食用菌液体菌种生产方法(发酵罐法)

食用菌液体菌种的制作食用菌
在无菌的条件下把菌种投放到培养基里。

安装通气管后用输氧机给培养基输入氧气。

把培养基放置在摇床机上进行振荡培养。

食用菌液体菌种具有生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、发酵快、适宜于工厂化生产等优点。

食用菌液体菌种的生产方式一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧）法、发酵罐法。

据省农科院食用菌站工作人员介绍，摇瓶机法不仅接种简单，管理方便，而且生产量根据机器的设定而不同，投资2000~3000元即可。

配制液体培养基先把马铃薯煮到熟而不烂时提取上清液，然后配制3%葡萄糖、1%玉米粉、0.05%硫酸镁、0.1%磷酸二氢钾，最后将马铃薯上清液和上述溶液及水混合即可。

液体培养基适用于多种食用菌菌种的培养。

摇瓶振荡培养液体培养基配制好后，装入容量为500毫升的三角烧瓶中，每瓶装入100毫升，并加入1～15粒小玻璃珠，瓶口用棉塞、牛皮纸密封，在1.5千克/平方厘米压强下灭菌30分钟。

然后投入一块约2平方厘米的斜面菌种，于23℃～25℃下静置培养24小时。

待菌丝萌发时再放置在往复式摇床上振荡培养，振荡频率为每分钟80～100次，振幅为6～10厘米。

摇床室的温度控制在24℃～25℃，培养时间因菌类不同而异，一般是5天左右。

将振荡好的培养基倒入大容器里，经过扩容后，在无菌条件下安装通气管，用输氧机通入适量氧气后培养48小时。

培养结束的标准：培养液清澈透明，其中悬浮着大量小菌丝球，并伴有******菇类特有的香味。

培养好的液体菌种应放入培养箱中保存。

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⾷⽤菌液体菌种发酵罐规范化操作规程⾷⽤菌液体菌种由于其有利于⾼效率、⼯⼚化、规范化栽培，解决了⾷⽤菌集约化⽣产中的瓶颈制约难题，且与固体菌种相⽐具有⽣产周期短、菌龄⼀致、出菇齐、成本低、纯度⾼、活⼒强等优点，越来越受到⾷⽤菌栽培者的青睐，已成为⾷⽤菌产业的发展趋势。

但由于发酵罐的操作需要较强的专业知识，提⾼发酵成功率⼀直是普通⽣产者的使⽤难题。

笔者经过⼏年对70型发酵罐的⽣产实践，总结出了该设备⾼成功率的实⽤规范化操作规程，供⼤家借鉴。

⾷⽤菌液体菌种⽣产流程：罐的清洗和检查－煮罐－配料－灭滤芯、⽆菌⽔、接种枪管－上料－灭菌(安装滤芯计时开始时开⽓泵吹⼲滤芯)－降温(先接进⽓管后放，并瓶)－发酵罐接种(第2天装袋灭菌)－培养⼀接菌袋(瓶)。

1 清洗与检查　发酵罐在每次使⽤后或再次使⽤之前都必须进⾏彻底清洗，除去罐擘的菌球、菌块、料液及其它污物。

对于内壁粘附的污物可以⽤⽊棒包扎软布揩拭，洗罐⽔从罐底接种阀排出。

如有⼤的菌料(块)不能排出，可卸下进⽓管的喷嘴排出菌料(块)。

清洗的标准：罐内壁⽆悬挂物，⽆残留菌球，排放的⽔清澈⽆污物。

罐清洗完毕即可加⽔，加⽔量以超过加热管为宜(绝对禁⽌加热管⼲烧)。

然后启动设备，观察检查控制柜、加热管⼯作是否正常，各阀门有⽆渗漏，检查合格⽅能开始⼯作。

2 煮灌　正常⽣产不须煮罐，上⼀次⽣产完只需将罐洗净就可进⼊下⼀批⽣产。

如果有下列情况之⼀者须要煮罐：①新罐，初次使⽤须要煮罐；②上⼀次污染杂菌的罐；③更换⽣产品种的罐；④长时间不⽤的罐。

煮灌是对罐内进⾏预消毒的过程，具体操作⽅法：①关闭罐底部的接种阀和进⽓阀，把⽔从进料⼝加⼊⾄视镜中线，盖上进料⼝盖，拧紧，关闭排⽓⼝。

②启动电源，按控制柜灭菌键4s，屏幕上两个加热指⽰灯亮，此时设备进⼊灭菌状态。

③当温度达到100℃时排放冷⽓，微微打开排⽓阀直⾄灭菌结束。

④当控制柜显⽰屏上的显⽰温度123℃、压⼒表压⼒0.12MPa时，控制柜⾃动计时，显⽰屏上交叉显⽰温度和计时时间。

液体菌种制作规程工艺流程：斜面菌种→初级摇瓶种→二级摇瓶种→发酵罐深层发酵种→接种一、摇瓶种的制作1斜面菌种准备：马铃薯200克（去皮切块煮沸过滤取滤液），蔗糖20克，麸皮30克（煮汁过滤取滤液）二氢钾2克，硫酸镁1克，琼脂20克，VB1 10毫克，水1000毫升。

