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兽医生物制品学第一讲绪论一、兽医生物制品学的概念1、兽医生物制品学（veterinary biologicology）以预防兽医学和生物工程学理论为基础，研究动物传染病和寄生虫病的免疫预防、诊断和治疗用生物性制品的制造理论和技术、生产工艺、制品质量检验与控制及保藏和使用方法，以增强动物机体特异性和非特异性免疫力，及时准确诊断动物疫病，并给予特异性治疗，防止疫病传播的综合性应用学科。
2、兽医生物制品(veterinary biologics)是根据免疫学原理，利用微生物、寄生虫及其代谢产物或免疫应答产物制备的一类物质，专供相应的疫病诊断、治疗或预防之用。
二、兽医生物制品学的应用：免疫预防、诊断、治疗1、免疫预防：18-19世纪,牛瘟在法国和南美引起大量牛只死亡；牛肺疫曾在亚非地区包括我国广泛流行；1956年周泰冲、袁庆志等研制成功的中国系（C系）猪瘟兔化弱毒疫苗。
口蹄疫多价灭活疫苗已被成功应用，特别是口蹄疫在欧洲的控制和扑灭、其中部分应归功于O型、A型、C型口蹄疫三价灭活疫苗的有效应用。
2、诊断：猪瘟、猪伪狂犬病、鸡新城疫及传染性法氏囊病等ELISA抗体检测试剂盒已在普遍使用。
3、治疗：有些动物传染病的免疫血清、痊愈血清和卵黄抗体等生物制品具有帮助动物机体杀死、抑制或消除病原体的致病作用。
三、生物制品的发展史（一）经验时期时间：十一世纪-1798年主要事件：1、十一世纪我国的“痘症防御法”。
2、1400年，我国甘肃牧区的“灌花”预防牛瘟。
（二）实验时期时间：1798年-1945年主要事件：1、1798年Jenner（秦纳）：天花疫苗的由来及效果的研究。
2、疫苗技术研究：1881－1885Pasteur(巴斯德）培养鸡霍乱陈旧物、高温培养炭疽、兔体传代狂犬病毒，首创弱毒疫苗。
1886Salmon首创灭活技术并培育成功灭活疫苗。
1888外毒素的脱毒技术，研制成功类毒素。
1890 德国人Behring和日本人北里（Kitasato）将白喉外毒素注射给动物，发现抗毒素。
菌种与毒种选育技术菌种和毒种是动物疫苗生产、检验与研究的基础。
自然界存在着多种多样的微生物，而且还在不断地出现新的株和型，由于生物制品用途的不同，所选择的菌种和毒种也各异。
有的需要致病力强，抗原性好的，有的则要求致病力弱仅有感染性而无病害性，免疫原性高的菌（毒）种。
1、兽医生物制品菌（毒）种标准生物制品用强弱菌毒种除毒力标准不同外，还需符合以下标准。
（1）历史清楚，流行地区，动物种毒，流行资料清楚，分离鉴定资料完整，传代、保藏、生物特性检查方法明确。
（2）生物性状明显，菌种的形态，培养特征和生化特性，血清免疫学特性明显，菌毒种人工感染动物后的临床表现，病理变化特征明显等。
（3）遗传学上相对均一与稳定：菌毒种遗传性状的改变主要表现在形态特征，毒力和反应原性等方面。
提高或保持菌毒种均一性和稳定性的方法，就是经常进行挑选，纯化，例如羊痘鸡胚化毒种在经羊体传2-4代复壮，纯化后方能用于制苗。
（4）反应原性与免疫原性优良：优良的反应原性与免疫原性是生物制品菌毒种标准的重要指标。
反应原性高，即使微量抗原进入机体即能产生强烈的免疫反应，在血清学上会出现很高的特异性。
优良的免疫原性物质能使免疫动物发生尽可能完善的免疫应答，从而获得坚强的免疫力。
通常也可通过浓缩，提纯或导入佐剂等方法提高反应原性、免疫原性不高的菌毒种制品的免疫效果与免疫反应。
（5）毒力应在规定范围内：用于制造弱毒疫苗的毒种毒力，要尽可能弱性；而其他制品用的则要强毒力毒种，但抗原性要尽可能高为准，强毒株细菌的毒性物质还含有毒素物质，在未处理前的毒力极强，对动物是不安全的，所以必要对致病力进行测定。
2、强菌（毒）种选育强菌毒种广泛用于诊断制品，抗病血清，灭活疫苗和疫苗制品的效力检验，也用于人工育成弱毒株的毒种，以及微生物学与免疫学、动物传染病等的研究。
