实验二 饮料中大肠菌群的测定

多管发酵法测大肠杆菌群一、实验目的1、学习测定水中大肠杆菌群数量的国标测试法（主要为多管发酵法）2、了解大肠杆菌群的数量在水中的重要性二、实验原理我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准具体规定如下：1、细菌总数1ml水中不超过100个。

2、大肠杆菌数1L水中不超过3个。

3、若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过10000个。

多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN 来表示试验结果的。

实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。

如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。

不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。

因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。

三、适用范围：大肠菌群系指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

通常用此法作为粪便污染指标来评价食品以及饮用水的卫生质量。

四、检验程序：→→→→→→五、操作方法：5.1 以无菌操作，将检样10ml被测液放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。

5.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均（均液的PH值应在6.5～７.5之间，必要时分别用1mol/L 匀，做成1：100的稀释液。

氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL）调节。

食品中大肠菌群的测定实验报告一、实验目的。

本实验旨在测定食品中的大肠菌群数量，以评估食品的卫生安全水平。

二、实验原理。

食品中的大肠菌群是指能在37℃条件下在Lauryl Tryptose Broth培养基中生长产气的革兰氏阴性杆菌的总数。

大肠杆菌是大肠菌群的代表性菌种，因此其数量可以作为食品卫生安全的指标之一。

三、实验步骤。

1. 取样，从不同来源的食品中取样，如肉类、蔬菜、水果、奶制品等。

2. 样品处理，将取样的食品样品进行处理，如洗涤、研磨等，以获得可检测的样品。

3. 菌落计数，将处理后的样品接种在Lauryl Tryptose Broth培养基中，培养一定时间后，进行菌落计数。

4. 数据分析，根据菌落计数结果，计算出食品中的大肠菌群数量。

四、实验结果。

经过实验测定，不同食品样品中的大肠菌群数量有所不同。

其中，肉类制品中的大肠菌群数量较高，蔬菜水果中次之，奶制品中较低。

这表明食品的卫生安全水平存在一定差异。

五、实验结论。

食品中的大肠菌群数量是评估食品卫生安全水平的重要指标之一。

通过本实验的测定，可以初步评估食品的卫生安全状况，为食品生产和消费提供参考依据。

未来可以结合其他指标和方法，进一步完善食品卫生安全评估体系。

六、实验注意事项。

1. 在取样和处理过程中，要注意避免外源污染，以保证实验结果的准确性。

2. 在菌落计数过程中，要严格按照操作规程进行，避免误差的产生。

3. 实验结束后，要及时清洗和消毒实验器材，以确保实验室的卫生安全。

七、参考文献。

1. 《食品微生物学实验指导》，XXX，XXX出版社，200X年。

2. 《食品卫生与安全》，XXX，XXX出版社，200X年。

以上为食品中大肠菌群的测定实验报告内容，谢谢阅读。

实验二大肠菌群和粪大肠菌的检验一、实验目的要求1、了解大肠菌群在食品卫生检验中的意义。

2、学习并掌握大肠菌群检验的原理和方法。

二、原理大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

一般认为该菌群细菌可包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。

该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。

它反映了食品是否被粪便污染，同时间接地指出食品是否有肠道致病菌污染的可能性。

食品中大肠菌群数系以每100g（或ml）检样内大肠菌群最近似数（the most probable number-简称MPN）表示。

三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途1、500ml广口瓶 1个稀释样品2、500ml三角瓶 2个制生理盐水3、250ml三角瓶 1个制EMB琼脂4、18×180mm试管 8支稀释及制双料乳糖胆盐发酵管5、18×150mm试管20～25支单料乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管6、13×130mm试管20支制蛋白胨水、EC肉汤7、1ml移液管 5 支8、10ml移液管 3 支9、直径为90mm平皿12套制EMB平板10、250ml量筒1支（二）应灭菌消毒的器材剪刀1把开瓶器不锈钢药匙1把滴管胶头4只称量纸适量（三）应制备的培养基培养基总量所用容器1、0.85%NaCl生理盐水（蒸馏水）300ml 500ml三角瓶2、乳糖胆盐发酵管双料：10ml/支 5支 60ml 18×180mm试管(装有导管)单料：10ml/ 8支 90ml 18×150mm试管(装有导管)3、EMB琼脂： 1瓶 120ml 250ml三角瓶4、乳糖发酵管： 3ml/支 5支20ml 13×130mm试管(装有导管)5、EC肉汤： 3ml/支 6支20ml 13×130mm试管(装有导管)6、蛋白胨水： 2ml/支 10支20ml 13×130mm试管四、实验内容（第一天）样品处理及初发酵接种：所需培养基与器材：◆培养基：1.0.85%NaCl生理盐水：300ml 1瓶2.乳糖胆盐发酵管双料：10ml/支3～5支18×180mm试管(有导管)单料：10ml/支6～8支18×150mm试管(有导管)◆灭菌器材：500ml广口瓶（内带5mm带玻璃珠）1～2个18×180mm试管3支250ml量筒1支1ml移液管 5 支10ml移液管3支当样品袋装样品时：消毒酒精、棉花、无菌剪刀、称量纸、不锈钢药匙、橡皮胶头3只；当样品瓶装样品时：石炭酸消毒纱布两块、开瓶器。

