3种方法测定水中粪便污染指示菌比较研究_嵇志远

水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究摘要：本文采用固定底物酶底物法与传统多管发酵法对水中粪大肠菌群进行比对试验，比较两者检测结果的一致性。

结果表明，两种方法在结果一致性方面相关性好，无统计学意义上的显著性差异，与多管发酵法相比，酶底物法具有简便快速、结果准确、特异、实验过程污染的可能性低、无二次污染等优点。

关键词：固定底物酶底物法多管发酵法粪大肠菌群Comparative Study on Two Detection Methods of Fecal Coliform in Water (Thermotolerant Coliforms )Luo Yun Liuzhou Environmental Protection Monitoring Station, Guangxi 545001Abstract: This paper conducts a comparative test on fecal coliform in water with Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique and traditional Multiple-tube fermentation technique and compares the consistency of detection results. The result shows that both methods have a good correlation in the consistency of results and there is no significant difference in statistical sense. Compared to multiple-tube fermentation technique, enzyme substrate technique has such advantages as simplicity, rapidness, accurate result, specificity, low possibility of pollution in the experimental process and secondary pollution avoided.Key words: Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique; Multiple-tube fermentation technique; Fecal coliform粪大肠菌群（耐热大肠菌群）是水质污染的重要指标之一。

环境⽣态学摘要：环境⽣态学，是指以⽣态学的基本原理为理论基础，结合系统科学、物理学、化学、仪器分析、环境科学等学科的研摘要：究成果，研究⽣物与受⼈⼲预的环境相互之间的关系及其规律性的⼀门科学。

从学科发展上看，环境⽣态学的理论基础是⽣态学，它由⽣态学分⽀⽽来，但同时⼜不同于⽣态学。

关键词：环境⽣态学、进展、环境保护关键词：正⽂： 环境⽣态学是研究⼈为⼲扰下，⽣态系统内在的变化机理、规律和对⼈类的反效应，寻求受损⽣态系统恢复、重建和保护对策的科学，即运⽤⽣态学理论，阐明⼈与环境间的相互作⽤及解决环境问题的⽣态途径。

1.1环境⽣态学的定义从学科体系上看，环境⽣态学是环境科学的组成部分，但按现代⽣态学的学科划分，它⼜是应⽤⽣态学的⼀个分⽀，⽬前尚处于发展、完善阶段。

环境⽣态学是个新兴的、综合性很强的学科，是⼀门运⽤⽣态学理论，研究⼈为⼲扰下，⽣态系统内在的变化机制，规律和对⼈类的反效应，寻求受损⽣态系统恢复，重建和保护对策的科学。

1.2环境⽣态学的研究范围环境⽣态学研究重点是环境污染的⽣态学原理和规律、环境污染的综合治理、⾃然资源的保护和利⽤、废弃物的能源化和资源化技术，研究⽬的是改善不断恶化的⽣态环境，达到资源的永续利⽤，促进经济、环境和⼈类社会的可持续发展。

环境⽣态学的研究对象是污染的环境对整个⽣态系统的影响。

它是研究⽣态系统中的⽣物与污染的环境两者之间作⽤与反作⽤、对⽴与统⼀、相互依赖与相互制约、物质的循环与代谢等⼀系列相互作⽤的规律，以及⽀配这些规律的内在机理。

⽣命系统与⼈为⼲预的环境系统两者之间的相互作⽤，可以表现为各级⽔平，所以，环境⽣态学的研究对象既包括从宏观上研究环境中污染物和⼈为⼲预的环境对⽣物的个体、种群、群落和⽣态系统产⽣影响的基本规律，也包括从微观上研究污染物和⼈为⼲预的环境对⽣物的分⼦、细胞和组织器官产⽣的毒害作⽤及其机理。

1.3环境⽣态学的研究意义环境问题和⽣态问题制约着社会的可可持续发展，因此为了解决环境问题和⽣态问题，保证社会的可持续发展，⼈们对⽣态学、环境学、环境⽣物学和环境⽣态学等相关学科的研究越来越重视，对它们的发展趋势越来越关⼼。

滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析摘要粪大肠菌群是污水中常见的指标菌，其检测与评价对于污水处理过程的监测和卫生保障非常重要。

