草芽孢杆菌的液体发酵和产物中糖化酶的实验

4、枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用；
5、能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性。
1.3应用范围
枯草芽孢杆菌不仅在饲料中应该比较广泛,在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用也相当广泛,是一种多功能的微生物.
3.发酵培养基的灭菌每组配制13L牛肉膏蛋白胨液体培养基（pH7.4），另再加0.1%的酵母膏，用乳胶管小心地加入发酵罐中，然后旋紧塞子，安装好防护罩（见图7），按下面的方法灭菌：
（1）检查水、电、气以及发酵罐的密封性是否正常。如正常即可灭菌。
（2）打开进水阀，调节水压使水压表指针指示在0.2~0.4之间，使水充满加热器，防止烧坏加热器。（出水阀近关闭情况下，达到0.4，此时出水阀虽然关闭，但进水阀打开，此外水压也满足要求，所以水能充满加热器不至于烧坏，当灭菌结束降温时，热水会走另一条旁路（非出水阀的另一条出口）泄压。）
本科学生综合性实验报告
学号
学院专业、班级
实验课程名称枯草芽孢杆菌的液体发酵及其产物中糖
化酶的活性测定
教师及职称
开课学期2013至2014学年下学期
云南师范大学教务处编印
一．实验设计方案
实验序号
实验三
实验名称
枯草芽孢杆菌的液体发酵及其产物中糖化酶的活性测定
实验时间
2013.4.7-2013.4.14
实验室
总之，本次实验的学习，让我们深刻体会到了合作学习的重要性，以及严谨的科学态度的重要性。在今后的学习中我们会更加珍惜这样的学习机会，并尽力做到最好的。
教师评语及评分：
签名： 年 月 日
4、使用固体原料，在发酵过程中，糖化和发酵过程同时进行，简化操作工序，节约能耗。

利用枯草芽孢杆菌发酵生产糖化酶的上游工艺研究山西生物应用职业技术学院　闫　君[摘　要]糖化酶—Α-1,4-葡萄糖水解酶(Α-1,4-Glucan glucohydro lace ),又称葡萄糖淀粉酶[Glucoam ylase ,(EC .3.2.1.3.)],此酶作用于淀粉分子的非还原性末端,以葡萄糖为单位,依次作用于淀粉分子中的Α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖。

此酶作用于支链淀粉后的产物有葡萄糖和带有Α-1,6-糖苷键的寡糖;作用于直链淀粉后的产物几乎全部是葡萄糖。

本产品广泛用于生产白酒、黄酒、酒精、啤酒;用于以葡萄糖作发酵培养基的各种抗生素、有机酸、氨基酸、维生素的发酵;本品还大量用于生产各种规格的葡萄糖。

总之,凡对淀粉、糊精必需进行酶水解的工业上,都可适用。

糖化酶产生菌主要是黑曲霉(左美曲霉、泡盛曲霉)、根霉(雪白根酶、德氏根霉)、拟内孢霉、红曲霉等经深层发酵提炼而成,本文介绍的是利用枯草芽孢菌杆发酵来生产糖化酶的基本上游工艺过程。

[关键词]枯草芽孢杆菌　发酵　糖化酶　上游工艺1、上游工艺流程 2、材料与设备菌种:枯草芽孢杆菌(中科院微生物菌种保藏中心购买,编号1.15)设备:生物发酵罐(镇江东方生物工程设备技术公司GU JS -50-500C 型)3、发酵过程3.1菌种活化与扩培制作斜面培养基(蛋白胨1%、牛肉膏0.3%、氯化钠015%、琼脂粉2%、PH 7.0、蒸馏水配制),并灭菌(灭菌时间30分钟,温度121℃)。

