环境微生物学-实验六 微生物大小测定和计数

微生物的大小及数量的测定一、实验目的1.了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。

2.学习并把握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。

3.了解血球计数板的结构，学习并把握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。

二、实验原理1.微生物大小测定原理微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。

由于菌体特殊小、只能在显微镜下来测量。

用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

（1）目镜测微尺〔图1〕目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中心把5mm长度刻成50等分，或把10mm长度刻成100等分。

测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

图1目镜测微尺图2镜台测微尺（2）镜台测微尺〔图2〕镜台测微尺是中心局部刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm〔〕，是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要通过物镜和目镜的两次放大成象进进视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数确实是根基细胞的真实大小，因此用镜台测微尺的长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移往镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。

2.血球计数板测定微生物数量的原理镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。

菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采纳血球计数板；一般细菌那么采纳彼得罗夫·霍泽(PetroffHausser)细菌计数板。

微生物的大小测定与数量的测定一、实验目的1．学习了解测微尺的结构，掌握测定微生物大小的方法。

2．观察酵母菌的形态，掌握鉴别死活酵母菌的方法。

3．学习了解血球计数板的结构，掌握微生物数量测定的方法。

二、实验内容1．在低倍镜和高倍镜下求出目镜测微尺的校正值。

（1）目镜测微尺和镜台测微尺目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片的中央刻有一小尺，它是在 5 毫米内作50 等分刻制的，每一等份为0.1 毫米。

另一规格是 5 毫米作100 等分，每等分为0.05毫米。

镜台测微尺是刻在载玻片中央的小尺，它是在1 毫米内作100 等分刻成的，每等分10 微米。

（2）目镜测微尺校正的方法将镜台测微尺上面的透镜片取下，把目镜测微尺放在光阑上，刻度朝下。

把镜台测微尺置于载物台上，用低倍物镜检视，使测微尺位于视野中央。

注意区分视野内两把尺哪个是目镜测微尺，哪个是镜台测微尺。

利用推进器或转动目镜使两尺的第一条线（0 线）互相重合，然后找出另一条重合线。

如重合线较多选取距0 线最远的重合线。

记下两条重合线之间两尺的刻度，依公式算出目镜测微尺的校正值。

目镜测微尺校正值（每刻度微米数）= 两重叠刻度间镜台测微尺格数×10两重叠刻度间目镜测微尺格数2．用美兰水浸片法观察酿酒酵母（saccharomyces cerevisiac）的形态，注意出芽繁殖和死活酵母菌的染色形态，并测量大小。

3．用血球板计算黑曲霉孢子的数量。

（1）血球计数板3．用血球板计算黑曲霉孢子的数量。

（1）血球计数板利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常见的微生物计总数的方法。

因为计数板载片和盖片间的容积一定，所以可以根据显微镜下观察到的微生物数目来计算单位体积内微生物总数。

血球计数板是一只特制载玻片。

载片上有两个方格网，每一方格网共分九个大方格，其中间的一个大方格用来做微生物计数，所以又称为计数室。

计数室的刻度一般有两种，一种是每个大方格分成16 个中方格，每中方格又分成25个小方格。

微生物大小的测定及显微镜直接计数法微生物的大小测定与显微计数生32 程雨婧 2013012406一、实验目的1. 学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。

2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。

3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、实验原理1. 显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。

镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。

用于校正目镜测微尺的长度.目镜测微尺的中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度(见图1),再以后作为测量微生物细胞的长度。

2. 球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表示(μm)图一:测微尺的校正3. 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。

中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。

计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

计数区由400个小方格组成。

每个大方格边长为1mm，其面2积为lmm，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体3积为0.1mm。

使用血球计数板计数时，通常测定四或五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以16或25，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。

设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则: A441mL菌液中的总菌数= ×25×10×B=5×10×A?B (25个中格) 5图二:血细胞计数室构造三、实验器材1. 菌种:啤酒酵母2. 器材:普通光学显微镜、目镜测微尺镜头、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、试管、无菌水、血细胞计数板、计数器、吸管、生理盐水、移液器。

山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康一、目的要求1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。

2.增强微生物细胞大小的感性认识。

3. 明确血细胞计数板计数的原理。

4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、基本原理一）微生物大小的测定1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。

微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。

2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每格长0.01mm（即10µm）。

镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于矫正目镜测微尺每格的相对长度。

3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。

测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。

因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。

4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。

如金黄色葡萄球菌直径约为0.8µm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3µm。

二）微生物数量的测定1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。

显微镜直接计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

微生物大小与数量的测定实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握使用显微镜测量微生物大小的方法，以及学会运用血球计数板对微生物数量进行测定。

通过实验操作和数据处理，深入了解微生物的形态特征和种群密度，为后续的微生物学研究打下基础。

二、实验原理（一）微生物大小的测定微生物细胞的大小是微生物的基本特征之一。

使用显微镜测微尺可以较为准确地测量微生物细胞的长度、宽度和直径等参数。

显微镜测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形小玻片，上面刻有刻度；镜台测微尺是一块特制的载玻片，中央有精确的刻度，用于校正目镜测微尺。

