高二生物 酶活力的测定

【高中生物】高中生物知识点：酶的制备和活力的测定酶的制备和活力的测定：酶活力（enzymeactivity）：也称为酶活性，是指酶在催化一定的化学反应时表现出来的能力，通常用酶促反应的速率即酶促反应过程中单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示。

酶活力的高低会受温度、pH、激活剂等多种因素的影响。

酶的提取一般选择在低温和适合的pH下进行，有时还要加入酶的激活剂以提高酶活力。

例如，从植物材料中提取果胶酶就是在低温、偏酸性的提取液和NaCl作激活剂的条件下进行的。

一、制备果胶酶1、实验材料和器具：新鲜的水果或蔬菜；质量分数为10%的NaCl溶液，0.1mol/L冰醋酸；研钵，剪刀，漏斗，纱布或滤纸，烧杯，精密pH试纸，试管，酒精灯，离心机，榨汁机等。

2、果胶酶的制备：（1）将50g新鲜的水果或蔬菜洗净，在预冷的研钵内用剪刀迅速剪碎后研磨，边研磨边加入质量分数为10%NaCl溶液50mL，制成匀浆。

（2）漏斗中放置滤纸或5层纱布过滤匀浆液，收集滤液。

（3）以4000r/min的离心速率离心滤液15min。

注意使用同一规格的离心管，离心管内滤液的高度不超过离心管长度的2/3，离心前要确保在离心机中对称放置的离心管（内含滤液）的质量相等。

（4）离心完毕后，果胶酶主要存在于离心管的上清液中，迅速地将上清液倒入洁净的小烧杯内，用0.1mol/L冰醋酸将pH调至3～4，在0～4℃下保存备用。

二、观察果胶酶对苹果匀浆液的作用1、用榨汁机制作苹果匀浆液，将匀浆液置于90℃的恒温水浴中保温4min。

冷却后再过滤，收集滤液。

2、取两支试管，编号为1和2，分别加入30mL滤液，再向试管1中加入30mL保存备用的上清液，向试管2中加入经过90℃水浴保温4min后的上清液30mL，振荡摇匀两支试管，置于室温下。

3、观察两支试管中苹果匀浆液的澄清程度变化，并将结果记录在下表中。

项目苹果匀浆液/mL上清液/mL90℃水浴保温4min后的上清液/mL现象澄清时间试管1 （样品管）3030试管2 （对照管）3030知识点拨：注意事项：在温度、pH影响酶活性的实验中，始终都贯穿着对照原则，而在设置对照实验时最重要的是运用单一变量原则，其中的变量就是我们所研究的对象，所以在分析实验问题时，要紧紧抓住研究变量，把其他可能影响实验结果的变量变为常量，才能保证对照实验结果的严密性和准确性。

一、实验目的1. 了解酶活性测定的基本原理和方法。

2. 探究温度、pH值、底物浓度、酶浓度以及抑制剂和激活剂对酶活性的影响。

二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一和可调节的特性。

酶活性是指酶催化反应的能力，通常用酶活力单位（U）表示。

在一定条件下，酶活力与反应速率成正比，即反应速率越快，酶活力越高。

本实验采用比色法测定酶活性。

在酶催化反应中，底物被转化为产物，同时产生一定量的有色物质。

通过测定有色物质的吸光度，可以计算出酶活力。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酶：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。