本研究采用滤膜法和酶底物法两种方法对污水中的粪大肠菌群进行了比较分析。

结果表明，滤膜法具有操作简单、准确性高的优点，适用于对粪大肠菌群进行定量检测；而酶底物法快速、便捷，适用于快速筛查和初步评价。

两种方法在不同场景和实际应用中具有各自的优缺点，应根据具体需求选取合适的检测方法。

1. 引言粪大肠菌群是一类常见的从属于大肠杆菌科的细菌，广泛存在于土壤和水体中，为评估环境水质状况提供了一种重要的指标。

粪大肠菌群来源于人体和动物的消化系统，其存在与污水中表明该水源可能受到了粪便污染。

因此，对于污水处理厂和水源地的管理和监测，粪大肠菌群的检测是必不可少的。

2. 滤膜法检测粪大肠菌群滤膜法是一种常用的粪大肠菌群定量检测方法。

其基本原理是通过滤膜将样品中的粪大肠菌群分离并聚集，然后用染色剂进行着色，并在显微镜下进行计数。

滤膜法的优点是操作简单、准确性高，可以快速定量检测粪大肠菌群的数量。

其缺点是耗时较长，需要使用显微镜进行观察和计数，有一定的操作难度。

3. 酶底物法检测粪大肠菌群酶底物法是一种基于粪大肠菌群特定酶的检测方法，通过检测粪大肠菌群特异酶的活性来间接反映其存在量。

常用的酶底物法是利用3-苯基-六胺葡萄糖（X-GAL）和X-α-半乳糖苷酶（β-galactosidase）进行检测。

该方法操作简单、迅速，只需在特定培养基中添加相应底物，通过观察底物转化后的色素变化来判断是否存在粪大肠菌群。

酶底物法的优点是快速、便捷，适用于大规模样品的筛查和初步评价。

然而，酶底物法只能定性判断粪大肠菌群的存在与否，无法精确定量。

4. 比较分析滤膜法和酶底物法是常用的粪大肠菌群检测方法，两种方法在检测原理、操作步骤、检测结果及适用范围等方面存在一定差异。

多管发酵法——水中粪链球菌的测定（B）（一）人和温血动物的粪便都存在有不少的链球菌，通称为（fecalstrepfococcus)。

粪链球菌是革兰氏阳性、过氧化氢酶(catalase)阴性，呈短链状的球菌，在链球菌的血清学分族中主要属于兰斯菲尔德（Lancefield)D族。

因此，粪链球菌和兰斯菲尔德D族链球菌曾被作为同义词用法。

粪链球菌进入水体后，在水中不再自行繁殖，因此可以作为粪便污染的指示菌。

因为人粪便中粪大肠菌群数多于粪链球菌，动物粪便中粪链球菌多于粪大肠菌群，因此在水质检验时按照这两种菌菌数的比值（FC/FS)不同可以推想粪便污染的来源。

按照对每个动物个体所产生的粪大肠菌群和粪链球菌的数量估量，可以得出FC/FS的比值。

当比值大于或等于4，则认为污染主要来自人类；如比值小于或等于0.7，则认为污染主要来自温血动物的粪便：如比值小于4而大于2，则为混合污染但以人粪为主；如比值小于1而大于0.7，则为混合污染但以动物粪便为主；如比值小于或等于2而大于或等于1，则难以判定污染来源。

为尽量减小对照值错误的说明，要注重以下几点：①要测量水样的pH值，由于水中的pH在9.0以上或4.0以下时，链球菌的密度会有急剧地转变；②尽可能逼近污染源采集水样，由于粪链球菌一离开动物寄主后存活时光不长；③当各种污染源都存在时，利用比值来判定可能不行靠，此时要调查污染确实切来源；④当粪链球菌的计数低于100个/loom]时，不要用法比值法。

多管发酵法水中粪链球菌的密度也可采纳MPN法估量。

此法检测粪链球菌虽然手续较繁杂，但适用于较混浊的水样，或含有有害化学物质（特殊是金属物质）或杂菌数过多的水样，但不适用于海水样品。

此法的步骤是将水样接种于葡萄糖培养液中，叠氮化钠可抑制普通革兰氏阴性细菌的生长，能在此种培养液中生长可认为是粪链球菌推想实验阳性。

自推想实验阳性管用接种环接种三环至含有叠氮化钠和两种抑制剂的培养液中，如能在此种培养基中生长，表示粪链球菌的证明实验为阳性。

滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析滤膜法与酶底物法检测污水中粪大肠菌群的比较分析一、引言随着城市化进程的加速和人口的不断增长，污水处理成为一项重要的环保任务。

