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9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则本指导原则是用于指导药品微生物检验用的洁净室等受控环境微生物污染情况的监测和控制。
药品洁净实验室是指用于药品无菌或微生物检验用的洁净实验室、隔离系统及其它受控环境。
药品洁净实验室的洁净级别按空气悬浮粒子大小和数量的不同参考现行“药品生产质量管理规范”分为A、B、C、D 4个级别。
为维持药品洁净实验室操作环境的稳定性、确保药品质量安全及检测结果的准确性，应对药品洁净实验室进行微生物监测和控制，使受控环境维持可接受的微生物污染风险水平。
本指导原则包括人员要求、初次使用的洁净实验室参数确认、微生物监测方法、监测频次及监测项目、监测标准、警戒限和纠偏限、数据分析及偏差处理、微生物鉴定和微生物控制。
人员从事药品洁净实验室微生物监测和控制的人员应符合现行《中国药典》通则中“药品微生物实验室质量管理指导原则（通则9203）”的相关要求。
确认初次使用的洁净实验室应进行参数确认，确认参数包括物理参数、空气悬浮粒子和微生物。
洁净实验室若有超净工作台、空气调节系统等关键设备发生重大变化时应重新进行参数测试。
药品洁净实验室物理参数的测试应当在微生物监测方案实施之前进行，确保操作顺畅，保证设备系统的运行能力和可靠性。
主要的物理参数包括高效空气过滤器完整性、，气流组织、空气流速（平均风速），换气次数、压差、温度和相对湿度等。
测试应一般首先在静态下测试，符合要求后再在模拟正常检测条件下进行测试。
各级别洁净环境物理参数建议标准及最长监测周期见表1，必要时，各实验室应根据洁净实验室使用用途、检测药品的特性等制定适宜的参数标准。
物理参数测试方法参照《洁净室施工及验收规范》的现行国家标准中附录D3高效空气过滤器现场扫描检漏方法、附录E12气流的检测、附录E1风量和风速的检测、附录E2静压差的检测、附录E5温湿度的检测进行。
初次使用的洁净实验室其空气悬浮粒子和微生物的确认及监测照以下“监测”进行。
洁净室（区）的操作服、手套微生物检验操作规程1.目的：建立一个测定洁净室（区）的操作服、手套微生物数的检查方法。
2.范围：适用于所有全厂洁净室（区）、超净台等区域使用的操作服、手套的监测。
3.责任：质检科检验员、车间全体洁净室（区）人员对实施本规程负责。
4.程序4.1取样部位及范围4.1.1手套和操作服表面的微生物监测是人员卫生监测的关键。
手套取样时应包括双手的手指和手掌，操作服表面取样主要是前臂的袖管部位、肩前下部等，鞋套的取样部位宜在套筒的上侧面（此部位在穿戴时易被污染）。
4.1.2人员卫生监测时每点取样面积宜控制在24～30cm2之间。
4.1.3为避免干扰，宜在生产活动结束时取样（生产人员离开无菌生产区时取样）。
4.2监测方法（接触蝶法）接触蝶内的培养基为固化后呈凸面状的营养琼脂，适用于对平整的规则性表面进行取样监测。
取样时，打开蝶盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触蝶底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上蝶盖。
取样后，需用蘸有70%酒精的湿纱布擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。
将取样后并做好标记的接触蝶置于30～35℃培养4天，读数，记录。
4.3洁净室（区）操作服、手套活微生物数等级4.4菌落计数4.4.1用肉眼直接计数。
4.4.2若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.5附注4.5.1每批培养基应有空白对照试验，检验培养基本身是否污染。
4.5.2所用的玻璃器皿，先用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗三次。
于250℃干烤至少1小时，一周内备用。
4.5.3为保证实验的准确性，应在干燥无尘埃流通的环境里操作。
4.5.4测试过程中应严格防止人为对样本的污染。
洁净区环境监测微生物标准洁净区环境监测微生物标准背景洁净区是一种特殊的工作环境，要求空气中的微生物污染物尽可能低。
因此，制定洁净区环境监测微生物标准显得尤为重要。
本文将介绍一些关于洁净区环境监测微生物标准的相关要点。
目标洁净区环境监测微生物标准的目标是确保洁净区内的空气、表面和水质等各方面符合相关微生物的标准。
通过监测，可以评估洁净区的卫生状况，减少微生物污染对产品和人员健康的潜在风险。
标准洁净区环境监测微生物的标准应基于国家和地区的法规和条例，同时考虑以下因素：•空气中的微生物限值：根据洁净区的级别，空气中微生物的限值也有所不同。
例如，一级洁净区的空气中微生物总菌落数限制在每立方米不超过10个。
•表面微生物限值：洁净区内的表面微生物菌落数也需要监测，通常要求每平方厘米不超过100个菌落。
•水质微生物限值：洁净区所使用的水源也需要经常检测微生物的水质，以确保不会带来额外的污染风险。
监测方法为了确保准确度和可重复性，洁净区环境监测微生物的方法需要是科学可靠的。
常用的监测方法包括：•空气采样：通过空气采样器采集洁净区空气中的微生物，并使用培养基进行菌落计数。
•表面拭子法：用洁净的拭子对洁净区表面进行拭子采样，并将拭子转移到培养基上进行菌落计数。
