花蚬酶解物清除羟自由基作用研究
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5种中药提取物清除自由基的体外抗氧化活性研究
收稿日期：2019-04-19 基金项目：南通市卫生和计划生育委员会科研课题专项（WKZL2018
084） 作者简介：郭新颖（1986-），女，工程师，主要从事理化检验工作。 通信作者：陆 娟。
单、试剂便宜，可为开拓现代食药用途、开发功能性 保健1.1 仪器与试剂
GUO Xin-ying，SHI Yu-kun，CHEN Feng，LU Juan （Nantong Center for Disease Control and Prevention, Nantong 226007, China） Abstract :Objective A new fluorescence detection method was established for the indirect determination of
抗氧化活性，其中以五倍子最佳。
关键词：羟自由基；荧光强度；抗氧化；中药
中图分类号：R284.1
文献标识码：A
Study on scavenging free radicals and antioxidant activity in vitro for 5 kinds of traditional Chinese medicine extracts*
F96 型荧光分光光度计 （上海棱光技术有限公 司）；930 型荧光光度计 （上海第三分析仪器厂）； FA2004 型电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）。
5.0×10-5mol·L-1 曙红 B 溶液（上海新中化学试 剂厂）；5.0×10-4mo·l L-1 FeSO4 溶液（批号 20140630 国 药集团化学试剂有限公司）；2.0×10-3mol·L-1 硫脲溶 液（批号 96-12-02 上海试剂一厂）；2.0×10-3mol·L-1 抗坏血酸溶液 （批号 L-8754-50 Sigma 试剂公司）； 0.002% H2O2 溶液 （批号 10011218 国药集团化学试 剂 有 限 公 司）；1.0 ×10-4mol·L-1 H2SO4 溶 液 （批 号 20061204 上海试剂四厂昆山分厂）。
084） 作者简介：郭新颖（1986-），女，工程师，主要从事理化检验工作。 通信作者：陆 娟。
单、试剂便宜，可为开拓现代食药用途、开发功能性 保健1.1 仪器与试剂
GUO Xin-ying，SHI Yu-kun，CHEN Feng，LU Juan （Nantong Center for Disease Control and Prevention, Nantong 226007, China） Abstract :Objective A new fluorescence detection method was established for the indirect determination of
抗氧化活性，其中以五倍子最佳。
关键词：羟自由基；荧光强度；抗氧化；中药
中图分类号：R284.1
文献标识码：A
Study on scavenging free radicals and antioxidant activity in vitro for 5 kinds of traditional Chinese medicine extracts*
F96 型荧光分光光度计 （上海棱光技术有限公 司）；930 型荧光光度计 （上海第三分析仪器厂）； FA2004 型电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）。
5.0×10-5mol·L-1 曙红 B 溶液（上海新中化学试 剂厂）；5.0×10-4mo·l L-1 FeSO4 溶液（批号 20140630 国 药集团化学试剂有限公司）；2.0×10-3mol·L-1 硫脲溶 液（批号 96-12-02 上海试剂一厂）；2.0×10-3mol·L-1 抗坏血酸溶液 （批号 L-8754-50 Sigma 试剂公司）； 0.002% H2O2 溶液 （批号 10011218 国药集团化学试 剂 有 限 公 司）；1.0 ×10-4mol·L-1 H2SO4 溶 液 （批 号 20061204 上海试剂四厂昆山分厂）。
荧光分光光度法测定两种中药对羟基自由基的清除作用
