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临床检验中心PCR实验室标准操作程序

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临床检验中心PCR实验室标准操作程序

****医院

临床检验中心

临床基因扩增实验室

管理程序

标准操作程序（SOP）

起草人：

批准人：

生效日期： 年 月 日

目 录

临床基因扩增实验室的设置 ······························································· 5

临床基因扩增实验室内部管理规章 ···················································· 15

临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训 ········································ 20

临床基因扩增实验室的设施和环境 ···················································· 25

临床基因扩增实验室清洁制度规章 ···················································· 27

临床基因扩增实验室仪器设备管理规章 ·············································· 29

Roche 480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）未修改 ······························································································ 36

Finnpipette 可调式移液器的使用与维护标准操作(SOP-2) ······················· 48

Finnpipette可调式移液器校准标准管理程序(SOP-3) ····························· 53

温度计及湿温度计的校正标准管理程序(SOP-4) ···································· 55

离心机使用与维护标准操作程序(SOP-5) ············································· 57

超净工作台使用与维护标准操作程序(SOP-6) ······································· 63

恒温水浴箱使用、维护与校正（SOP-7） ············································ 65

旋涡振荡器使用与维护标准操作程序（SOP-8） ··································· 69

冰箱的使用与维护标准操作程序（SOP-9） ········································· 71

可移动紫外灯标准操作程序（SOP-10） ············································· 75

仪器故障时标记、放置标准操作程序（SOP-11） ·································· 77

仪器设备发生故障时的应急处理程序（SOP-12） ································· 79

临床标本的收集管理标准操作程序（SOP-13） ···································· 83 检验标本的验收和保存标准操作程序（SOP-14） ································· 85

样本编号的标准操作程序(SOP-15) ···················································· 94

PCR标本管理标准操作程序（SOP-16） ············································ 97

标本前处理标准操作程序（SOP-17） ················································ 99

核酸扩增及产物分析检测标准操作程序（SOP-18） ····························· 101

乙型肝炎病毒基因扩增检测标准操作程序（SOP-19） ··························

103

基因扩增检测实验结果分析标准操作程序(SOP-20) ······························ 111

实验结果有效性判断标准操作程序（SOP-21） ··································· 115

室内质量控制标准操作程序(SOP-22) ················································ 117

实验室试剂耗材购买、验收和贮存的标准操作程序（SOP-23） ··············· 126

试剂质检标准操作程序（SOP-24） ·················································· 136

实验室耗材质检标准操作程序（SOP-25） ········································· 140

手套使用及左右手分开的原则（SOP-26） ········································· 144

实验室化学试剂贮存使用、废弃物处理及生物防护（SOP-27） ··············· 146

抱怨的处理程序（SOP-28） ··························································· 149

实验室记录管理规章标准操作程序（SOP-29） ··································· 156

检验报告单管理标准操作程序（SOP-30） ········································· 160

实验室台面摆放顺序程序（SOP-31） ··············································· 165

实验室常用溶液配置标准操作程序（SOP-32） ··································· 167

****医院临床检验中心SOP文件

实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01

临床基因扩增实验室设置标准操作程序 第 5

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****医院临床基因扩增实验室- 5 -

临床基因扩增实验室的设置

1目的：依照实验室设置规范实现核酸扩增荧光检测实验室配置合理，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性

2 范围：临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确各项规章制度

3 操作人：** **

4 实验室设置规章：

4.1 依据：

本实验室按《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）中临床基因扩增检验实验室基本设置标准结合本实验室的条件进行设置，并严格按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字2002第8号）的要求开展临床基因扩增工作(拟开展基因扩增检验项目见附表1)

4.2 实验室设置:

实验室主要由试剂储存和准备区（PCR-Ⅰ）、标本制备区（PCR-Ⅱ）、PCR扩增及产物分析区(PCR-Ⅲ）三个工作室组成。这三区各自独立，每个区设有缓冲间。其布局见实验室平面图（见附图1）。

设立各区的门牌，分别是：“试剂储存和准备区（PCR-Ⅰ）”、“标本制备区（PCR-Ⅱ）”、“PCR扩增及产物分析区(PCR-Ⅲ）”，并在各区门上贴有“非本室工作人员不得进入”标记。

建立实验室内务管理，并放在进入实验室的明显位置（如置于缓冲区的墙上；内务管理应有进入实验的工作流程、进入实验室的要求、实验前的准备及清洁等）。

4.2.4三个工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识：试剂准备区—蓝色，标本制备区****医院临床检验中心SOP文件

实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01

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****医院临床基因扩增实验室- 6 - —紫色，PCR扩增及产物分析区—黑色。各区的实验物品不得混用（实验室主要设备一览表见表3）。

4.2.5进入各区的工作流程为：试剂储存和准备区→标本制备区→PCR扩增及产物分析区。

4.2.6进入实验室必须更换有本室标识的工作服及清洁鞋套，工作人员离开某一工作区时，该区物品不得带出本区（包括工作服等）。

4.3各区实验设备及用品配置：

试剂储存和准备区：

冰箱（2～8℃和-15℃）、可调式移液器（覆盖0.5～1000ul）、紫外消毒车、固定紫外线灯，混匀器，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离心管），专用实验记录本及记号笔等。

标本制备区：

冰箱（2～8℃和-15℃）、台式高速离心机、水浴锅、净化工作台、混匀器、可调式移液器（覆盖1～1000ul）、紫外消毒车、固定紫外线灯，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离心管），专用实验记录本及记号笔等。

扩增及产物分析区：

Line-Gene全自动荧光定量PCR核酸扩增仪、紫外消毒车、固定紫外线灯，专用工作服，一次性用品（手套、鞋套、吸水纸等），专用实验记录本及记号笔等。

4.4实验室人员设置：

实验室人员配置：我院PCR实验室配备有3名工作人员，其中1人具检验师职称，2人具主管检验师职称。已全部经过安徽省临床检验中心培训，并取得培训合格证（实验室工作人员一览表见表2）。

****医院临床检验中心SOP文件

实验室操作规程 文件编号： 版本：2013第三版 生效日期：2013/01/01

临床基因扩增实验室设置标准操作程序 第 7

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****医院临床基因扩增实验室- 7 -

起 草 人 批 准 人 生 效 日 期

年 月 日

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PCR实验检测标准操作规范

PCR实验检测标准操作规范

PCR检测实验室操作规范

一、PCR 实验室的设置及管理

1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染,保证检测结果的可靠性。

2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等.

