羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton比色法)

羟自由基清除能力测定原理一、引言羟自由基是一种高活性的化学物质，具有很强的清除能力。

羟自由基清除能力测定是一种常用的方法，用于评估化合物对自由基的抗氧化能力。

本文将介绍羟自由基清除能力测定的原理和相关实验方法。

二、羟自由基的产生羟自由基是一种带有羟基（OH）的自由基，具有很强的氧化能力。

羟自由基可以通过多种途径产生，例如光解水、氧化还原反应以及生物代谢过程中的产生等。

在实验室中，常用的产生羟自由基的方法是通过添加氢过氧化物和过氧化氢催化剂来进行。

三、羟自由基清除能力的评估方法1. 直接测定法直接测定法是最常用的羟自由基清除能力评估方法之一。

该方法利用特定的化学试剂（如5,5-二甲基-1-吡咯烷酮）与羟自由基发生反应，生成稳定的产物，通过测定产物的浓度变化来评估清除能力的强弱。

该方法操作简单、结果可靠。

2. 电子自旋共振法电子自旋共振法是一种基于电子自旋共振谱仪的测定方法。

该方法利用特定的探针与羟自由基反应生成稳定的产物，通过测定产物的电子自旋共振信号强度来评估清除能力的大小。

该方法对样品要求较高，需要配备专业的设备。

3. 化学计量法化学计量法是一种通过测定特定试剂的消耗量来评估羟自由基清除能力的方法。

该方法常用的试剂有抗坏血酸、谷胱甘肽等，通过与羟自由基反应生成稳定的产物，进而测定试剂的消耗量来评估清除能力的强弱。

该方法操作简单，适用于大批量样品的测定。

四、影响羟自由基清除能力的因素羟自由基清除能力受多种因素的影响，包括温度、pH值、浓度、反应时间等。

一般来说，较高的温度、适宜的pH值和较长的反应时间有助于提高羟自由基清除能力。

此外，样品的浓度也是影响清除能力的重要因素，适宜的浓度可以使清除能力得到准确的评估。

五、应用领域羟自由基清除能力测定在抗氧化剂的筛选和评估中具有广泛的应用。

抗氧化剂可以通过清除羟自由基来减轻氧化应激引起的损伤，具有重要的保护作用。

因此，羟自由基清除能力测定可以帮助筛选出具有较强抗氧化能力的化合物，并为新药开发和保健品研究提供依据。

COD深度处理技术——芬顿（Fenton）⾼级氧化法芬顿反应塔芬顿法(Fenton),从⼴义上说是利⽤催化剂或光辐射、或电化学作⽤，通过H2O2产⽣羟基⾃由基(·OH)处理有机物的技术。

1. 传统芬顿法芬顿试剂的实质是⼆价铁离⼦(Fe2+)和过氧化氢之间的链反应催化⽣成OH⾃由基，具有较强的氧化能⼒，其氧化电位仅次于氟，⾼达2.80eV。

另外, 羟基⾃由基具有很⾼的电负性或亲电性 ,其电⼦亲和能⼒达 569.3kJ ，具有很强的加成反应特性，因⽽芬顿试剂可⽆选择氧化⽔中的⼤多数有机物，特别适⽤于⽣物难降解或⼀般化学氧化难以凑效的有机废⽔的氧化处理，芬顿试剂在处理有机废⽔时会发⽣反应产⽣铁⽔络合物,主要反应式如下：[Fe(H2O)6]3++H2O→[Fe(H2O)5OH]2++H3O+[Fe(H2O)5OH]2++H2O→[Fe(H2O)4(OH)2]+ H3O+当pH为3～7时,上述络合物变成：2[Fe(H2O)5OH]2+→[Fe(H2O)8(OH)2]4++2H2O[Fe(H2O)8(OH)2]4++H2O→[Fe2(H2O)7(OH)3]3++H3O+[Fe2(H2O)7(OH)3]3++[Fe(H2O)5OH]2+→[Fe3(H2O)7(OH)4]5++5H2O以上反应⽅程式表达了芬顿试剂所具有的絮凝功能。

芬顿试剂所具有的这种絮凝/沉淀功能是芬顿试剂降解CODcr的重要组成部分，可以看出利⽤芬顿试剂处理废⽔所取得的处理效果，并不是单纯的因为羟基⾃由基的作⽤，这种絮凝/沉降功能同样起到了重要的作⽤。