荧光分光光度法测定两种中药对羟基自由基的清除作用吕永为;郭祥群【期刊名称】《厦门大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2004(043)002【摘要】Fe2+-EDTA在弱碱性介质中还原溶解氧生成超氧阴离子自由基(O-2·),O-2·进一步歧化为H2O2和氧分子,之后Fe2+-EDTA与H2O2反应生成羟基自由基(·OH).·OH进攻对苯二甲酸产生唯一的强荧光羟基化产物2-羟基对苯二甲酸(HOTP).·OH清除剂加入体系后,与对苯二甲酸竞争结合·OH,导致对苯二甲酸的羟基化产物HOTP的生成量减少,从而导致体系荧光强度明显降低.我们首次成功地将以上原理运用于中药对·OH清除作用的研究,并于实验中首次发现中药白头翁和半支莲可以清除·OH,两种中药对·OH的清除具有负协同效应,同时测定了它们对·OH的清除率分别为白头翁IC50=1.80×10-2 mg/mL;半支莲IC50＝1.76×10-2 mg/mL.【总页数】5页(P208-212)【作者】吕永为;郭祥群【作者单位】厦门大学化学系,教育部现代分析科学重点实验室,福建,厦门361005;厦门大学化学系,教育部现代分析科学重点实验室,福建,厦门361005【正文语种】中文【中图分类】O657.3【相关文献】1.荧光动力学分析法测定5种(口山)酮清除超氧自由基和羟基自由基的活性 [J], 赫春香;王杨;曹璨;王世盛2.罗丹明B-Fe2+-H2O2光度法测定两种中药对羟基自由基的清除作用 [J], 王征帆3.荧光分光光度法测定中药对羟自由基的清除率 [J], 陈冠华;田益玲;杨更亮;王晓燕;赵花荣4.一些天然提取物对超氧自由基和羟基自由基的清除作用 [J], 韩强;林惠芬;朱玲莉5.Fenton反应产生的羟基自由基及其清除的分光光度法测定 [J], 宋艳;邹洪;董瑞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
花蛤酶解工艺的研究
时 间＃ ｎ ｍｉ
图３ 不 同反 应 时 间下 水解 度
图 １ 不 同ｐ 值 条 件 下 水解 度 Ｈ
由 图３ 可知 ，９— ８ ｉ，水解 度 随 时间延 长 逐 ０ １０ｍｎ 渐上升 ，随后增加程度 减小 ，２０ｍｎ １ ｉ时达 到峰值 ２ ． ％，２０ｍｎ ２０ ８ ４ ｉ时水解度有所下降但无显著差异 。
花 蛤 酶解 工 艺 的研 究
张 慧恩 ，金 祥 ，王 江 强
３５０） ０ ０ １ （ 浙江万里学院 生物与环境 学院 ，浙 江 宁波
摘要 ：对 花蛤 肉酶法水解进行 了研究 ，使用 Ｐｏ ｍｅ ｒｔ ｘ复合蛋白酶 ，考察 了酶用量 、温度 、时间 、ｐ ａ Ｈ值对水解度 的影
响。结果表 明 ，Ｐｏ ｍｅ 复合蛋 白酶水解花蛤肉的最佳条件为 酶用量 ０ ６Ａ ／，ｐ ｒｔ ｘ ａ ． Ｕｇ Ｈ值 ６５ ０ ．，水解 时间 １０ｍ ｎ ８ ｉ，水解
・
４ ６・
蛋白质水解度的计算【 ７ Ｊ ：
水解磨 ×１０ ％． ０
收 稿 日期 ： ２ １ — ５ １ ０２ ０ — ５
基 金项 目：宁波市 自然基金 项 目 （ １Ａ １ ０ ） ２ １ ６０ ８ 。 ０ ０ 作者简 介 ： 张慧恩 （ ８一 ） １ １ ９ ，男 ，浙江人 ，讲师 ，研究方 向：食 品生物技术 。Ｅ ｍａ：ｚａｇｕ ｎ ｚｕ ｄ － 。 － ｉ ｈｎｈｉ ＠ ｗ ． ｕ ｎ ｌ ｅ ｅ ｃ
由 图 ｌ 知 ， 解 度 显 示 Ｐｏａ ｘ 合 蛋 白酶 的 可 水 ｒｔ 复 ｍｅ 最 适 作用 ｐ 为 酸 陛 ， Ｈ值 本试 验 中在 ｐ 值 ６５ Ｈ ．条件 下 有 最 大水 解度 。 ２２ 温度 对水 解度 的影 响 ． Ｐｏ ｍ ｘ 白酶的最适作用温度 ，推荐使用范 围 ｒ ａ ｅ蛋 ｔ 在 ４ — ０℃。 在底 物 蛋 白质 质 量浓 度 为 ５ｇ１０ｍ ０６ ／０ Ｌ， 体 系ｐ 值６ ， 酶用量０ ４ Ｕｇ 白，反应时 间 Ｈ ． ５ ． ８Ａ ／ ０ 蛋 １０ｍｎ 件下测 定 了４ ，４ ，５ ，５ ，６ ，６ ８ ｉ条 ０ ５ ０ ５ Ｏ ５℃下
分光光度法测定中药对羟自由基的清除率
关键词：UV - Vis 分光光度法；结晶紫；羟自由基；中药提取物 中图分类号：O657 . 32 文献标志码：A
!引言
机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程 . 对此学者们有各种解释，如自由基学说、遗传学说、交 联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种［1］. 自由基是一类外层轨道含有 未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基（·O2 - ）、羟基 自由基（·OH）、脂自由基（ROO·）等，其中以·OH 作用最强 . 它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式 与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死 或突变 .·OH 还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的 重要指标 . 因此，·OH 参与的各种研究已成为生物学、生物化学和生物医学等领域中的重要研究课题 . 与此同时，·OH 测定方法的研究也倍受关注 .
