核酸适配体在白血病诊断中的应用1

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核酸适配体在白血病诊断中的应用
作者:孙娜夏薇
【摘要】白血病是由于造血干细胞恶性增生的克隆性疾病,临床诊断主要依据MICM综合性诊断的方法。

现今,白血病早期的诊断还有待研究。

指数富集的配体系统进化技术是一种新型体外筛选适配体的技术。

因为适配体的特异性与制备后贮存及再使用的方便与经济等特点,在白血病的临床早期诊断、精准诊断提供了可能。

【关键词】白血病;适配体;SELEX技术
近几年来,应用细胞为靶标的指数富集配体的系统进化(cell based systematic evolution of ligands by exponential enrichment,Cell-SELEX) 技术在肿瘤研究领域中已成为热点[1] 。

1990年,Tuerk报道了制备特异性寡核苷酸分子的技术,即SELEX技术。

这是一种能与靶细胞高特异性、高亲和力结合的寡核苷酸技术,所制备的寡核苷酸分子被称为适配体(aptamer) 。

适配体可以是DNA或RNA,是在随机的寡核苷酸文库中,经过多次循环筛选、富集获得,它们的特点是能形成特定的三维立体结构,通过空间构型互补而与靶细胞高亲和性、高特异性结合。

白血病是一类造血干细胞恶性克隆性增生性疾病,异常行为表现在细胞生物学方面,主要体现为造血干细胞分化障碍、增殖过剩和凋亡障碍,发生全身性组织细胞破坏。

临床表现常为贫血、发热和出血以及肝、脾、淋巴结异常肿大等病状。

近年来,分子生物学技术发展突飞猛进,分子诊断技术已应用于白血病的临床诊断,成为医学各学科发展的突破点,但是对白血病的精确诊断还存在一定的局限性。

SELEX技术是一种新近研发的体外筛选技术,目前,该技术已经成功在体外筛选出急性髓系白血病、急性早幼粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性淋巴细胞白血病细胞特异的适配体。

这种方法在白血病分子诊断领研究域中引起了研究热潮。

1、SELEX技术的优点与应用
SELEX技术筛选在实际中的应用有以下优点:①库容量大、特异性高、亲和性高,可以区分结构相近的物质;②靶细胞范围广,较大的蛋白质分子如酶、生长因子或小分子物质如金属离子、有机染料等都可以做为核酸适配体的靶分子[3];③易体外筛选,可人工合成,准确性强、重复性好,大大减少了制备过程中的的批间误差;④易与一些特殊标记分子或治疗药物等相结合,便于标记与检测;⑤可修饰性。

适配体做为单链的寡聚核苷酸片段,在进行精准的位点修饰后,还可以保持原有的生物学活性。

可以对其进行
荧光染料、生物素、放射性同位素标记,进行特异的位点修饰以提供精准的报告分子和效应分子,对肿瘤的特异诊断提供可能;⑥具有分子量较小,稳定性能好,对温度不敏感,容易保存。

肿瘤细胞与正常细胞在形态结构上有许多相似之处,所以可以应用SELEX技术以正常细胞为靶细胞筛选出特异性肿瘤标志物的适配体,可以应用于临床诊断与治疗,Hikce等以神经胶质母细胞瘤系U251为靶细胞,筛选出特异性U251细胞的适配体TTA1,通过特定二维闪烁成像技术就能获得清晰的肿瘤图像,从而应用于临床诊断。

这些都是以正常细胞为靶细胞筛选而得的适配体,获得的适配体可以特异结合到相应的肿瘤细胞上,从而为临床上获得新的肿瘤标志物提供了可能。