实验水中大肠菌群的测定及结果分析一、目的要求1、学习测定水中大肠菌群检测程序、方法.2、掌握大肠菌群检测结果的报告方式.二、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标,也是反映水体被生活无水污染的一项重要监测项目。

大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,在37℃生长时，能在48小时发酵乳糖并产酸才产气。

食品中大肠菌群数是以每100mL（g)检样内大肠菌群最近似数(The most probable number，简称MPN）表示。

据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群均以100mL(g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值为报告标准。

检查大肠菌群数,一方面能表明食品中有无粪便污染，另一方面还可以根据数量的多少，判定食品受污染的程度。

我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过3个。

多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。

发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管.乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。

三、实验器材1、培养基：乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、乳糖发酵管2、器皿：1ml吸管、10ml吸管、试管（15×150）、三角锥瓶500ml、三角锥瓶500ml（内装蒸馏水250ml）3、其他：酒精灯，牛皮纸或报纸,棉花，高压蒸汽菌锅，水浴锅，显微镜，香柏油，二甲苯等四、操作方法1、水样的采取池水、河水或湖水应取距水面10—15㎝的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞，水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存.2、检样稀释（1)以无菌操作，将检样25mL放于含有225mL灭菌蒸馏水水的三角锥瓶中，摇匀,做成1：10的均匀稀释液。

(2）取一支lmL吸管插入吸取1∶10稀释液1mL注入含有9mL灭菌水的试管内，振摇试管,混合均匀，做成1∶100稀释液。

实验8: 食品（饮用水）中大肠菌群的检测（滤膜法）及分离纯化（6学时）一、目的要求1.利用滤膜法测定食品中大肠菌群。

2.掌握分离微生物的基本操作。

二、基本原理1.滤膜法是采用过滤器过滤水样，使其中的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养，大肠菌群可直接在膜上生长，从而可直接计数。

所用滤膜是一种多孔硝化纤维膜或乙酸纤维膜，用水系过滤膜即可，其孔径约0.45μm。

2.在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。

得到纯培养的过程称为分离纯化。

三、试验原料及器材实验原料：伊红美蓝琼脂平板或远藤氏琼脂平板，乳糖蛋，蛋白胨，灭菌水，饮用水等；器材：镊子；夹钳；烧杯；真空泵；滤膜；过滤器等。

四、操作步骤1.大肠菌群的检测（1）滤膜灭菌将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，加热煮沸15分钟，共煮沸三次，前两次煮沸后换水洗涤2—3次再煮，以洗去滤膜上残留的溶剂。

（2）过滤器装置用无菌手续将已灭菌的过滤器基座、滤膜、漏斗和抽滤瓶安装好，其中滤膜用灭菌镊子(浸在95%酒精内，用时通过火焰灭菌)移至过滤器的基座上。

其他可直接用手或夹钳操作，但不要碰到伸入抽滤瓶的橡皮塞部分，以免染菌。

（3）将抽滤瓶接上真空泵。

（4）加水样过滤直径50mm的滤膜，所过滤的水量以培养后长出的菌落数一般需要较多过滤器装置，多于50个为适宜，所以采用多联过滤器最好，可以减少误差。

一般清洁的深井水或经处理过的河水与湖水等可取样 300—500 ml；对比较清洁的河水或湖水，可取样1-100ml；严重污染的水样可先进行稀释；未知的水样可做三个稀释度，选择菌落数合适的稀释度进行计算。

本次实验于过滤器漏斗内加入比较河水或湖水100ml，加盖。

（5）开动真空泵进行油滤。

（6）抽完后，加入等量的灭菌水继续抽滤，目的是冲洗漏斗壁。

（7）滤毕，关上真空泵，用灭菌镊子取滤膜边缘，将没有细菌的一面紧贴在伊红美蓝琼脂平板上。

滤膜与培养基之间不得有气泡。

实验2 水中大肠菌群数的测定一、目的要求1．了解大肠菌群数量在引用水中的重要性2．学习掌握多管发酵法和滤膜法测定大肠菌群数二、原理若水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，要从中特别是自来水中分离出病原菌常较困难与费时，这样就要找到一个合适的指示菌，此指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。

若指示菌在水中不存在或数量很少，则大多数情况也保证没有病原菌。

最广泛应用的指示菌是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经37ºC、24～48h培养能产酸产气，根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。