- 底物：淀粉、蛋白质、脂肪等。

- 抑制剂：碘化钠、氟化钠、氯化钠等。

- 激活剂：硫酸铵、氯化钙等。

- pH缓冲液：磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等。

2. 实验仪器：- 紫外-可见分光光度计- 恒温水浴锅- 移液器- 试管- 试管架- 秒表四、实验方法1. 酶活力测定：- 将酶和底物混合，置于恒温水浴锅中。

- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。

- 根据吸光度计算酶活力。

2. 温度对酶活性的影响：- 将酶和底物混合，分别置于不同温度的水浴锅中。

- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。

- 分析不同温度下酶活性的变化。

3. pH值对酶活性的影响：- 将酶和底物混合，分别置于不同pH值的缓冲液中。

- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。

- 分析不同pH值下酶活性的变化。

4. 底物浓度对酶活性的影响：- 将酶和不同浓度的底物混合，置于恒温水浴锅中。

- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。

- 分析不同底物浓度下酶活性的变化。

5. 酶浓度对酶活性的影响：- 将不同浓度的酶与底物混合，置于恒温水浴锅中。

- 在一定时间内，每隔一段时间取出一定体积的反应液，用紫外-可见分光光度计测定吸光度。

酶活力测定实验报告一、实验目的酶活力测定实验的主要目的是了解酶的活性及其影响因素，掌握测定酶活力的基本方法和原理，以及学会使用相关仪器和试剂进行实验操作。

二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质或核酸。

酶活力是指酶催化一定化学反应的能力，通常用在一定条件下酶催化反应的速度来表示。

本实验采用分光光度法测定酶活力，其原理是基于酶催化反应所产生的产物在特定波长下具有光吸收特性，通过测定反应体系在该波长下吸光度的变化，可以计算出酶催化反应的速度，从而反映酶的活力。

以过氧化氢酶为例，过氧化氢酶能够催化过氧化氢分解为水和氧气。

在本实验中，通过加入一定量的过氧化氢溶液，使其与过氧化氢酶反应，然后使用高锰酸钾溶液滴定剩余的过氧化氢，根据高锰酸钾溶液的用量计算出过氧化氢酶的活力。

三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的猪肝或土豆等富含过氧化氢酶的组织。

过氧化氢溶液（3%）。

高锰酸钾溶液（002 mol/L）。

磷酸缓冲液（pH 70）。

2、实验仪器研钵。

离心机。

移液器。

分光光度计。

恒温水浴锅。

试管、量筒、容量瓶等玻璃仪器。

四、实验步骤1、酶液的制备称取新鲜的猪肝或土豆组织_____g，置于研钵中，加入适量的磷酸缓冲液（pH 70），研磨成匀浆。

将匀浆转移至离心管中，以_____rpm 的转速离心_____min，取上清液即为粗酶液。

2、酶活力的测定取_____支试管，分别标记为 1、2、3。

在 1 号试管中加入_____mL 磷酸缓冲液（pH 70）作为空白对照，在 2、3 号试管中分别加入_____mL 粗酶液。

向 1、2、3 号试管中分别加入_____mL 过氧化氢溶液（3%），立即摇匀，并同时开始计时。

在反应进行_____min 后，迅速向 1、2、3 号试管中分别加入_____mL 浓度为 2 mol/L 的硫酸溶液终止反应。

用移液器吸取_____mL 反应液，加入到另一支装有_____mL 高锰酸钾溶液（002 mol/L）的试管中，摇匀。

酶活力的测定实验报告酶活力的测定实验报告引言：酶是一类生物催化剂，能够加速生物体内化学反应的速率。

酶活力的测定是生物学实验中常见的实验之一，通过测定酶活力的大小，可以了解酶在不同条件下的催化效果，进而研究酶的特性及其在生物体内的作用机制。

本实验旨在通过测定过氧化氢酶的活力，探究酶活力与温度、酶浓度和底物浓度的关系。

材料与方法：1. 实验所需材料包括过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物、缓冲液、显色剂等。

