3.2动物细胞培养的基本方法

《生物技术制药》课程笔记第一章：绪论一、生物技术的发展史1.1 生物技术概述生物技术是指人们利用微生物、动植物体对物质、能量、信息进行操纵的技术。

它广泛应用于食品、农业、环境保护、能源、医药等领域。

1.2 生物技术的发展简史生物技术的发展可以分为三个阶段：（1）传统生物技术阶段：早在公元前22世纪，中国就开始了酿酒、制酱、制醋等传统生物技术应用。

此后，世界各国也逐渐发展了各自的发酵技术。

（2）现代生物技术阶段：20世纪初，科学家们开始研究酶和微生物，发现了遗传物质DNA和RNA，并逐步揭示了生物体的遗传密码。

这一阶段的代表性成果包括抗生素的发现、遗传工程的创立以及生物制品的生产。

（3）生物技术革命阶段：20世纪70年代末，基因工程技术的发展使生物技术进入了一个新的时代。

基因克隆、基因编辑、基因组学等技术的突破，为生物技术在医药、农业、能源等领域的应用开辟了广阔前景。

二、生物技术药物1.2.1 生物技术药物概述生物技术药物是指利用生物技术方法生产的药物，主要包括蛋白质药物、抗体、疫苗、寡核苷酸药物等。

1.2.2 生物技术药物的特性生物技术药物具有以下特点：（1）高特异性：生物技术药物针对性强，能够精确作用于疾病相关分子。

（2）低毒性：生物技术药物通常来源于自然界中的生物体，毒副作用较低。

（3）复杂性：生物技术药物的结构复杂，生产过程需要严格控制条件。

（4）生产成本高：生物技术药物的生产设备、工艺和原材料成本较高。

三、生物技术制药1.3.1 生物技术制药概述生物技术制药是指利用生物技术方法生产药物的过程。

它主要包括基因工程、细胞培养、蛋白质工程等技术。

1.3.2 生物技术制药特征生物技术制药具有以下特征：（1）生产过程高度自动化、精确化。

（2）药物作用机制明确，针对性强。

（3）生产周期较长，生产成本较高。

（4）药物质量和安全性要求严格。

1.3.3 生物技术在制药中的应用生物技术在制药领域的应用主要包括：（1）生产生物技术药物，如蛋白质药物、抗体、疫苗等。

821《酶工程》复习大纲一、考试基本要求通过学习本课程，使学生掌握酶工程的基本原理、酶的生产方法、酶的提取与分离纯化、酶的改造方法、非水相酶催化、酶反应器以及酶的应用，根据需要通过人工操作，掌握酶的生产与应用的技术过程。

通过课堂授课教学、结合专题内容评述。

使学生对酶的的生产与应用一定的了解，并为以后的研究应用打下基础。

二、考试方式和考试时间闭卷考试，总分150，考试时间为3小时。

三、参考书目（仅供参考）1．郭勇编著，酶工程（第四版），2016，北京：科学出版社2．袁勤生主编，酶与酶工程（第二版），2012，上海：华东理工大学出版社3．罗贵民主编，酶工程（第3版），2016，北京：化学工业出版社四、试题类型：主要包括选择题、填空题、简答题、论述题等类型，并根据每年的考试要求做相应调整。