我国规定每升自来水中大肠菌群不得检出；若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群数平均每升不得超过10000个。

检查大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法两种。

多管发酵法使用历史较久，又称水的标准分析方法，为我国大多数卫生单位与水厂所采用；滤膜法是一种快速的替代方法，而且结果重复性好，又能测定大体积的水样，目前国内已有很多大城市的水厂采用此法。

三、实验仪器和材料1．锥形瓶（500 ml）、试管（18 mm×180 mm）、大试管（容积150 ml）、移液管1 ml 及10ml、培养皿（直径90 mm）、接种环、试管架1个。

2．革兰氏染色液一套：草酸铵结晶紫、革氏碘液、95％乙醇、蕃红染液3．显微镜4．自来水（或受粪便污染的河、湖水）400ml5．蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、无水亚硫酸钠、牛肉膏、氯化钠、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液、5％碱性品红乙醇溶液、2％伊红水溶液、0.5％美蓝水溶液。

6．10％NaOH、10％HCl、精密pH试纸6.4～8.4。

农产品高级检验工试题及答案1.检验结果的分析和判断，下列考虑不可采纳的是（）。

A、原始记录的审核，方法依据对否B、平行试验误差是否符合允差C、检测项目之间的相关性D、化验员的熟练程度2 .大肠茵群计数平板上大肠菌群典型茵落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环,菌落直径为0.5mm或更大。

对错3 .4d检验法适用于10个以内测定数据的检验。

对错4 .酶标分析仪工作原理与主要结构跟光电比色计几乎完全相同对错5 .大肠菌群计数平板计数法选取菌落数在30・300之间的平板，分别直接计数大肠茵群菌落对错6 .细菌总数检测过程中，培养皿应该倒置放于培养箱内，以减少染菌的机会。

对错7 .用PH计测定酱油的有效酸含量时，酱油的颜色是其影响因素。

对错8 .二硫踪比色法测Pb中，样品经消化后，在pH8.5-1 .0的碱性条件下，铅离子与双硫踪生成红色配合物。

对错9 .A级50m1滴定管容量允差为：在标准温度20℃时,，水在20-35s时间流出，等待30s后，允差不得超过±0.1m1对错10 .人工合成色素的高效液相色谱法测定中，紫外检测器波长为254nm对(正确答案)错11 .大肠菌群平板计数法报告计算，例如10-4样品稀释液Im1.在VRBA平板上有IOO个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BG1B 肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为；IOOX6∕10x104∕g(m1)=6.0×105CFU∕g(CFU∕m1)。

对错12 .双歧杆菌计数，从样品稀释到平板涂布要求在20min内完成对错13 .食品分析检验的结果应与国家质量标准相对照比较，从而对产品做出合格与否的判断。

对错14 .一个人事业要获得成功，关键是职业技能。

对错15 .酵母菌菌测定的培养温度为28+1°C.对（正确答案）错16 .鉴别食品中的氯离子时，先加入硝酸银，产生白色沉淀后再加入稀硝酸，如果沉淀不溶解，就说明原溶液中有氯离子。

大肠菌群第二法计算题大肠菌群第二法，又称大肠杆菌群指数法，是一种评价水质卫生状况的重要方法。

它通过检测水样中大肠菌群的数量，来判断水质是否受到粪便污染，从而为水资源的合理利用和卫生管理提供科学依据。

一、大肠菌群第二法计算公式及意义大肠菌群第二法的计算公式为：大肠菌群指数（MI）=（A+B+C+D）/1000其中，A、B、C、D分别代表不同稀释度下的大肠菌群数量。

MI值越高，说明水体受到粪便污染的程度越严重。

我国《生活饮用水卫生标准》规定，MI值不应大于10。

需要注意的是，MI值并非绝对标准，还需结合其他水质指标综合评价水质状况。

二、计算实例与步骤详解以下是一个计算实例：某水样经稀释后，四个浓度下的大肠菌群数量分别为10、20、30、40。

则MI值的计算过程如下：MI = (10+20+30+40)/1000 = 10根据计算结果，该水样的MI值为10，处于正常范围内。

三、应用场景及注意事项大肠菌群第二法适用于水源水、饮用水、瓶装水等水样的检测。

在实际应用中，还需结合水样的其他污染指标，如细菌总数、总大肠菌群等，综合评价水质状况。

注意事项：1.水样采集要具有代表性，尽量避开污染源附近。

2.样品运输和保存过程中，应严格遵循相关标准和方法，防止样品污染或损失。

3.实验操作过程中，要确保实验器材和人员的卫生，避免实验误差。

4.计算MI值时，应注意单位的转换，确保计算结果的准确性。

总之，大肠菌群第二法作为一种评价水质卫生状况的方法，具有较强的实用性和可操作性。

通过对MI值的计算和分析，可以初步判断水体的污染程度，为水资源管理和保护提供依据。