再进行接种:在灭菌过的超净工作台中,用浸过75%酒精的脱脂棉檫净安瓿瓶,用火焰加热其端顶,滴少量无菌水至加热顶端使之破裂,用锉刀或镊子敲下已破裂的安瓿瓶顶端。

然后用无菌吸管吸取0.3-0.5m l 灭菌好的液体培养基,滴入安瓿管内,轻轻震荡,使冻干菌体溶解呈悬浮状,吸取全部菌体悬浮液,移植于斜面培养基上。

将接种好的斜面放入培养箱中,于28℃培养48小时。

培养过程中,要注意观察菌种情况,及时做好记录。

芽孢杆菌糖酵解实验现象
芽孢杆菌产酶酵解葡萄糖为乳酸和乙酸的实验是一种经典的微生物学实验，该实验的
主要过程包括菌种接种、培养基制备、培养、振荡、取样等步骤。

其主要目的是了解芽孢
杆菌的生长特性、代谢途径和代谢产物，以及不同物质对其生长和代谢的影响。

在该实验中，首先将芽孢杆菌接种在含有葡萄糖的液体培养基中，经过一定时间的培养，芽孢杆菌开始进行糖酵解代谢，将葡萄糖分解为乳酸和乙酸。

此时，培养液的pH下降，并伴随着乳酸和乙酸等有机酸的产生，导致培养基呈现酸性反应。

接着，通过荧光显微镜观察芽孢杆菌的生长情况，可以发现芽孢杆菌呈现长杆状、不
具有明显的鞭毛和纤毛结构。

随着培养时间的延长，芽孢杆菌的生长速度逐渐加快，产生
的代谢产物也逐渐增加。

此外，通过对不同浓度的葡萄糖、不同时间、不同pH条件下菌群生长和糖酵解代谢的影响进行探究，可以进一步了解芽孢杆菌的生长特性和代谢途径。

例如，当葡萄糖浓度较
高时，菌群的生长速度明显加快，产生的代谢产物也相应增加，而当pH值过低或过高时，菌群的生长和代谢都会受到影响。

总之，芽孢杆菌糖酵解实验是一种常用的微生物实验，通过该实验可以深入了解微生
物的生长特性、代谢途径和代谢产物，为探究微生物的生命活动提供了实验基础。

武汉工商学院酶工程技术实训论文学院：环境与生物工程学院专业：生物工程年级：2014级学生：学号: 指导教师：职称：题目：枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的分离纯化2017年6月18日目录摘要 (1)关键词 (1)Abstract (1)Keywords (1)1 中性蛋白酶 (2)1.1 中性蛋白酶的来源 (2)1.2 中性蛋白酶的意义 (2)1.3 枯草芽孢杆菌 (2)1.4 枯草芽孢杆菌的产酶特征 (2)1.5 枯草芽胞杆菌的形态特征 (3)1.6 研究目的 (3)2 实验材料与方法 (3)2.1 仪器设备和耗材 (3)2.1.1 仪器 (3)2.1.2 耗材 (3)2.2 枯草芽孢杆菌的筛选 (4)2.3 粗酶液的制备 (4)2.4 酶的分离纯化 (4)2.4.1 硫酸铵饱和度的选择 (4)2.4.2 蛋白酶活力测定 (5)2.4.3 透析及层析 (5)2.4.4 蛋白酶性质的测定 (5)3 结果与分析 (6)3.1 蛋白酶活力测定 (6)3.2 透析除盐 (7)3.3 柱层析分析 (7)3.4 酶作用的最适 pH (8)3.5 金属离子对酶活的影响 (9)3.6 化学试剂对酶活的影响 (9)4 结论与讨论 (10)参考文献 (11)枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的分离纯化摘要中性蛋白酶作为一种生物催化剂已广泛用于食品、酿造、医药、纺织、制革等行业,本文对枯草芽孢杆菌的发酵产酶的提取质量条件进行了研究。

利用硫酸铵分级盐析，葡聚糖层析纯化后蛋白酶总活力为38694U，蛋白酶比活力为4960.8U/mg。

该酶的活力受到EDTA、异丙醇、乙醇抑制。

钙离子、镁离子对该酶有较好的保护作用关键词：枯草芽孢杆菌；中性蛋白酶；葡聚糖层析；分级盐析Extraction quality analysis of producing neutralprotease from Bacillus subtilisAbstractNeutral protease as a biological catalyst has widely for food, and brewing, and medicine, and textile, and leather, industry, will enzyme technology application to seafood condiment, hydrolyzed of production in the, can formed enzyme method processing of unique advantages, makes fermentation products production cycle greatly shortened, and improve protein using, for, I on Bacillus subtilis spore Bacillus (Bacillus Substilis) of fermentation produced enzyme of extraction quality conditions for has research.Keywords:Bacillus subtilis; neutral protease; Dextran chromatography;fractionation; salting out1中性蛋白酶1.1中性蛋白酶的来源蛋白酶是一类催化蛋白质肽键，生成蛋白胨、蛋白肽及氨基酸等产物的水解酶，其广泛分布于自然界的植物、动物和微生物中。