五、考试内容及要求第一章绪论1.1 酶的基本概念与发展史1.2 酶催化作用特点1.3 影响酶催化作用的因素1.4 酶的分类与命名1.5 酶活力的测定1.6 酶的生产方法1.7 酶工程发展概况基本要求：掌握酶催化作用的特点、酶活力的测定方法和酶的分类命名方法；重点：酶的生产方法第二章微生物发酵产酶2.1 酶生物合成的基本理论2.2 常用的产酶微生物2.3 发酵工艺条件及其控制2.4 产酶发酵动力学2.5 固定化微生物细胞发酵产酶2.6 固定化原生质体发酵产酶基本要求：掌握酶生物合成的基本理论、微生物和固定化微生物发酵产酶的工艺流程重点：微生物发酵产酶的发酵条件控制和产酶动力学难点：酶生物合成的调节机制第三章动植物细胞培养产酶3.1 植物细胞培养产酶3.2 动物细胞培养产酶基本要求：掌握动植物细胞培养产酶的基本方法和工艺过程重点：动植物细胞的特性及其培养特点第四章酶的提取与分离纯化4.1 酶的特性与分离提取方法的选择4.2 酶分离提取的一般方法4.3 酶分离提取的重点方法概述4.4 典型酶的分离提取工艺流程基本要求：掌握酶分离提取的种类与方法重点：层析和电泳方法在酶分离提取中的应用难点：不同分离提取方法的选择第五章酶分子修饰5.1 金属离子置换修饰5.2 大分子结合修饰5.3 酶分子的侧链基团修饰5.4 肽链有限水解修饰5.5 核苷酸链剪切修饰5.6 氨基酸置换修饰5.7 核苷酸置换修饰5.8 酶分子的物理修饰5.9 酶分子修饰的应用基本要求：掌握酶分子修饰的一般方法和作用重点：大分子结合修饰的特点与应用难点：氨基酸和核苷酸的置换修饰第六章酶、细胞和原生质体的固定化6.1 酶固定化6.2 细胞固定化6.3 原生质体固定化基本要求：掌握酶与细胞固定化的原理和方法重点：酶和微生物细胞的固定化难点：动植物细胞的固定化第七章酶的定向进化7.1 酶定向进化的特点7.2 酶基因的随机突变7.3 酶突变基因的定向选择7.4 酶定向进化的应用基本要求：掌握酶定向进化的基本过程与方法；重点：酶定向进化中突变基因库的构建方法；难点：酶突变基因的筛选；第八章酶的非水相催化8.1 酶非水相催化的研究概况8.2 有机介质中水和有机溶剂对酶催化反应的影响8.3 酶在有机介质中的催化特性8.4 有机介质中酶催化反应的工艺条件控制8.5 有机介质中酶催化反应的应用基本要求：掌握非水相中酶促反应的特点与一般规律；重点：水对有机相中酶促反应的影响；难点：有机相中酶促反应中水的控制；第九章酶反应器9.1 酶反应器的类型9.2 酶反应器的选择9.3 酶反应器的设计9.4 酶反应器的操作基本要求：掌握酶反应器的不同类型及其特点重点：不同酶反应器的特性和适用范围难点：酶反应器型式的选择第十章酶的应用10.1 酶在医药领域的应用10.2 酶在食品领域的应用10.3 酶在轻工和化工领域的应用10.4 酶在环保领域的应用10.5 酶在生物技术领域的应用基本要求：掌握了解酶在各领域中的应用重点：酶在医药、食品和轻化工领域中的应用。

