法测定水中粪大肠菌群的优点及影响因素杨晓冉;朱超;张付海;胡雅琴;张敏【摘要】使用酶底物法和多管发酵法检测水质中的粪大肠菌群,结果表明,两种方法在统计学上并无显著差异.酶底物法具有操作快速简便的优点,检测灵敏度也高于多管发酵法.酶底物法可以采用成品的培养基及试剂,操作方便,无需确认试验,20 h即可判断水样中粪大肠菌群的MPN值,实验环境是否无菌对酶底物法测定水中粪大肠菌群的影响不大,但是培养温度对结果影响较大.【期刊名称】《环境科学导刊》【年(卷),期】2017(036)005【总页数】4页(P87-90)【关键词】粪大肠菌群;环境监测;酶底物法;多管发酵法;快速检测;影响因素【作者】杨晓冉;朱超;张付海;胡雅琴;张敏【作者单位】安徽省环境监测中心站,安徽合肥230061;安徽省环境监测中心站,安徽合肥230061;安徽省环境监测中心站,安徽合肥230061;安徽省环境监测中心站,安徽合肥230061;安徽省环境监测中心站,安徽合肥230061【正文语种】中文【中图分类】X83粪大肠菌群(Fecal coliform)主要来自粪便，它在44～44.5℃的高温条件下仍可生长繁殖并发酵乳糖产酸产气，其他特性均与总大肠菌群(Total coliform)相同。

因此，可用提高培养温度的方法造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。

粪大肠菌群细菌在卫生学上具有重要的意义。

目前水中粪大肠杆菌群(耐热大肠菌群)的检测方法主要有传统的多管发酵法和滤膜法，并且已经列入环保行业标准方法，此两种传统方法被国内环境检测部门广泛采用。

传统方法实验操做需要较多的试剂和器材，步骤繁琐，检测周期较长，培养基保存时间短，阳性结果需验证试验，对实验环境的无菌程度要求也比较高，不能对水的卫生学状况做出快速评价，制约了其应用。

固定底物酶底物法利用大肠菌群细菌能产生β-半乳糖苷酶(β-D galactosidase)分解ONPG(Ortho-nitrophenyl -β-D galactopyranoside)使培养液呈黄色，来判断水样中是否含有大肠菌群、粪大肠菌群(耐热大肠菌群)。

在线酶底物法检测地表水中粪大肠菌群的适用性分析龚海燕【摘要】Combining with the relevant research on the detection of fecal coliforms using enzyme substrate technique,using online enzyme substrate monitoring method and standard methods-multiple tube fermenta⁃tion method,this article detected fecal coliforms in a river located in Shanghai and discussed the applicabil⁃ity of online enzyme substrate monitoring method on fecal coliforms detection in surface water. The results showed that there was no statistically significant difference(P>0.05)between this two methods. Compared with the multiple tube fermentationmethod,online enzyme substrate monitoring method has high specificity, short detection time,automatic sampling,automatic detection,little secondary pollution,can realize the real-time monitoring of surface water,drinking water and other important water source,which plays an important role in surface water quality monitoring and health evaluation.%结合酶底物法检测粪大肠菌群的相关研究，运用酶底物在线监测系统对上海市某河段进行检测，用标准方法-多管发酵法进行同步检测，讨论在线酶底物法在地表水中检测粪大肠菌群的适用性。