芽孢杆菌液体发酵产脂肪酶实验报告一、引言脂肪酶（lipase）是一种能催化脂肪水解的酶，广泛存在于微生物中。

而芽孢杆菌（Bacillus）是一种常见的细菌，具有良好的产酶性能和酶稳定性。

本实验旨在通过芽孢杆菌的液体发酵过程，获得高效产脂肪酶的条件，并对其产酶能力进行评价。

二、材料与方法2.1 发酵菌种的培养与保存1.预先培养芽孢杆菌菌株。

2.将菌株保存在琼脂斜面培养基中，并置于4℃冰箱保存。

2.2 液体发酵过程1.准备适宜的发酵培养基。

2.将预培养菌株接种到发酵培养基中，初始菌液浓度为OD600=0.2。

3.在适宜的温度（如30℃）下进行培养，并设定一定的培养时间（如48小时）。

4.定时取样，测定菌液中脂肪酶的活性，并监测菌液的各项指标变化。

2.3 脂肪酶活性测定1.取培养液中适量的样品。

2.根据脂肪酶活性检测试剂盒的说明书进行实验操作。

3.记录结果并计算菌液中脂肪酶的活性。

三、结果与讨论3.1 菌液中脂肪酶的活性变化以下为菌液中脂肪酶活性的测定结果：培养时间（小时）脂肪酶活性（U/mL）12 5024 10036 15048 200通过对菌液中脂肪酶活性的监测，可以看出随着培养时间的延长，脂肪酶活性呈现逐渐增加的趋势。

在培养48小时时，菌液中脂肪酶活性达到最高峰，为200 U/mL。

3.2 脂肪酶产量的评价为评价菌株的产酶能力，计算菌液中单位体积的产酶能力，即单位体积菌液中的脂肪酶活性。

在本实验中，采用菌液中脂肪酶活性最高的时间点（48小时）进行单位体积产酶能力的计算。

假设培养液的体积为V mL，计算单位体积的脂肪酶活性为：200U/mL。

由此可见，在本实验中，芽孢杆菌液体发酵过程中，脂肪酶的产量为200 U/mL。

四、结论本实验通过芽孢杆菌的液体发酵过程，成功获得了高效产脂肪酶的菌株。

通过测定菌液中的脂肪酶活性，发现菌液中脂肪酶活性随着培养时间的延长呈逐渐增加的趋势，在培养48小时时达到最高峰。

从枯草杆菌发酵液中提取a淀粉酶的流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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食 品与 发 酵科 技
２０１８年第３期
菌 自身 可 合 成蛋 白酶 、淀 粉酶 、脂 肪 酶 、纤 维 素 酶 等 １．２－３ 正 交 试 验 优化 枯 草 芽 孢 杆 菌 Ｌ１产 中性 蛋 白
多种 酶类 ，具 有很 强 的发 酵能 力 ，近年来 常 被用 于发 酶 活性 条 件
酵食 品工业 副产 物 以提 高其 利用 价值 ，如 发 酵花 生
即 豆粕 粉 浓度 为 ２．ｏ％，葡萄 糖 为 １．ｏ％ ，接 种 量 为 ７％ ，发 酵 温度 为 ３６℃ ，其 发 酵 液 的 中性 蛋 白酶 活力 可 达 ６８ 菌 ；豆 粕 ；中性 蛋 白酶 ；酶 活
中 图 分 类 号 ：ＴＱ９２５＋．２
文献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１６７４—５０６Ｘ（２０１８）０３—００５５—０００５
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｈｅ Ｅｎｚｙｍ ｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｎｅｕｔｒａｌ Ｐｒｏｔｅａｓｅ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｌ１ Ｓｔｒａｉｎ Ｆｅｒｍ ｅｎｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｓｏｙｂｅａｎ Ｍ ｅａｌ
ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４—５０６Ｘ．２０１８．０３—０１２
枯 草 芽 孢 杆 菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ），属 于 芽 孢 杆 菌 属 ，为 革 兰 氏 阳 性 、过 氧 化 氢 酶 阳性 、需 氧 杆 状 细 菌 ，属 于 ＧＲＡＳ级 益生 菌 ［１－２］，其在 自然界 分 布 广 泛 ，研 究 人员 已从 土 壤 ＿３］、海洋 、植 物 体 表 ［５］、动 物
食 品 与 发 酵 科 技
Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

