液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)

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《液相色谱分析法》课件

液相色谱分析法
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01 添加目录项标题 03 液相色谱分析法的
技术原理
05 液相色谱分析法的优缺点
02 液相色谱分析法的概述
04 液相色谱分析法的应用实例
06
液相色谱分析法的发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号进行处理，得到样品的色谱图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定量结果，对样品进行分析和鉴定
Part Four
液相色谱分析法的应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱中分离，根据不同组分的性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检测器时，检测器对样品进行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்

液质联用ppt课件

14
HPLC分离原理
最广的色谱法是反相色谱主要用于分离非极性至中等极性的各类分子型
化合物，因为键合相表面的官能团不流失，溶剂的极性可以在很大范围内调整，因此应用范围很宽。十八烷基（C18）化学键合相是最常用的非极性键合相，反相键合相表面具有非极性烷基官能团，及未被取代的硅醇基。硅醇基具有吸附性能，剩余硅醇基的多寡，视覆盖率而定。因此，分离机制比较复杂。
很大，相应源参数也应该改变，所以恒定比例流动相能满足分离分析要求时，尽量不用梯度，尤其定量分析时
39
流动相的选择
流动相中加入甲酸、乙酸等可提高正离子化效率
(**)液质联用中，流动相有时需要加入缓冲盐 A CH3COONH4 B HCOONH4 C KH2PO3 是否加酸不是绝对的，具体应根据LC的分离情
18
离子化的方法(Ionisation Methods)
电子轰击电离 EI 化学离子化 CI 场电离，场解吸 FD 快原子轰击 FAB 基质辅助激光解析电离电喷雾电离 ESI 大气压化学电离 APCI
MALDI
19
电喷雾电离源 Electrospray Ionization (ESI)
37
仪器测试条件的选择
液相色谱条件质谱条件
38
HPLC条件的选择(流动相)
根据化合物类型选择流动相组成，甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙腈-水（**DMF、DMSO、 DCSO、THF ）
某些化合物只有某种流动相体系才出峰一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈好
些梯度的设定：梯度变化太快对离子化效率影响
+ ++ ++ +

液质联用中质谱条件的优化策略(PPT42页)

合适的液相色谱平台
• 能提供一个连续、稳定的液流环境 • 真空脱气设备 • 系统的死体积尽可能小，减少管路的长度 • 输液泵的设计能适用于微径柱的要求 • 二极管阵列检测器的池体积与质谱仪匹配 • 必要的液相色谱辅助配件 • 必要的液相色谱与质谱仪的软件操作平台
合适的液相色谱柱
• 柱内径：2.1mm • 柱长度：
Area Nortriptyline Propranolol Tetracycline
Caffeine Tryptophan Paracetamol
Nicotinic acid
Salicylic acid
Compound
Solution Chemistry Effects on Positive Ion ESI-MS of Leu-Enkephalin
– Start with acetonitrile
01094
Useful pH Ranges for Volatile Buffers
Buffers normally used in LC/MS :
Buffer
Formate Acetate
??? Ammonia Diethylamine Triethylamine
1 .E+ 07 1 .E+ 07 1 .E+ 07 8 .E+ 06 6 .E+ 06 4 .E+ 06 2 .E+ 06 0 .E+ 00
Variation of pe ak ar ea with pH in positive ESI
0. 1%f o rmic pH 3 pH 5 pH 8 pH 9
0.005% TFA
• A significant increase in sensitivity of peptides was observed for most peptides analyzed using 5% acetic acid rather than TFA.