传统芬顿法在⿊暗中就能⼒破坏有机物，具有设备投资省的优点，但其存在两个致命的缺点：⼀是不能充分矿化有机物，初始物质部分转化为某些中间产物，这些中间产或与Fe3+形成络合物，或与·OH的⽣成路线发⽣竞争，并可能对环境造成的更⼤危害；⼆是H2O2的利⽤率不⾼，致使处理成本很⾼。

利⽤Fe(Ⅲ)盐溶液,可溶性铁，铁的氧化矿物(如⾚铁矿,针铁矿等)，⽯墨，铁锰的氧化矿物同样可使H2O2催化分解产⽣·OH，达到降解有机物⽬的，以这类催化剂组成的芬顿体系,成为类芬顿体系，如⽤Fe3+代替Fe2+,由于Fe2+是即时产⽣的，减少了·OH被Fe2+还原的机会，可提⾼·OH的利⽤效率。

分光光度法测定茶叶对羟基自由基的清除率发布时间：2021-07-06T09:34:10.120Z 来源：《教育学》2021年5月总第249期作者：薛云尹俊泉[导读] 生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。

与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。

甘肃省陇南市武都区莲湖小学746000摘要：邻二氮菲在紫外光区有强烈吸收，加入H2O2产生羟基自由基，茶叶提取液会使其中的羟基自由基减少，此时，溶液的吸光度值也随之减小，据此原理可以计算茶叶提取液对羟基自由基的清除率。

体系最佳实验条件为pH=7.00，缓冲溶液体积用量1.00mL，邻二氮菲浓度3×10-4mol/L，Fe2+浓度5×10-3mol/L，1%H2O2用量1.00mL，茶叶提取液用量20.00mL，按照邻二氮菲-Fe2+-H2O2顺序加入反应4min。

在以上实验条件下，测得羟基自由基的清除率为44.1%。

关键词：分光光度法邻二氮菲羟基自由基茶叶提取液机体的疾病与衰老是一个复杂的生物过程。

对此，学者们有各种解释，如自由基学说、传学说、交联学说、免疫学说等，其中自由基学说是目前国内外较普遍认同的一种。

自由基是一类外层轨道含有未配对电子的原子团或特殊状态分子，与人体关系最为密切的是氧自由基，如超氧自由基(·O2-)、羟基自由基(·OH)、脂自由基(ROO·)等，其中以·OH作用最强。

它可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死或突变。

·OH还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标。

因此，·OH参与的各种研究已成为生物学、生物化和生物医学等领域中的重要研究课题。

与此同时，·OH测定方法的研究也备受关注。

近年来，国内外文献报道了检测羟自由基的主要方法有：电子自旋共振法、高效液相色谱法、化学发光法、光度法等。

羟自由基测定试剂盒使用说明货号：LA1950规格：50管/48样产品内容：试剂一：3%H2O2标准品贮备液0.5mL×1支，4℃保存3个月。

0.03%标准品应用液的配置：3%H2O2标准品贮备液：双蒸水=1：99稀释，现用现配。

试剂二：底物贮备液1mL×1支，4℃保存3个月。

底物应用液的配制：如果您的样本为抑制羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度低，则底物反应液的配制：底物贮备液：双蒸水=1：99稀释，现用现配。

如果您的样本为产生羟自由基，即测定管吸光度比对照管吸光度高，则底物反应液的配制：底物贮备液：双蒸水=1：299稀释，现用现配。

试剂三：甲液贮备液2mL×1支，4℃保存3个月。

用时用双蒸水稀释至1：9稀释成应用液。

乙液7mL×2支，4℃保存3个月。

试剂三应用液的配制：甲液应用液与乙液等比列混合，按需配置，剩余的4℃保存。

试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存3个月。

用时加双蒸水稀释至100mL制备应用液，4℃保存。

若有结晶，则放置37℃水浴至全部溶解后再稀释。

试剂五：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。

试剂六：液体30mL×1瓶，避光4℃保存3个月。

试剂七：分析纯的冰乙酸自备。

显色剂的配制：试剂四应用液：试剂五：试剂六：冰乙酸=8:3:3:2，现用现配。

抑制羟自由基的物质如：血清（浆）、各种组织匀浆液、口服液等产生羟自由基的物质如：中性白细胞、某些药物、部分植物等。

产品简介：Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和Fenton反应产生的OH·量成正比，当给予电子受体后，用griess试剂显色，形成红色物质，其呈色与OH·的多少成正比列关系。