（CV）、CV - Fe2 + 溶液、CV - Fe3 + 溶液、CV - H202 溶液的 最大吸收波长均在 588 nm 附近且吸光度值基本不变，而
CV - Fe2 + - H202 溶液的最大吸收波长也在 588 nm 附 近，但吸光度值较其它溶液体系下降（图 1），说明体系吸
光度值的下降是 Fenton 试剂产生的羟自由基与结晶紫 作用的结果 . 3 . 1 . 2 酸度的影响 测定 CV - Fe2 + - H202 体系在 pH 4 . 5 ~ 7 . 5 范围内不同酸度溶液的 !A，发现在 pH 为 5 . 5 时体 系 !A 有 最 大 值（ 图 2），故 选 择 体 系 的 酸 度 为
表 # 银杏叶水提取液和舒血宁药片清除羟自由基比较
!引言
机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程 . 对此学者们有各种解释，如自由基学说、遗传学说、交 联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种［1］. 自由基是一类外层轨道含有 未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基（·O2 - ）、羟基 自由基（·OH）、脂自由基（ROO·）等，其中以·OH 作用最强 . 它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式 与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死 或突变 .·OH 还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的 重要指标 . 因此，·OH 参与的各种研究已成为生物学、生物化学和生物医学等领域中的重要研究课题 . 与此同时，·OH 测定方法的研究也倍受关注 .
（CV）、CV - Fe2 + 溶液、CV - Fe3 + 溶液、CV - H202 溶液的 最大吸收波长均在 588 nm 附近且吸光度值基本不变，而
CV - Fe2 + - H202 溶液的最大吸收波长也在 588 nm 附 近，但吸光度值较其它溶液体系下降（图 1），说明体系吸
光度值的下降是 Fenton 试剂产生的羟自由基与结晶紫 作用的结果 . 3 . 1 . 2 酸度的影响 测定 CV - Fe2 + - H202 体系在 pH 4 . 5 ~ 7 . 5 范围内不同酸度溶液的 !A，发现在 pH 为 5 . 5 时体 系 !A 有 最 大 值（ 图 2），故 选 择 体 系 的 酸 度 为
表 # 银杏叶水提取液和舒血宁药片清除羟自由基比较
几种常见食用菌清除羟基自由基能力的研究_马晓华
研究报 告
表 1 结果表明 , 食用菌粗多糖有显著的清除羟自 由基的能力 , 相当于每 100 m L 含 0.4 g 干品所得粗 多糖 的 清 除 羟 自 由 基 能 力 分 别 为 15.55 % 和 14.63 %。 但未经提取粗多糖的干菌浸提液本身的羟 自由基清除率远大于粗多糖溶液 。 说明在热水浸提 液中多糖具有一定的清除羟自由基能力 , 但由于粗多 糖溶液组成的复杂性 , 许多被沉淀下来的诸如蛋白质 等物质可能同样具有清除羟自由基能力 。 2.4 不同提取物清除羟基自由基能力的比较(图 3)
各取 8 g 由 1.2.2 制备的双孢蘑菇 、香菇和平菇 干菌粉 , 再将每种食用菌的 8 g 干菌粉等分为 4 份 , 2 g/ 份 , 各自分别加 20 m L 的双蒸水 、75 %乙醇 、无水 乙醇 、乙酸乙酯 , 充分搅拌 , 通风橱中各自密闭放置浸 提 14 h 后 , 过滤 , 各自取滤液即为不同提取溶剂的浸 提液 。 将浸提液放真空干燥箱中用真空泵抽取 12 h 后 , 在通风橱中自然挥发 5 d 至完全干燥得浸膏 。 分 别测定浸膏对羟自由基的清除能力 , 方法同 1.2.2 中 测定干菌粉对羟自由基清除能力的方法 。