25度培养7天备用。

2、初级摇瓶制作①配方土豆200克葡萄糖20克酵母膏2克蛋白胨3克磷酸二氢钾2克硫酸镁1克V B110毫克水1000毫升。

（配方2：玉米粉4%，蔗糖3%，麸皮2%，酵母膏0.5%，2氢钾0.25%，硫酸镁0.1%，VB1 0.01%，豆油0.05%）。

②制作：土豆去皮切成薄块，煮沸后保持20分钟，四层纱布过滤后取滤液，补足1000毫升水，称取其他成份，与土豆液充分搅匀然后装入三角瓶。

初级摇瓶采用500ml三角瓶，装入200ml,放入玻璃球5粒（0.5cm 直径）用二层纱布包裹制作棉塞，塞紧棉塞后再用二层纱布外层加报纸做罩，扎紧瓶胫，防止摇动时棉塞活动。

③灭菌：把三角瓶放入立式高压锅，加足水紧好盖，开启放气阀，接通电源，有蒸汽冒出时关闭放气阀，待压力表达到0.05MPa时,断掉电源,打开放气阀,放冷空气至压力表回0，再关闭放气阀，接通电源，当压力表显示0.11 MPa，温度达到121℃后开时计时，保持45min。

断电使其自然降至0.02 MPa时放气归0，趁热微开盖，使剩余蒸汽烘干棉塞，然后出锅降温至25℃即可接种。

④接种：首先，封闭接种室，用开启紫外线灯30分钟，再用臭氧灭菌器灭菌60分钟或用烟雾剂每立方5克熏蒸30分钟，进行接种环境灭菌。

把灭菌后的三角瓶放入超净台（或接种箱）,把斜面母种、工具、酒精灯、75%的酒精棉球瓶同时放入，母种用灭过菌的报纸遮盖，打开紫外线灯和无菌风开关，保持15min后，关闭紫外线灯进行接种。

操作人员应着干净的隔离衣，带好卫生帽、口罩，手洗净，用75%酒精擦拭手、母种试管、工具，点燃酒精灯，灼烧工具及试管口20秒，在严格无菌操作程序下，把斜面菌种切割成0.5厘米小块（不带培养基），移入三角瓶中，使其浮在液面，一般接入5-6块，塞好棉塞，接完后重新封好棉塞罩，放到25℃恒温环境净置培养72小时。

食用菌液体菌种发酵罐专用母种制作方法作者：白胡木吉力图白福林哈斯图力古尔刁雅娟钱丹珠来源：《农业与技术》2016年第08期摘要：本文介绍了液体专用母种的制作过程、培养终点及质量好坏的判断、液体专用母种生产中应注意的问题等内容。

关键词：液体菌种；培养器；母种中图分类号：S646 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20160432006在液体菌种培养器的使用越来越普及时种植户遇到了不会制作液体菌种培养器专用母种的难题，影响了种植户使用液体菌种培养器这种先进设备的积极性。

本文介绍其制作方法如下：1 液体专用母种的制作过程1.1 试管斜面种的制作采用PDA综合培养基。

另外，根据不同需要可以采用营养加富培养基，即在上述配方外加入20g麸皮或0.5g蛋白胨；用漏斗将培养基分装至试管1/5～1/4处，试管口壁不粘培养基；梳棉制作大小合适的棉塞，松紧适度，塞入试管内1.5 ～2.0cm，外露0.5 ～1.0cm7支或10支捆成1捆，管口用牛皮纸包好，直立于灭菌锅内，准备灭菌；121～126℃（0.11 ～0.15MPa）的条件下灭菌30min，将培养基冷却至60～70℃时将灭好菌的培养摆成斜面，冷却备用；当培养基温度降至30℃以下时，无菌室内将菌种用接种钩接入空白培养基上，动作迅速、准确；根据不同的品种选择其适宜的温度避光培养，常规品种22～26℃，高温品种29～31℃，一般7～11d即可长好，菌丝生长健壮、洁白、均匀、无任何杂菌污染的菌种为优良菌种。

1.2 摇瓶种的制作按液体培养基的配料办法按一定的配比制作培养基（土豆20%、麸皮45%～5%、红糖1.2%～5%、葡萄糖1.5%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、蛋白胨0.3%、VB120mg/L）；每瓶装料系数为20%～40%，即1000mL的锥形瓶装料约200～400mL；棉塞外包1层纱布，大小要合适，上面加盖1层牛皮纸，用线绳绑好。