操作步骤：以上配制好的应用液，先在37℃水浴中温育3min，一下操作在37℃水浴中进行。

空白管标准管对照管测定管双蒸水（mL）0.40.20.20.03%H2O2标准应用液（mL）0.2底物应用液（mL）0.20.2样本（mL）0.2试剂三应用液（mL）0.40.40.40.4混匀，37℃反应1min（准确以秒表计时），从加完试剂三开始到1min结束，立即加入显色剂终止反应，一次只能做一个管子。

羟自由基清除率测定方法
1. 哎呀呀，你知道吗？有一种羟自由基清除率测定方法叫比色法呢！就好像我们通过眼睛看颜色的变化来判断一样，是不是很神奇？比如在做实验的时候，加入特定的试剂后，颜色一下子就变了，那就能知道羟自由基清除的情况啦！
2. 嘿，还有一种电子自旋共振法呢！这就好像是给羟自由基装上一个追踪器，能清楚地看到它们的动向和变化。

想象一下，在实验室里，我们能这么精准地捕捉到羟自由基的信号，是不是超厉害呀！就像警察抓小偷一样把它们都“逮住”呢！
3. 哇塞，化学发光法也是羟自由基清除率测定的好方法呀！这不就像夜晚的萤火虫一闪一闪地告诉我们它在哪里嘛！比如说当有物质能清除羟自由基时，那光芒就会减弱，多直观呀！
4. 哟呵！荧光分析法也很不错呢！它就像是一道光，照亮羟自由基的“踪迹”。

我们通过观察荧光的变化来了解羟自由基的清除效率，感觉自己就像个侦探一样在寻找线索呢！比如说在某个样品中加入特定试剂后，荧光发生了改变，那就是关键信息呀！
5. 哈哈，脉冲辐解法也能用来测羟自由基清除率哦！这就如同闪电划过，清楚地显示出羟自由基的状态呢。

就像闪电带来的瞬间光明一样，让我们能看清整个过程。

在实验中看到那些数据的变化，可有意思啦！
6. 哇哦！分光光度法也能担此大任呀！这就像用一个神奇的“眼睛”去观测羟自由基的世界。

我们按照步骤一步步操作，就能得到想要的结果啦。

比如说在特定波长下测量吸光度的变化，就知道羟自由基的清除情况如何啦！
我觉得这些羟自由基清除率测定方法都各有千秋，都为我们研究和了解羟自由基提供了有力的手段呀！。

羟自由基清除能力检测
羟自由基清除能力（Hydroxy free radical scavenging activity）是一种衡量物质抗氧化能力的重要指标。

目前有关羟自由基的分析测试方法主要有高效液相色谱法、化学发光法、荧光分析法、分光光度法等。

其中测定羟自由基清除能力最常用的是通过分光光度法测定样本抑制显色物邻二氮菲的吸光度的下降，从而反映样品清除羟自由基的能力。

测定原理为：
H2O2/Fe2+通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+ ，导致536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测羟自由基清除能力。

此外，我们还提供其他氧化应激类检测服务，以满足您的不同需求。

生化法测定羟自由基清除能力样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 羟自由基清除能力信息。

北京索莱宝科技有限公司羟自由基清除能力检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC1325规格：100T/96S 产品内容：提取液：液体110mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体8mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体0.16mL×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入9.84mL 蒸馏水混匀，也可按比例现用现配，配好的试剂4℃保存一周。

产品说明：羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。

它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。

羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

H 2O 2/Fe 2+通过Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe 2+水溶液中Fe 2+氧化为Fe 3+，导致536nm 的吸光度下降，样品536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品：恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：一、样品的制备：（1）组织样品的制备：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

（2）血清、果汁等液体样品可直接测定。

（3）提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。

二、测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至536nm，蒸馏水调零。

2、操作表：在1.5或0.5mLEP管中分别加入下列试剂空白管对照管测定管试剂一（µL）505050试剂二（µL）100100100试剂三（µL）100100100充分混匀，防止颜色不均一。