污水中的粪大肠菌群是评估水质和卫生水平的重要指标之一。

为了准确快速地检测污水中的粪大肠菌群，科学家们发展了各种检测方法。

其中，滤膜法和酶底物法是常用的两种方法，本文将对这两种方法进行比较分析。

二、滤膜法滤膜法是通过将粪大肠菌群附着在滤膜上，再通过计数形状与颜色进行检测。

其操作包括取样、滤膜萃取、滤膜染色和计数四个步骤。

滤膜法具有简单、直观、操作便捷等优势，被广泛应用于实际工作中。

然而，滤膜法的检测结果容易受到环境因素的干扰，例如水质的浑浊度、背景物质的影响等，这可能导致结果的不准确。

三、酶底物法酶底物法是通过检测粪大肠菌群特有的酶活性来间接测定其存在。

常用的指示剂是3-indoxyl-β-D-glucuronide（X-Gluc），它能与酶β-D-葡萄糖苷酸酶反应产生可见的蓝色产物。

这种方法的优势在于结果的准确性较高，而且不受环境因素的影响。

但是，酶底物法需要较长的检测时间，操作较为复杂，并且对仪器设备要求较高。

四、比较分析（1）准确性方面：滤膜法和酶底物法在检测粪大肠菌群方面均有较高的准确性，但是酶底物法的结果更为精确。

滤膜法容易受到环境因素的影响，导致结果的偏差。

（2）操作方面：滤膜法操作简便，流程清晰，不需要特殊的仪器设备，适用于现场快速检测。

酶底物法的操作较为复杂，需要仪器设备支持，所需时间较长。

（3）受环境因素影响方面：滤膜法受环境因素影响较大，如水质浑浊度、背景物质等因素会干扰检测结果。

酶底物法不受环境因素的影响，结果更为稳定。

（4）适用范围方面：滤膜法适用于对大量样品进行快速筛查，特别是现场检测。

酶底物法适用于对粪大肠菌群的高灵敏度检测，尤其适合于研究或实验室内的检测。

五、结论综上所述，滤膜法和酶底物法是常用于检测污水中粪大肠菌群的两种方法。

I节能环保LOW CARBON WORLD2021/6三种监测地表水中粪大肠菌群标准方法的比较唐微微，罗娅敏，陈瀚,赵志友(四川省成都生态环境监测中心站，四川成都610066)【摘要】多管发酵法、纸片法和酶底物法是目前测定地表水中粪大肠菌群的常用标准方法，通过三种方法对粪大肠菌群标准物质和实际地表水样进行分析检测，结果表明：多管发酵法、纸片法和酶底物法用于粪大肠菌群的检测结果具有一致性；通过三种方法优缺点的对比，多管法成本低适用于常规检测，纸片法高效方便更适用于大批量快速检测，酶底物法操作简单，不受场地限制可直接现场检测,更适用于应急现场监测遥【关键词】多管发酵法；纸片法；酶底物法；粪大肠菌群;地表水【中图分类号】X132【文献标识码】A【文章编号】2095-2066(2021)06-0034-020前言粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，是在44.5益能生长并发酵乳酸产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌⑴。

环境地表水中的粪大肠菌群主要来自粪便的污染，因此通过测定水中粪大肠菌群的含量，可间接得出水体受粪便污染的情况囚,是当前国内外环境监测部门主要监测项目之一，是评价水体污染程度和环境卫生的重要指标，在《地表水环境质量(GB3838—2002)》中，规定I、域、芋、郁及吁类水粪大肠菌群的含量依次臆200、200〜2000、2000〜10000、10000~20000及20000~40000个/L,我国地表水体粪大肠菌群含量普遍较高，部分水域含量甚至超过吁类水质标准。

多管发酵法叫纸片法⑷和酶底物法间是目前国内测定地表水中粪大肠菌群常用的标准方法。

多管发酵法早在1985年就列入《生活饮用水标准检验方法(GB5750-85)》，并于2018年发布修订版，是粪大肠菌群测定的经典方法,它作为《水和废水监测分析方法(第四版)》中的推荐方法向，美国公共卫生协会(APHA)出版的《水和废水标准检验方法(20版)》中方法9221E也采用的是多管发酵法；纸片法在西方发达国家运用较少，主要在一些发展中国家使用，环保部在2015年发布了纸片法的标准方法，它作为《水和废水监测分析方法(第四版)》中的推荐方法(C类方法)叫酶底物法是一种新型酶技术检测方法，已在美、日、韩和欧洲许多国家使用孔2003年从美国引入我国，环保部在2018年发布了酶底物法的标准方法。