[课件]液质联用缺点及解决办法,药物分析PPT

残留效应是指在高浓度的样品进样分析后，在进样系统中
现在要检测一个化合物，但是在这个过程中受到另个化合物的影响。影响物质比目标药物的分子量小1，而且它的浓度是被监测的目标药物的20倍，以0.1%的甲酸水和甲酸乙腈溶液为流动相分析时，保留时间非常接近，跑了20min也没有分开。
二、多种物质的同时测定
对于复方制剂，当存在两种或多种药物的剂量相差悬殊的情况时，通常会导致各个待测物在生物体液中的浓度相差巨大，因而符合它们各自药代动力学研究的药物浓度的线性范围也相差甚远。此时需要对各个待测物的质谱响应、线性范围和灵敏度三者进行综合考虑。
虽然也有研究者尝试采用曲线回归法校正浓度与响应之间的非线性关系, 但是该法的耐用性仍然是个未知数。若不进行浓缩处理甚至为了保证良好的线性而稀释待测成分, 血药浓度低的成分的质谱响应就会降低，可能不能满足药动学研究所需要达到的灵敏度。
加入添加剂
在流动相中加入少量添加剂，如甲酸、乙酸、醋酸铵等，能够有效地降低基质带来的背景干扰
四、专属性结果的可靠性
虽然目前质谱的选择性是其他检测器难以比拟的，但高通量 LC-MS 分析有时会导致假阳性结果的出现，进而降低测定结果的可靠性。特别是当待测样品中存在原型药物的 II相代谢物时，假阳性结果出现的几率会更高。这是因为这类代谢物容易在离子源内发生中性丢失反应形成与母体药物相同的离子，从而影响对后者的准确定量质谱的专属性有时还会受到其自身分辨力的限制，尤其是当监测对象为单个离子或是伪离子对时，这种现象更为明显。
改善色谱峰形
内源性基质造成的竞争性离子化抑源自往往具有浓度依赖性，良好的色谱峰形可以保证待测物流出色谱柱时尽可能得到富集和浓缩，进而降低基质效应产生的可能性

液质联用讲座.ppt

• LC可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物、热不稳定化合物和大分子化合物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等)，分析范围广，而且不需衍生化步骤。
• MS是强有力的结构解析工具，能为结构定性提供较多的信息，作为理想的色谱检测器，不仅特异性强，而且具有极高的检测灵敏度。自1983年McLaffeny等开发串联质谱技术(MS／MS)以来，经过短短十几年的发展，串联质谱已成为一种成熟的技术，在许多领域发挥了巨大作用。串联质谱法是指质量分离的质谱检测技术，在单极质谱给出化合物相对分子量的信息后，对准分子离子进行多级裂解，进而获得丰富的化合物碎片信息，确认目标化合物，对目标化合物进行定量等，有分离、结构解析同步完成的特点，能直接分析混合物组分，有高度的选择性和可靠性，其检测水平可以达到pg级
用MS2质量分析器扫描指定母离子的子离子碎片，所得到的质谱图只能是由指定母离经碰撞产生。
子离子扫描，pruduct ion scan
• 子离子扫描可以得到母离子的碎片信息。这些信息可以帮助操作者了解母离子的结构信息，区别几种m/z相同的母离子，降低假阳性率。子离子扫描的作用是：
• 通过母离子碎片种类和强度的差异来区别 m/z相同的母离子
• 扫描类型选择
• 全扫描(Full Scan) • 子离子扫描(Daughter Scan) • 母离子扫描(Parent Scan) • 中性碎片丢失扫描(Constant Neutral Loss Scan) • 选择离子监测(SIR) • 多反应监测(MRM)
全扫描
• 全扫描用于检测离子源产生的离子流中，各种离子的m/z和强度。从全扫描得到的信息可以知道目前样品中的组分状态。
仪器用途
该系统是Waters-Micromass公司在2005年推出的一款最新高质量三重四极杆串联液质联用仪，它能广泛应用于医药、农药、生物化学、食品安全、环保、生命科学等领域，它是解决不易挥发、热不稳定、大分子量及宽极性范围等样品分析难题的强有力工具。通过高灵敏度的串联质谱系统，结合高效液相色谱的分离或直接进样可以详细地研究未知组分的结构。从分子水平上准确阐述样品的化学成分，也十分适合新产品、新配方的开发研制，同时可准确和深入地了解各种化合物的实质性差异，并实时定性、定量地描述样品中的复杂组分的产