羟自由基清除能力检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC1320规格：50T/48S 产品内容：提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体0.16mL×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入9.84mL 蒸馏水混匀，也可按比例现用现配，配好的试剂4℃保存一周。

产品说明：羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。

它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。

羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

H 2O 2/Fe 2+通过Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe 2+水溶液中Fe 2+氧化为Fe 3+，导致536nm 的吸光度下降，样品536nm 吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品：可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：一、样品的制备（1）组织样品的制备：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

（2）血清、果汁等液体样品可直接测定。

（3）提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至536nm，蒸馏水调零。

2、操作表：在1.5mLEP管中分别加入下列试剂空白管对照管测定管试剂一（mL）0.150.150.15试剂二（mL）0.30.30.3试剂三（mL）0.30.30.3充分混匀，防止颜色不均一。

样品（mL）--0.15试剂四（mL）-0.150.15HO（mL）0.750.600.452混匀后37℃孵育60min。

羟基自由基‎(·OH)清除能力测‎定法的简易‎操作图解（适用于各种‎抗氧化剂）文献来源[1] Xican‎Li. Solve‎n t effec‎t s and impro‎v emen‎t s in the deoxy‎r ibos‎e degra‎d atio‎n assay‎for hydro‎x ylradic‎a l-scave‎n ging‎. Food Chemi‎s try, 2013, 141(3):2082-2088.操作图解图1 羟基自由基‎(·OH)清除能力测‎定法（脱氧核糖降‎解法）的实验操作‎图具体方法1 溶液配制0.2 MKH2P‎O4溶液: 100mL‎蒸馏水+2.7218g‎KH2PO‎4。

0.2 M Na2HP‎O4溶液: 500mL‎蒸馏水+35.814g Na2HP‎O4·12H2O‎。

磷酸盐KH‎2PO4－Na2HP‎O4缓冲液‎p hosp‎h ate buffe‎r（0.2M, pH7.4, 100mL‎）：19mL0‎.2 MKH2P‎O4+ 81mL 0.2 MNa2H‎P O4. （注意：19：81是大概‎的体积比，具体的比例‎以pH=7.4为准）。

Na2ED‎T A溶液：（1mM, 25mL）：8.4 mg+25mL蒸‎馏水。

FeCl3‎溶液：（3.2mM, 5mL）：4.2 mg+5mL蒸馏‎水。

抗坏血酸溶‎液：（1.8mM, 50mL）：15 mg+50mL蒸‎馏水。

H2O2溶‎液：（50 mM,5mL）：30 mg 30% H2O2+5mL蒸馏‎水。

脱氧核糖溶‎液：（50 mM, 2 mL）：15 mg脱氧核‎糖+2 mL蒸馏水‎(该用量约可‎做40个数‎据) 。

三氯乙酸溶‎液TCA（10%, 10 mL）：1 g + 10 mL蒸馏水‎。

硫代巴比妥‎酸溶液TB‎A：（5%, W/V, 20mL）:取1gTB‎A+20mL蒸‎馏水+20mgN‎a OH (临用时配，超声溶解. 该用量可做‎40个数据‎)。

羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton 比色法)简介：在生命活动的代谢过程中不断产生各种自由基，其中羟自由基·OH 是体内最活跃的活性氧，可介导许多生理变化。

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损Leagene 羟自由基清除率检测试剂盒(Fenton 比色法)又称羟自由基清除能力检测试剂盒或羟自由基检测试剂盒，其检测原理H 2O 2/Fe 2+ 通过Fenton 反应产生羟自由基，将Fe 2+氧化为Fe 3+，求得标准曲线，通过分析捕获产生的羟自由基可计算出自由基清除率或清除能力。

