医院PCR试剂的质检标准操作程序

PCR仪标准操作规程

一、操作程序

（一）开始运行仪器

插上MyCycler的电源，仪器会自动开始运行一个快速的自检步骤。当自检步骤结束后，显示屏上显示主屏幕“Home Screen”。在仪器前部面板上的一个发光二极管（LED）灯会发亮，提示仪器处于开机状态。

（二）使仪器进入待机“Standby Mode”状态

当仪器打开时，按下面板上的待机“Standby Mode”键3秒。如果此时仪器正处于空闲状态，仪器会进入待机“Standby Mode”状态；如果此时仪器正处于运行状态或处于修改程序并且未保存的状态，仪器会提示您进入待机“Standby Mode”状态前确认您的选择。

（三）运行一个储存过的程序

1. 在主屏幕“Home Screen”状态下，按F1-Protocol Library键，可以显示菜单中已存的程序。

2. 使用方向键选择您所需要的程序，按回车“Enter”键。

3. 在选项中选择运行程序“Run Protocol”。

4. 在运行设置“Run Setup”屏中确认您的选择。您可以指定温控模式“temperaturemeasurement mode”，或者在运行程序前包括或不包括一个热启动“Hot Start”步骤。

（四）创建一个新的程序

1. 在主屏幕“Home Screen”状态下，按F2-Create键，可以显示菜单中已有的程序模板。

2. 选择一个预编好的模板程序来修改，或者在选项中选择“Custom”选项，按回车“Enter”键。

程序中可编辑的地方可以通过使用方向键和数字键来修改：

如果要添加或删除Step或Cycle，按F4-Add/Del键。

如果要做时间或温度的递增或递减，移动指示符到要调节的时间或温度上，按F3-Option。

3. 当您完成修改后按F5-Done

在选项栏中选择“Run Protocol”来在不保存的情况下直接运行被修改过的程序。

PCR检测实验室操作规范

一、PCR 实验室的设置及管理

1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染,保证检测结果的可靠性。

2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等.

3．负责人：

4．细则:

4．1流感实验室为急传所的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等.

4．2 本实验室采用实时荧光定量（定性）PCR 技术作为病毒基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区)、扩增分析区（第三区）。每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识.标本的接收则在检验科标本接收处进行.

4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用.

4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP 文件。

4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。

4．6 非本实验室工作人员,未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区） 需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。

4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。

二、PCR 实验室工作制度

1．目的 ：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。

2．适用范围：所有本实验室人员。

3．负责人:

4．细则： 4．1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作。

4．2 各区的用品不得混用。

4．3 在各区的实验操作过程中,操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程.

4．4 试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP 文件)。

4．5 标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA 时cDNA 的合成（见相关SOP 文件）。

PCR仪的技术要求

1. 设备名称：PCR仪(镀金银槽)

2. 主要用途：进行核酸扩增，以获得高浓度目的基因片段。

3. 工作条件：适合于0℃～60℃的环境温度操作；相对湿度：0～95%；电源电压：220V±10V

4. 技术指标：

4.1 硬件：

*4.1.1 主机一台（带96X0.2ml镀金银槽一个）

4.1.2可更换型96 孔基座，可配多种不同类型的样品基座：96×0.6ml、60×0.6ml、2×384孔板、2×96孔板

4.1.3 蓝色大屏幕液晶显示屏，图表式PCR 编程快速简便直观

*4.1.4加热冷却速度：样品实际平均温度变化速度≥1℃/秒

4.1.5 95－55℃温度范围内样品基座的平均升降温速度≥3.5℃/秒,最大升降温速度为5℃/秒,降温的速率可以调节。

*4.1.6基座镀金银材料制作，温度传导更好,且不易失去光泽

4.2 软件：

4.2.1软件容量大，可储存完整的PCR≥100个程序

*4.2.2循环时间和温度自动延伸/自动下降；有时间日期显示；软件具有自动计算Tm值功能，温度验证功能

4.3 检测性能：

4.3.1 温度范围：4.0-99.9℃，控温精确到≤0.1℃

4.3.2 35－100℃范围温度准确性：≤±0.25℃，

4.4 检测方法：图表示PCR扩增方法，数据输入无需掌握任何特殊命令，PCR编程象填表一般加速简便直观，程序运行可闪烁显示当前状态；

4.5控制系统：PCR 仪直接控制样品实际温度，控温更精确，扩增效果重现性更好

5. 主要配置：主机一台（带96X0.2ml镀金银槽一个）

6. 备品备件：96孔加样塑料支架一个，翘管盖夹一个，PCR管一包（50个），电源线一根

7. 技术资料：操作说明书一份，说明光盘一张

8. 售后服务与培训：

8.1 免费安装调试：仪器到货后1周内到用户处安装调试，按验收指标逐项测试，直至达到各项验收要求。

8.2 维修响应时间一般情况≤24小时，到现场时间72小时。

PCR室检测结果分析的标准操作程序

1.目的 保证扩增及结果分析的标准化、规范化；保证实验结果的有效性，准确判断实验失控的原因，加强实验的可靠程度。

2.适用范围 本规则适用于实验结果判定标准

3.制定依据《临床基因扩增检验技术》 申子瑜 李金明主编 人民卫生出版社出版2002年第一版；试剂使用说明书

4.职责 由经培训合格的临床基因扩增实验室技术人员负责操作。

5.结果分析标准程序

5.1对于结果曲线的分析，应按以下步骤进行：全部曲线——阴性对照——阳性室内质控品——阳性标准品——逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）——调整参数，获得较好的标准曲线，显示定量结果——登记，发报告。

5.2整体曲线的观察 将所有曲线选中进行整体观察

①观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一Ct值出现上涨的情况。

②观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。

5.3空白对照的分析

空白对照：仅含扩增反应混合液的管

作用：监测扩增试剂是否发生污染 5.4阴性对照的分析

阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。

作用：用以监测实验室和前处理过程中是否存在污染。

5.5阳性对照的分析

阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。

作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。

5.6阳性室内质控品的分析

阳性室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知浓度的阳性室内质控血清。

作用：用以监控日常实验的精密度。

5.7阳性标准品的分析

5.7.1各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳模稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。

5.7.2观察各曲线的Ct值是否在平常的正常位置。有两种情况：

①若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct 值均后移，则判断是否为试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格）。 ②出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。