动物细胞原代培养名词解释1.引言1.1 概述动物细胞原代培养是一种重要的实验手段，被广泛应用于生物学研究领域。

通过原代培养，科研人员可以将动物体内的细胞从组织或器官中分离出来，并在适当的培养条件下培养和繁殖这些细胞。

这种培养方法能够维持细胞的生长和功能，使其能够在体外环境下长期存活。

原代培养的过程可以分为两个主要阶段：细胞分离和细胞培养。

首先，需要将动物组织或器官进行机械或酶解分离，以获得单个的细胞悬浮液。

然后，将这些分离的细胞种植在含有适当培养基和营养物质的培养皿中，提供合适的温度、湿度和氧气条件，使细胞得以生长和分裂。

通过原代培养，科研人员可以获得大量的动物细胞来进行各种实验和研究。

这些细胞可以用于研究细胞的生理功能、细胞周期、细胞信号传导以及疾病模型的建立等。

此外，通过原代培养还可以进行细胞遗传学研究、药物筛选和细胞工程等领域的实验。

总而言之，动物细胞原代培养是一种重要的实验手段，可以为科研人员提供源源不断的动物细胞来进行各种研究。

它为细胞生物学、医学研究以及药物开发等领域的进展提供了坚实的基础，并在解决许多科学问题中扮演着重要的角色。

文章结构指的是文章的组织框架和布局。

它的作用在于使读者能够清晰地理解整篇文章的内容和结构，从而更好地把握文章的主旨和论证思路。

本文按照以下结构进行组织和呈现：1. 引言1.1 概述在这一部分，将对动物细胞原代培养的基本概念和背景进行简要介绍，引起读者的兴趣，并提出研究的意义。

1.2 文章结构（即本节内容）在这一部分，将对整篇文章的结构进行概述，介绍各个章节的内容以及它们在整篇文章中的作用。

1.3 目的在这一部分，明确研究动物细胞原代培养的目的，说明研究的意义和价值，为读者提供清晰的导向。

2. 正文2.1 原代培养详细介绍什么是原代培养，原代培养的步骤和方法，以及原代培养在细胞研究中的重要性和应用领域。

2.2 动物细胞介绍动物细胞的结构和特点，包括细胞膜、细胞质、细胞核等重要组成部分，以及动物细胞在生物学研究和医学领域中的应用。

动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。

以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。

细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。

2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。

培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。

不同的细胞系需要不同的培养基。

3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。

解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。

4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。

传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。

5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。

通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。

6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。

7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。

使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。

8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。

冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。

9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。

在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。

动物细胞原代培养和传代培养中的培养方法1. 引言嘿，大家好！今天咱们聊聊动物细胞的培养，听起来可能有点高大上，但其实就像种花一样，只是“花”是细胞，养护的方法也有讲究。

说白了，细胞也有自己的“家”，咱们得给它们创造个舒适的环境，让它们在里面嗨起来！接下来，我就带你走进这个充满神奇和乐趣的细胞世界。

2. 原代培养2.1 什么是原代培养？原代培养，简单来说，就是从活体动物身上直接提取细胞，然后把它们放在培养皿里，就像把新鲜的花插进水里一样。

你知道吗，这些细胞就像刚从大自然里来的小家伙，特别活泼，适应能力强。

不过，这可不是随便就能搞定的，得有点技术活。

2.2 原代培养的方法首先，咱得准备好一切工具，这可是基础中的基础，不能马虎。

咱们要用到无菌技术，确保培养环境干净得像新洗的碗，不然细胞们就会遭殃。

提取细胞时，通常会用胰酶把它们从组织中“松开”，就像剥开一个大榴莲，里边的果肉才好吃嘛。

然后，把这些细胞放到培养基里。

培养基就像细胞的“快餐”，里面有细胞需要的各种营养物质和生长因子。

要记得，细胞也要“吃好”，才能长得壮壮的，不然就不成气候了。

培养的环境也不能小看，温度、pH值、二氧化碳浓度都得保持稳定。

咱们得把细胞放在适合的温度下，就像给它们开个温暖的“家庭聚会”。

如果环境不合适，细胞就会抗议，甚至罢工！3. 传代培养3.1 什么是传代培养？说到传代培养，那就是把原代培养中的细胞继续繁殖，让它们“生儿育女”。

这就像一个大家庭，越来越壮大，热闹得不得了。

传代培养可以让我们获得更多细胞，方便后续的实验和研究。

3.2 传代培养的方法传代培养的关键在于及时分离细胞，咱不能让细胞们挤在一起，这样容易“打架”。

通常，当细胞长满培养皿后，就需要把它们分离开。

这个过程又得用到胰酶，跟原代培养一样，轻轻松松把它们从皿里“请”出来。

接下来，咱们需要把细胞分到新的培养皿里，再给它们加上新鲜的培养基，确保它们能继续健康成长。

注意，细胞们需要一点时间适应新环境，就像搬家后要习惯新居的味道一样。

293e细胞培养方法293E细胞是一种常用的哺乳动物细胞系，广泛应用于生物医学研究和重组蛋白表达等领域。

本文将介绍293E细胞的培养方法，包括细胞培养基的配制、细胞的传代和细胞的冻存。

一、细胞培养基的配制293E细胞的培养基配制相对简单，常用的培养基是DMEM （Dulbecco's Modified Eagle Medium）基础上加入适当的补充剂。

