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常用培养基及添加剂的配制

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1．牛心脑浸汁-辅助琼脂：（BHI-S）

BHI 琼脂 100mL

氯化血红素-维生素K1 1mL

脱纤维蛋白血（兔血） 5-10mL

2． 胰蛋白水解物-大豆琼脂（TS）

胰蛋白水解物 （或胰蛋白胨） 1.5g

大豆胨 0.5g

Nacl 0.5g

酵母提取物 0.5g

盐酸半胱氨酸液 0.4mL

琼脂 2.0g

蒸馏水加至 100mL

3．Gifu厌氧培养基：（GAM）

胰蛋白胨 1.0g

大豆胨 0.3g

多价蛋白胨 1.0g

酵母提取物 0.5g

肝浸汁 10mL

VPI盐溶液 0.2g

牛肉浸膏 5mL

盐酸半胱氨酸 0.4mL

旈基乙醇酸钠 0.03g

葡萄糖 1.0g

琼脂 1.8-2.0g

刃天青 （0.1%） 0.5g

蒸馏水加至 100mL

4．Rogosa 乳杆菌选择培养基（LS）

胰蛋白水解物 （或胰蛋白胨） 2.0g

酵母提取物 1.0g

琼脂 4g 葡萄糖 4.0g (储存液)

磷酸二氢钾 1.2g 12g

枸橼酸三铵 0.4g 4g

硫酸镁（MgSo4 7H2O） 1.0g 10g

硫酸锰（MnSo4 4H2O） 0.4g 4g

硫酸亚铁（FeSo4 7H2O） 0.08g 0.8g

醋酸钠（CH3COONa 3H2O）(乙酸钠) 5g 50g

冰乙酸（99.5%） 0.264mL 2.64mL

聚山梨酯 -80 0.2g 2g

DH2O 200mL 200mL（每100mL培养基加10mL）

5．TPY培养基

胰蛋白胨 3.0g

酵母提取物 0.8g

葡萄糖 2.0g

磷酸二氢钾 1.2g

K2HPO4 3H2O 0.4g

NaCO3 0.4g

NaCl 0.4g

DH2O 200mL

琼脂 2.5g /200mL

6．普通血琼脂培养基 （BA）

牛肉浸膏 （0.5-1.0）g

蛋白胨 1.0g

NaCl 0.5g

K2HPO4 2.0g

酵母提取物 0.5g

葡萄糖 1.0g

琼脂 1.8g

蒸馏水加至 100mL 7．轻唾培养基（MS）

胰蛋白胨 1.0g

示胨 0.5g

蔗糖 3-5g（可根据需要将蔗糖量增至20g）

葡萄糖 0.1g

K2HPO4 3H2O 0.53g

琼脂 2.0g

0.1%曲利本蓝 7.5mL

0.1%结晶紫 0.8mL

蒸馏水加至 100mL

8．轻唾-杆菌肽琼脂（MSB）

MS琼脂 （蔗糖含量为20%） 100mL

杆菌肽溶液（200U/mL） 0.1mL

灭菌MS琼脂50℃左右时加入杆菌肽溶液，混匀倒板

9．轻唾-磺胺二甲嘧啶琼脂（MS磺胺琼脂）

MS琼脂 100mL

*磺胺二甲嘧啶（5%） 1.0mL

*1%的亚碲酸钾溶液 0.28mL

灭菌MS琼脂冷却至25℃时加入*

10．TYCSB琼脂

胰蛋白酶水解物 1.0g

酵母提取物 0.5g

盐酸半胱氨酸溶液 0.4g

K2HPO4 3H2O 0.53g

蔗糖 20g

琼脂 2g

DH2O 100mL

灭菌后冷却至 50-55℃时加入杆菌肽溶液 （200U/mL）0.1mL,混匀倒板

11．Rogosa 乳杆菌选择培养基（LS）

胰蛋白水解物 （或胰蛋白胨） 1.0g 酵母提取物 0.5g

磷酸二氢钾 0.6g

枸橼酸三铵 0.2g

葡萄糖 2.0g

硫酸镁（MgSo4 7H2O） 0.5g

硫酸锰（MnSo4 4H2O） 0.2g

硫酸亚铁（FeSo4 7H2O） 0.04g

醋酸钠（CH3COONa 3H2O）(乙酸钠) 2.5g

冰乙酸（99.5%） 0.132mL

聚山梨酯 -80 0.1g

琼脂 1.8g

DH2O 100mL

LS盐溶液的组成：

MgSo4 7H2O 5.57g

MnSo4 2H2O 1.20g

FeSo4 7H2O 0.34g

DH2O 50 mL

混合上述成分并加热使之溶解。高压（121℃）灭菌15分钟备用。100mL乳杆菌选择培养集中加入0.5mL LS盐溶液即可

12．放线菌分离和富集培养基：

1） Beigheor-CoIman 培养基：（FC）

BHI 基础培养基 100mL

聚乙烯吡咯烷酮 1.0g

盐酸半胱氨酸 0.4mL

琼脂 1.8g

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培养基的配制

培养基的配制

培养基的配制

1目的

1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法

1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。

2原理

培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。

琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98~100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。