物质活性的实验中检测其清除超氧阴离子自由基能 力的实验较多 , 研究表明 , 平菇多糖 、黑木耳多糖等具 有清除超氧自由基的作用[ 9～ 11] 。 羟自由基(·OH)是 最活泼的自由基 , 也是毒性最大的自由基 。它可以与 活细胞中任何分子发生反应造成损害 , 且反应速度极 快 , 被破坏的分子遍及糖类 、氨基酸 、磷脂 、核苷和有 机酸等[ 7] 。但几乎未见有人对食用菌清除羟自由基 能力进行研究 。 本文利用水杨酸法检测并比较研究 了几种常见食用菌鲜品及干品 的热水浸提液 、干菌 粉 、粗多糖 、冷水浸提液 、75 %乙醇浸提液 、无水乙醇 浸提液及乙酸乙酯浸提液的清除羟基自由基能力 , 初 步分析了几种食用菌清除羟基自由基物质的来源 。
菲律宾蛤仔酶解多肽的分离及体外抗氧化作用研究【开题报告】
开题报告药学菲律宾蛤仔酶解多肽的分离及体外抗氧化作用研究一、说明选题的依据和意义菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum），隶属于软体动物门（Mollusca）、双壳纲（Bivalvia）、帘蛤科（Veneridae）的海洋生物，俗称花蛤，是我国四大养殖贝类之一。
花蛤肉组织蛋白含量高，脂肪含量低，并含有丰富的维生素和微量元素，具有良好的营养保健功能。
中医认为，蛤肉有滋阴明目、软坚化痰之功效。
近代研究表明，菲律宾蛤仔提取物具有提高免疫力、抑制细胞微核形成、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗菌等作用。
传统医学与现代研究均证实了菲律宾蛤仔的医疗保健作用，但是至今还没有将其开发成产品投入市场。
海洋是全球生命支持系统的一个重要组成部分，也是一种有助于实现社会、经济可持续发展的宝贵财富。
向海洋进军, 开发利用海洋资源, 成为扩大人类生存空间、增加资源储备的重要出路。
海洋生物技术作为一个全新的学科，已经成为21世纪海洋研究开发的重要领域。
当前世界各国对开发海洋药物和功能特殊的海洋生活活性物质都给予了高度关注。
浙江省海洋生物资源丰富，发展海洋经济具有得天独厚的条件，本项目研究为促进浙江省的十一五规划建设、加快实现海洋经济大省的步伐、成为“海上浙江”，打破资源限制具有重要意义；为促进功能性产品开发和海洋药物产业化的发展也具有重要的意义。
此外，菲律宾蛤仔是我国重要的养殖贝类，将其进行药物保健品的研究开发，不但不会破坏生态平衡，还将会为它的高值化利用寻找新的出路。
超氧化物阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、过氧化自由基（ROO）和羟自由基（-OH）等自由基是生物体在新陈代谢过程中产生的中间产物，具有很强的氧化作用。
正常生理情况下，机体内的抗氧化酶及非酶类因子可以将自由基有效地清除，从而维持自由基产生与消除的平衡状态，但自由基多数不稳定，在病理情况下，可以迅速引起脂质的过氧化。
自由基通过造成细胞膜、DNA和蛋白活性的损伤，并与动脉硬化、脑卒中、阿尔茨海默病、肥胖、白内障以及肝脏疾病等多种人类疾病相关。
荧光分光光度法测定中药对羟自由基的清除率
［1， 2］ 公认的毒性最大的自由基 。因此， ・OH 的检测在自由基
中图分类号： O658引来自言!"$
样品测定
在含有 20 mmOI ・ L - 1 的 50 mL 过氧化氢溶液中加入样品 提取液后， 迅 速 放 置 于 紫 外 灯 下， 以 280 nm 紫 外 光 照 射 15 然后加入 0.85 mOI ・ 再照射 5 min， 将此 min， L - 1 苯甲酸 0.5 mL， 样品以 302 nm 激发， 于 411 nm 处测定。
2
#"!