➢ 3、无菌室：用超净工作台及净化室代替无菌室， 以提高无菌程度。
一、种子的制备
➢ 种子的制备
➢ 培养基
➢ 牛肉膏 0.5g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g
蒸
馏水
➢ 将配置好的培养基放入250ml的三角瓶中装液 量为100ml，数量11个 。装液后进行高温灭菌。
➢ 一级种子的制备
➢ 选取长势良好的菌种，挑取菌落2~3环接种 导液体摇瓶中。
行升温，当温度达到120摄氏度、压强时，保持温度和 压力20min。 ➢ 灭菌后，关闭蒸汽进气阀，开大放气阀，当压强下降 到时开启通气阀。使罐内压力保持在左右。 ➢ 开启冷水阀门，对发酵罐进行降温。
五、接种
➢ 当罐温降到37摄氏度后，关闭冷水。用酒精将 接种口处仔细擦洗，并放上接种火圈。
➢ 减少进气，使罐压保持在，点燃接种火圈。 ➢ 拧下进料口螺盖，放入酒精中,以免染菌。 ➢ 按接种瓶的瓶口在火焰上灼烧一下，并在火焰
罐体经行升温，当温度达到120摄氏度、压强 时，保持温度和压力20min。 ➢ 灭菌后，关闭蒸汽进气阀，开大放气阀，进行 泄压。
四、实罐灭菌
➢ 泄压后，从进料口开始添加培养基，并开始搅拌（转 速130r/min）
➢ 进料完毕后开始调节PH值 ➢ 调好PH后，对罐体进行夹套预热85摄氏度以上。 ➢ 温度到达后，关闭夹套进气开关。通热蒸汽对罐体经
➢ 取上述溶液1ml，加入DNS试剂于沸水浴中加热2min进行显色，取出后 用水迅速冷却 ，加去9ml蒸馏水，摇匀，在540nm波长处测定吸光值。
➢ 2）空白液的处理： ➢ 发酵液离心处理：8000rpm，5min ➢ 1ml离心后的发酵液+5ml 1%淀粉溶液直接加热煮沸5min，取1ml，加入

枯草芽孢杆菌液态发酵的研究李情敏;何名芳;张凤英;张超凤;陈卫平【摘要】该研究选取了一株从无花果中分离出的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)作为试验菌株,它可以产生抗逆性强的芽孢,非常适合应用于益生菌饲料加工生产.在单因素试验基础上,进行L9(33)正交试验,获得芽孢产量高、原料成本低廉的液态发酵培养基最佳配方为碎米水解液6％、酵母粉0.7％、KH2PO40.5％;对该菌的摇瓶发酵条件进行了初步研究,确定了液态发酵的最佳条件为pH值为5,温度37℃,接种量6％,转速200 r/mm,培养时间19h.在此最佳培养基配方及发酵条件下,发酵液OD600mm值可达7.38.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)002【总页数】5页(P43-47)【关键词】枯草芽孢杆菌;液态发酵;培养基配方;培养条件;优化【作者】李情敏;何名芳;张凤英;张超凤;陈卫平【作者单位】江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045;赣州农业学校食品教研组,江西赣州341100;江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045;江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045;江西农业大学食品科学与工程学院,江西南昌330045【正文语种】中文【中图分类】TQ920.6益生菌的生理功能有很多，最重要的是可以促进肠道有益微生物的繁殖，降低病原菌数量，提高机体免疫的功能［1］。

益生菌制剂以无毒、无残留、无副作用、不污染环境等优点，使其成为了有效的抗生素替代物，在防治动植物疾病，促进机体发育，延缓人类衰老等方面被人们广泛使用［2］，并成为生态循环农业中的一个重要纽带。

由于枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）可形成抗逆性极强的芽孢，在稳定性方面具有先天优势，且枯草芽孢杆菌是我国农业部和美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration，FDA）允许作为饲料添加剂的菌种［3-4］，其可以产生抑菌活性物质［5-6］，也可以作为一种理想的抗生素替代物。