液质联用PPT

1. 质谱基本知识
1.4.4 质谱仪器类型-四极杆/线性离子阱质量分析器
Ion Accumulation (patented) Fragment Ion Generation
Q0
Q1
Q2
Q3
Ion trap MS Mass Selection
1、在串联四极杆的基础上，将Q3设计成线性离子阱 2、Q2中实现第一次的碎裂，进入Q3分析 ——空间串联 3、Q3的离子阱功能，可以进一步进行Frag/scan ，MSn－时间串联
2. 联用技术
2.2 液相色谱/质谱联用
• 高效液相色谱(HPLC)是分离化合物范围最广，准确度高，对化合物破坏性小的快速分离方法，特别适用于有机生物分子的分离。 • 质谱仪(MS)是灵敏度很高，对未知化合物的结构分析定性准确，对被测定化合物和相应标准样品的了解要求较低的定性手段。
2. 联用技术
2.2 .1 LC/MS连接时的主要问题难挥发和/或热不稳定被分析物的离子化；流速不兼容：LC的传统柱流速1ml/min.或更高，而MS需在高真空条件下工作；流动相不兼容：LC分离时经常加不挥发性的缓冲液、添加剂等。
2. 联用技术
难挥发和/或热不稳定被分析物的离子化： ——应用软电离技术
☺ 快原子轰击(FAB)； ☺ 热喷雾(TS)； ☺ 电喷雾(ESI)； ☺ 基质辅助激光解吸离子化(MALDI)。
2. 联用技术
流动相不兼容：
☺ 尽量不使用不挥发性的流动相； ☺ 用挥发性溶剂置换不挥发性的缓冲液； ☺ 使用柱上连续流动液－液萃取技术； ☺ 利用双柱，进行相切换； ☺ 利用微膜离子抑制系统。
5. LC/MS/MS的应用
5.1 新生儿疾病的筛查

(完整版)液相色谱-质谱(LC-MS)联用的原理及应用ppt课件

? 其中ESI，APCI，APPI统称大气压电离 (API)
实验室现有的离子源:
? ESI电喷雾电离源 ? APCI大气压化学电离源
电喷雾（ESI）的特点
? 通常小分子得到[M+H]+ ]+,[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子，生物大分子产生多电荷离子，由于质谱仪测定质 / 荷比，因此质量范围只有几千质量数的质谱仪可测定质量数十几万的生物大分子。
100 90 80 70 60 50 40
30 20 10
0
1.0
2.0质量色谱图3.0
4.0
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
1.0
2.0
总3离.0 子流图4.0
5.0
6.0
准分子离子:
? 指与分子存在简单关系的离子，通过它可以确定分子量 .液质中最常见的准分子离子峰是[M+H]+ 或[M-H]- .
电喷雾与大气压化学电离的比较
? 电离机理：电喷雾采用离子蒸发，而 APCI电离是高压放电发生了质子转移而生成 [M＋H]+或[M-H]离子。
r
100
147255.00
Reconst uct of act
147415.00 147096.00
Int Ant ibod1y.15e2
50 147575.00
147224.00
146892.00
147532.00 147729.00
同位素离子
? 由元素的重同位素构成的离子称为同位素离子 . ? 各种元素的同位素 ,基本上按照其在自然界的
? 不同类型有机物有不同的裂解方式 ? 相同类型有机物有相同的裂解方式 ,只是质量

溶液的调配与分离PPT课件(初中科学)

配置一定质量分数的溶液
（1）配制溶液的一般步骤：
•计算：（固体计算质量、液体计算体积）
•称量：（固体秤质量、液体量体积）
•溶解：（在烧杯中溶解，用玻璃棒搅拌，冷却后装瓶，并贴上标签）
（2）需要的仪器：托盘天平、药匙、量筒、胶头滴管、烧杯、玻璃杯
溶解度与溶质质量分数的换算
溶解度与溶质质量分数的换算，是对一定温度下的饱和溶液而
1、溶解度曲线表示的意义：
(1)曲线上的点，表示某物质在某一温度下的溶解度。
(2)曲线的走向表示某物质的溶解度随温度的变化情况。
(3)两条溶解度曲线的交点表示两种溶质在某一温度下有相同的溶解度。
2、应用
(1)查找某一温度下某物质的溶解度。
(2)比较某一温度下两种物质溶解度的大小。
物质溶解性的等级
20℃时的溶解
大于10克
1－10克
0．01－1克
小于0.01克
易溶
可溶
微溶
难溶
度
溶解性等级
所谓的易溶、可溶、微溶、难溶时相对的。自然界没有绝对不溶解。习
惯上称作“不溶”的物质，只是溶解度很小，一般忽略不计而已。
溶解度与温度的关系
①．大多数固体物质的溶解度随着温度的升高而增大，如硝酸钾等；

某溶液的密度是1.2g/cm3，实验测得每100ml该溶液中含溶质
24g，求该溶液的溶质质量分数？
溶液稀释和浓缩的计算
（1）.溶液稀释就是往浓溶液中加溶剂变成稀溶液的过程。
（2）.溶液稀释问题的特点是:稀释前后溶液中溶质质量保持不变，即:
浓溶液的质量×浓溶液中溶质的质量分数＝稀溶液的质量×稀溶液中
⑤晶种的选择是关键，要获得形状完整的晶种，应使用纯净的硫酸铜，