2. 实验仪器包括分光光度计、试管、移液器等。

3. 实验步骤：a. 准备一组不同温度下的试验样品，分别将过氧化氢酶溶液和过氧化氢底物按照一定比例混合，并加入适量的缓冲液。

b. 在不同温度下，将试验样品分别放入预先恒温的水浴中反应一定时间。

c. 取出反应后的试验样品，加入显色剂，并在分光光度计中测定吸光度。

d. 重复上述步骤，分别改变酶浓度和底物浓度，进行实验。

结果与讨论：通过实验测定，我们得到了不同条件下的酶活力数据，并进行了分析和讨论。

1. 温度对酶活力的影响：在实验中，我们分别将试验样品置于不同温度下进行反应，结果发现酶活力随温度的变化呈现一定的规律性。

当温度较低时，酶活力较低，随着温度的升高，酶活力逐渐增加，但当温度超过一定范围后，酶活力开始下降。

这是因为酶是一种蛋白质，其结构在高温下容易受到破坏，从而导致酶活力的降低。

2. 酶浓度对酶活力的影响：在实验中，我们分别改变了酶的浓度，结果发现酶浓度对酶活力有着明显的影响。

当酶浓度较低时，酶活力较低，随着酶浓度的增加，酶活力逐渐增加，但当酶浓度超过一定范围后，酶活力开始趋于饱和，增加酶浓度对酶活力的提高效果不明显。

这是因为酶浓度的增加会导致底物与酶结合的速率增加，但酶分子之间的竞争也会增加，从而限制了酶活力的提高。

3. 底物浓度对酶活力的影响：在实验中，我们分别改变了底物的浓度，结果发现底物浓度对酶活力也有着明显的影响。

当底物浓度较低时，酶活力较低，随着底物浓度的增加，酶活力逐渐增加，但当底物浓度超过一定范围后，酶活力开始趋于饱和，增加底物浓度对酶活力的提高效果不明显。

酶活力测定的方法
酶活力测定的方法有多种，下面列举常用的几种方法：
1. 比色法：通过测定酶反应产生的可见光吸收或色素形成来间接测定酶活力。

常用的比色法有尼林蓝法、间苯二酚法、对苯二酚法等。

2. 发光法：利用酶催化的氧化还原反应产生的发光信号来测定酶活力。

常用的发光法有荧光发光法、葡萄糖氧化酶法等。

3. 毛细管电泳法：通过测定酶催化反应产生的电荷变化、离子浓度变化或pH 值的变化来测定酶活力。

4. 毛细管电泳法：通过测定酶催化反应产生的电荷变化、离子浓度变化或pH 值的变化来测定酶活力。

5. 凝胶电泳方法：通过观察酶在凝胶上的迁移距离或酶活性的带状图案的强度来测定酶活力。

6. 标记物法：利用酶催化与标记物反应产生的物质变化来测定酶活力，常用的标记物有放射性同位素、酶标记物等。

以上是常用的酶活力测定方法，不同方法适用于不同类型的酶和反应体系。

在实
际应用中，需要根据具体情况选择最合适的方法来测定酶活力。

酶活性测定技术的使用教程简介：酶活性是指单位时间内酶能够催化的底物转化的数量，是评估酶活性及其效率的重要指标。

酶活性的测定对于生物学、医学和食品科学等领域具有重要意义。

本篇文章将为您介绍酶活性测定技术的使用教程，帮助您了解如何准确测定酶活性并获得可靠的实验结果。

一、酶活性测定原理酶活性测定的原理是通过测定单位时间内酶所催化的底物转化速率来评估酶的催化效率。

常见的酶活性测定方法包括色谱法、光谱法、比色法和电化学法等。

选择合适的方法需要根据实验的具体目的和所研究的酶的特性来决定。

