结肠癌组织中 Beclin1及 Bcl-2表达变化及意义

结肠癌组织中 Beclin1及 Bcl-2表达变化及意义

任宇鹏;宋纯;张昊

【摘 要】Objective To explore the expression of Beclin 1 and Bcl-2 in colon

cancer and discuss the significances . Methods Immunohistochemistry was

used to detect the expression of Beclin 1 and Bcl-2 in 97 pairs paraffin-embedded co-lon cancer tissues , adjacent non-cancerous tissues and

normal colon tissues , to analyze the relationship between Beclin 1 and

Bcl-2 expressions and clinicopathological parameters .Results The positive

rate of Beclin1 and Bcl-2 expression were 80.4%and 75.3%in colon cancer

tissues, 60.8%and 64.9%in adjacent non-cancerous tissues, 36.1%and

26.8%in normal colon tissues respectively .Beclin1 and Bcl-2 expressed

higher in colon cancer tissues than that in adjacent non-can-cerous tissues

and normal colon tissues (all P<0.01).The invasion deepth, tumor diameter

and TNM stage were positive-ly correlated with the expression of Beclin1

(all P<0.01).Tumor diameter and TNM stage were positively correlated with

the expression of Bcl-2 (all P<0.05).Beclin1 in colon cancer tissues was

positively correlated with Bcl-2 (r=0.324,P<0.01).Conclusion High

expressions of Beclin1 and Bcl-2 were correlated with the onset and

malignant development of colon cancer , which predicted the unfavorable

prognosis .%目的：观察结肠癌组织中Beclin1、Bcl-2表达变化，探讨其意义。方法手术治疗的结肠癌患者97例，术中分别取肿瘤组织、癌旁组织、距离肿瘤边缘6 cm以上的正常结肠组织；免疫组化法检测各组织中的Beclin1、Bcl-2，分析二者与结肠癌临床病理参数的关系。结果结肠癌组织中Beclin1、Bcl-2的阳性表达率分别为80．4％、75．3％，癌旁组织分别为60．8％、64．9％，正常结肠组织分别为36．1％、26．8％；结肠癌组织Beclin1、Bcl-2阳性表达率均高于癌旁组织及正常结肠组织（P均＜0．01）。 Beclin1表达与结肠癌肿瘤浸润深度、肿瘤直径、TNM分期有关（P均＜0．01）；Bcl-2表达与结肠癌肿瘤直径、TNM分期有关（P均＜0．05）。结肠癌组织中Beclin1、Bcl-2表达呈正相关（r＝0．324，P＜0．01）。结论 Beclin1、Bcl-2高表达与结肠癌的发生及恶性生长行为相关，可作为预后不良的判断指标。

【期刊名称】《山东医药》

【年(卷),期】2015(000)008

【总页数】3页(P34-36)

【关键词】结肠癌;Beclin1蛋白;Bcl-2蛋白

【作 者】任宇鹏;宋纯;张昊

【作者单位】辽宁省肿瘤医院，沈阳110042;辽宁省肿瘤医院，沈阳110042;辽宁省肿瘤医院，沈阳110042

【正文语种】中 文

【中图分类】R735.3

结肠癌的恶性行为以肿瘤体积的迅速生长及浸润为特点。自噬相关性蛋白Beclin1参与恶性肿瘤的发生发展，主要作用于自噬性活性激活的细胞程序性死亡过程中［1］。抗调亡基因 Bcl-2为促癌基因，对肿瘤细胞恶性增生行为的启动有重要作用［2］。Beclin1、Bcl-2对肿瘤细胞生长及浸润等恶性行为可能有协同作用，在细胞调亡通路中具有相关性［3，4］。本研究观察结肠癌组织中Beclin1、Bcl-2表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2013年6月～2014年5月辽宁省肿瘤医院大肠外科手术治疗的结肠癌患者97例，男59例、女38例，年龄(63±27.9)岁，术前均未接受化疗、放疗等抗肿瘤治疗，术中均切除肿瘤;除外肿瘤未切除姑息造瘘病例。术中分别取肿瘤组织、癌旁组织、距离肿瘤边缘6 cm以上的正常结肠组织。

1.2 方法

1.2.1 Beclin1、Bcl-2检测方法 采用免疫组化法。组织标本以4%甲醛缓冲液固定、脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋，切片后进行脱蜡，PBS洗涤。加入Ⅰ抗，孵育过夜后加Ⅱ抗，37℃孵育30 min。DAB显色，苏木素复染后自来水洗净，盐酸乙醇分化后流水冲洗，脱水，透明。二甲苯干燥前中性树胶封片。以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。根据染色阳性细胞百分比和阳性细胞着色强度两项综合判断结果［5，6］。阳性细胞占细胞总数百分比:≤10%为1分、10%～50%为2分、50%～70%为3分、＞70%为4分。着色强度:无染色为0分，浅棕黄色为1分，较深棕黄色为2分，深棕黄色伴浓染颗粒为3分。根据两项分数之和判定结果:1分为阴性(－); 2～3分为弱阳性(+);4～5分为中度阳性(++); 6～7分为强阳性(+++)。+、++、+++均为阳性;－和+为低表达，++和+++为高表达。

