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黑木耳多糖的提取方法(多种)

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一 黑木耳多糖的提取方法

1.热水浸提法

热水浸提法是多糖提取的传统方法，用水作为溶剂浸取多糖，在恒温水浴上回流浸提，过滤后得滤液和滤渣。滤渣反复浸取几次合并滤液，经浓缩、乙醇醇沉、离心，干燥即得到粗多糖。林敏[1]等采用热水浸提法探索出热水浸提法提取黑木耳多糖的最佳工艺条件，得出结果：黑木耳子实体干粉与水之比为l：50，在90℃水浴中抽提3.5h，提取液用70％乙醇醇析，在此工艺条件下多糖得率最高。

2.碱溶法

碱浸提法是向原料中加一定量的碱溶液，然后在恒温水浴中浸提一定时间，用酸中和后过滤，滤渣用碱液反复浸提几次，最后合并滤液，浓缩、用乙醇沉淀、分离、洗涤脱水、干燥即得粗多糖。

3.酶法[2]

酶法有两种，一是复合酶解法，另一个是分别酶解法。

复合酶解法：黑木耳→粉碎→水浸泡→复合酶保温酶解→灭酶浸提→离心→上清液浓缩→乙醇沉淀→静置、离心、烘干→粗多糖

分别酶解法：

黑木耳→粉碎→水浸泡→果胶酶保温酶解→中性蛋白酶酶解→灭酶浸提→离心→上清液浓缩→乙醇沉淀→静置、离心、烘干→粗多糖。

果胶酶酶解木耳的最佳工艺条件：浸提剂倍数50，PH5.0，温度55℃，时间80min，酶加量为1.1%，在此条件下黑木耳多糖的提取率为4.15%。

纤维素酶酶解木耳的最佳工艺条件：浸提剂倍数50，PH5.0，温度50℃，时间80min，酶加量为1.3%，在此条件下黑木耳多糖的提取率为4.71%。

4.超声波酶法

超声波协同纤维素酶提取黑木耳多糖的方法是通过空化、震荡等作用，使酶分子构象及催化部位微环境发生变化，从而影响纤维素酶的催化活力，加速破坏黑木耳的纤维结构；此外，低强度超声不仅可以使细胞周围形成微流，还可使细胞内产生内环流，从而提高细胞膜和细胞壁的通透性，从而可以加快细胞壁释放多糖，缩短提取时间，提高多糖提取率1-3。唐娟[3]通过实验确定了最佳方案：超声波功率40W、PH4.5、提取时间2.5h，提取温度45℃。

5.微波辅助提取法

微波辅助萃取技术应用于黑木耳多糖的提取，在生产中具有快速、节能、安全、高得率、和易控制易放大等优点。樊黎生[4]等利用微波辅助提取法提取多糖，确定的合理的提取工艺条件为：微波辐射功率为800w，辐射时间为40min，固液比(g：mL)为1:32，水浴浸提时间为3 h，二级提取。

二 黑木耳多糖的含量测定方法

1.紫外分光光度法 紫外分光光度法是目前测定百合多糖最常用的方法，且回收率高，误差较小，灵敏度和准确度较高。该法以葡萄糖为对照品，样品被水解为单糖后经显色剂显色，并在一定波长下测定其含量，常用的测定方法有苯酚硫酸法[5]、蒽酮硫酸法[6]和DNS[7]法，其中蒽酮硫酸法最易受蛋白的影响,在测多糖时需要进行脱蛋白处理，所以在操作过程中相对苯酚硫酸法繁琐。

2.高效液相色谱法

高效液相色谱法具有高效、高灵敏度、应用范围广、分析速度快及载液流速快等特点，目前，高效液相色谱法已经被广泛的运用到中药中多糖的含量测定。

3.薄层色谱法

薄层色谱法可用于测定多糖的含量[8]，该法对仪器要求不高，操作方便，但近年来已被测定更准确的紫外分光光度法和操作更简单的高效液相色谱法所代替。

三 结语

目前对于黑木耳多糖的提取方法主要是酶提取法，这种方法提取率高，提取周期短。热浸法是传统方法，多糖收率低，且耗时费工。碱提法虽然收率有所提高，但容易使多糖发生水解，破坏多糖的活性结构。超声波辅助提取、超声酶法、微波辅助提取法是现代提取方法，虽工艺不很成熟，但值得开发利用。黑木耳多糖的含量测定目前最广泛使用的是高效液相色谱法，该方法操作简便，测量准确。