水环境粪大肠菌群监测2种分析方法的对比粪大肠菌群是监测水体是否被粪便污染的指示菌,是监测地表水尤其是饮用地表水的重要指标之一。

它是总大肠菌群的一部分,其基本性状和总大肠菌群相似。

在实验时,将培养温度提高到44.5C,我们把可以在此条件下生长并发酵产酸产气的,称粪大肠菌群。

经典的粪大肠菌群的监测方法是采用多管发酵法,但这种方法具有前期准备时间长、任务繁重;培养过程中操作繁琐的缺点,并且事后还要清洗大量的试管,浪费人力、物力、财力。

为此很多厂家研发了大肠菌群的快检纸片。

采用纸片法,大大缩短了实验的时间,并且根本不需要再清理大量的试管,减轻了劳动强度,也节约了宝贵的水资源。

那么,多管发酵法和纸片法的数据究竟有没有相关性?作者采用某厂生产的大肠菌群的快检纸片通过对比实验旨在探讨这个问题。

一、分析方法1、多管发酵法(1)培养基单倍和三倍乳糖蛋白胨培养液(培养液的成分与制备略,下同)EC培养液(2)步骤①水样接种量：将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样的接种量,每个样品至少用3个不同的水样量接种,同一接种水样量要有五管。

如果接种的体积为10ml,则接种于含有三倍浓度5ml的乳糖蛋白胨培养液的试管内,如果接种量为1ml或者小于1ml,则接种于含有单倍浓度10ml的乳糖蛋白胨培养液的试管内。

②初发酵：将接种了水样的试管,在370.5C下培养242h,产酸和产气的发酵管表明实验阳性。

如产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。

③复发酵试验轻微振荡初发酵阳性的发酵管,用3mm接种环将培养物转接到EC培养液中。

在440.5C水浴中培养242h,培养后立即观察。

发酵管产酸产气表明确信试验阳性。

④计算和报告结果根据不同接种量的发酵管所出现的阳性结果的数目,从MPN表中查相应的MPN 指数,计算出每升水中粪大肠菌群的MPN值。

2、纸片法采用某厂生产的大肠菌群快检纸片①水样接种量：将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样的稀释倍数,每个样品至少用3个不同的水样量接种,同一接种水样量要有五个纸片。

水中粪大肠菌群的测定-酶底物法与荧光光度法的比较
张茵;刘溪南;王静;刘娟
【期刊名称】《煤炭与化工》
【年(卷),期】2024(47)3
【摘要】采用酶底物法和荧光光度法对水源水、景观水、污水中粪大肠菌群进行检测。

通过检测高浓度标准样品与低浓度标准样品发现,酶底物法和荧光光度法相比,荧光光度法检测结果相对误差更小,跟接近于真值,其结果更为准确。

荧光光度法相对标准偏差低于酶底物法,表明荧光光度法检测的稳定性优于酶底物法。

通过选取不同类型的实际样品分别用2种方法测定,并对结果进行统计学分析,发现2种方法在统计学中具有相关性,无显著差异。

采用荧光光度法测定粪大肠菌群具有测定时间短,减少了人为误差,同时避免了测定时间对结果的影响,特别适合应急检测。

【总页数】5页(P151-154)
【作者】张茵;刘溪南;王静;刘娟
【作者单位】河北省生态环境监测中心;中国南水北调集团中线有限公司河北水质监测中心;石家庄高新技术产业开发区供水排水公司
【正文语种】中文
【中图分类】O65
【相关文献】
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2.固定底物酶底物法与多管发酵法和快速纸片法测定水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的比较
3.滤膜法与固定底物酶底物法测定地表水中粪大肠菌群的比较研究
4.酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较
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水中粪大肠菌群测定方法嘿，咱今儿就来说说这水中粪大肠菌群测定方法。