强菌毒种常自疾病流行地区的典型病动物体内分离，在疾病流行初中期，病状病理变化典型而又未经任何治疗的病历可分离到毒力强大，抗原性良好的自然毒株，如我国的石门系猪瘟病毒，多杀性巴氏杆菌C44-1等。
兽用新生物制品管理办法［失效］发文单位：农业部发布日期：1989-9-2执行日期：1989-9-2生效日期：2004-7-1第一章总则第二章新制品的分类和命名第三章新制品的研制要求第四章新制品的审批程序第五章新制品的生产第六章附则第一章总则第一条根据《兽药管理条例》第二十二条的规定，制定本办法。
第二条兽用新生物制品（以下简称新制品）系指我国创制或首次生产的用于畜禽等动物疫病预防、治疗和诊断的生物制品。
对已批准的生物制品所使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的，亦属新制品管理范畴。
第三条凡从事新制品的研究、生产、检验、使用、监督管理的单位和人员，都必须遵守本办法。
第二章新制品的分类和命名第四条新制品按管理要求分为三类：第一类：我国创制的制品；国外仅有文献报道而未批准生产的制品。
第二类：国外已批准生产，但我国尚未生产的制品。
第三类：对我国已批准的生物制品使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的制品。
第五条新制品的命名要符合“生物制品命名原则”（见附录一）的规定。
第三章新制品的研制要求第六条新制品应经过实验室试验、田间试验、中间试制、区域试验等研究过程，取得完整的数据，提出制造及检验规程草案（有关试验数据要求见附录五）。
第七条实验室试验应包括菌（毒、虫）种的选育和鉴定，毒力、抗原性、免疫原性、稳定性、特异性试验和生产工艺，制品的安全性、效力（实验动物及使用对象动物）、免疫期和保存期试验等。
第八条田间试验应用3～5批实验室制造的新制品对生产条件下的使用对象动物进行试验，观察其安全性和效力。
第九条中间试制应按实验室生产工艺在生物药品厂或农业部认可的具备一定条件的中试车间试制5～10批（诊断制剂不少于3批）制品，定型生产工艺。
批量小且工艺复杂的诊断制剂，可在具备条件的实验室中间试制，批数同上。
第十条区域试验应用3批以上中间试制产品进行较大范围、不同品种的使用对象动物试验，进一步观察制品的安全性和效力。
兽医生物制品学教学大纲第一章绪论内容提要：本章主要讲述兽医生物制品学的概念及在预防疾病上的应用，兽医生物制品的分类、命名原则；兽医生物制品发展的历史、成就及前景。
教学目标：掌握兽用生物制品的概念、分类、应用，了解兽用生物制品的命名原则、兽医生物制品发展的方向。
计划课时：4学时1.1兽医生物制品学的概念与应用兽医生物制品的概念；兽医生物制品学的概念免疫预防；诊断；治疗1.2兽医生物制品的分类与命名原则1.3我国兽医生物制品的发展历史及前景第二章生物制品的免疫学理论内容提要：主要讲述抗原与抗体、免疫系统与免疫应答、免疫血清学技术教学目标：掌握抗原抗体的概念。
主要的微生物抗体，免疫球蛋白；理解免疫应答的机制；掌握体液免疫应答细胞免疫应答；熟悉免疫学诊断与检测的常用技术。
计划课时：16学时2.1抗原与抗体抗原的概念、构成免疫原的条件、抗原决定簇、抗原的交叉性、主要抗原微生物免疫球蛋白与抗体、Ig的分子结构、Ig的主要特性与免疫学功能2.2免疫系统与免疫应答免疫器官、免疫细胞、细胞因子免疫应答的基本过程、体液免疫应答、细胞免疫应答、免疫耐受、免疫应答的机制2.3免疫血清学技术第三章灭活剂、保护剂与免疫佐剂内容提要：介绍灭活剂、保护剂、免疫佐剂、新型免疫佐剂教学目标：掌握灭活剂、佐剂、保护剂的概念、影响灭活剂作用的因素，理解灭活剂、佐剂、保护剂在兽用生物制品生产中的作用。