第四章原种的生产（液体菌种生产）第三节：液体罐菌种的生产市场上液体菌种罐种类很多，从大型工业发酵罐到小型液体发酵罐都向操作简便和高成功率转型。

一、发酵罐型号食用菌液体发酵罐有很多型号：如50L，100L，200L，400L，600L。

各个菌罐生产厂所生产的食用菌罐各有其优缺点，只要是操作技术人员熟悉罐体结构，成功率就很高了。

二、常用的液体罐菌种的生产流程现在菌种生产者常用的液体罐菌种的生产流程：(一)发酵罐培养基配方以1L的培养基配方为例进行计算。

如下：1.红糖10g，玉米粉5g，豆饼粉10g,蛋白胨1.5g，磷酸二氢钾0.8g，硫酸镁0.8g。

2.也可以用煮土豆麦麸培养基。

各种斜面培养基配方都可以做为液体菌培养液配方使用。

一般200L的发酵罐一般可装160L培养料。

（二）液体菌种生产工艺流程：罐的清洗与检查→培养基的配制→上料→灭菌→降温→摇瓶接种→培养→接种栽培袋1.罐的清洗与检查每一罐做完之后，新的一罐做之前。

我们都需要对罐体进行清洗，目的是除去罐内所有污垢。

方法就是用清水冲刷内壁。

然后检查各部件是否完好，有无渗漏，设备能否正常运转。

我们还需要进行煮罐，那在什么时候进行煮罐呢？比如在新罐第一次使用时；在上一罐染菌时；在更换品种时；在长期闲置不用时。

这些时候我们都需要进行煮罐。

具体的操作方法就是：①、加水至试镜中线，扣上接种盖，微开排气阀。

②、打开启动开关，进入灭菌状态，温度升到124℃时，计时，40分钟后，控制柜报警。

③、关闭排气阀，关闭启动开关，闷罐20分钟，放水。

2.如是外置滤芯需要对外置滤芯及无菌水灭菌(1)将进气管管口用8-10层纱布包好。

(2)选择容积是1000ml的广口烧瓶，加水750-780ml，盖棉塞，包牛皮纸。

(3)在压力是0.11-0.15MPa，温度121-126℃的条件下，计时60分钟。

3.培养基的制作配方按生产品种配制。

很多公司现在也有现成的专用培养基。

直接配比水即可。

食用菌液体发酵罐制种技术食用菌制种主要有液体和固体两种制种方式。

液体制种是目前国际上通用的、先进的方法。

液体菌种具有生产周期短、用工成本低、菌丝活力强、接种后萌发吃料快、菌种在培养基中的流动性和分散性好、菌龄一致、出菇整齐、可缩短栽培时间等优点。

在对液体制种与固体制种经济效益分析比较中指出，液体菌种发育时间可以减少24d，接栽培袋菌丝满菌时间缩短约10d，污染率可以降低1.5%，成本利润率可提高42%。

液体菌种作为食用菌基料工厂化生产发展过程中的重要环节，具有重要意义。

而现在食用菌产业受资金和技术的限制，其规模化、工厂化生产仍然以固体菌种为主，液体菌种的应用只有少数较大规模工厂化生产的企业及少数栽培品种工厂化栽培中获得应用，液体菌种的优势完全没有发挥出来。

液体菌种在制作过程中对设备、技术的要求较高，液体菌种发酵罐的操作技术流程复杂，增加了使用者的生产难度。

我们将对食用菌液体菌种发酵罐的生产工艺、操作流程进行技术总结，为食用菌项目的液体菌种提供参考。

1、研发液体菌种发酵罐的构造液体菌种在发酵培养过程中需要充足的氧气，属好氧性发酵。

满足于好氧性发酵的生化反应器主要有两大类即机械搅拌通风发酵罐和气流搅拌发酵罐。

前者利用通风装置和搅拌装置将氧溶入发酵液中，因机械搅拌剪切力而对菌丝产生破坏作用，因此不适于栽培型菌种的应用。

而后者则利用外部供气装置将气体通入发酵罐内形成环流将氧溶入发酵液中，其特点是基质溶液分布均匀、具有较高的溶解氧速率和溶解氧效率、结构简单、易于加工和操作。

而气流搅拌发酵罐的构造主要由电控系统、气体输送系统、发酵培养系统三部分组成。

1.1电控系统。

由控制箱体、微型电脑、集成传感器、报警器、数码显示屏、控制开关等组成，可调控灭菌温度、时间、压力及培养温度等。

1.2气体输送系统。

由无油隔膜泵、气水分离器、空气过滤器、滤芯、止回阀、压力表、硅胶管等组成，可为发酵罐提供纯净、无菌的气源。

1.3发酵培养系统。