该试剂盒主要用于测定植物组织、血清、血浆等样本中的羟自由基清除率或羟自由基清除能力。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 实验材料：植物组织(芹菜、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等3、 研钵或匀浆器4、 离心管或试管5、 离心机6、 比色杯7、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按 OH编号 名称TO1133 50T Storage试剂(A): OH Lysis buffer 250ml RT 试剂(B): OH Assay buffer 25ml RT 避光 试剂(C): H 2O 2基液 1ml RT 试剂(D): OH 显色液 50ml 4℃ 避光 试剂(E): Fenton 基液 25ml RT 避光 试剂(F): OH 萃取液 100mlRT 使用说明书1份Lysis buffer的比例，加入OH Lysis buffer后匀浆或研磨，室温静置4h，3000g离心，上清液即为羟自由基粗提液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃保存，用于羟自由基(·OH)的检测。

fenton法测定羟自由基英文回答：Fenton Reaction for Determining Hydroxyl Radicals.The Fenton reaction is a chemical reaction that generates hydroxyl radicals, which are highly reactive species that can damage DNA, proteins, and lipids. The reaction is commonly used in laboratory settings to study the effects of oxidative stress on biological systems.The Fenton reaction is a two-step process. In the first step, iron(II) ions react with hydrogen peroxide to form hydroxyl radicals and iron(III) ions. In the second step, iron(III) ions react with another molecule of hydrogen peroxide to regenerate iron(II) ions and produce a second molecule of hydroxyl radicals.The rate of the Fenton reaction is influenced by several factors, including the concentration of iron(II)ions, hydrogen peroxide, and pH. The reaction is most efficient at pH values between 3 and 5.The Fenton reaction can be used to determine the concentration of hydroxyl radicals in a solution. This is done by adding a known amount of hydrogen peroxide to a solution containing iron(II) ions. The reaction is then allowed to proceed for a known period of time, and the concentration of hydroxyl radicals is determined using a spectrophotometer.The Fenton reaction is a powerful tool for studying the effects of oxidative stress on biological systems. The reaction can be used to generate hydroxyl radicals in a controlled manner, and the concentration of hydroxyl radicals can be determined using a spectrophotometer.中文回答：芬顿法测定羟自由基。