第1篇一、实验目的1. 了解糖发酵的原理及其在微生物学研究中的应用。

2. 掌握糖发酵实验的操作方法及观察指标。

3. 通过糖发酵实验，鉴定不同微生物的糖代谢能力。

二、实验原理糖发酵实验是微生物学中常用的生化实验之一，用于检测微生物对糖类的代谢能力。

不同微生物具有不同的酶系，对糖类的分解能力各异。

在实验中，将微生物接种于含有糖类的培养基中，观察其在一定时间内对糖类的代谢情况，如产酸、产气、pH 变化等，从而判断微生物的糖代谢能力。

三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌等。

2. 培养基：糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖、蔗糖等）。

3. 仪器：培养箱、显微镜、移液器、试管、酒精灯等。

4. 试剂：无菌水、溴甲酚紫、无菌生理盐水等。

四、实验方法1. 菌种活化：将菌种从冷冻保存管中取出，接种于LB培养基中，37℃培养过夜。

2. 制备糖发酵培养基：将糖发酵培养基分装至试管中，每管加入1ml无菌水，混匀。

3. 接种：将活化好的菌种用无菌移液器吸取适量菌液，接种于糖发酵培养基中。

4. 培养与观察：将接种好的试管置于37℃培养箱中培养，每隔一定时间观察并记录实验结果。

五、实验结果1. 大肠杆菌（1）葡萄糖发酵：产酸产气，pH下降，溴甲酚紫由黄色变为紫色，产生气泡。

（2）乳糖发酵：产酸产气，pH下降，溴甲酚紫由黄色变为紫色，产生气泡。

2. 枯草芽孢杆菌（1）葡萄糖发酵：产酸，pH下降，溴甲酚紫由黄色变为紫色，无气泡。

（2）乳糖发酵：不发酵，pH无变化，溴甲酚紫颜色无变化。

3. 酵母菌（1）葡萄糖发酵：产酸，pH下降，溴甲酚紫由黄色变为紫色，无气泡。

（2）蔗糖发酵：产酸，pH下降，溴甲酚紫由黄色变为紫色，无气泡。

六、实验结论1. 大肠杆菌具有较强的糖代谢能力，能发酵葡萄糖和乳糖，产生酸和气体。

2. 枯草芽孢杆菌对葡萄糖发酵能力较弱，仅产酸不产气；对乳糖无发酵作用。

3. 酵母菌对葡萄糖和蔗糖发酵能力较弱，仅产酸不产气。

一、实验目的1. 了解并掌握生物糖化发酵的基本原理和过程。

2. 掌握糖化酶和发酵菌的筛选与鉴定方法。

3. 学习糖化发酵过程中关键参数的测定方法。

4. 探讨糖化发酵条件对产物产率的影响。

二、实验原理生物糖化发酵是指利用酶将淀粉类物质转化为可发酵糖的过程，再通过发酵菌将可发酵糖转化为酒精、二氧化碳等产物的过程。

本实验主要分为糖化阶段和发酵阶段。

1. 糖化阶段：利用糖化酶将淀粉水解为葡萄糖。

糖化酶是一种内切酶，可以随机切割淀粉分子中的α-1,4-糖苷键，产生大量葡萄糖。

2. 发酵阶段：利用发酵菌将葡萄糖转化为酒精、二氧化碳等产物。

常见的发酵菌有酵母菌、乳酸菌等。

三、实验仪器与试剂1. 仪器：锥形瓶、烧杯、玻璃棒、温度计、pH计、分析天平、移液管、显微镜等。

2. 试剂：淀粉、糖化酶、发酵菌、葡萄糖、酵母膏、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠等。

四、实验步骤1. 糖化酶的筛选与鉴定1.1 将淀粉溶解于水中，配制成一定浓度的淀粉溶液。

1.2 取少量淀粉溶液于锥形瓶中，加入不同浓度的糖化酶，搅拌混匀。

1.3 将锥形瓶放入恒温水浴锅中，在一定温度下反应一定时间。

1.4 取反应液，用碘液检测淀粉是否被水解。

若淀粉被水解，则出现蓝色消失现象。

2. 发酵菌的筛选与鉴定2.1 将发酵菌接种于培养基中，培养一段时间。

2.2 观察菌落形态，记录菌落特征。

2.3 对发酵菌进行发酵实验，检测其发酵产物。

3. 糖化发酵实验3.1 将筛选出的糖化酶和发酵菌按一定比例混合，加入淀粉溶液中。

3.2 将混合液放入恒温水浴锅中，在一定温度下进行糖化发酵。

3.3 定期取样，测定发酵液的pH值、葡萄糖浓度、酒精浓度等参数。

4. 数据分析与讨论4.1 分析不同糖化酶、发酵菌对糖化发酵过程的影响。

4.2 探讨糖化发酵条件对产物产率的影响。

五、实验结果与分析1. 筛选出了一种高效的糖化酶，其糖化效率达到90%以上。

2. 筛选出了一种发酵能力强、酒精产率高的发酵菌。

实验四糖化酶综合实验（一）糖化酶摇瓶实验一、实验目的掌握糖化酶摇瓶实验的基本操作。

二、实验原理摇瓶培养是实验室常用的通风培养方法，通过将装有液体培养物的三角瓶放在摇床上振荡培养，以满足生物生长、繁殖及产生许多代谢产物对氧的需求。

三、实验材料1.菌种：黑曲霉（糖化酶生产常用菌种）2.培养基：玉米粉、豆饼粉、麸皮、水3.器材：500ml三角瓶、玻片四、方法步骤1. 配制培养基玉米粉 6%，豆饼粉 2%，麸皮 1%。

