食品中亚硝酸盐的快速检测盐酸萘乙二胺法KJ

实验十 食品中亚硝酸盐含量的检测1.实验目的掌握盐酸萘乙二胺法检测肉制品中食品添加剂——亚硝酸盐的基本操作技术。

2.实验原理在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸奈乙二胺偶合生成紫红色化合物，颜色的深浅与亚硝酸盐含量成正比，其最大吸收波长为538nm ，可测定吸光度并与标准比较定量。

2HCl+NaNO 2+H 2N3H重氮化H 3SO-Cl----+NaCl 2H +2O2HCl .H 2NH 2CH 2+--N-Cl N3H偶合CHN 2CH 2NH 2H .2HCl N -H 3SON +HCl盐酸萘乙二胺紫红色3.仪器、试剂及材料3.1仪器50mL 小烧杯，752型分光光度计，250mL 容量瓶，1mL 移液管，25mL 具塞试管，洗耳球 3.2试剂（1）饱和硼砂溶液：溶解5g 硼酸钠于100mL 热水中，冷却后备用。

（2）硫酸锌溶液：溶解30g 硫酸锌于100mL 水中。

（3）对氨基苯磺酸溶液（0.4%）：溶解0.4g 对氨基苯磺酸于100mL20%盐酸中，避光保存。

（4）盐酸奈乙二胺溶液（0.2%）：溶解0.2g 盐酸奈乙二胺于100mL 水中，避光保存。

（5）亚硝酸钠标准溶液：精确称取0.1000g 亚硝酸钠（硅胶干燥中干燥24小时），加水溶解，移入500mL 容量瓶，并稀释至刻度，混匀，临用前吸取5.00mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，此溶液每毫升相当5μg 亚硝酸钠。

（6）亚铁氰化钾溶液：称取10.6g 亚铁氰化钾于100mL 容量瓶中定容。

3.3材料火腿肠4.实验步骤4.1亚硝酸钠的提取4.2 测定试剂按照表1进行添加表1 各试剂添加顺序滤液20 0.4%对氨基苯磺酸1 1 1 1 1 1 混匀3~5min 0.2%盐酸奈乙二胺0.50.50.5 0.5 0.50.5补水至25mL数据处理公式与方法：1000250201000A X ⨯⨯⨯=mX ——样品中的亚硝酸盐的含量，mg/kg ；A ——测定用滤液中亚硝酸钠的含量，μg ； m ——样品的质量，g ；20/250——测定用样液体积mL/试样处理液总体积mL 。

食品中亚硝酸盐测定盐酸荼乙二胺法实验实验4食品中亚硝酸盐测定（盐酸茶乙二胺法） A文稿归稿存档 DQS583-OLUI129一、实验原理制品中加入的亚硝酸盐产生的亚硝基与肌红蛋白反应，生产色泽鲜红的亚硝基肌红蛋白，使肉制品有美观的颜色。

同时亚硝酸盐也是一种防腐剂，可抑制微生物的增殖。

由于蛋白质代谢产物中仲胺基与亚硝酸反应能够生成具有很强毒性和致癌性的亚硝胺，因此，亚硝酸盐的使用量及在制品中的残留量均应按标准执行。

亚硝酸盐的测定方法主要是重氮偶合比色法，此外可与荧光胺偶合，测定其荧光吸收强度，或衍生后用气相色谱法测定。

H样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸2—蔡乙二胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。

其颜色的深度与样品种亚硝酸含量成正比，故可比色测定。

二、试剂和器材①饱和硼砂溶液：5g硼酸钠溶于lOOmL热的重蒸水中，冷却备用。

②亚铁鼠化钾溶液：称取106g亚铁鼠化钾溶于水，并稀释至lOOOmLo③乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌，加30mL冰醋酸溶于水，并稀释至lOOOmLo④果蔬抽提液：溶解50g氯化汞和50g氯化锁于lOOOmL重蒸水中，用浓盐酸调整到pH值为lo⑤氢氧化铝乳液：溶解125呂硫酸铝于lOOOmL重蒸水中，滴加氨水使氢氧化铝全部沉淀。