Fenton反应是一种氧化还原反应，用于生成自由基。

这种反应由哈瑞·菲顿和詹姆斯·菲顿在1894年发明。

它是通过将还原剂（如二进制铁盐）和氧气在酸性条件下添加到溶液中来实现的。

比色法测定Fenton反应产生的羟自由基是使用一种化学试剂，称为2，2'-联苯二肼，来检测羟自由基。

当羟自由基存在时，2，2'-联苯二肼会发生颜色变化，变成深蓝色。

通过测量这种颜色变化的强度，可以估算羟自由基的浓度。

Fenton反应的应用包括：
1.环境污染物的氧化：Fenton反应可以用来氧化有机污染物，如废水中的有机废物。

这种方法在净化水和废水方面很有用。

2.生物杀灭剂：Fenton反应产生的羟自由基可以杀死细菌，因此可以用作生物杀灭剂。

3.化妆品的生产：Fenton反应在化妆品的生产中也被广泛使用。

例如，Fenton反应可
以用来制造护肤霜和洗发水。

4.生物医学研究：Fenton反应在生物医学研究中也得到了应用。

例如，Fenton反应可
以用来研究自由基的生物学作用，以及自由基在疾病发展中的作用。

研究人员还可以使用Fenton反应来模拟自由基的影响，以帮助研究自由基的生物学效应。

总的来说，Fenton反应在环境净化、生物杀灭、化妆品生产和生物医学研究中都得到了广泛应用。

feton法测定清除氧自由基的能力
Fenton法是一种常用的实验方法，用于测定物质对清除氧自由基的能力。

在Fenton法中，通过加入过氧化氢(H2O2)和铁(Fe2+)离子，产生高活性的羟基自由基(OH·)，从而模拟体内的氧化应激环境。

以下是使用Fenton法测定清除氧自由基能力的步骤：
1. 准备试剂：准备过氧化氢溶液和含有铁离子的反应溶液。

2. 反应混合：将待测物质与过氧化氢溶液和铁离子溶液混合在一起。

3. 反应过程：在适当的温度和时间下进行反应，使得羟基自由基生成。

4. 制备控制组：制备一个只含有过氧化氢溶液和铁离子的对照组。

5. 反应停止：通过加入适当的试剂来停止反应。

6. 测定结果：使用适当的分析方法，如抗氧化指示剂或电子自旋共振谱仪，测定待测物质和对照组中自由基的生成量差异。

根据测定结果，可以评估待测物质对清除氧自由基的能力。

如果待测物质能够显著减少自由基的生成，表明其具有较强的清除氧自由基能力。

需要注意的是，Fenton法是一种简单直观的实验方法，但在实际应用中还需结合其他指标和实验方法来全面评估物质的抗氧化能力。

1、羟自由基清除能力测定法
试剂：1.865 mmol/L邻二氮菲、无水乙醇溶液、0.2 M的pH 7.4磷酸盐缓冲液、1.865 mmol/L的FeSO4·7H2O溶液、0.03% (v/v) 的H2O2、抗坏血酸
取1.0 mL浓度为1.865 mmol/L邻二氮菲的无水乙醇溶液于带塞试管中，分别加入浓度为0.2 M的pH 7.4磷酸盐缓冲液2 mL和1 mL不同浓度的样品，充分混匀后加入1.0 mL浓度为1.865 mmol/L的FeSO4·7H2O溶液，再次混匀后加入1.0 mL 0.03% (v/v) 的H2O2，于37℃恒温水浴，60 min后，在536 nm下分别测量各组混合溶液的吸光度值得A S，以蒸馏水代替样品作为空白组测吸光度值得A b，以蒸馏水替代H2O2作为损伤组，测其吸光度值A n，以抗坏血酸代替样品作为阳性对照，抗氧化剂的羟自由基清除率按以下公式计算：羟自由基清除率(%)=[(As-A n)/(A b-A n)] × 100。

羟基自由基检测方法的研究进展刘建伟　杨长河(南昌大学建筑工程学院,南昌330031)摘　要:羟基自由基氧化是高级氧化技术重要的机理之一,也是研究的难点之一。

本文归纳总结了测定羟基自由基的几种方法,并探讨了各种方法存在的问题,提出了新的检测方法所应具备的特点。

关键词:水处理　高级氧化技术　羟基自由基1　前言随着经济的快速发展,环境污染问题越来越严峻,传统水处理方法难以有效处理成分日益复杂的污水,水处理新技术的研究与应用成为环保领域的重要研究课题。

以臭氧氧化、光催化氧化、电化学氧化、超声技术、湿式氧化等为代表的高级氧化工艺(Advanced Oxi2dati on Pr ocess,AOP)处理污染物技术的形成,为我们提供了处理水体中污染物的新思路。

高级氧化工艺具有反应速度快、处理完全、无公害、适用范围广等优点。

这一概念由Glaze等[1]于1987年提出,被定义为能够产生羟基自由基(·OH)的氧化过程。

目前水处理中能产生·OH的高级氧化技术主要有臭氧氧化、Fent on均相催化氧化、湿式氧化、光催化氧化、电催化氧化、光电催化氧化、超声空化氧化[2]、高压脉冲放电等离子体技术[3,4]等。

随着对其反应机理研究的深入,逐渐认识到反应过程中·OH的行为的重要性。

·OH具有一个未成对电子,使其具有极强的氧化能力(2.80V),仅次于氟(2.87V),并能引发诱导产生链反应,主要通过电子转移、亲电加成、脱氢反应等途径无选择性地与各种有机化合物直接作用并最终将其降解为C O2、H2O等无害物质。

由此,准确的·OH的检测特别是在线检测已被认为是此项研究的重要方面,也是目前各种高级氧化反应机理研究的难点之一。

由于自由基是化学反应的中间体,大部分自由基寿命极短。

在水相反应体系中的·OH的寿命仅大约10-9s[5],直接对其进行检测受到仪器操作方面的限制很大,而且其存在依赖于特定的反应环境,因而关于自由基的行为方面,推测和间接证明的为多,直接测量的为少。

Fenton （芬顿）试剂与其他方法有哪些联用?为进一步提高对有机物的去除效果，以标准 Fenton 试剂为基础，通过改变和耦合反应条件，改善反应机制，得到了一系列机理相似的类 Fenton 试剂，如光-Fenton 试剂、电-Fenton 试剂和混凝-Fenton 试剂等。

（1）光Fenton 法①UV-Fenton 法当有光辐射（如紫外光、可见光）时，Fenton 试剂氧化性能有很大的改善。

UV-Fenton 法也叫光助 Fenton 法，是普通 Fenton法与 UV-H2O2两种系统的复合，与该两种系统相比，其优点在于降低了 Fe2+用量，提高了H2O2的利用率。