结果与讨论
苯甲酸与反应产物的激发和发射光谱 制备两份含有相同浓度苯甲酸的水溶液， 其中溶液 1 含
有适量 H2 O2 ，并经 280 nm 紫外光照射产生・OH， 使苯甲酸与 之反应生成强荧光产物； 而溶液 2 只有苯甲酸。测定此二溶 液的荧光发射光谱， 仪器条件为： 入射、 出射狭缝均为 5 " m， 灵敏度取中等，可得图 1 所示谱图。从测定结果可知， 两者 的最大激发波长均为 302 nm， 但它们的最大发射波长有所不 同， 苯甲酸的为 366 nm， 而产物的为 411 nm。从图 1 中我们还 可以看到， 产物的荧光强度显著高于苯甲酸， 这说明确有羟基 接于苯环之上。利用液相色谱分离反应后的溶液 1 可知， 产 物主要为间羟基苯甲酸。这与理论分析结论是一致的。 #"# 苯甲酸过量范围的确定 在测定中药提取物对 ・ OH 清除率时，需要向溶液中加入 不同浓度的提取物。这样， 溶液中剩余的 ・ OH 会各不相同。
生成量减少， 从而使溶液的荧光增加程度降低。据此原理建立了一种测定中药对・OH 的清除率新方法。研 究表明， 在紫外光照射 H2 O2 的 ・ 当照射时间为 20 min 时， ・OH 产生率达到饱和； 当 H2 O2 与苯 OH 产生体系中， 甲酸的摩尔比为 30 1 1 时， ・ 产物荧光响应随 H2 O2 浓度变化的线性范围是 2.2 ~ 80 OH 可与苯甲酸完全反应； ・ ・ ・ 与分光光度法测定结果相比无 mmOI L - 1 。测得厚朴和山茱萸清除 OH 的 IC50 分别为 1.025 和 515.3 mg L - 1， 显著性差异。 主题词 羟自由基； 苯甲酸； 中药提取物； 荧光分光光度法 文献标识码： A 文章编号： （2002） 1000-0593 04-0634-03 用 60 mL 乙醇分三次浸提， 每次 20 mL。浸提前先 3.023 1 g， 超声处理 10 min， 然后静置 24 1， 将三次浸提液合并作为药物 提取液。 羟自由基 （ ・OH） 是造成组织细胞损伤的重要活性氧之 一。人体 在 正 常 的 生 命 活 动 中 通 过 新 陈 代 谢 即 可 以 产 生 ・ 它可以引起膜过氧化， 蛋白质交联变性， 核酸损伤等， 是 OH，
中图分类号： O658引来自言!"$
样品测定
在含有 20 mmOI ・ L - 1 的 50 mL 过氧化氢溶液中加入样品 提取液后， 迅 速 放 置 于 紫 外 灯 下， 以 280 nm 紫 外 光 照 射 15 然后加入 0.85 mOI ・ 再照射 5 min， 将此 min， L - 1 苯甲酸 0.5 mL， 样品以 302 nm 激发， 于 411 nm 处测定。
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结果与讨论
苯甲酸与反应产物的激发和发射光谱 制备两份含有相同浓度苯甲酸的水溶液， 其中溶液 1 含
有适量 H2 O2 ，并经 280 nm 紫外光照射产生・OH， 使苯甲酸与 之反应生成强荧光产物； 而溶液 2 只有苯甲酸。测定此二溶 液的荧光发射光谱， 仪器条件为： 入射、 出射狭缝均为 5 " m， 灵敏度取中等，可得图 1 所示谱图。从测定结果可知， 两者 的最大激发波长均为 302 nm， 但它们的最大发射波长有所不 同， 苯甲酸的为 366 nm， 而产物的为 411 nm。从图 1 中我们还 可以看到， 产物的荧光强度显著高于苯甲酸， 这说明确有羟基 接于苯环之上。利用液相色谱分离反应后的溶液 1 可知， 产 物主要为间羟基苯甲酸。这与理论分析结论是一致的。 #"# 苯甲酸过量范围的确定 在测定中药提取物对 ・ OH 清除率时，需要向溶液中加入 不同浓度的提取物。这样， 溶液中剩余的 ・ OH 会各不相同。