1.1 DMEM的配制将DMEM粉末加入无菌的蒸馏水中，并加热至溶解。

待完全溶解后，调节pH值至7.4，并加入适量的无菌纤维素。

1.2 培养基的补充剂将DMEM中加入10%的胎牛血清（FBS），1%的L-谷氨酰胺（L-Gln），100 U/mL的青霉素和100 μg/mL的链霉素。

混匀后滤过以获得无菌的培养基。

二、细胞的传代293E细胞的传代是维持细胞生长和增殖的重要步骤。

下面将介绍293E细胞的传代方法。

2.1 细胞解离用PBS（磷酸盐缓冲液）将培养皿中的细胞洗涤一次，去除培养基。

加入适量的胰酶或胰酶-乳酸酐（Trypsin-EDTA）溶液，并在37°C的恒温培养箱中孵育5-10分钟，直至细胞从培养皿上脱落。

2.2 细胞传代将细胞解离液转移至离心管中，离心300×g，室温下离心3-5分钟。

去除上清，加入适量的培养基悬浮细胞，并用移液器进行混匀。

将细胞悬液装入新的培养皿中。

2.3 细胞的培养条件将新传代的293E细胞放入37°C的恒温培养箱中，培养基的补充和细胞的观察一般每两天进行一次。

当细胞生长至80%-90%的密度时，可以进行下一次的传代。

三、细胞的冻存3.1 冻存液的配制将培养基中的FBS浓度提高至20%，添加相同体积的DMSO（二甲基亚砜），混匀后过滤灭菌得到冻存液。

3.2 细胞冻存将培养皿中的293E细胞加入足够量的培养基，离心300×g，室温下离心3-5分钟。

去除上清，加入冻存液悬浮细胞，并用移液器进行混匀。

动物细胞培养管理制度一、培养基的准备和管理1.1 培养基的准备1.1.1 培养基成分的准备应严格按照配方进行，精确称量各种成分，尽量避免因操作不当或器皿受到污染导致成分比例出错。

1.1.2 培养基成分的保存应在密封、阴凉、干燥、无异味的条件下，避免受到阳光直射和高温影响。

1.1.3 开启新瓶或新袋的培养基前，应先用无菌液体将外包装表面消毒，避免外包装受到污染，然后在洁净无菌的操作台上打开瓶盖，尽量避免让空气中的微生物进入培养基内。

1.2 培养基的管理1.2.1 包装好的培养基应有清晰的标签，标注成分、配制日期、有效期等信息，并存放于适当的温度下，避免受到阳光直射和高温影响。

1.2.2 一旦发现培养基外观发生变化，如颜色、透明度等明显异常，应停止使用，并将问题培养基送至实验室进行分析检测。

1.2.3 使用的培养基应记录每次使用的日期、批号、制备者等信息，以便后期的追踪和管理。

二、细胞的培养和传代2.1 细胞的培养2.1.1 在细胞培养前，应先对工作台、培养箱等培养环境进行必要的消毒处理，保证操作环境的无菌。

2.1.2 培养细胞前，应仔细查看细胞培养饲养瓶或培养皿，检查是否有异物或污染，如有，应立即处理或更换合适的饲养瓶或培养皿。

2.1.3 细胞培养进程中，应定期检查细胞的状态，如细胞的形态、密度、生长速度等，一旦发现异常应及时进行处理。

2.2 细胞的传代2.2.1 传代前，应先对饲养瓶或培养皿中的细胞进行观察和计数，掌握细胞的状态和数量，以确定需要传代的细胞数目。

2.2.2 传代操作时，应注意操作的轻柔、迅速和无菌，避免对细胞造成机械性损伤或污染。

2.2.3 传代后，应对培养皿或饲养瓶进行标记，记录传代的日期、次数等信息，以便后期的追踪和管理。

三、细胞的冻存与解冻3.1 细胞的冻存3.1.1 冻存前应检查细胞的状态、数量和培养基的成分是否符合冻存要求，然后进行冻存液的配置和标记，避免出错。

3.1.2 冻存过程中，应确保细胞在冻存容器内的均匀分布，避免出现细胞团或细胞沉积现象，影响细胞的存活率。