液质联用中质谱条件的优化策略共44页文档

60、人民的幸福是至高无个的法。— —西塞罗
谢谢！
36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
液质联用中质谱条件的优化策略
56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们就不再配享受自由了。—— 毕达哥拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的利益，而是为了公共的利益；一部分靠有害的强制，一部分靠榜样的效力。 ——格老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话，那么法律作为一件无用之物自己就会消灭。— —洛克
39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
40、学而不思则罔，思而不学则殆。——孔子

液质联用仪原理及操作注意事项安捷伦ppt课件

LDD
高效液相色谱质谱联用（HPLC/MS）是指高效液相色谱与质谱串联的技术，是将应用范围极广的高效液相分离方法与灵敏、专属、能够提供分子量和结构信息的质谱法结合起来的一种现代分析技术。
HPLC-MS主要由HPLC仪、接口离子源（LC与MS连接装置）、质量分析器、真空系统、计算机数据处理系统组成。
流动相
•流动相每两天至少更换
过膜处理
缓冲盐的使用
1
•LC/MS中不能使用磷酸盐、硼酸盐、硫酸盐、三氟乙酸、三乙胺，易残留，会形成强离子对，产生离子抑制，降低灵敏度
2
•溶剂的截止波长：乙腈 /190nm,甲醇/210nm, 水/190nm.一般分析时样品检测波长应至少大于所用溶剂的截止波长20nm 以上，否则背景较高。
1ms2scan确定待测物的分子离子102ms2sim优化待测物的fragmentor11productionscan确定定性定量离子12mrm优化子离子碰撞能13?流动相以及样品必须过膜有机滤膜水系膜?流动相应超声脱气1020min否则压力易波动装有在线脱气机影响会小一些?流动相每两天至少更换过膜处理?反相常用流动相为甲醇乙腈水以及缓冲盐溶液
不能使用的溶剂添加剂
3
溶剂截止波长
4
三、液质操作系统的注意事项
色谱柱根据键合相的不同可分为氨基柱、C8、 C18、C30柱等等
反相色谱柱
1
2
3
色谱柱使用完要冲洗，特别是使用缓冲盐分析样品时，原则上用于冲洗的流动相中水的比例应该等于或高于分析时所用流动相中水的比例。严禁用纯水冲洗柱子，易造成固定相的流失和键合相的坍塌。（特殊柱子除外，如T3柱，因具有三相键合相，所以高耐水性，用于分析丙酸、EDTA、三聚氰胺等）

液相色谱质谱HPLCMS联用 ppt课件

2020/11/8
液相色谱质谱HPLCMS联用
19
the number
of MRMs at
any time are
many fewer
than with
time
segment
methods,
allowing
much faster
MS c2y0c2l0e/11/8
液相色谱质谱HPLCMS联用
20
3. 电离影响因素与溶液化学
表面活性剂影响去溶剂化
Agilent LC-MS/MS 6420
1
内容
1. LC-MS/MS的基本原理 2. 方法开发流程及优化 3. 电离影响因素与溶液化学 4. 注意事项
2020/11/8
液相色谱质谱HPLCMS联用
2
精品资料
1. LC-MS/MS的基本原理
2020/11/8
液相色谱质谱HPLCMS联用
4
ESI ion source
antibiotics等
•
酸性流动相
负离子ES模式
•
适合于酸性样品，acids，hydroxyls，含强负电性基团
•
有杂原子，可失去质子。如COOH、OH
•
中性偏碱性流动相
可正可负
•
比较灵敏度
2020/11/8
液相色谱质谱HPLCMS联用
22
溶剂匹配
反相溶剂：甲醇、乙腈、水
兼容液质的盐（常用）：甲酸、乙酸(0.01-1%)、甲酸铵、乙酸铵(小于20
溶液的化学性质
•
流动相
•
被分析物
•
基质的性质
喷针
•
内部针的位置
•