二、酶活性测定步骤1. 样品制备：首先根据实验目的选择合适的样品，可以是纯酶、酶提取液或含酶的生物样品。

按照实验要求将样品进行预处理，例如将样品离心、稀释或者浓缩等。

2. 酶活性测定方法选择：根据样品和实验目的的不同，选择合适的酶活性测定方法。

常用方法包括比色法、光谱法和电化学法。

3. 实验操作：根据所选择的酶活性测定方法，进行相应的实验操作。

通常包括以下几个步骤：a. 准备试剂并调整反应体系：根据实验所需，准备好所需的试剂，并按照比例将试剂加入到反应体系中。

b. 控制实验条件：因为酶活性常受温度、pH值和离子浓度等因素的影响，所以在实验过程中需要控制好这些条件以确保准确的结果。

c. 反应时间和反应温度的优化：根据所研究的酶的特性，通过调整反应时间和反应温度来优化实验条件。

d. 反应停止和数据记录：根据所使用的方法，选择合适的方法来停止反应，并记录数据。

4. 数据分析：根据实验所得的数据，进行数据分析和结果解读。

根据所使用的酶活性测定方法，可以得到对应的活性值。

常用的酶活性单位有单位时间里转化底物的数量（例如单位时间里转化的亚硝酸盐浓度变化量）或者特定反应物的生成速率等。

5. 结果验证：通过对多组样品的测定，可以进行结果验证。

重复实验或者使用多个不同方法进行测定，可以提高结果的可靠性。

同时，设立对照组和空白组，可以进一步确认实验结果的准确性。

酶活力测定实验报告酶活力测定实验报告引言：酶是一种生物催化剂，能够加速化学反应的速率，对于维持生物体内的代谢平衡起着重要的作用。

酶活力测定实验是一种常用的实验方法，通过测量酶催化反应中底物消耗量或产物生成量的变化，来间接反映酶的活性水平。

本实验旨在通过测定过氧化氢酶（catalase）在不同温度下的活性变化，探究酶活性与温度之间的关系。

材料与方法：1. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴槽。

2. 实验试剂：过氧化氢酶溶液、过氧化氢底物溶液、磷酸盐缓冲液。

3. 实验步骤：a. 在分光光度计中设置波长为240nm。

b. 准备一组含有过氧化氢酶、过氧化氢底物和磷酸盐缓冲液的混合溶液，作为实验组。

c. 将实验组的混合溶液分别置于不同温度的恒温水浴槽中反应一段时间。

d. 取出反应后的混合溶液，通过分光光度计测定其吸光度，得到反应速率。

e. 重复以上步骤，分别在不同温度下进行实验，并记录实验数据。

结果与讨论：通过实验测定，我们得到了不同温度下过氧化氢酶的活性变化曲线。

实验结果显示，随着温度的升高，过氧化氢酶的活性呈现出先增加后降低的趋势。

在较低温度下，酶的活性较低，反应速率较慢；随着温度的升高，酶的活性逐渐增强，反应速率也随之增加；然而，当温度超过一定范围后，酶的活性开始下降，反应速率逐渐减小。

这一结果可以解释为酶的活性受到温度的影响。

酶是一种蛋白质，其活性受到温度的变化而变化。

当温度升高时，酶分子内部的振动加剧，使得酶与底物之间的碰撞频率增加，酶活性增强；然而，当温度过高时，酶分子的结构开始发生变化，部分酶分子失去了原有的构象，导致酶活性下降。