你想想看啊，水这东西，咱天天都得用，喝的、洗的、用的，要是水里有啥不干净的东西，那可不得了！这粪大肠菌群就是得重点关注的家伙。

咱先来说说多管发酵法吧。

就好像是个大侦探在找线索一样，把水样分成好多份，分别放到不同的管子里，给它们创造适合的环境，然后等着看有没有啥反应。

这就像是在观察一群小“嫌疑人”，看谁露出马脚。

如果有管子里出现了一些特殊的现象，嘿，那可能就找到目标啦！还有滤膜法，这就像是给水流过一个特别的滤网。

把水过滤一遍，那些粪大肠菌群就可能被留在滤膜上。

然后再去观察这个滤膜，看看有没有它们的踪迹。

这就好像是在沙滩上找贝壳，仔细地搜寻着。

平板计数法也挺有意思呢！把水样涂在平板上，就像给它们安排了一个小舞台，然后等着看哪些家伙会冒出来，在这个小舞台上“表演”。

通过观察这些“小演员”的数量和状态，就能大概知道水里的情况啦。

你说，这测定方法是不是挺神奇的？就像是给水里的这些小东西来了一场大排查。

咱得认真对待啊，不然喝了不干净的水，那肚子可不得闹腾啊！这可不是开玩笑的事儿。

而且啊，测定的时候可得细心再细心，不能有一点马虎。

这就跟咱做一件重要的事情一样，得全神贯注，不能出岔子。

要是稍微不注意，可能就错过了关键的信息，那可不行。

想象一下，如果因为测定不准确，导致我们以为水是干净的，结果却不是，那会带来多大的麻烦呀！所以说，这水中粪大肠菌群测定可真是个重要的活儿，一点都不能含糊。

咱普通老百姓可能平时不太会去做这个，但咱得知道有这么回事儿，得关注咱喝的水是不是安全的。

这也是对自己和家人负责呀！可别小看了这小小的粪大肠菌群，它们要是在水里闹腾起来，那可不好收拾呢！总之呢，水中粪大肠菌群测定方法是保障我们用水安全的重要手段，我们得重视起来，让我们的生活用水干干净净、健健康康的，这样我们才能放心地使用呀！你说是不是这个理儿？。

酶底物法与多管发酵法和纸片法测定水中粪大肠菌群方法比较背景介绍随着人口的不断加添和城市化的进程，水诘责题也越来越受到关注。

其中水中粪大肠菌群是判定水质是否达标的指标之一、因此，快速、精准地测定水中粪大肠菌群已成为保障公共卫生和水环境安全的紧要工作。

在测定水中粪大肠菌群时，目前紧要有三种方法：酶底物法、多管发酵法和纸片法。

本文将对这三种方法进行比较，以便选择适合的方法进行水质检测。

酶底物法酶底物法是利用粪大肠菌群分泌的β—D—半乳糖苷酶对其底物苯基—β—D—半乳苷（X—Gal）水解，产生可见的蓝色色素。

实在试验步骤如下：1.接受分光光度计，读取X—Gal水解产生的蓝色产物的吸取值。

吸取值越高，表明样品中粪大肠菌群的数量越多。

该方法具有快速、精准等优点，但存在确定的局限性，比如无法区分大肠杆菌和其他肠道菌，仅仅只能检测粪生源的水体样品。

多管发酵法多管发酵法是利用粪大肠菌群在固体培育基中进行培育，利用二氧化碳生成的压力变化判定粪大肠菌群的数量。

实在试验步骤如下：1.将含有气管的玻璃管一端紧贴于固体培育基上。

2.向不同的玻璃管中分别加入不同的水样，并进行固体培育。

3.通过察看玻璃管顶端气泡的产生和数量，判定样品中粪大肠菌群的数量。

该方法不仅可以检测含有粪便的水产品中的粪大肠菌群，而且适用范围广，可以检测非点源污染和净化污水等水产品中的粪大肠菌群，但操作多而杂、时间较长。

纸片法纸片法是将覆盖了0.5～1.0 ml水体样品的纤维素纸分别带入含有荧光素β—D—葡萄糖苷（MUG）的细菌培育基中，然后在黑暗中孵育后，通过紫外线灯照射MUG荧光显带样品，察看荧光显带情况，得出粪大肠菌群数量。

实在试验步骤如下：1.制备含有MUG的培育基。

2.将确定数量的水样加入到带有MUG的培育基中并进行培育。

3.在黑暗中察看培育基上产生的荧光显带情况，得出样品中粪大肠菌群的数量。

该方法具有灵敏度高、操作简便等优点，但也有局限性，例如无法检测混合大肠杆菌和其他的大肠杆菌感染和污染的水样。

水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析湖南衡阳421200摘要:多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法是目前国内测定水中粪大肠菌群的常用标准方法。