3．负责人：

4．细则:

4．1流感实验室为急传所的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等.

4．2 本实验室采用实时荧光定量（定性）PCR 技术作为病毒基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区)、扩增分析区（第三区）。每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识.标本的接收则在检验科标本接收处进行.

4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用.

4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP 文件。

4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。

4．6 非本实验室工作人员,未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区） 需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。

4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。

二、PCR 实验室工作制度

1．目的 ：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。

2．适用范围：所有本实验室人员。

3．负责人:

4．细则： 4．1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作。

4．2 各区的用品不得混用。

4．3 在各区的实验操作过程中,操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程.

4．4 试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP 文件)。

4．5 标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA 时cDNA 的合成（见相关SOP 文件）。

PCR室检测结果分析的标准操作程序

PCR室检测结果分析的标准操作程序

PCR室检测结果分析的标准操作程序

1.目的 保证扩增及结果分析的标准化、规范化；保证实验结果的有效性，准确判断实验失控的原因，加强实验的可靠程度。

2.适用范围 本规则适用于实验结果判定标准

3.制定依据《临床基因扩增检验技术》 申子瑜 李金明主编 人民卫生出版社出版2002年第一版；试剂使用说明书

4.职责 由经培训合格的临床基因扩增实验室技术人员负责操作。

5.结果分析标准程序

5.1对于结果曲线的分析，应按以下步骤进行：全部曲线——阴性对照——阳性室内质控品——阳性标准品——逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）——调整参数，获得较好的标准曲线，显示定量结果——登记，发报告。

5.2整体曲线的观察 将所有曲线选中进行整体观察

①观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一Ct值出现上涨的情况。

②观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。

5.3空白对照的分析

空白对照：仅含扩增反应混合液的管

作用：监测扩增试剂是否发生污染 5.4阴性对照的分析

阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。

作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。

5.5阳性对照的分析

阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。

作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。

5.6阳性室内质控品的分析

阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知浓度的阳性室内质控血清。

作用：用以监控日常实验的精密度。

5.7阳性标准品的分析

5.7.1各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳模稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。

5.7.2观察各曲线的Ct值是否在平常的正常位置。有两种情况：

①若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct 值均后移，则判断是否为试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格）。 ②出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。

实验室生物污染物的处理程序-PCR标准操作规程

实验室生物污染物的处理程序-PCR标准操作规程

实验室生物污染物的处理程序-PCR标准操作规程

一、 目的

保证实验室工作的正常运行，防止废弃物对实验室和社会环境造成污染。

二、 适用范围

从事分子生物实验室清洁工作的清洁人员。

三、 职责

分子生物检验室派出清洁人员负责实验废弃物的处理

一、 目的

保证实验室工作的正常运行，防止废弃物对实验室和社会环境造成污染。

二、 适用范围

从事分子生物实验室清洁工作的清洁人员。

三、 职责

分子生物检验室派出清洁人员负责实验废弃物的处理。

四、工作程序

1. 每天实验前，在废物缸内套上塑料袋，加入半缸10%次氯酸钠，实验中将吸头、子弹头丢入废液缸中浸泡。

2. 实验结束后将由10%次氯酸钠浸泡过的实验垃圾统一收集。 (10%次氯酸钠浸泡后方可收集)送医院垃圾站焚烧。

3. 血清、血浆、体液、分泌物和手套、帽子、口罩等消耗品单独收集。每天工作结束前，送医院垃圾处理站焚烧处理。

4. 其他办公垃圾单独送医院垃圾站统一处理。

5. 在《生物污染物处理记录本》上详细记录。

五、支持性文件

《临床PCR实验室管理制度》

PCR室室内质控标准操作程序

PCR室室内质控标准操作程序

PCR室室内质控标准操作程序

PCR室室内质控标准操作程序

本程序的目的是控制实验的重复性、精密度，并检测其准确度的改变，提高本室常规工作中的批间、批内标本检测的一致性。适用范围包括临床基因扩增检验质量负责人和检验人员对DNA和RNA分析的室内质量控制。制定依据为《临床基因扩增检验技术》XXXXXX主编XXX2002年第一版。

实验室质量负责人和检验人员负责执行本规程，并评估检测结果的正确性，判定当日结果是否可以被采用。

操作步骤：

5.1 血清质量控制品

a) 质控品的来源为XXX或试剂盒内质控品。

b) 质控品与样本同时处理，排列顺序为：标准品或校准品，阴性质控品，阳性质控品，临床样本。

c) 对质控品进行处理和分析判断。 d) 实验结果合格即发报告，不合格则报告室主任，会同有关人员查找原因并妥善解决。

e) 记录每次检测质控结果。

f) 记录失控原因及纠正措施。

5.2 室内质控图的使用方法：

① 描点：

a）图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不变化。只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。

b）每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接。

c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。

② 图形分析

a）如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。 b）如果在X±2s线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应立即向有关负责人反映，并积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。

③ 通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源。