生成量减少， 从而使溶液的荧光增加程度降低。据此原理建立了一种测定中药对・OH 的清除率新方法。研 究表明， 在紫外光照射 H2 O2 的 ・ 当照射时间为 20 min 时， ・OH 产生率达到饱和； 当 H2 O2 与苯 OH 产生体系中， 甲酸的摩尔比为 30 1 1 时， ・ 产物荧光响应随 H2 O2 浓度变化的线性范围是 2.2 ~ 80 OH 可与苯甲酸完全反应； ・ ・ ・ 与分光光度法测定结果相比无 mmOI L - 1 。测得厚朴和山茱萸清除 OH 的 IC50 分别为 1.025 和 515.3 mg L - 1， 显著性差异。 主题词 羟自由基； 苯甲酸； 中药提取物； 荧光分光光度法 文献标识码： A 文章编号： （2002） 1000-0593 04-0634-03 用 60 mL 乙醇分三次浸提， 每次 20 mL。浸提前先 3.023 1 g， 超声处理 10 min， 然后静置 24 1， 将三次浸提液合并作为药物 提取液。 羟自由基 （ ・OH） 是造成组织细胞损伤的重要活性氧之 一。人体 在 正 常 的 生 命 活 动 中 通 过 新 陈 代 谢 即 可 以 产 生 ・ 它可以引起膜过氧化， 蛋白质交联变性， 核酸损伤等， 是 OH，
不同蛋白酶酶解河蚬产物的抗氧化活性研究
不同蛋白酶酶解河蚬产物的抗氧化活性研究朱小燕;方芳;任世英;周佳;谭中标;李相前【期刊名称】《淮阴工学院学报》【年(卷),期】2018(027)003【摘要】以河蚬为原料,采用Alcalase、Neutrase、Flavourzyme、Papain四种蛋白酶水解河蚬,考察不同酶酶解产物的抗氧化活性包括DPPH自由基清除能力、超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力、羟自由基(·OH)清除能力及还原力.研究发现,Alcalase2 h酶解产物DPPH自由基清除能力最佳,清除率为83.17％,Alcalase8 h酶解产物O2-· 的清除率最高达到72.52％.Papain6 h酶解产物·OH清除效果最佳,清除率达83.86％,Papain 6 h酶解产物还原力最高,酶解产物OD700nm值为0.74.可见蛋白酶种类和酶解时间对河蚬酶解产物的抗氧化活性具有较大影响,且抗氧化活性指标不一样,不同的蛋白酶酶解河蚬产物的抗氧化活性也有较大差异.【总页数】6页(P30-35)【作者】朱小燕;方芳;任世英;周佳;谭中标;李相前【作者单位】淮阴工学院生命科学与食品工程学院,江苏淮安223003;淮阴工学院江苏省生物质转化与过程集成重点实验室,江苏淮安223003;淮阴工学院生命科学与食品工程学院,江苏淮安223003;淮阴工学院生命科学与食品工程学院,江苏淮安223003;淮阴工学院江苏省生物质转化与过程集成重点实验室,江苏淮安223003;淮阴工学院生命科学与食品工程学院,江苏淮安223003;淮阴工学院江苏省生物质转化与过程集成重点实验室,江苏淮安223003;淮阴工学院生命科学与食品工程学院,江苏淮安223003;淮阴工学院江苏省生物质转化与过程集成重点实验室,江苏淮安223003;淮阴工学院生命科学与食品工程学院,江苏淮安223003;淮阴工学院江苏省生物质转化与过程集成重点实验室,江苏淮安223003【正文语种】中文【中图分类】Q519;TS254.4【相关文献】1.不同苦荞蛋白酶解产物抗氧化活性研究 [J], 吴伟菁;纪美茹;李再贵2.木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶分步水解玉米蛋白酶解产物抗氧化活性研究 [J], 胡二坤;郭兴凤;吴欣欣;崔会娟3.鹅肉蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究 [J], 李俊江;潘道东;郭宇星;岳娜;孙杨赢4.羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究 [J], 文飞;母应春;李静雯;赵旭;唐素婷;杨旭卉;苏伟5.河蚬酶解物美拉德反应产物抗氧化活性研究 [J], XU Hao;LIN Lin;LIU Dong-xu;LU Jian-feng;JIANG Shao-tong因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