用蒸懈水反复洗涤，真空抽滤，直至洗液分别用氯化钞!溶液检验不发生浑浊。

取下沉淀物，加适量重蒸水使之呈薄襁糊状，捣拌均匀备用。

©0. 4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%的盐酸溶液中，闭关保存。

⑦0.2%盐酸蔡乙二胺溶液：称取0.2g盐酸蔡乙二胺，溶于100mL重蒸水中。

⑧亚硝酸钠标准溶液（5微克每毫升）：精确称取0. 1000g亚硝酸钱，以重蒸水定容到500mLo再吸取此溶液25mL,以重蒸水定容到lOOOmL,此工作液每毫升含亚硝酸钠5微克。

实验一：食品中亚硝酸盐的测定一、实验目的1. 掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的原理2. 掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计算方法3. 了解分光光度计的构造二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为538 nm，可测定吸光度并与标准比较定量。

三、仪器与试剂1. 仪器（1）分光光度计（2）小型胶肉机（3）恒温水浴锅2．试剂（1）亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000 mL。

（2）乙酸锌溶液(220g/L)：称取220.0 g乙酸锌，先加30mL冰醋酸溶解，用水稀释至1000 mL。

（3）饱和硼砂溶液(50g/L)：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。

（4）对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4ｇ对氨基苯磺酸，溶于100mL20 %（V/V）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

（5）盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

（6）亚硝酸钠标准溶液（200μg/mL）：准确称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

（7）亚硝酸钠标准使用液（5.0 μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度。

四、实验步骤1. 提取称取2.50g经绞碎混匀的样品，于50mL烧杯中，加硼砂饱和溶液12.5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300 mL 将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。

2. 提取液净化在振荡上述提取液时加入5 mL 亚铁氰化钾溶液, 摇匀, 再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。

加水至刻度, 摇匀, 放置30min, 除去上层脂肪, 上清液用滤纸过滤, 弃去初滤液30mL，滤液备用。

盐酸萘乙二胺分光光度法测定肉制品中的亚硝酸盐姓名： 班级：食品科学学号：一 目的要求1 通过实验强化对紫外—可见分光光度法定量分析原理的理解；2 了解以紫外—可见分光光度法为基础的检测方法的建立思路；3 直观了解紫外—可见分光光度计的结构；4 掌握紫外－可见吸收光谱的测定方法；5 掌握利用标准曲线法进行定量分析的方法。

二 实验原理亚硝酸盐在食品生产中用作发色剂和防腐剂，允许用于肉及肉制品的生产加工中，使得肉与肉制品呈现良好的色泽。

其呈色机理是，亚硝酸盐与肌肉中的乳酸作用产生亚硝酸，而亚硝酸不稳定易分解产生一氧化氮，然后一氧化氮与肌红蛋白结合产生红色的亚硝基肌红蛋白，使肉制品产生稳定的红色。

但是过量的亚硝酸盐能够引起高铁血红蛋白症， 导致组织缺氧，还可使血管扩张、血压降低。

在酸性条件下，亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸通过重氮化反应定量生成重氮盐，该重氮盐可进一步与盐酸萘乙二胺通过偶联反应生成紫红色偶氮染料，在特定波长处产生较强吸收：；通过测定该偶氮染料在特定波长下的吸光度，利用朗伯-比尔定律（A=KLc ）可确定样品中亚硝酸盐的质量浓度。

采用标准曲线法进行定量分析时，可对亚硝酸盐标准溶液系列进行上述反应，通过测定该系列的吸光度，利用excel 回归标准曲线，得到浓度和吸光度的关系，再将样品中亚硝酸盐测得的吸光值带到方程中算出其中亚硝酸盐的浓度。