•水质检测：采集洁净区水样，通过培养基或分子生物学方法检测其中的微生物污染。
结论洁净区环境监测微生物标准是确保洁净区卫生状况的重要手段。
通过制定合理的标准、使用科学可靠的监测方法，可以保障洁净区内微生物的控制和管理，减少污染风险，提高产品质量。
参考资料1.国家药品监督管理局，洁净区环境监测技术导则。
2.International Organization for Standardization(ISO) :2015, Cleanrooms and associated controlledenvironments – Part 1: Classification of aircleanliness.3.United States Pharmacopeia (USP) Chapter <1116>,Microbiological Control and Monitoring of Aseptic Processing Environments.。
洁净区微生物控制预防措施一．人员进入洁净区控制1.进入洁净区人员按照要求洗手、更衣、消毒,并加强对人员进入洁净区洗手、消毒情况监督检查。
穿洁净服不得出二更，穿过渡服不得进入手消毒间。
按照更衣程序，自上而下穿戴洁净服，口罩能够遮住口鼻。
2.洁净服、口罩、手套、过渡鞋、洁净鞋按规定要求及时清洗，破损及时更换。
3.机修人员及借调人员不得自带洁净服，由车间配备洁净服。
并在更衣室出口配备维修人员专用收衣桶，要求给维修人员“专服专用专清洗”。
4.各房间随手关门。
二更更衣柜不得放置洁净服、口罩等洁净区相关之外的物品。
二．生产控制1.生产前对所使用的直接接触药品的设备表面、工器具，用75%乙醇擦拭消毒。
2.生产各环节，严禁裸手接触物料、严禁接触直接接触药品的设备内表面及工器具，以防造成交叉污染。
3.进料及领料时检查原辅料外包装是否有破损。
4.与物料直接接触的工器具、内包材等严禁接触地面，避免交叉污染。
5.物料、生产用工器具、维修用工具，经过缓冲间自净消毒后进入洁净区，严禁经过其它途径传入。
6.严禁生产未结束进行清场。
生产过程中尽最大可能避免洁具进入生产操作间。
7.洁净区所用毛巾按用途分区存放，不得混放。
三、清场控制1、按照清场原则“由上到下，由内到外”进行清洁。
2、洁净手套清洗，先用纯化水清洗后，再用75%乙醇浸泡。
3、拖把使用后清洁干净，并用75%酒精喷洒消毒。
4、二维混合、摇摆式颗粒机等，每月做一次拆卸大清。
5、对分装间与外包联系的穿越轨道进行有效密封，在生产结束后用卡板进行有效隔离。
6、车间根据实际情况制定洁净区环境消毒频次，轮换使用消毒剂。
7、浸膏桶积压较多，车间清洗后将桶内水分控净，并用75%乙醇消毒。
提取车间使用时，消毒要执行到位。
8、清场结束后对各操作间用75%酒精消毒，（消毒包括操作间内外门把手）。
三．厂房、设施控制1.设备员配合洗衣人员对洗衣机死角每周清理一次。
2.每天检查车间顶棚、消火栓等的密封性，发现漏气及时打胶处理。
微生物限度检查法微生物限度检查在环境的洁净度10000级和局部100级的单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作，以防再污染。
单向流空气区域、工作台面及环境必须定期按国家《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌测试方法》现行标准进行洁净度验证。
隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
灭菌和培养温度：细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃检验量：检验量指供试品一次检验的用量。
一般为10g或10ml；化学药膜剂为100cm2；贵重或微量包装的药品可酌减〔不得少于3g〕。
检查沙门菌的供试品其检验量增加10g或10ml。
一般随机抽样不少于检验用量〔2个以上最小包装〕的3倍量。
供试液的制备：用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制备供试液或选用适宜的乳化剂、分散剂、中和剂制备供试液；其用量应验证，在该检验条件无抗菌作用。
供试液制备妥后不得超过1h就加入检验用培养基具抑菌活性的供试品当供试品具有抑菌活性时，应将供试液中的抑菌活性消除后，方能依法检查。
常用的方法有：⏹稀释法——降低供试品的相对浓度⏹薄膜法——利用体积差异别离⏹中和法——利用化学〔生物〕专属性灭活⏹离心法——利用沉降系数差异别离一、微生物限度检查法验证对药品进行微生物限度检查法时，首先应进行检测方法的验证。
如细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认该计数方法是否科学、准确、客观。
假设供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。
验证时，按供试液的制备，细菌、霉菌和酵母菌计数所规定的方法及以下要求进行。
对各试验菌的回收率应逐一进行验证。
验证用菌株及菌液的制备菌株大肠埃希菌CMCC〔B〕44102、金黄色葡萄球菌CMCC〔B〕26003、枯草芽孢杆菌、CMCC〔B〕63501白色念株菌CMCC (F) 98001、黑曲霉菌CMCC(F)98003 。