几种天然植物花色苷体外清除自由基活性比较研究_李洋
色苷 0.6mg/ml、草莓花色苷 1.2mg/ml、杨梅花色苷 0.3 mg/ml，桑椹花色苷 4.6mg/ml、荔枝皮花色苷 1.3mg/ml、 红毛丹花色苷 3.2mg/ml、石榴花花色苷 3mg/ml 浓度的试 样溶液，并将各种花色苷试样均 2 倍稀释成 6 个不同浓 度，另配制浓度为 2.5 × 10-5mol/L 的 DPPH 95% 乙醇溶 液，低温避光保存。取 0.1ml 试样溶液和 0.2ml DPPH 乙 醇溶液混合加入 96 孔板，在室温下避光反应 20min，然 后经多功能酶标仪在 517nm 下测定吸光度。空白对照组 以 0.1ml 试样溶剂代替试样溶液，每个浓度均做三个复 孔。清除率用下式计算：
清除率用下式计算：
A1－A2 羟基自由基清除率(%) = ————× 100
A1
式中：A 1 为空白的平均吸光度；A 2 为试样的平均 吸光度。
1.3.4 花色苷清除超氧阴离子自由基活性的测定 采用邻苯三酚自氧化法产生 O 2·，方法参照文献
[7]，并做适当改进。用 pH8.2 的 Tris-HCl 缓冲液配制 楮果花色苷 1.8mg/ml、蛇莓花色苷 3.625mg/ml、杨梅 花色苷 1.5mg/ml、桑椹花色苷 0.045mg/ml、荔枝皮花 色苷 1.8mg/ml、红毛丹花色苷 0.65mg/ml、石榴花花 色苷 0.776mg/ml 浓度的试样溶液，并按浓度的 10% 递减 稀释成 6 个不同浓度，其中蛇莓花色苷为 2 倍稀释成 6 个不同浓度。在 96 孔板中依次加入 0.095ml 的 pH8.2 TrisHCl 缓冲液、0.005ml 的 25mmol/L 邻苯三酚溶液、0.2ml 的试样溶液，室温避光反应 5min 后在 320nm 下检测吸 光度。空白对照组以 0.2ml 试样溶剂代替试样溶液，每 个浓度均做三个复孔。
清除率用下式计算：
A1－A2 羟基自由基清除率(%) = ————× 100
A1
式中：A 1 为空白的平均吸光度；A 2 为试样的平均 吸光度。
1.3.4 花色苷清除超氧阴离子自由基活性的测定 采用邻苯三酚自氧化法产生 O 2·，方法参照文献
[7]，并做适当改进。用 pH8.2 的 Tris-HCl 缓冲液配制 楮果花色苷 1.8mg/ml、蛇莓花色苷 3.625mg/ml、杨梅 花色苷 1.5mg/ml、桑椹花色苷 0.045mg/ml、荔枝皮花 色苷 1.8mg/ml、红毛丹花色苷 0.65mg/ml、石榴花花 色苷 0.776mg/ml 浓度的试样溶液，并按浓度的 10% 递减 稀释成 6 个不同浓度，其中蛇莓花色苷为 2 倍稀释成 6 个不同浓度。在 96 孔板中依次加入 0.095ml 的 pH8.2 TrisHCl 缓冲液、0.005ml 的 25mmol/L 邻苯三酚溶液、0.2ml 的试样溶液，室温避光反应 5min 后在 320nm 下检测吸 光度。空白对照组以 0.2ml 试样溶剂代替试样溶液，每 个浓度均做三个复孔。
生物体中自由基的清除机制和药物的设计
生物体中自由基的清除机制和药物的设计在生命体内，存在着许多生物化学反应，其中一些反应会产生自由基。
自由基是一个电子不成对的分子或原子，它们在生物体内会和其他分子反应，造成细胞损伤，导致疾病的形成。
