PCR实验室操作流程

1 Q-PCR实验流程

一、 ①实验前准备,每天早上到实验室后，先把超净工作台的紫外灯打开15-20分钟。②超净台前做实验，需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套,RNA抽提需带口罩。③取EP管/枪头时需用镊子，不可以用使用过的手套直接取用.取完EP管/枪头后，袋子及时封好。④橡胶手套须放入超净台照射紫外，实验操作过程中不得带出超净台，移液器在一天工作结束后调至最大量程，并用75％乙醇清洁移液器，枪头盒及超净台面。⑤实验进行的过程中或观看实验时，没有带口罩不要在超净台前讲话。

二、 总RNA抽提

1）细胞培养皿中细胞样品用1＊PBS洗两次后,用1ml枪将PBS吸干净，加入1ml Trizol （Invitrogen)溶液，吹打混匀，并吸至1.5ml RNase free EP管中使细胞充分裂解，室温静置5min；

组织样品用液氮充分研磨,加入1ml Trizol (Invitrogen）溶液，混匀，室温放置5min使其充分裂解；(管盖与管壁都需标记样品名称)

2）加入200μl氯仿，剧烈振荡混匀30s,使水相和有机相充分接触,室温静置3—5min;（离心时离心管按顺序排放，离心完毕，离心管的顺序也按顺序排好，与第一步的顺序一致）

3) 4℃下，14,000g离心15min，可见分为三层，RNA在上层水相，移至另一个新的RNase free EP管；(用20-200ul的枪吸取上清，吸上清时，枪头应沿着液面上层吸取上清，枪头不可碰到、吸到中间层）

4）沉淀RNA：加入等体积异丙醇，轻柔地充分混匀(颠倒6-8次）(不应用振荡器混匀），室温静置10min;

5） 4℃下，14,000g离心10min，收集RNA沉淀（如离心后仍不见EP管底部有沉淀，应将EP管放置在-80度冰箱过夜,继续在4℃下，14，000g离心10min，收集RNA沉淀），去上清;

6） 用75%乙醇洗涤两次(12,000g离心5min)(加入乙醇后只需轻轻颠倒EP管即可,不用振荡器震荡或枪头吸打沉淀),超净台风干；沉淀不能过干或过 2 湿，过干则不易溶解，过湿则乙醇残留。

无锡市人民医院

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PCR仪操作规程

1、 开机

打开机器后部的主开关。

2、设计程序

出现主菜单后，按standard或new方式编制要运行的PCR程序，在输入预变性的温度及时间、变性的温度及时间、退火的温度及时间、延伸的温度及时间、Sock的温度后，按start/stop键开始启动运行当前程序。

如果设计程序时选择了CNTRL/TUBE命令，则程序启动后需要输入反应管的相应型号和样品体积。

——用SEL键选择反应管的型号，用ENTER键确认。

——输入溶液体积，用Enter 键确认。

——当程序运行时，按Opt键可以显示大概的运行时间和预期结束的时间。

3、 程序运行

程序设计好后可直接按控制面板上的start键运行，

如果设计程序时选择了CNTRL/TUBE命令，则程序启动后需要输入反应管的相应型号和样品体积。

——用SEL键选择反应管的型号，用ENTER键确认。

——输入溶液体积，用Enter 键确认。

——当程序运行时，按Opt键可以显示大概的运行时间和预期结束的时间。

——Lid用来确定热盖的温度。允许值为0-110℃。

启动时，NOWAIT 无需热盖温度，程序直接启动。

WAIT 程序直到热盖达到预设的温度才启动。

4、关机

程序运行结束后，按Exit退出原程序。关闭机器后部的开关。

——无锡市人民医院

pcr实验室操作流程

PCR实验室操作流程。

PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，用于扩增DNA片段。它是一种重要的实验手段，广泛应用于基因克隆、基因检测、DNA测序等领域。下面将介绍PCR实验室的操作流程，希望能够对初学者有所帮助。