这种变化可能是由于酶分子的部分构象发生变化，使得酶活性中心的空间结构发生改变，从而影响了酶与底物之间的互作用。

此外，实验结果还表明，酶活性与温度之间存在一个最适温度。

在最适温度下，酶的活性达到最高点，反应速率最快。

这是因为在最适温度下，酶分子的结构处于最稳定的状态，酶活性中心与底物之间的互作用最为紧密，因此反应速率最高。

酶活性的测定1 实验背景（1）酶活性的定义酶活性（enzyme activity）也称酶活力，指酶催化指定化学反应的能力酶活力的大小可以用在一定条件下所催化的化学反应的速率来表示，反应速率愈快，就表明酶活力愈高酶催化的反应速率可用单位时间内底物的减少量或产物的增加量来表示，实际酶活性测定中一般以测定产物的增加量为准012345678910111213141551015202530时间/min产物的量酶活性＝反应初速率＝产物量的变化/时间/ m m o l /LpNPP （磷酸对硝基苯酚）pNP （对硝基苯酚）＋Pi碱性磷酸酶（2）酶活性的测定方法方法原理优点缺点分光光度法底物、产物或指示剂在紫外或可见光部分吸光度不同操作简便，节省时间和样品，可用于动力学监测灵敏度相对较低荧光法底物、产物的荧光性质有差别灵敏度高易受其它物质（特别是蛋白质）干扰同位素测定法底物用放射性同位素标记灵敏度高操作复杂，代价昂贵电化学方法用pH计跟踪H+浓度的变化操作比较简便仅适用于有H+生成或消耗的反应碱性磷酸酶测活原理pNPP （磷酸对硝基苯酚）pNP （对硝基苯酚）＋PiA 410= ε（λ）C LpNP 的摩尔消光系数ε（λ）为17500 mol -1·L·cm -1117500A C 410⨯=碱性磷酸酶肌酸激酶测活原理肌酸＋MgATP2-MgADP-+ 磷酸肌酸+ H+用百里酚蓝作为pH指示剂，测定597 nm吸光度的变化，用于计算酶活性[H+]∆A597= 1.3 ∆[H+]将酶加入底物溶液中，快速混合，开始反应 反应一段时间后，加入反应终止液，终止反应使用分光光度计测定产物的浓度，计算酶活性①终止法测定碱性磷酸酶的活性123456789101112131415051015202530时间/min产物的量/ m m o l /L●计算酶样品的活力单位数（U，activity unit）酶活力单位是酶活力大小的一种衡量单位按照国际酶学委员会的规定，1个酶活力国际单位是指在最适反应条件（指最适pH、温度25℃等）下，1分钟内能催化1μmol底物转化为产物所需的酶量1 IU=1 μmol/min碱性磷酸酶活力国际单位规定：以pNPP 为底物，在pH 为8.5，30o C 下每分钟产生1μmol pNP 所需要的酶量为一个活力单位1011750010004.0A 6410⨯⨯⨯⨯=位数碱性磷酸酶活力国际单管号测活液AKP 30o C反应10min终止液A 410360 μL40 μL3.6 mLn V ⨯⨯04.0)ml (V ：碱性磷酸酶样品的总体积；n ：酶样品的稀释倍数碱性磷酸酶活力国际单位数●计算酶样品的比活力酶的比活力指每毫克酶蛋白所含有的酶活力单位数比活力= 总活力U/总蛋白mg比活力是酶纯化程度的指标04.0c 101 1750010004.0A6 410⨯⨯⨯⨯⨯=碱性磷酸酶比活力C：碱性磷酸酶样品的浓度（mg/mL）碱性磷酸酶比活力②连续法测定碱性磷酸酶的活性将适量酶加入底物溶液中，快速混合将酶与底物的混合液迅速转移入比色杯中，放入分光光度计 利用分光光度计连续测定吸光度的变化利用吸光度变化的动力学曲线与 A值计算酶活力连续法测定碱性磷酸酶的活性11750010002.0A 位数碱性磷酸酶活力国际单6410⨯⨯⨯∆=碱性磷酸酶活力国际单位数测活液AKP 30o C 连续反应∆A 4102 mL 22 μL2 实验试剂（1）底物溶液（测活液）pH 8.5100 mL 50 mmol/L Tris-HCl0.2 mg/mL BSA10 mmol/L pNPP2 mmol/L MgAc2（2）酶稀释液pH 8.5100 mL50 mmol/L Tris-HCl0.2 mg/mL BSA2 mmol/L MgAc22 实验试剂（3）测活终止液0.5 mol/L Na3PO410 mmol/L EDTA3 实验操作1）准备4个玻璃试管，放在试管架上，用微量移液器将0.2mL酶稀释液加入1号试管中，然后将0.2mL酶溶液加入1号试管，用旋涡混合器混合；接下来，将0.2mL 酶稀释液加入2号试管，从1号试管取出0.2mL液体样品，加入2号试管，用旋涡混合器混合；将0.2mL酶稀释液加入3号试管，从2号试管取出0.2mL液体样品，加入3号试管，用旋涡混合器混合；将0.2mL酶稀释液加入4号试管，从3号试管取出0.2 mL液体样品，加入4号试管，用旋涡混合器混合。