（二）微生物数量的测定血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的工具。

它由一块特制的厚玻璃片制成，玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面各刻有一个方格网。

方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。

但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是一定的。

因此，在一定体积的菌液中，通过计算微生物在计数室中的数量，就可以换算出菌液中微生物的数量。

三、实验材料与仪器（一）材料枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的菌悬液。

（二）仪器显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、盖玻片、滴管、擦镜纸、吸水纸等。

四、实验步骤（一）微生物大小的测定1、安装目镜测微尺将目镜测微尺装入目镜的隔板上，注意有刻度的一面朝下。

2、校正目镜测微尺（1）将镜台测微尺置于载物台上，先用低倍镜观察，找到镜台测微尺的刻度线。

（2）移动镜台测微尺，使镜台测微尺与目镜测微尺的刻度线平行，并使两者的“0”刻度线重合。

（3）换用高倍镜观察，找出两尺再次重合的刻度线。

分别记录目镜测微尺和镜台测微尺在重合线段内各自的格数。

姓名 王海宽 班级 12级生物基地 学号 201200140099 同组者：孙梦杰、袁家奇、肖荷 科目 微生物学实验 题目 微生物的大小测定与显微计数 组别 周三第六大组第 1 页 共3 页 微生物实验报告·**微生物的大小测定与显微计数一．实验目的 1.学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。

2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。

3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二．实验原理1. 测微尺的构造：显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成(1) 目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在 5mm 刻尺上分 50 份。

目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。

(2) 镜台测微尺为一专用的载玻片，中央有精确等分线将长为 1mm 的直线等分成 100 个小格，每格长 10μm ，专用于校正目镜测微尺。

(3) 球菌用直径表示大小；杆菌用宽和长来表示。

本实验要分别测量酵母菌和枯草芽孢杆菌的大小，酵母菌的大小以直径来表示，枯草芽孢杆菌的大小以菌体的宽和长来表示。

(4) 目镜测微尺每格长度（μm ）=(两重合线间镜台测微尺的格数×10)/两重合线间目镜测微尺的格数。

2. 微生物数量的测定(1) 显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法.通常使用的计菌器是血球计数板。

(2) 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。

中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。

此实验用的血球计数板，一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格（也有的计数区被分成16个中格，每个中格被分成25个小格），总共400个小方格。

每个计数区边长为1mm ，面积1mm 2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm ，所以计数室的容积为0.1mm 3。

实验五微生物大小的测定实验教学课题：实验五、微生物大小的测定实验教学目的：1 学会测微尺的使用和计算方法2 学会球菌和杆菌大小的测定实验教学重点：测微尺的校正和使用方法。

实验教学难点：测微尺的校正原理。

实验用品：1镜台测微尺、目镜测微尺；2 菌种：酵母菌和大肠杆菌菌种3试剂：革兰氏染液（结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液）4器材：目镜测微尺、镜台测微尺、显微镜、擦镜纸、香柏油、二甲苯实验教学方法与手段：板书讲解+演示实验＋学生动手实验教学课时：4课时教学过程：一、实验原理微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。

由于菌体很小，只能在显微镜下测量。

用来测量微生物细胞大小的工具有目镜微尺和镜台测微尺。

镜台测微尺是中央部分有精确等分线的载玻片。

一般将1mm等分为100格（或2mm 等分为200格），每格长度等于0.1mm。

是专用于校正目镜测微尺每格长度的。

目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，有等分50小格和100小格两种，每5小格间有一长线相隔。

由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同，因此，目镜测微尺不能直接用测量微生物的大小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才用来测量微生物的大小。

二、实验材料和用具四、操作步骤（一）目镜测微尺的校正1．放目镜测微尺：取出目镜，旋开接目透镜，将目镜测微尺放在目镜的光阑上（有刻度一面向下）然后旋上接目透镜，将目镜插入镜筒。

2．放置镜台测微尺：将镜台测微尺放在镜台上（刻度面向上）通过调焦看清镜台测微尺的刻度。

3．校准目镜测微尺的长度：用低倍镜观察，移动镜台测微尺和转动目镜测微尺，使两者刻度相平行，并使两者间某一段的起、止线完全重合，然后分别数出两条一重合线之间的格数，即可求出目镜测微尺每小格的实际长度（目镜测微尺和镜台测微尺两个重合点的距离愈长，所测得的数值愈准确）。

微生物大小及数量的测定微生物大小及数量的测定一、实验目的：1、学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法2、掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识3、学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法二、实验器材1、菌种：枯草芽孢杆菌、酿酒酵母2、溶液和试剂香柏油、二甲苯、美兰染液3、仪器和其他用品目镜测微尺、镜台测微尺、普通光学显微镜、擦镜纸、软布、血细胞计数板、凹载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、试管、吸管、移液枪三、实验原理1、测微尺：微生物大小的测定，需要借助于特殊的测量工具——显微测微尺，它包括目镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。

镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为是10个小格，共100个小格，每个小格长度为，即10μm。

刻线外有一直径为φ3，粗线为的圆，以便调焦时寻找线条。

刻线上还覆盖有厚度为的盖玻片，可保护刻线久用而不受损伤。

镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每一格的相对长度。

目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50个小格和100个小格两种。

测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。

于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不一样，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。

因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。

球菌用直径表示大小，杆菌用长和宽来表示大小2、显微镜计数：显微镜计数是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有确定容积的载玻片上，于显微镜下直接观察、计数的方法。

目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞悬液的计数，基本原理相同。

微生物学实验报告姓名年级班级组别一组同组者科目微生物题目微生物大小和数量的测定仪器编号一、目的要求1．学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。

2．了解血球计数板的构造、明确其计数原理。

3．学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。

二、基本原理l．显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。

镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。

用于校正目镜测微尺没小哥的长度.目镜测微尺其中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度,再以后作为测量微生物细胞的长度.目镜测微尺每格长度（μm）=（两重合线间镜台测微尺格数x10）/两重合线间目镜测微尺格数2.球菌用直径表示大小；杆菌用宽和长来表示μm图一：测微尺的校正3．显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板或Hawksley计数板。

三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。

中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。

计数区的刻度有两种：一种是计数区（大方格）分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。

计数区由400个小方格组成。

每个大方格边长为1mm，其面积为lmm2，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3。