液相色谱质谱联用的原理详解ppt课件

6
ESI是一种软电离方式，即便是分子量大，稳定性差的化合物，也不会在电离过程中发生分解，它适合于分析极性强的有机化合物。
ESI的最大特点是容易形成多电荷离子。目前采用电喷雾电离，可以测量大分子量的蛋白质。
7
大气压化学电离源(APCI)
APCI喷嘴的下游放置一个针状放电电极，通过放电电极的高压放电，使空气中某
4.流量和色谱柱的选择
不加热ESI的最佳流速是1—50ul／min，应用 4.6 mm内径LC柱时要求柱后分流，目前大多采用 l—2.1 mm内径的微柱，TIS源最高允许lml ／min，建议使用200—400ul／min
APCI的最佳流速～lml／min，常规的直径4.6mm 柱最合适。
为了提高分析效率，常采用＜ 100 mm的短柱（此时UV图上并不能获得完全分离，由于质谱定量分析时使用MRM的功能，所以不要求各组分没有完全分离）。这对于大批量定量分析可以节省大量的时间。
9
电喷雾与大气压化学电离的比较
电离机理：电喷雾采用离子蒸发，而APCI电离是高压放电发生了质子转移而生成[M＋H]+或[M-H]-离子。
样品流速：APCI源可从0.2到2 ml／min；而电喷雾源允许流量相对较小,一般为0.2-1 ml／min.
断裂程度；APCI源的探头处于高温，对热不稳定的化合物就足以使其分解.
一般质谱仪都采用机械泵预抽真空后，再用高效率扩散泵连续地运行以保持真空。现代质谱仪采用分子泵可获得更高的真空度。
4
离子源
离子源的作用是将欲分析样品电离，得到带有样品信息的离子。
1.质谱检测的是离子 2.离子源=接口
5
电喷雾电离（ESI）
ESI是近年来出现的一种新的电离方式。它主要应用于液相色谱-质谱联用仪。流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘；从而雾化、蒸发溶剂、阻止中性溶剂分子进入后端检测。

液质校准ppt课件

1
1. 点击Start采集数据 2. 采集到的质谱图
3. 右键点击右侧质谱图区域，选择OpenData
2
3
PPG质量准确度校准
操作详解，示例数据
PPG质量准确度校准
操作详解，校准前计算
1
2
1. 点击Calibration From
Spectrum
2. 在弹出菜单中选择合适的校
验标准
3. 点击Start开始校准前的计算
源开关（时间不要超过5秒钟），重新打开排油孔螺栓，排出泵内残余泵油拧上排油孔螺栓并上紧打开加油孔螺栓，添加干净的真空泵油，油面位置约到“MAX”80%处，拧上
加油孔盖子以正常程序开机
日常维护
更换喷雾针1
1
1. 旋下Peek管线与
2
接头
3
2. 旋松黑色螺帽
3
3. 旋松黄铜螺帽，轻
轻向上拔起喷雾头
等待约30min
关闭机械泵电源
关闭主机电源
关闭氮气发生器
结束
关闭氮气发生器
开机流程
API3200/3200QTRAP API4000/4000QTRAP
打开氮气发生器确定气压正常
打开机械泵电源
TripleQuad4500/QTRAP4500 TripleQuad5500/QTRAP5500
打开氮气发生器确定气压正常
PPG质量准确度校准
操作详解，激活
1
1. 双击Hardware
2
Configuration
2. 激活MassOnly
PPG质量准确度校准
操作详解，打开采样方法
3
1
2
1. 切换到Installation

第四章试验条件的优化.ppt

1978年，七机部由于导弹设计的要求，提出了一个五因素的试验，希望每个因素的水平数要多于10，试验总数不超过50，此时靠全面试验法是无法完成的。
（2）简单比较法
变化一个因素而固定其它因素，如首先固定B、C
于B1、C1，使A变化，则： A1
B1C1
A2 A3 (好结果)
如果得出结果A3最好，则固定A于A3，C还是C1，使B
4
1
B1
A1
A2
A3 C1
正交试验的试验点分布
7
C3
C2
用正交试验法安排试验只需要9次试验
• 正交试验法优点：（1）试验点代表性强，试验次数少。（2）不需做重复试验，就可以估计试验误差。（3）可以分清因素的主次。（4）可以使用数理统计的方法处理试验结果，提出展望好条件。
• 正交试验（表）法的特点：(正交性) （1）均衡分散性－－代表性。（2）整齐可比性－－可以用数理统计方法对试
第四章试验条件的优化
§4.1 正交试验设计法 §4.2 正交试验数据的基本分析法 §4.3 单纯形优化法 §4.4 单纯形优化的参数选择
试验设计的发展概况
试验设计方法起源
1980s
1920s
1920s Fisher提出方差分析，用于农业、生物学、遗传学等方面
1924~
1935
1949
1980s 美国引进田口方法
每个因素可能出现的状态称为因素的水平，简称水平。
• 对因素A、B、C在试验范围内分别选取三个水平 • A：A1＝80℃、A2＝85℃、A3＝90℃ • B：B1＝90min、B2＝120min、B3＝150min • C：C1＝5%、C2＝6%、C3＝7%
取三因素三水平，通常有两种试验方法：