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黑木耳多糖的提取与纯化

黑木耳多糖的提取与纯化

验,发现保持小苗周围空气湿润,通气良好且保湿良好的栽培基质和适宜的温度是丽格海棠试管苗移栽成功的关键[7]。3　小结311　试验结果表明:最佳愈伤组织及分化培养基为:①MS+KT1.00mgΠL+NAA0.10mgΠL;②MS+6-BA0.50mgΠL+2,4-D0.10mgΠL;③MS+6-BA1.00mgΠL+NAA0.10mgΠL;④MS+6-BA0.50mgΠL+NAA0.10mgΠL;继代增殖以同样的培养基为好。生根培养以在1Π2MS+NAA0.50mgΠL和1Π2MS+IBA0.10mgΠL培养基上的效果最好[10]。312　从试验中注意到,在四个花色品种中易成苗的依次为粉色品种、橙色品种、黄色品种红色品种,对此需进一步研究[10]。313　将不同外植体分别接种于不同的培养基上,培养1w后,茎尖外植体首先明显膨大,长出愈伤组织块;3w后,叶片外植体绝大多数都长出了愈伤组织块。愈伤组织继续长大,呈黄绿色,颗粒状,较疏松.观察发现3种不同外植体都能被诱导出愈伤组织,只是茎尖最容易脱分化,叶柄次之。这2种外植体脱分化诱导率均为100%;叶片的诱导率也达到88.3%。这表明叶片组织分化强度和叶柄与茎尖组织的分化程度差别不大,这与远凌威等人的报道略有不同,需要进一步研究。参考文献:[1]达克东,张松,姜璐琰,等.丽格海棠离体叶片培养不定芽发生和微繁研究[J]1山东农业大学学报(自然科学版),2002,33(1):93-951[2]王利琳,庞基良,胡江琴.丽格海棠的离体快繁[J]1生物技术,2001,11(5):46-481[3]林德钦,李梅,张文珠.富丽华贵的丽格海棠[J]1厦门华侨亚热带植物引种园,2001,621[4]杜启兰,宋仪农.丽格海棠的微体快速繁殖[J]1山东林业科技,2002,(5):16-171[5]田代科,管开云,郭瑞贤,等.变色秋海棠的繁殖栽培[J]1广西植物,2001,21(4):375-3801[6]周鑫,韩建军.丽格海棠的组织培养[J]1中国林副特产,2001,2(1):471[7]石贵玉,邓欢爱,周巧劲.高压静电场对蟆叶秋海棠愈伤组织生长的效应[J]1广西科学,1999,6(4):296-2981[8]李景秀,管开云,孔繁才1长翅秋海棠的叶片培养和快速繁殖[J]1植物生理学通讯,2000,36(5):439-4401[9]王发林,赵秀梅,刘芬.丽格海棠的叶片离体培养技术[J]1甘肃农业科技,2001,(5):46-471[10]远凌威,袁正仿,张苏锋.丽格海棠的组织培养与快速繁殖研究[J]1信阳师范学院学报(自然科学版),2002,15(2):219-2211黑木耳多糖的提取与纯化孔祥辉1,2,张介驰2,戴肖东2,李景鹏13(11东北农业大学生命科学学院,黑龙江哈尔滨150030;21黑龙江省科学院应用微生物研究所,黑龙江哈尔滨150010)摘要:黑木耳干子实体经复合酶解结合热水浸提法提取,超过滤,鞣酸法去蛋白,DEAE-52和SephacrylS-400分子筛柱层析纯化得到精多糖(AAP1)。其含糖量为89.5%。经薄板层析得到单一斑点,经琼脂糖凝胶电泳得到单一区带,表明为分子大小均一的单一组分多糖。关键词:黑木耳多糖;提取;纯化;分子量中图分类号:Q539 文献标识码:A 文章编号:1004-311X(2005)01-0081-02