三 仪器与试剂1 仪器Cary Eclipse 型紫外-可见分光光度计；BS 124S 电子分析天平。

2 试剂亚铁氰化钾[K 4Fe(CN)6·3H 2O]、乙酸锌[Zn(CH 3COO)2·2H 2O]、硼砂 [Na 2B 4O 7·10H 2O]、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺，均为分析纯试剂。

四 实验步骤1 试剂配制亚铁氰化钾溶液：称取106.0 g 亚铁氰化钾，溶解于水后稀释至1000mL 。

NH 2SO 3H +NO 2-+2H N+NSO 3H+2H 2ON+NSO 3H+NHCH 2CH 2NH 2SO 3H NNHCH 2CH 2NH 2N乙酸锌溶液：称取220.0 g 乙酸锌，加30 mL冰乙酸溶于水，稀释至1000mL。

实验十二、食品中亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺分光光度法）一、实验目的1.明确亚硝酸盐在食品中的作用以及限量标准。

2.掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，与标准系列比较定量。

三、仪器1. 722分光光度计，提前20min打开预热2. 组织绞碎机，菜刀，砧板 1-2套3. 50mL烧杯 500mL烧杯 3L大烧杯4. 电炉 2个5. 托盘天平6. 200mL容量瓶 500mL容量瓶7. 恒温水浴锅8. 25mL具塞比色管9. 滴管，漏斗，滤纸，吸小球10. 玻璃棒，温度计，标记笔，标签纸四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。

）1、亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾[K4Fe6(CN)·3H2O]，用水溶解后，稀释至1000mL。

2、乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌[Zn(CH3C00)2·2H20]，加3 mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL。

3、饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100 mL热水中，冷却后备用。

4、对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20％的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保分装。

5、盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。

有致癌作用6、亚硝酸钠标准溶液（0.2g/L）：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，并稀释至刻度。

此溶液每ml相当于200µg亚硝酸钠。

7、亚硝酸钠标准使用液（0.2µg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。

分析检测食品中亚硝酸盐快速检测方法优化李鹏飞，李丽蓉*，鲍艳莉，刘　辉，张嵘蕊（云南孚尔质量检验检测有限公司，云南昆明 650000）摘　要：目的：基于分光光度法的反应机理，建立一种便携、低毒、保质期长的亚硝酸盐快速检测方法。

方法：采用3种有机酸分别代替国标法中的浓盐酸作为酸性介质，并优化3组试剂[柠檬酸组（CA组）、酒石酸组（TA组）、2-羟基丁二酸组（MA组）]中有机酸的最佳用量，进行对比研究。

同时，在3组试剂中加入茶多酚作为抗氧化剂，考察不同浓度的茶多酚对3组试剂存储效果的影响。

结果：3组试剂中柠檬酸、酒石酸、2-羟基丁二酸均可替代国标法中的浓盐酸作为酸性介质，时效性强；CA组、TA组、MA组线性范围分别为0.05～20.00 mg·L-1、0.2～10.0 mg·L-1、0.2～10.0 mg·L-1，28 ℃时存储时间分别为180 d以上、60 d、60 d。

3组试剂下，食品中亚硝酸盐都有较高的加标回收率，相对标准偏差均小于5%；使用国标法和该方法对同一样品进行检测，结果一致性良好。

结论：3组试剂中的有机酸均可代替浓盐酸作为酸性介质，安全性和时效性均有提高，加入茶多酚后3组试剂的存储稳定性均有提高，其中CA组的存储时间可达180 d，在亚硝酸盐实际检测工作中更加实用。