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• Avoid Non-volatile Buffers – Alkali-metal phosphates, borates, etc.
01111
Change Retention to Improve Resolution – Select Solvents/ Modifiers that are MS Compatible
9.5 – 11.5 10 – 12
Intensity (peak area) F ormate pH
2.5 Phosphate
pH 2.5 Acetate pH
6.0 Phosphate
pH 6.0 Ammonia
pH 8.0 Phosphate
pH 8.0
01121
Effect of Buffer on Analyte Response
液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)
液质分析条件的优化策略（简化板）
液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)
液相色谱与液质联用仪使用的要点
• 质量校正的正确 • 对于相关分析要有合适的支持软件（Maxnet，
TargeLyness） • 合适的液相色谱平台 • 合适的质谱接口方式 • 液相色谱分析中合适的色谱柱的选用 • 质谱检测模式的选择 • 必要的后液流补充
• Compatible LC/MS Buffers and Modifiers: – Formic acid, acetic acid, ammonium acetate, ammonium formate, ammonium hydroxide, trifluoroacetic acid – TFA concentration should be <0.1% v/v – Keep volatile buffer concentrations <20 mM to minimize ESI ion suppression
6.00
8.00
10.00 12.00 14.00 16.00 min
Suitable Solvents for LC/MS
• Reverse-Phase LC/MS Solvents – ACN, MeOH, H2O, Isopropanol
• Normal-Phase LC/MS Solvents (for APCI-MS) – Hexane, Methylene Chloride, Acetone, Ethanol
• Volatile buffer – minimize instrument downtime • Buffer concentration:
– High ion suppression decreases ESI sensitivity
– Low system adequately buffered? • pH range permitted by stationary phase • Methanol or acetonitrile
pKa
3.8 4.8
7 9.2
10.5 11.0
pH range
2.8 – 4.8 3.8 – 5.8
6–8 8.2 – 10.2
Buffer Concentrations/Additive amounts: • 10 to 50 mM • formic, acetic acids 0.01 - 1% v/v • trifluoroacetic acid <0.1% v/v • alkylamine type bases <0.1% v/v
质量校正的正确（Myoglobin校正）
质量校正的正确（Myoglobin校正）
质量校正的正确（CsI校正）的肽测定
质量校正的正确（CsI校正）的蛋白测定
质量校正的关键点
• 针对不同的分析采用不同的校正，一般蛋白质采用Myoglobin，对于小分子分析建议采用CsI校正。
• 对于采用Myoglobin校正的建议采用高次方的校正曲线（3-4）；对CsI校正的建议采用低次方的校正曲线（1-2）
Abundance
250000 200000 150000 100000 50000
1.0% HOAc
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00 12.00 14.00 16.00 min
Abundance
250000 200000 150000 100000 50000
0.2% TFA
2.00
4.00
合适的液相色谱平台
• 能提供一个连续、稳定的液流环境 • 真空脱气设备 • 系统的死体积尽可能小，减少管路的长度 • 输液泵的设计能适用于微径柱的要求 • 二极管阵列检测器的池体积与质谱仪匹配 • 必要的液相色谱辅助配件 • 必要的液相色谱与质谱仪的软件操作平台
合适的液相色谱柱
• 柱内径：2.1mm • 柱长度：
– Start with acetonitrile
01094
Useful pH Ranges for Volatile Buffers
Buffers normally used in MS :
Buffer
Formate Acetate
??? Ammonia Diethylamine Triethylamine
Mobile phase: A - 10mM buffer pH 6.0; B – methanol
Gradient: 5% to 75% in 4 min
3.E+08 3.E+08 2.E+08 2.E+08 1.E+08 5.E+07 0.E+00
Pr ocainamide Caffeine Propranolol Nortriptyline Oxazepam
根据分析的目的选择50mm或150mm • 柱填料选用新型的填料：
Symmetry，Discovery，Vydac，Zorbax， Xterra，Intersil，Diamonsil等
LC/MS Flow Injection Analysis of Peptides and Proteins by Reversed-Phase HPLC
Buffer type
Phosphate buffers suppress the MS response of caffeine at all pHs and also the MS response of Oxazepam at pH 8. Volatile buffers (formate, acetate, ammonia) generally provide good responses.