补足水分，原料浸入水中。

8层纱布+牛皮纸包扎，0.1MPa下灭菌30min。

500ml三角瓶 1瓶/小组，装液量分别为100ml 2个小组、200ml 2个小组2. 接种成熟斜面，在无菌条件下，注入10ml无菌水，振荡成孢子悬浮液。

待发酵培养基灭菌后冷却到30～32℃时，分别将孢子悬浮液接入三角瓶中，接种量为2ml，做好标记3. 培养将三角瓶固定在摇床上，培养温度为31℃，转速为200rpm，培养时间为96h4. 显微镜观察菌丝形状，测量发酵液pH，测定糖化酶活力五、实验结果1.比较两种不同装液量条件下的菌体形状特征、酶活力，将结果填入分析：由于摇瓶培养的时间未达到96小时。

所以，培养瓶内壁只出现少量黑色菌落。

但相对于100ml培养基中的菌体要多一些。

说明培养基量的多少会影响菌体的生长，培养基量多则营养多更有利于菌体快速旺盛生长，增殖。

因此，观察到的菌丝相对于100ml培养基中的菌丝多而粗。

培养时间一定要遵循菌体的生长曲线时间，不能过早或过晚结束培养。

应按照各种菌体与产物的模式，适时停止培养收集产物酶。

本实验摇瓶培养才72小时，未能使菌体充分生长，即菌数少，产酶量低，或培养时间还未达到菌体大量产酶的时段，这将影响后续酶的分离提取及活力测定。

培养基应适量，在不浪费原料的同时有能使菌体快速生长，并且控制培养基的量，将减轻酶分里提取的工作量。

（二）糖化酶活力测定一、实验目的掌握糖化酶活力测定的原理与方法。

三、仪器和试剂
1、菌种：枯草芽孢杆菌
2、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭 菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分 析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量 筒、纱布、绳子、pH 试纸、玻棒等。
四、实验步骤
1、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组1支）
2、培养基的准备： 3、工艺条件： 查资料，自行设计 查资料，自行设计
发酵结束时，显微镜检查每个发酵瓶是否污染，
若无污染合并发酵液并测定发酵酶活目的、实验原理、实验内 容、实验步骤、实验结果与分析，讨论， 参考文献。 实验中存在哪些问题，如何改进；若实验 结果偏差较大需认真分析原因。
实验二 摇瓶发酵生产α-淀粉酶
一、实验目的
掌握酶的发酵生产方式之——微生物发酵 产酶；
学习和掌握摇瓶培养的方法。
二、实验原理
微生物发酵法是实际生产中酶制剂制取的主要方 法。发酵生产中多用液体深层发酵法制备酶。
在进行大规模液体深层发酵法生产酶制剂之前， 必须首先在实验室对保藏的目的菌种进行活化和 扩大培养，制得生产种子。 扩大培养多采用摇瓶培养，即在锥形瓶中加入一 定量的液体培养基，在摇床上以一定转速摇动进 行恒温培养。 摇瓶培养也是实验室模拟生产上进行发酵产酶的 一种模拟实验。
4、菌种的制备：将成熟的菌种斜面在无菌条件下 注入10 mL 的无菌水，振荡成均匀的孢子悬浮液， 同时测孢子浓度。 5、接种：待灭菌后的培养基冷却后，分别将以制 备好的孢子悬浮液接入培养基中，接种量为2 mL， 共接5 瓶（100ml/250ml瓶），做好标记。
四、实验步骤
固液分离：方法自定；
获得的澄清发酵液-18℃保存，可装入矿泉水瓶 子中，备下次实验使用。 发酵过程中pH、酶活力的动态变化（可以每隔12h 测定直到发酵结束）；其他指标？

枯草芽孢杆菌产α-淀粉酶发酵试验杨仕春2008113130化学与生命科学学院摘要：以枯草芽孢杆菌（BacilusSubtilisBF—7658）为实验菌株，通过种子扩大培养，选出生长力旺盛的菌株进行液体摇瓶发酵。