分别从方法的检出限、方法操作、准确度和方法间的一致性四个方面对水中粪大肠菌群的测定进行了对比研究，总结出各方法的适用范围和优缺点，为分析人员根据实际条件和水样类型选择最佳方法提供参考。

关键词:粪大肠菌群;酶底物法;多管发酵法;滤膜法;纸片快速法粪大肠菌群是在 44．5℃ 温度下能生长并发酵乳糖产酸，产气，需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，主要来自粪便。

粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，可以指示水体是否遭受粪便污染，直接指示生活污水的污染，间接反映肠道致病菌的污染风险，是水质检验中非常重要的卫生指标。

目前，国内测定水中粪大肠菌群的标准分析方法有多管发酵法、滤膜法、纸片快速法和酶底物法。

多管发酵法早在 1985 年就列入了《生活饮用水标准检验方法》( GB 5750 －85) ，至今已经沿用了三十多年，是行业内公认的粪大肠菌群测定的经典方法，卫生、水利、环保等行业均有多管发酵法的方法标准。

美国公共卫生协会( APHA) 出版的《水和废水标准检验方法》( 20 版) 中方法 9221E 也采用的是多管发酵法; 滤膜法采用直接计数特征菌落的方式，不同于其它三种方法采用 MPN 法计数，其应用广泛性仅次于多管发酵法，美国 APHA 方法9222D和ISO9308 － 1: 2014采用的是滤膜法; 纸片快速法在西方发达国家采用较少，主要在一些发展中国家使用，环保部在 2015 年发布了测定水中粪大肠菌群的纸片快速法; 酶底物法利用粪大肠菌群在邻硝基苯－β － D －吡喃半乳糖苷培养基上培养产生β － D －半乳糖苷酶，该酶可以分解色源底物释放出黄色的邻硝基苯酚，通过颜色变化定性，MPN 法定量。

我国没有酶底物法测定粪大肠菌群的现行国家和行业标准，美国APHA 方法 9221 E、ISO 9380 － 2: 2012 和 GB5750． 12 －2006均将酶底物法列入标准，但仅限测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌。

两种检验水质粪大肠茵群方法的比较研究摘要：粪大肠菌群是评价水环境质量的重要卫生指示菌之一,水质粪大肠菌群的监测检验对保障人体健康和维护良好的生态环境有着重要的意义。

本文对实际水样分别用多管发酵法和滤膜法进行检验比较。

关键词：粪大肠菌群；多管发酵法；滤膜法；检测水样Abstract: the fecal coliform over the water environmental quality evaluation, is one of the important health instructions bacteria, water quality monitoring inspection of fecal coliform over to protect the human health and maintain good ecological environment has important significance. This paper respectively with more actual water pipe, fermentation and the membrane filter method for the inspection comparison.Keywords: fecal coliform bacteria; Many tube fermentation; The membrane filter method; Testing water水中病原微生物对人体健康形成的危害历史悠久，受病原微生物污染的水体中含有大量的致病菌，可引起伤寒、痢疾、霍乱和腹泻等肠道疾病，历史上曾发生过一些大城市因水源水质受到污染而造成的致命传染病的爆发和蔓延。

虽然人们现在通过采用加氯消毒的方式，已基本上控制了水致传染病的问题，但水体中还是不断发现新的病原微生物种，病原微生物至今仍是威胁人类健康和生命的重要原因。

两种检验水质粪大肠茵群方法的比较研究摘要：粪大肠菌群是评价水环境质量的重要卫生指示菌之一,水质粪大肠菌群的监测检验对保障人体健康和维护良好的生态环境有着重要的意义。

本文对实际水样分别用多管发酵法和滤膜法进行检验比较。

关键词：粪大肠菌群；多管发酵法；滤膜法；检测水样abstract: the fecal coliform over the water environmental quality evaluation, is one of the important health instructions bacteria, water quality monitoring inspection of fecal coliform over to protect the human health and maintain good ecological environment has important significance. this paper respectively with more actual water pipe, fermentation and the membrane filter method for the inspection comparison.keywords: fecal coliform bacteria; many tube fermentation; the membrane filter method; testing water中图分类号： r378.2+1 文献标识码：a 文章编号：水中病原微生物对人体健康形成的危害历史悠久，受病原微生物污染的水体中含有大量的致病菌，可引起伤寒、痢疾、霍乱和腹泻等肠道疾病，历史上曾发生过一些大城市因水源水质受到污染而造成的致命传染病的爆发和蔓延。