1. 实验室准备。

在进行PCR实验之前，首先需要准备好实验室所需的各种试剂和设备。确保PCR工作台表面清洁，使用紫外线消毒工作台。准备好PCR试剂盒、PCR管、PCR仪、蒸馏水、DNA模板等。

2. 反应体系设计。

根据实验需要设计PCR反应体系，包括引物、模板DNA、缓冲液、酶和核苷酸。确保反应体系中各组分的浓度和配比符合实验要求，避免出现反应体系不稳定或者无法扩增的情况。

3. PCR反应设置。

将设计好的PCR反应体系分装到PCR管中，注意避免气泡的产生。在加盖后进行离心，确保反应体系均匀混合。将PCR管放置于PCR仪中，设置好反应程序和温度，启动PCR反应。

4. PCR反应后处理。

PCR反应结束后，取出PCR管，检查反应体系是否正常。将PCR产物进行电泳检测，确认扩增片段的大小和纯度。根据需要，可以进行DNA提取、测序或者下一步的实验操作。

5. 实验室清洁。

实验结束后，及时清洁PCR工作台和PCR仪，避免污染下一次实验。将实验台面和设备用75%乙醇擦拭消毒，保持实验室的整洁和卫生。

以上就是PCR实验室操作流程的简要介绍，希望能够对初学者有所帮助。在进行PCR实验时，需要严格按照操作流程进行，避免出现污染或者错误的情况。同时，注意实验室安全和个人防护，确保实验过程安全顺利进行。PCR技术的应用范围广泛，掌握PCR实验室操作流程对于科研工作者来说是非常重要的基本技能。希望大家能够在实验操作中熟练掌握PCR技术，为科研工作的顺利进行提供有力支持。

PCR实验室操作流程

PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学实验技术，用于在体外扩增DNA序列。下面是PCR实验室操作流程的详细说明。

1.实验前准备：

a.准备必需的试剂和材料，包括PCR反应缓冲液、dNTPs、引物、聚合酶、模板DNA、消毒水、离心机、PCR仪等。

b.检查PCR反应缓冲液、dNTPs、引物和聚合酶的保存条件和有效期。

c.将PCR反应管、移液器、移液枪、显微镜幻灯片等进行消毒处理。

2.PCR反应体系的准备：

a.将PCR反应缓冲液、dNTPs、引物和聚合酶按照规定比例混合，制备PCR反应体系。

b.添加模板DNA，使总体积达到预定的体积。

3.PCR反应管的装填：

a.执行无菌操作，将PCR反应体系均匀地分装到PCR反应管中，避免空气泡影响反应结果。

b.添加防止蒸发的润滑油至PCR反应管中。

4.PCR仪的设置：

a.打开PCR仪，设定所需的温度和时间参数。

b.确保PCR仪处于冷却状态，使反应管可以准确控制升温和降温的过程。 5.PCR反应程序设置：

a.根据扩增的目标基因长度和引物设计，确定适当的PCR循环数、退火温度和延伸时间。

b.在PCR仪的控制面板上设置所需的循环数、温度和时间参数。

6.PCR反应的进行：

a.将PCR反应管放入PCR仪的样品位。

b.关闭PCR仪的盖子，启动PCR反应。

7.PCR反应结束后：

a.关闭PCR仪，取出PCR反应管。

b.使用电泳或其他方法，对PCR产物进行分析和检测。

8.PCR反应管和废弃物处理：

a.将PCR反应管中的废液倒入废液收集容器中。

b.将PCR反应管进行无菌处理，避免污染实验室环境。

c.将废弃物放入相应的废弃物容器中，以便进行妥善处置。

需要注意的是，PCR实验室操作流程中的无菌操作和个人防护是非常重要的。在整个实验过程中，实验人员应佩戴实验手套，并注意将不同试剂和反应物进行分装。此外，实验结束后，实验台面和设备都需要进行彻底的清洁和消毒处理，以保证实验环境的无菌和清洁。