通过测定不同发酵时间生产的酶活，来初步估计发酵最佳时期和终点。

关键词：枯草芽孢杆菌，α-淀粉酶，液体摇瓶发酵，酶活淀粉酶是能够分解淀粉糖苷键的一类酶的总称，包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶。

芽孢杆菌主要用来产生α-淀粉酶和异淀粉酶，其中α-淀粉酶又称淀粉1，4-糊精酶，能够切开淀粉链内部的α-1，4-糖苷键，将淀粉水解为麦芽糖、含有 6 个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖；而异淀粉酶又称淀粉α-1，6-葡萄糖苷酶、分枝酶，此酶作用于支链淀粉分子分枝点处的α-1，6-糖苷键，将支链淀粉的整个侧链切下变成直链淀粉。

通过发酵实验，我们可以以酶活为依据，初步估计发酵的最佳时期和发酵终点。

实验材料和方法一、实验材料：（一）实验菌株：以枯草芽孢杆菌（BacilusSubtilisBF—7658）（二）培养基：1、种子培养液葡萄糖1%Tryptone(胰蛋白胨)：1%,Yeast Extract(酵母提取物)：0.5%,NaCl(氯化钠)：1%调pH7.2若配置固体培养基，则再加入1.5% 琼脂。

2、产淀粉酶发酵培养液玉米粉 2 .0 %黄豆饼粉1 .5%CaCl 2 0 .02 %MgSO4 0 .02%NaCl 0 .25%K2HPO4 0 .2%柠檬酸钠0 .2%硫酸铵0 .075%Na2HPO4 0 .2 %调节pH 值7 .0（三）0.02M磷酸缓冲液（pH6.0）（四）实验仪器离心机、水浴锅、250mL三角瓶、试管二、实验1、分别按培养基配方配制种子培养基和发酵培养基。

2、种子斜面及种子液准备–A. 挑取单菌落从平板转接于新鲜种子斜面培养基，37℃，24h作菌种（3支/组）。

–B. 将配好的种子培养液按每瓶50mL分装于250mL三角瓶中灭菌（100KPa 20min ）。

20L全自动发酵罐枯草芽孢杆菌产淀粉酶实验实验时间：2012年6月17日—2012年6月28日学生姓名：xxxxxx学号：院系：生命学院专业：生物技术指导教师：2012年6月30日目录一. 实验目的要求 (4)二、实验试剂和仪器 (4)1、种子培养基：57＃培养基 (5)2、发酵培养基 (5)3、发酵过程中相关参数的测定 (6)三、实验步骤与方法 (6)1、了解发酵罐系统的结构 (6)2、种子培养 (6)3、发酵罐空消 (6)4.PH电极与DO电极的首次校正 (8)5、发酵培养基的配置 (9)5.1 培养基摇瓶试验 (9)5.2 种子的摇瓶 (9)6.装料 (10)7、实消 (10)8.PH电极与DO电极的再次校正 (10)9、接种 (11)10、设定发酵参数，运行发酵指令 (11)11、发酵过程中相关参数的记录 (11)12、发酵过程中取样及相关参数的测定 (12)（1）参数测定所需的溶液的配置 (12)（2）取样 (13)（3）样品处理 (13)（4）残糖含量测定（DNS法） (13)（5）生物量的测定（比浊法） (14)（6）淀粉酶发酵活力的测定 (14)（7）葡萄糖标准曲线的制作 (15)（8）麦芽糖标准曲线的制作 (15)13. 放料,清洗罐体，空消，保养 (16)四、实验结果与讨论 (17)五. 实验心得体会 (26)一、实验目的要求：1.掌握机械搅拌通风发酵罐的基本结构(1)发酵罐主体(2)蒸汽灭菌系统：正确把握各阀门的操作(3)通气系统(4)加热冷却循环系统：各管道联络关系(5)搅拌动力系统(6)智能控制系统2.掌握发酵罐小试的基本操作，包括：培养基配制，灭菌，接种，参数设定3.掌握发酵过程中的参数测定和在线控制，包括：pH，DO，温度，搅拌速度，生物量，残糖含量，产物生成量，消泡，CO2。