虽然人们现在通过采用加氯消毒的方式，已基本上控制了水致传染病的问题，但水体中还是不断发现新的病原微生物种，病原微生物至今仍是威胁人类健康和生命的重要原因。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911178556.9(22)申请日 2019.11.27(71)申请人 辽宁大学地址 110000 辽宁省沈阳市沈北新区道义南大街58号(72)发明人 陈颖　段宇婧　毛大庆　罗义　李丽丹　(74)专利代理机构 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207代理人 金春华(51)Int.Cl.C12Q 1/6851(2018.01)C12Q 1/70(2006.01)C12N 15/70(2006.01)C12R 1/92(2006.01)(54)发明名称一种水环境中人类粪便指示物的定量检测方法(57)摘要本发明涉及一种水环境中人类粪便指示物的定量检测方法。

包括：选用人类粪便DNA为模板，采用PCR扩增目的基因CPQ_056片段；切胶回收纯化扩增后的目的基因，将基因连接在载体pTOPO -Blunt上，然后转化感受态大肠杆菌细胞，挑选阳性克隆子；用琼脂糖凝胶电泳检测扩大培养菌液的质量，选克隆成功的菌液提取质粒，检测质粒浓度，换算出质粒所携带目的基因的拷贝数，并按10倍为稀释梯度稀释，作为标准品；将标准品进行定量PCR扩增，做出标准曲线。

再将水样DNA进行定量PCR扩增，从而最终得出水环境中人类粪便指示基因的拷贝数。

本发明不依赖于微生物培养，操作简单，检测速度高，灵敏度高，数量上也更为直观。

权利要求书2页 说明书6页 附图2页CN 110819699 A 2020.02.21C N 110819699A1.一种水环境中人类粪便指示物的定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(一)生成目的基因标准曲线：以CPQ_056基因为目的基因，从人类粪便中提取CPQ_056基因片段，以目的基因CPQ_056的拷贝数的对数为横坐标，Ct值为纵坐标，生成CPQ_056目的基因标准曲线；(二)样品检测：取待测水样，提取水样DNA；以水样DNA为模板，以特异性引物和探针进行定量PCR扩增，得Ct值；(三)计算：根据测定的Ct值，依据CPQ_056目的基因标准曲线，得待测水样中CPQ_056目的基因的拷贝数。

生物监测利用粪大肠菌群监测水域受粪便污染等级环境中的肠道病原菌主要来自人畜粪便。

他们首先被排到水体或土壤，然后传播至其他环境导致人类感染得病。

由于粪大肠菌群与粪便中大肠杆菌数直接相关，在人粪中粪大肠杆菌群占总大肠菌群的96.4%。

因此要用粪大肠菌群为代表间接指示肠道病原菌存在的可能性。

它也叫耐热性大肠菌群。

一、采取水样在选取的水域中用事先准备好的容器盛取该水域的水体，保存好拿回实验室。

并及时进行试验。

（适用于饮用水、湖泊、水库、河川、溪流、井水、泉水、地下水、娱乐用水、海水及放流水等水样之粪便性大肠杆菌群细菌之检验，但不适用于高浊度及含有干扰物质之水样之检验。

）二、材料准备量筒：一般使用100 、500及1000 ml的量筒，培养皿 MFC培养基滤膜恒温培养箱乳糖蛋白胨培养基二、测定步骤原理：滤膜是一种微孔性薄膜。

将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45μm）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M−FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数1、MFC培养基的制备胰胨、多胨和酵母膏提供碳源、维生素和生长因子；氯化钠维持均匀的渗透压；乳糖为可发酵糖类；3号胆盐抑制革兰氏阳性菌；琼脂是培养基的凝固剂；玫红酸和苯胺蓝PH指示剂。

配方胰胨10g多胨5g酵母膏粉3g氯化钠5g乳糖12.5g3号胆盐 1.5g琼脂15g玫红酸0.1g苯胺蓝0.1g最终PH7.4±0.2制法：将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节pH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶100mL，于115℃灭菌20min。

贮于冰箱中备用。

临用前，按上述配方比例，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝溶液1mL及新配制的1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氢氧化钠液中）1mL，混合均匀。

加热溶解前，加入 1.2%～1.5%琼脂可制成固体培养基。