计划学时:6学时3.1灭活剂灭火与灭活剂的概念、灭火的类型、甲醛、烷化剂、苯酚、结晶紫、β-丙酰内酯3.2保护剂做成、作用机理不同微生物适用的保护剂、兽医生物制品常用的保护剂3.3免疫佐剂铝盐类佐剂、油乳佐剂、蜂胶佐剂3.4新型免疫佐剂概念与分类、作用特点、应用、重要的细胞因子3.4.2 CpGDNA概念及特点、免疫学活性、佐剂效应与应用前景免疫刺激复合物、脂质体佐剂、MF59佐剂第四章兽医生物制品生产的基本技术内容提要：本章主要讲述菌（毒）种选育技术，细菌培养、病毒增值技术，疫苗制造流程，诊断、治疗制剂的制造技术以及冷冻真空干燥，干燥技术。
兽用新生物制品管理办法文章属性•【制定机关】农业部(已撤销)•【公布日期】1989.09.02•【文号】农业部令第五号•【施行日期】1989.09.02•【效力等级】部门规章•【时效性】失效•【主题分类】畜牧业正文*注：本篇法规已被《农业部关于废止农业行政许可规章和规范性文件的决定》（发布日期：2004年7月1日实施日期：2004年11月1日）废止兽用新生物制品管理办法（一九八九年九月二日农业部令第五号发布）第一章总则第一条根据《兽药管理条例》第二十二条的规定，制定本办法。
第二条兽用新生物制品（以下简称新制品）系指我国创制或首次生产的用于畜禽等动物疫病预防、治疗和诊断的生物制品。
对已批准的生物制品所使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的，亦属新制品管理范畴。
第三条凡从事新制品的研究、生产、检验、使用、监督管理的单位和人员，都必须遵守本办法。
第二章新制品的分类和命名第四条新制品按管理要求分为三类：第一类：我国创制的制品；国外仅有文献报道而未批准生产的制品。
第二类：国外已批准生产，但我国尚未生产的制品。
第三类：对我国已批准的生物制品使用的菌（毒、虫）种和生产工艺有根本改进的制品。
第五条新制品的命名要符合“生物制品命名原则”（见附件一）的规定。
第三章新制品的研制要求第六条新制品应经过实验室试验、田间试验、中间试验、区域试验等研究过程，取得完整的数据，提出制造及检验规程草案（有关试验数据要求见附件五）。
第七条实验室试验应包括菌（毒、虫）种的选育和鉴定，毒力、抗原性、免疫原性、稳定性、特异性试验和生产工艺，制品的安全性、效力（实验动物及使用对象动物）、免疫期和保存期试验等。
第八条田间试验应用3－5批实验室制造的新制品对生产条件下的使用对象动物进行试验，观察其安全性和效力。
第九条中间试制应按实验室生产工艺在生物药品厂或农业部认可的具备一定条件的中试车间试制5－10批（诊断制剂不少于3批）制品，定型生产工艺。
兽医生物制品生产的基本技术兽医生物制品生产的基本技术【知识目标】·熟悉① 兽医生物制品菌(毒)种的概念及保存；② 病毒增殖方法；③ 实验动物的分类及特点；④ 实验动物的概念；⑤ 实验动物的正确选择。
·理解① 细菌的生长繁殖规律；② 病毒的组织细胞培养。
·掌握① 细菌培养方法及培养基的制备；② 禽胚培养技术；③ 掌握实验动物的捕捉、保定和采血技术。
·了解① 兽医生物制品菌种、毒种的分类及选育与鉴定；② 细菌生长繁殖的营养要求；③ 实验动物的繁育与生产管理。
【能力目标】·能进行细菌培养、禽胚培养等操作；·能应用动物实验技术。
第一节菌种与毒种选育技术一、菌(毒)种的概念与分类菌(毒)种是国家的重要生物资源，世界各国对这项资源都极为重视，并设置各种专业性保藏机构，现在不少国家的菌种与毒种中心都采用计算机进行管理。
我国于1980年成立了兽医微生物菌种保藏管理中心，设在中国兽药监察所(简称中监所)，专门从事兽医微生物菌种的收集、保藏、管理、交流和供应。
(一)、菌(毒)种的概念兽医生物制品的菌种与毒种是指应用于兽医生物制品生产、检定和研究的细菌菌种、病毒毒种以及分类地位在原虫以下的生物种，主要指兽医生物制品生产、检定用的菌种与毒种。
(二)、菌(毒)种的分类兽医生物制品用的菌(毒)种，按其存兽医生物制品生产、检定过程中的用途可分为四类：1．生产用的菌(毒)种(1) 直接生产用的菌(毒)种生物秀—专心做生物！ｗｗｗ．ｂｂｉｏｏ．ｃｏｍ易生物－领先的生物医药商务平台ｗｗｗ．ｅｂｉｏｅ．ｃｏｍ生物秀论坛－学术交流，资源共享，互助社区ｗｗｗ．ｂｂｉｏｏ．ｃｏｍ／ｂｂｓ／直接用本微生物或其产物制备疫苗、类毒素、诊断抗原等生物制品，参与制品的加工与处理，如制备新城疫油佐剂火活疫苗的新城疫病毒，制造破伤风类毒素的破伤风棱菌，生产鸡白痢全血玻板凝集抗原的鸡白痢沙门氏菌等。