这是由于Fe3+和紫外线对 H2O2的催化分解存在协同效应。

该法存在的主要问题是太阳能利用率仍然不高，能耗较大，处理设备费用较高。

②UV-vis-草酸铁络合物-H2O2法当有机物浓度高时，被 Fe3+络合物所吸收的光量子数很少，且需较长的辐照时间，H2O2的投加量也随之增加，羟基自由基易被高浓度的H2O2所清除。

因而，UV-Fenton 法一般只适宜于处理中低浓度的有机废水。

当在 UV-Fenton 体系中引入光化学活性较高的物质（如含 Fe3+的草酸盐和柠檬酸盐络合物）时，可有效提高对紫外线和可见光的利用效果。

（2）电-Fenton 法光-Fenton法比普通 Fenton 法提高了对有机物的矿化程度，但仍存在光量子效率低和自动产生 H2O2机制不完善的缺点。

电 Fenton 法利用电化学法产生的 H2O2和 Fe2+作为Fenton 试剂的持续来源，与光 Fenton 法相比具有以下优点∶一是自动产生 H2O2的机制较完善;二是导致有机物降解的因素较多（除羟基自由基的氧化作用外，还有阳极氧化、电吸附等）。

由于 H2O2的成本远高于Fe2+，所以通过申化学法将自动产生 H2O2的机制引入 Fenton 体系具有很大的实际应用意义，可以说电-Fenton 法是 Fenton 法发展的一个方向。

抗氧化活性的测定(参考)——测定活性物质对羟自由基的清除率（羟自由基清除试验）采用Fenton 试剂：过氧化氢/亚铁盐。

原理：H 2O 2与亚铁离子反应生成·OH,·OH 自由基一般存活时间比较短，具有较高的反应活性。

当在反应体系中添加水杨酸，便能快速的捕捉·OH 而产生紫色化合物（2,3-二羟基苯甲酸），该有色化合物在510nm 处有较大吸收峰，测其吸光度可表示羟自由基（•OH ）的多少，吸光度与羟自由基（•OH ）的量成正比。

反应体系中若加入羟自由基（•OH ）清除剂后，被氧化的水杨酸减少，则体系颜色变浅甚至消失，吸光度变小。

操作：样品处理：蔬菜水果切分，榨汁（切分后可放在2%的盐酸或草酸溶液中护色）。

将蔬菜汁或果汁放入50ml 离心管中（如有颜色加适量活性炭或白陶土），在3000~ 4000rpm 下离心10min~ 20min 后（若样品蛋白含量较高，需加适量乙酸锌，亚铁氰化钾）快速过滤，滤液备用。

取25ml 比色管2支（样品管、空白管），分别加入5ml 1mmol/L 硫酸亚铁溶液、5ml 3mmol/L H2O2溶液，样品管中加入1ml 样品溶液，空白管中加入1ml 蒸馏水，混合均匀后用3mmol/L 水杨酸溶液定容至刻度，在37℃(0.1±℃)的恒温水中反应15min 后，用分光光度计在510nm 的波长下测定各管的吸光度。

以3mmol/L 水杨酸溶液调零。

其对•OH 自由基的清除率SA （%），可根据下式进行计算：式中：A0—不加样品的吸光度； A1—加入样品的吸光度100A0A1-A0= SA(%)⨯清除率###【以往经验，不一定全适用】：若样品不进行脱色处理，则操作如下：在3支25ml 的比色管中（样品管、空白管、样品本底管）依次加入5ml1mmol/L 硫酸亚铁溶液，空白管和样品管中各加入5ml3mmol/L H 2O 2溶液，本底管中H 2O 2溶液用蒸馏水代替。

苏州科铭生物技术有限公司羟自由基清除能力测定试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。

羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。

测定原理：H2O2/ Fe2+ 通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+，导致536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品：恒温水浴锅、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:提取液：液体100 mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体12mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体12 mL×1瓶，4℃保存。

试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。

样品的制备：1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.血清、果汁等液体样品可直接测定。

3.提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5 mg/mL。

操作步骤：1、酶标仪预热30min，调节波长至536nm。

2、工作液配制：使用之前按照每管试剂一：试剂二：试剂三=100:50:100（µL）的比例配制，用多少配多少，混匀。

计算公式:羟自由基清除率D% =（A测-A对）÷（A空-A对）×100%A空、A对、A测：空白管、对照管和测定管的吸光值。

注意事项:为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。