超声波辅助提取黑木耳多糖及其果冻的制作

超声波辅助提取黑木耳多糖及其果冻的制作

30 2018, Vol.38, No.15 ※农业科学农业与技术

黑木耳（Auricularia auricula）属于真菌的担子菌属，因

生长于腐木之上，其颜色偏褐色，质地较柔软，形似人的

耳朵，故名常被称为木耳，是我国主要栽培的食用菌之一，

如：东北、吉林、湖南和湖北一带多有种植。黑木耳营养

丰富，含有许多食用和药用成分，深受广大人民的喜爱，

成为人们日常生活中不可缺少的保健食品之一[1]。据现代

科学分析，每100g干品中含蛋白质10.6 %，脂肪0.2 %，

维碳水化合物65 %，粗纤维7 %，钙0.37 %，磷0.2 %，铁0.19 %，以及多种维生素。更重要的是其还含有木耳多糖：

如从子实体分离的多糖，主要成分为L-岩藻糖（fucose），L-阿拉伯糖（L-arabinose），D-木糖（D-xylose），

D-甘露糖（D-mannose），D-葡萄糖（D-glucose），

葡萄糖醛酸（glucuronic acid）等；从菌丝体分离的多糖

主要成分为胞外多糖（exopolysaccharide）、麦角甾醇

（ergosterol）、原维生素D2（provitamin D2）以及黑刺

菌素（ustilaginoidin）。药理研究表明：黑木耳在抗衰老、

抗辐射、降血糖、降血压以及抗血栓等多个方面具有重

要的药用价值，提取木耳多糖将有利于农副产品的进一

步深度开发[2]。

果冻是一种西方日常甜品，呈半固体状态，外观晶

润透亮，色泽鲜美，口感软糯。其作为一种休闲时尚的

零食一直被年轻人所广泛追捧，笔者认为若能将木耳多

糖作为原料制作成果冻这将使其不仅仅是美味的零食，

而且还将是热量低、抗衰老、降血压的保健品。从而使

果冻成为全民皆食的营养美味[3-5]。

目前，有关木耳多糖的提取工艺研究已较多，包括有热水浸提法、回流法、微波辅助法和超声波辅助

法、酶辅助的超声波法[6-8]，因前2种方法时间长、

耗能大，因此最常用的方法为微波辅助法与超声波辅

实验三十三黑木耳多糖的提取、分离、纯化及初步测定

实验三十三黑木耳多糖的提取、分离、纯化及初步测定

实验三十三 黑木耳多糖的提取、分离、纯化及初步测定

实验目的

1.学习真菌多糖的提取方法

2.掌握测定多糖组成、总糖含量的基本方法

3.掌握柱层析技术

实验原理

通过水提法浸提出木耳中的多糖，经过有机溶剂脱脂，Sevag脱蛋白，透析除去无机盐等小

分子杂质，经干燥的得粗多糖。粗多糖经酸水解后通过纸层析或薄层层析测出多糖的单糖组

成。经酚硫酸法测得总糖含量。获得的粗多糖经G-100纯化，获得较纯多糖样品，为进一

步研究奠定基础。

设备及试剂

1.设备：721型分光光度计 回流装置 台式离心机 电热恒温水浴锅 真空干燥箱 恒温磁力搅

拌器 柱层析系统 层析缸 布氏漏斗

2. 材料：黑木耳，使用前烘干、粉粹，过80目筛，得木耳粉

3.试剂：苯酚 硫酸 无水乙醇 丙酮 乙醚 乙酸 正丁醇 邻苯二甲酸 CPC P2O5

NaSO4 NaCl NaOH BaCO3 石油醚 氯仿 粉末状活性炭 阿拉伯糖 鼠李糖 木糖

甘露糖 半乳糖 葡萄糖

步 骤

1、提取

1）.取50g粉末，用石油醚回流脱脂2h,反复两次，抽滤，取残渣。

2). 残渣经80%乙醇除去低聚糖后，热水浴浸提4h，重复一次，六层纱布粗滤，抽滤，取滤

液。

3).向滤液中加入1%粉末活性炭，磁力搅拌器搅拌15min，抽滤除净活性炭。

4). 浓缩至80ml左右，加入糖液总体积的1/4 Sevage试剂（正丁醇：氯仿=1：4），充分搅

拌2h，静置，离心，取上清液重复，至无游离蛋白为止。

5).将清夜装入透析袋，流水透析过夜。

6).将袋内溶液专移至250ml烧杯中，加入三倍体积95%乙醇沉淀多糖，静置30min。

7).4000rpm离心10min。

8).弃上清，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、氯仿洗涤。

9).将沉淀置于通风橱内挥净有机溶剂。

10).60℃真空干燥过夜，得粗多糖干品。

2.G-100柱纯化

3、酚硫酸法测总糖含量

1） 称量提取出来的多糖粗品100mg，定溶于1000ml容量瓶。 2） 6g苯酚蒸馏水定容于100ml容量瓶中，得6%苯酚。

云龙黑木耳中多糖的提取与测定

云龙黑木耳中多糖的提取与测定

大理学院学报　ＪＯｕＲＮＡＬ　ＯＦ　ＤＡＬＩ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　第１ｌ卷第３期２０１２年３月　Ｖ０１．１　ｌ　Ｎｏ．３　Ｍａｒ．　２０１２　

云龙黑木耳中多糖的提取与测定　

倪兆林　，申元英　，　，白　丽　，陈红云　－一，李润兵　

（１．大理学院公共卫生学院，云南大理６７１０００；２．大理学院基础医学院，云南大理６７１０００）　

［摘要］目的：提取云龙野生和人工培养两种黑木耳多糖并测定其含量。方法：采用乙醇浸提法提取多糖，紫外分光光度苯酚一硫　酸显色法测定粗多糖含量。结果：在８．０～４８．０　ｍＬ线性范围内，回收率为９９．０３％，ＲＳＤ为０．６６％（ｎ＝６），测到野生和人工培养黑　木耳中多糖的收率分别为１８．４８％和１８．２９％；野生和人工培养黑木耳中多糖的含量分别为９．２１％和８．２０％。结论：野生黑木耳比人　工培养黑木耳中多糖的含量高，生长环境对黑木耳多糖含量有影响。　［关键词］黑木耳；乙醇浸提法；紫外分光光度苯酚一硫酸显色法；多糖；含量　［中图分类号］Ｒ２８４．２［文献标志码］Ａ［文章编号］１６７２—２３４５（２０１２）０３—００３１－０４　

Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐ０ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｙｕｎｌｏｎｇ　Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕｌａｒ　ＮＩ　Ｚｈａｏｌｉｎ　，ＳＨＥＮ　Ｙｕａｎｙｉｎｇ　，　，ＢＡＩ　Ｌｉ　，ＣＨＥＮ　Ｈｏｎｇｙｕｎ　，ＬＩ　Ｒｕｎｂｉｎｇ　（１．Ｃｏｌｌｅｇｌｅ　ｏｆ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ，Ｄａｌｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉ，Ｙｕｎｎａｎ　６７１０００，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｐｒｅ—ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｌｅ，Ｄａｌｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉ，Ｙｕｎｎａｎ　６７　１０００，Ｃｈｉｎａ）　

【Ａｂｓｔｒａｃｔｊ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｂｏｔｈ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｗｉｌｄ　Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕｌａｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ　ｔｈｅｉｒ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　ｗｉｒｅｄ　ｂｙ　ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｐｈｅｎｏｌ—ｓｕｌｆｕｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｌｏｒ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　８．０－４８．０　Ｉｘｇ／ｍＬ，ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｗａｓ　９９．０３％ｗｉｔｈ　ＲＤＳ　ｏｆ　０．６６％（ｎ＝６）．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｉｎ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｗｉｌｄ　Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕｌａｒ　ｗｅｒｅ　１８．４８％ａｎｄ　１８．２９％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｗｉｌｄ　Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕｌａｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　９．２１％ａｎｄ　８．２０％．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｗｉｌｄ　Ａ　ｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕｌａｒ　ｈａｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙ．Ｇｒｏｗｉｎｇ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ａｆｆｅｃｔｓ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　Ａ　ｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕｌａ￣ｓ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　ｊ　Ａ　ｕｒｉｃｕｌａｒｉａ　ａｕｒｉｃｕ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ＵＶ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｐｈｅｎｏｌ—ｓｕｌｆｕｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｅｔｈｏｄ；ｐｏｌｙｓａｅｅｈａｒｉｄｅｓ；ｃｏｎｔｅｎｔ