兽用生物制品菌（毒、虫）种种子批建立试验技术指导原则1 目的为兽用新生物制品研制人员进行兽用生物制品菌（毒、虫）种子批建立及各级种子鉴定提供原则性指导。
2 背景《兽药注册办法》和农业部第442号公告规定，兽用生物制品的制造应以种子批系统为基础。
种子批分三级：原始种子、基础种子和生产种子。
只有按照规定项目和方法进行检验证明合格的种子，方可用于生产兽用生物制品。
3 定义3.1 原始种子具有一定数量、背景明确、组成均一、经系统鉴定免疫原性和繁殖特性良好、生物学特性和鉴别特征明确、纯净的病毒（细菌、虫）株。
3.2 基础种子由原始种子制备、处于规定代次水平、一定数量、组成均一、经系统鉴定符合有关规定的活病毒（菌体、虫）培养物。
3.3 生产种子由基础种子制备、处于规定代次范围内、经鉴定符合有关规定的活病毒（菌体、虫）培养物。
4 种子批的建立4.1 原始种子批的建立选用某一菌（毒、虫）株用于兽用生物制品研制和生产后，即应建立原始种子批，以确保在制品的持续生产期内，能充分供应质量均一的种子。
原始种子批建立基本原则为对选定的菌（毒、虫）株进行纯培养，并将培养物分成一定数量、装量和成分一致的小包装（如安瓿），于液氮中或其他适宜条件下保存。
对原始种子批要按照有关要求做系统鉴定。
通常情况下，应对原始种子的繁殖或培养特性、免疫原性、血清学特性、鉴别特征和纯净性进行鉴定。
4.2 基础种子批的建立4.2.1 基础种子由原始种子经适当方式传代扩增而来，增殖到一定数量后，将相同代次的所有培养物均匀混合成一批，定量分装（如安瓿），保存于液氮中或其他适宜条件下备用。
按照规定项目和方法进行系统鉴定合格后，方可作为基础种子使用。
基础种子批应达到足够的规模，以便能够保证相当长时间内的生产需要。
4.2.2 基础种子代次的确定通常情况下，将基础种子传代至规定最高代次以上第3代，取不同代次水平的培养物进行含量、免疫原性试验，考察其繁殖特性和免疫原性的稳定性。
《生物制品学》复习思考题
一、名词概念
兽医生物制品疫苗诊断液益生素类毒素副免疫制品弱毒疫苗灭活疫苗基因工程疫苗重组亚单位疫苗活载体疫苗基因缺失疫苗核酸疫苗转基因植物疫苗多肽疫苗单价疫苗多价疫苗多联疫苗同源疫苗异源疫苗抗病血清卵黄抗体单克隆抗体
二、思考题
1.兽医生物制品的作用是什么？如何分类?
2.生物制品制造中抗原灭活和致弱的含义是什么?抗原灭活的方法有哪
些?影响灭活的因素应哪些？说出几种常用灭活剂及其使用浓度。
3.冻干保护剂的组成及作用是什么?说出几种兽医生物制品保护剂。
4.免疫佐剂的作用是什么？什么情况下使用免疫佐剂？说出3~4种常用
免疫佐剂;
5.兽医生物制品用菌（毒）种的标准是什么?
6.强菌（毒)种筛选的程序和内容是什么？什么时候使用强菌(毒)种？
7.弱毒（菌)株选育的途径和方法有哪些？
8.细菌规模化培养的方法有那些?影响因素有哪些?
9.病毒增殖技术有哪几种?影响因素有哪些？
10.病毒接种鸡胚的途径有哪几种？影响鸡胚增殖病毒的因素有哪些？
11.细胞培养方法有哪些？细胞培养要素有哪些？
12.细胞培养常见的污染因素有哪些?如何判断和控制这些污染?
13.高免血清和卵黄抗体的制备过程;
14.高免血清的作用特点和使用注意事项；
15.细菌疫苗、类毒素的制备工艺流程；
16.病毒弱毒疫苗、灭活疫苗的制备工艺流程;
17.杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本过程;单克隆抗体的应用？
18.生物制品半成品和成品质量检验主要包括哪些内容?
19.什么叫诊断用生物制品？对诊断用生物制品的要求是什么？
20.基因工程疫苗与传统疫苗相比有何优点？。