关键词：亚硝酸盐；快速检测；有机酸；抗氧化剂Optimization of Rapid Detection Method for Nitrite in FoodLI Pengfei, LI Lirong*, BAO Yanli, LIU Hui, ZHANG Rongrui(Yunnan Fair Quality Inspection Co., Ltd., Kunming 650000, China)Abstract: Objective: To establish a portable, low toxicity, and long shelf life rapid detection method for nitrite based on the reaction mechanism of spectrophotometry. Method: Three types of organic acids were used to replace the concentrated hydrochloric acid in the national standard method as the acidic medium, and the optimal dosage of organic acids in three groups of reagents [citric acid group (CA group), tartaric acid group (TA group), and 2-hydroxysuccinic acid group (MA group)] was optimized and compared. At the same time, tea polyphenols were added as antioxidants to three sets of reagents to investigate the effect of different concentrations of tea polyphenols on the storage efficiency of the three sets of reagents. Result: Citric acid, tartaric acid, and 2-hydroxysuccinic acid in the three groups of reagents can all replace the concentrated hydrochloric acid in the national standard method as the acidic medium, with strong timeliness; The linear ranges of CA group, TA group, and MA group were 0.05～20.00 mg·L-1、0.2～10.0 mg·L-1、0.2～10.0 mg·L-1. The storage time at 28 ℃ was above 180 days, 60 days, and 60 days, respectively. Under three sets of reagents, nitrite in food has a high recovery rate with relative standard deviation less than 5%; the national standard method and this method were used to detect the same sample, and the results showed good consistency. Conclusion: Organic acids in all three groups of reagents can replace concentrated hydrochloric acid as an acidic medium, with improved safety and timeliness. After the addition of tea polyphenols, the storage stability of all three groups of reagents is improved, with the storage time of CA group reaching 180 days, making it more practical in the actual detection of nitrite.Keywords: nitrite; rapid detection; organic acid; antioxidant作者简介：李鹏飞（1989—），男，云南大理人，本科，工程师。

一、实验目的本实验旨在学习亚硝酸盐的测定方法，了解亚硝酸盐在食品中的存在及其对人体健康的影响。

通过实验，掌握亚硝酸盐的提取、分离和定量分析方法，提高对食品中亚硝酸盐含量的检测能力。

二、实验原理亚硝酸盐（NO2-）是一种常见的食品添加剂，广泛应用于肉制品的加工中，具有发色、防腐和抗微生物作用。

然而，过量的亚硝酸盐摄入对人体健康有害，可能导致急性中毒、慢性疾病甚至癌症。

因此，对食品中亚硝酸盐含量的检测具有重要意义。

本实验采用盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐含量。

该方法基于亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在酸性条件下发生重氮化反应，生成重氮盐，再与N-1-萘基乙二胺盐酸盐偶合形成玫瑰红色染料。

通过比色法测定染料的吸光度，可以计算出样品中亚硝酸盐的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 火腿肠样品- 试剂：对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、亚硝酸钠标准溶液等- 仪器：酸度计、分光光度计、离心机、移液器、容量瓶、试管等2. 实验步骤：1. 样品处理：将火腿肠样品剪碎，称取适量，加入蒸馏水溶解，搅拌均匀。

2. 提取：将样品溶液用酸度计调至pH 2.0，加入适量的亚铁氰化钾和乙酸锌，充分混合，静置30分钟，使蛋白质沉淀。

3. 分离：将上层清液转移至离心管中，离心分离蛋白质沉淀。

4. 测定：取一定量的上层清液，加入对氨基苯磺酸和N-1-萘基乙二胺盐酸盐，充分混合，静置15分钟，使染料形成。

5. 比色：用分光光度计测定染料的吸光度，与标准曲线比较，计算出样品中亚硝酸盐的含量。

四、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据亚硝酸钠标准溶液的浓度和吸光度，绘制标准曲线。

2. 样品测定：对火腿肠样品进行测定，得到样品中亚硝酸盐的吸光度。

3. 结果计算：根据标准曲线和样品吸光度，计算出样品中亚硝酸盐的含量。

五、实验讨论1. 实验过程中，酸度对亚硝酸盐的测定结果有较大影响。

实验过程中应严格控制酸度，确保测定结果的准确性。

2. 亚铁氰化钾和乙酸锌在实验中起到沉淀蛋白质和除去脂肪的作用，提高实验的灵敏度。