因此，生物体需要一些机制来清除这些自由基，保持细胞的正常运作。
自由基清除机制1. 抗氧化酶自由基清除机制中最为重要的一种是抗氧化酶（antioxidant enzymes）。
这些酶能够催化反应，将自由基变成更稳定的化合物，避免自由基引起的破坏作用。
常见的抗氧化酶包括超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase）。
2. 维生素和类维生素另外一些物质也可以作为自由基清除剂。
例如，维生素C和维生素E都是著名的抗氧化剂。
它们能够捕捉自由基，并与之反应，使自由基变为稳定的分子。
此外，类维生素Q10也可以作为一种自由基清除剂，它能够对抗细胞内氧化压力，并改善细胞的能量代谢。
3. 天然产物许多天然产物也具有自由基清除的能力。
例如，茶多酚、花青素、儿茶素等在植物中都存在。
它们能够捕捉自由基，从而保护植物免受自由基的破坏。
这些天然产物也可以通过饮食摄入，成为一种保护生命体的途径。
药物设计除了以上的自然产物和生物体内机制，还有一些药物可以帮助清除自由基，从而保护细胞健康。
这些药物都是经过精心设计和筛选的。
下面介绍几种较常见的自由基清除剂。
1. 抗氧化药物抗氧化药物是指那些能够直接清除自由基的药物。
常用的抗氧化药物包括维生素C、维生素E、花青素、茶多酚等。
这些药物能够捕捉自由基并使之变得不活泼，从而保护细胞健康。
此外，还有一些药物是通过刺激抗氧化酶来保护生物体的，例如硫酸半胱氨酸、肝素等。
2. 抗炎药物自由基与炎症之间有着紧密的联系。
炎症能够促进自由基的产生，而自由基也能够引起炎症。
因此，抗炎药物也可以是一种自由基清除剂。
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第 ５卷 第 １ 期 ２０ 年 ２ ０７ 月
花 蚬 酶 解 物 清 除 羟 自 由基 作 用 研 究
分 子 质 量 为 １ １５×１ ．６ ０。
关键词 ： 花蚬 ； 解物 ； 酶 活性肽 ； 自由基 ； 除活性 羟 清
中 图分 类号 ：Ｓ ５ ． Ｔ ２４ ４ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ２— ６８ ２０ ） １ ０ ０— ６ １７ ３ ７ （０ ７ ０ —０５ ０
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邱春 江 ， 刘 利
（ 淮海工 学 院 江苏省 海洋 生物技 术重 点建设 实验 室 ， 连云 港 ２２０ ） ２０ ５
摘
要 ： 讨 了不 同蛋 白酶酶解花蚬蛋 白所得酶 解物对 Ｆ ｎｏ 探 ｅｔ ｎ体 系产 生的羟 自由基 （ Ｏ 的清除效果 ， ・ Ｈ） 然后进 行
Ｓｐ ａｅ －５凝胶 柱分 离酶解产物 中的抗氧化活性肽 ， ｅｈ ｄｘＧ ２ 并测定 活性肽相 对分子质量分 布。结 果表明 ： 木瓜 蛋 白酶
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第 ５卷 第 １ 期 ２０ 年 ２ ０７ 月
花 蚬 酶 解 物 清 除 羟 自 由基 作 用 研 究
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关键词 ： 花蚬 ； 解物 ； 酶 活性肽 ； 自由基 ； 除活性 羟 清
中 图分 类号 ：Ｓ ５ ． Ｔ ２４ ４ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ２— ６８ ２０ ） １ ０ ０— ６ １７ ３ ７ （０ ７ ０ —０５ ０
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