1.2.2 统计学方法 采用PASW Statistics18.0统计软件。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验;相关关系采用Spearman等级相关分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Beclin1、Bcl-2检测结果 Beclin1阳性表达于细胞质，Bcl-2阳性表达于细胞质及细胞膜。结肠癌组织Beclin1、Bcl-2表达阳性率分别为80.4%(78/ 97)、75.3%(73/97)，癌旁组织分别为60.8%(59/ 97)、64.9%(63/97)，正常结肠组织分别为36.1% (35/97)、26.8%(26/97);结肠癌组织Beclin1、Bcl-2表达阳性率均高于癌旁组织及正常结肠组织(P均＜0.01)。

2.2 Beclin1、Bcl-2表达与结肠癌临床病理参数的关系 Beclin1表达与结肠癌肿瘤浸润深度、肿瘤直径、TNM分期有关(P均＜0.01);Bcl-2表达与结肠癌肿瘤直径、TNM分期有关(P均＜0.05)。见表1。

2.3 结肠癌组织Beclin1、Bcl-2表达的关系 结肠癌组织中Beclin1、Bcl-2表达呈正相关(r=0.324，P＜0.01)。

3 讨论

目前，结肠癌发病率居所有肿瘤第3位，且呈逐年升高趋势。结肠癌多以贫血或急性肠梗阻为首发症状，发现时多为晚期。因此，寻找早期诊断结肠癌的特异性标志物至关重要［7］。Bcl-2为抗调亡基因，定位于人染色体18q21上，在恶性肿瘤细胞质及细胞膜表达［8］。自噬相关基因Beclin1定位在人染色体17q21上，在调节自噬活性激活细胞程序性死亡过程中发挥重要作用［9］，但其抑癌或促癌活性目前仍存在争议。研究发现，Beclin1及Bcl-2过表达与乳腺癌、肝癌、胃癌、舌癌等肿瘤体积及TNM分期密切相关［10，11］。本研究发现，Beclin1在结肠癌组织中表达阳性率高于正常结肠组织及癌旁组织;其表达与肿瘤直径、TNM分期及浸润深度均有关，Beclin1高表达提示肿瘤体积更大，TNM分期更差，而且往往浸破浆膜层。在正常结肠癌组织及癌旁组织均有Beclin1表达，提示Beclin1可能在结肠癌早期即有升高趋势，伴随肿瘤恶性行为的全过程。Beclin1虽然作为抑癌基因出现，但其生物学行为中可能同时伴有促癌基因活动，或伴有在其作用通道中发挥主导作用的促癌基因［12］。Bcl-2作为一个重要刺激因子，在肿瘤血管生成与发展中发挥重要作用。本研究显示，Bcl-2在结肠癌细胞质及细胞膜均有表达，其在结肠癌组织中表达阳性率高于正常结肠组织及癌旁组织;其表达水平与肿瘤直径及TNM分期有关。

表1 Beclin1、Bcl-2表达与结肠癌临床病理参数的关系(例)临床病理参数 n Bcl-2

Beclin1低表达高表达 P 低表达高表达P年龄(岁)≤60 29 11 18 0.097 11 18

0.354＞60 68 21 47 30 38性别男59 14 45 0.238 22 37 0.631女38 18 20 19

19肿瘤位置左半结肠 42 16 26 0.836 15 27 0.502右半结肠 55 16 39 26 29肿瘤直径(cm)≤5 32 8 24 0.007 15 17 0.004＞5 6524 41 26 39浸润深度浸破浆膜

45 20 25 0.006 19 26 1.342未浸破浆膜 52 12 40 22 30 TNM分期Ⅰ期 12210

5 7Ⅱ期 39 15 24 0.009 17 22 0.014Ⅲ期 3512 23 15 20Ⅳ期 1138 47病理分型肿块型 41 18 23 19 22溃疡型 24 9 15 0.572 11 13 0.963浸润型 32 5 27 11

21病理类型腺癌 4314 29 18 25黏液癌 39 11 18 1.232 15 24 0.897未分化癌

157 8 8 7病理分级1级 21 9 12 10 11 2级 43 15 28 0.090 19 24 0.214 3级33 8 25 12 21

PTEN的下游通路PI3K/AKT信号通路是独立于其他通路之外的生长因子信号转导系统，对细胞的生长、增殖、凋亡、代谢等具有重要作用，并主导细胞的恶性转变［13，14］。研究发现，Beclin1及Bcl-2活性均与抑癌基因PTEN活性缺失相关。Beclin1是Bcl-2的结合蛋白，Bcl-2的抗自噬活性与Beclin1表达密切相关。Bcl-2通过下调Vps34和Beclin相关Vps34酶活性进行自噬活性的调节，这种自噬活性对肿瘤的发生、发展、侵袭及转移等恶性行为具有重要的调节功能［15］。本研究显示，结肠癌组织Beclin1、Bcl-2表达呈正相关，即Beclin1及Bcl-2在同一结肠癌组织中表达共同上调，进一步证明了二者在结肠癌中的协同作用。但Beclin1及Bcl-2协同作用的确切机制仍需进一步深入研究。