任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。

3材料

3.1器皿及材料

天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。

3.2药品试剂

蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。

4流程

称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。

5步骤

5.1培养基的制备

5.1.1称量药品

根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

5.1.2溶解

用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。

培养基的配制 2

培养基的配制 2

一、配制用水

培养基的大部分是水，所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准，水的电阻应为200万欧姆，一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的

双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。

二、培养基

培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基，以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）调pH至7.2-7.4，若pH值超过7.6或远低于6.8，则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌，使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。

三、血清

培养中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高压灭菌，无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体，置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定，一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制，可选用无血清培养基。

四、抗菌素

为防止培养时期细菌的污染，可在培养基中添加适当抗菌素，一般用量与组织细胞培养相同：卡那霉素100单位/毫升，或双抗--青霉素100单位/毫升，链霉素100微克/毫升。

五、植物血凝素（PHA）

非增殖期的细胞不能制备染色体，如人外周血淋巴细胞，但在离体培养过程中，在PHA的作用下，可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。

经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。

PHA有粘多糖，蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂，蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加，直至全部免疫活性细胞均

被激活为止，但PHA浓度过高会引起凝集，一般采用4%浓度为好。

培养过程应当注意以下几点

培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项：

确认工作细胞库是否被污染，确认毒种工作种子批是否被污染，确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染，均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。

常见培养基的配制操作方法和注意事项

常见培养基的配制操作方法和注意事项

常见培养基的配制操作方法和注意事项

一、培养基的配制方法：

1.准备所需材料：培养基主要由基础成分和添加剂组成，根据不同需求，可以选择不同的成分配制培养基。常见的基础成分包括碳源、氮源、矿物质盐和特定生长因子等，添加剂包括琼脂、酵母浸泡液等。

2.称量和溶解：根据配方比例，准确称量各个成分并分别溶解在适量的蒸馏水中，可以加温以加快溶解速度。

3.调整pH值：通常需要调整培养基的pH值，使用盐酸或氢氧化钠等酸碱调节剂，逐滴加入直至达到指定的pH值，一般为7.0-7.4

4.加入琼脂：在溶解各个成分的培养基溶液冷却至约50℃时，加入适量的琼脂，并充分搅拌溶解。最后通过高温高压灭菌，使培养基凝固。

二、培养基配制的注意事项：

1.材料和器皿的消毒：操作前需预先进行灭菌处理，如使用高温高压灭菌器、自闭式消毒法或紫外线照射等方法，以确保培养基的无菌性。

2.避免污染：在操作过程中应尽量避免培养基的污染，如使用干净的器皿和工具，并注意操作环境卫生。

3.精确称量：根据配方比例准确称量各个成分，尤其是微量元素等特定剂量的添加剂。

4.pH值调节：在调整培养基的pH值时，应逐滴添加酸碱调节剂，并反复检测和调整，以确保达到设定的pH值。 5.良好的溶解和混合：搅拌培养基溶液时应充分混合，以确保各个成分均匀分布。

6.温度控制：培养基配制过程中需要注意温度控制，避免溶液过热或过冷，影响琼脂的溶解或培养基的凝固。

7.灭菌处理：配制好的培养基需要通过高温高压灭菌或过滤灭菌进行处理，以保证培养基的无菌性。

8.存储条件：灭菌后的培养基应放置在低温、干燥和避光的环境中保存，并注意严格控制培养基的有效期。

总结：

培养基的配制方法包括准备材料、称量和溶解、调整pH值、加入琼脂和灭菌处理等步骤。在操作过程中需要注意材料和器皿的消毒、避免污染、精确称量、pH值调节、良好的溶解和混合、温度控制、灭菌处理和存储条件等方面的注意事项。通过严格控制操作环境和工艺要求，可以确保培养基的质量和无菌性。

培养基配方及配制方法

培养基配方及配制方法

培养基配方及配制方法

培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法：

1. LB培养基（Luria-Bertani）

LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基，其配方包括：

- 1% 蛋白胨（tryptone）: 添加营养源和能量

- 0.5% 酵母粉（yeast extract）: 提供维生素和生长因子

-1%NaCl（氯化钠）:调节渗透压

-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积

配制方法：将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入1.5%的琼脂。

2. YPD培养基（Yeast extract-Peptone-Dextrose）

YPD培养基常用于酵母菌的培养，其配方包括：

- 1% 酵母提取物（yeast extract）: 提供维生素和生长因子

- 2% 蛋白胨（peptone）: 为细菌提供碳源和能量

- 2% 葡萄糖（dextrose）: 为细菌提供碳源和能量

-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积

配制方法：将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入2%的琼脂。 3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）

DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基，其配方包括：

-10%胎牛血清（FBS）:提供生长因子和营养物质

- 1% 青霉素-链霉素溶液（Penicillin-Streptomycin Solution）:

防止细菌污染

- 1% L-谷氨酰胺（L-Glutamine）: 提供细胞代谢所需的基础物质

-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分

-蒸馏水：使混合液体稀释至所需体积

配制方法：将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中，调整pH值至7.4，混合均匀即可。