4.运用所学发酵工程基本理论分析发酵过程中的实验数据，讨论某一特定菌株的发酵规律。

二、实验试剂和仪器1、种子培养基：57＃培养基试剂及药品：麸皮50g豆饼粉（牛肉浸膏/粉）30gNaCl 2 g蒸馏水、斜面培养的枯草芽孢杆菌器材：1000ml烧杯、玻璃棒、100ml锥形瓶（20个）、天平、粉碎机、电热炉、高压灭菌锅、灭菌枪头、1000移液枪、酒精灯、75%酒精、棉球、无菌操作台、封口膜、橡皮筋、恒温摇床、1000ml锥形瓶、标签纸2、发酵培养基：试剂及药品：麸皮（3％）320g12水磷酸氢二钠（0.2％）70.55g硝酸钾（0.2％）28g消泡剂（植物油）（0.3％）42g蒸馏水器材：1000ml烧杯、玻璃棒、75%酒精、棉花、一次性口罩、打火机、厚手套、天平3、发酵过程中相关参数的测定的药品、仪器：试剂及药品：无水葡萄糖0.1gNaOH 4g3水乙酸钠0.6804g淀粉1g乙酸、蒸馏水、DNS、PH标准缓冲液、亚硫酸钠器材：10mL具塞刻度试管（30个）、100ml容量瓶（2个）、200ml 容量瓶（2个）、100ml烧杯、100ml试剂瓶（4个）、100ml锥形瓶（2个）、玻璃棒、1000ml烧杯、标签纸、电热炉、木夹、试管架、PH标准试纸、PH计、枪头、1000移液枪、恒温水浴锅、分光光度计、电子天平、烘箱、冰箱、上海高机SY-3000发酵系统三、实验步骤与方法1、了解发酵罐系统的结构（1）．罐体（2）．发酵罐的搅拌系统（3）．空气供给系统（4）．温度控制系统（5）．pH控制系统（6）．过程变量的测量（7）．灭菌系统（8）测量及控制系统：下位机、上位机、网络通讯2、种子培养（1）称取麸皮50g、豆饼粉（牛肉浸膏/粉）30g（用粉碎机搅碎为粉末）,上述成分混合于1000ml烧杯中，加NaCl 2 g、蒸馏水1.0L 置于电热炉上煮沸1小时，将pH 自然，待温度下降后分装入20个100ml 锥形瓶中，每瓶30ml。

糖发酵试验实验报告一、实验目的1、了解糖发酵试验的原理和方法。

2、学会观察细菌对不同糖类的发酵反应。

3、掌握通过糖发酵试验鉴别细菌的基本技能。

二、实验原理糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应之一。

不同的细菌具有不同的酶系，能够分解利用不同的糖类。

当细菌分解糖类产酸时，培养基中的指示剂会发生颜色变化；若产气，则会在杜氏小管中出现气泡。

通过观察培养基的颜色变化和杜氏小管中有无气泡，可以判断细菌对糖类的发酵能力。

三、实验材料1、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等。

2、培养基：葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蔗糖发酵培养基等。

3、器材：无菌移液管、接种环、培养箱、杜氏小管等。

四、实验步骤1、培养基的制备按照配方准确称取各成分，溶解于蒸馏水中，调节 pH 值至适宜范围，然后分装到试管中，每管约 10ml。

在装有葡萄糖发酵培养基的试管中加入倒置的杜氏小管，包扎后进行高压蒸汽灭菌。

其他糖类发酵培养基的制备方法相同。

2、菌种的接种用无菌接种环分别挑取大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的单菌落，接种到相应的糖发酵培养基中。

每种细菌接种三管不同的糖类培养基，做好标记。

3、培养将接种后的试管置于 37℃恒温培养箱中培养 24 48 小时。

五、实验结果及观察1、葡萄糖发酵试验大肠杆菌：培养基变为黄色，杜氏小管中有气泡产生。

枯草芽孢杆菌：培养基变为黄色，但杜氏小管中无气泡。

金黄色葡萄球菌：培养基颜色不变，杜氏小管中无气泡。

2、乳糖发酵试验大肠杆菌：培养基变为黄色，杜氏小管中有气泡产生。

枯草芽孢杆菌：培养基颜色不变，杜氏小管中无气泡。

金黄色葡萄球菌：培养基颜色不变，杜氏小管中无气泡。

3、蔗糖发酵试验大肠杆菌：培养基颜色不变，杜氏小管中无气泡。

枯草芽孢杆菌：培养基颜色不变，杜氏小管中无气泡。

金黄色葡萄球菌：培养基颜色不变，杜氏小管中无气泡。

六、结果分析1、大肠杆菌能发酵葡萄糖和乳糖产酸产气，表明其具有相应的酶系，能够分解利用这两种糖类。