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假鼻疽伯克霍尔德菌感染1例
杨金梅;孙恩华
【期刊名称】《临床检验杂志》
【年(卷),期】2024(42)3
【摘要】类鼻疽病是一种人畜共患传染病,由假鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei,BP)感染引起,一般多见于热带和亚热带地区,在我国以海南省和广东省较为多见[1-2],其他地区偶见散发病例。
类鼻疽可引起软组织感染、肝肺脓肿、脓毒血症、败血症等,也可见肌肉组织与骨骼感染并发症等[3];该病发病率低,但病死率高达30%[4]。
由于其临床表现不典型,容易漏诊和误诊,我院收治1例由BP引起的手坏死性筋膜炎,明确病原学诊断后,对其不典型性表现报告如下。
【总页数】2页(P237-238)
【作者】杨金梅;孙恩华
【作者单位】滨州医学院烟台附属医院检验科;山东大学齐鲁医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R446.5
【相关文献】
1.青海省首例输入性人感染假鼻疽伯克霍尔德菌死亡病例
2.假鼻疽伯克霍尔德菌致双髋慢性化脓性关节炎1例并文献回顾
3.1例假鼻疽伯克霍尔德菌致颅骨及脑膜感染患者的临床表现及诊疗经过分析
4.假鼻疽伯克霍尔德菌致深部组织脓肿形成三例
5.假(类)鼻疽伯克霍尔德菌致头皮下及颅骨脓肿1例
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1例假鼻疽伯克霍尔德菌败血症患者的护理体会作者：冯媚华来源：《中西医结合心血管病电子杂志》2019年第04期【关键词】假鼻疽伯克霍尔德菌败血症;护理;体会【中图分类号】R473.5 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095.6681.2019.04..02类鼻疽（Melioidosis）是热带和亚热带地区的人兽共患病，病原为假鼻疽伯克霍尔德菌，是具有动力的革兰氏阴性需氧菌，是自然腐生菌，广泛分布于泥土、积水、池塘和多种农作物中。
中国病例主要分布在香港、台湾地区，国内曾在海南、广东、湖南和贵州等13个县、市的土壤、水和患者与动物的标本中分离到该菌[1]。
人类感染是接触到染有该菌的水和土壤，经伤口或呼吸道进入体内，人普遍易感，免疫功能低下如糖尿病患者染菌后易患该病，但人与人之间传播罕见。
该病潜伏期大多4～5d，也有长达数月或数年者，临床表现多种多样，可分为隐匿性感染、无症状肺浸润、急性局部化脓性感染、急性肺部感染、急性败血症、慢性化脓性感染和复发性感染等类型，病原学检查以渗出物、脓液等涂片或培养，血培养等可发现此菌[2]。
急性败血症如不及时治疗可迅速出现呼吸窘迫综合征、感染性休克、多脏器功能衰竭。
在抗菌药问世前，类鼻疽显性感染的病死率为95%，早期诊断、早期治疗以及采用较长疗程的抗菌治疗已使病死率下降至27%，但败血症患者的病死率高于50%。
我院于于2017年10月收治一例假鼻疽伯克霍尔德菌败血症合并类风湿关节炎及糖尿病患者，在应用抗感染、激素等治疗后病情好转出院，现将护理体会介绍如下。
1 病例介绍患者女性，52岁，10天前无明显诱因出现发热恶寒，最高体温40℃，伴前额头痛，腹泻，解黄色稀样便10余次，入住当地人民医院，具体诊治过程不详，3天前热退办理出院;15/10患者再次发热，伴腹泻3次，呈黄色稀便，泻后出现腹痛，呈阵发性，呕吐胃内容物2次，遂于16/10来我院门诊就诊，为进一步诊治，门诊拟“类风湿关节炎;发热查因”于2017-10-16收入我风湿病科继续治疗治疗。
洋葱伯克霍尔德菌群质量标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述洋葱伯克霍尔德菌群是指存在于洋葱中的一种特殊微生物群体。
这个菌群被广泛研究并被认为对洋葱的品质和营养价值有着重要影响。
伯克霍尔德菌属是一类革兰氏阴性非发酵杆菌，常见于土壤和植物根际土壤中。
洋葱是伯克霍尔德菌群最主要的宿主之一。
伯克霍尔德菌群对洋葱的生长发育以及抗病能力具有重要作用。
它可以帮助植物吸收养分、提高免疫力、抑制病原微生物的生长，从而改善洋葱的产量和质量。
同时，伯克霍尔德菌群还具有一定的环境适应性和耐逆性，在恶劣环境条件下能够保持较高的活性和生存能力。
洋葱的质量标准是制定和评估洋葱营养价值、外观特征、口感口感和食用安全的重要依据。
洋葱的外观特征包括外皮颜色、大小和形状等，口感特征包括硬度、水分含量以及纤维含量等。
此外，洋葱作为一种蔬菜食材，食用安全也是一个不可忽视的考量因素。
质量标准的制定需要综合考虑这些因素，并根据市场需求和消费者偏好进行调整。
本文将重点介绍洋葱伯克霍尔德菌群的概述和质量标准，并讨论其对洋葱质量的影响。
同时，将探讨如何通过科学管理和种植技术改善洋葱伯克霍尔德菌群的数量和活性，从而提高洋葱的产量和品质。
最后，总结本文的主要内容并提出未来研究的方向。
1.2文章结构文章结构是指文章的整体框架和组织方式。
一个良好的文章结构可以使读者更容易理解和掌握文章的内容，使文章逻辑清晰、条理分明。
下面是对于文章结构的介绍和说明：文章结构部分应该包括以下内容：1. 文章主题的概述：在这部分中，介绍文章主题的背景和重要性。
解释为什么有必要进行该文的研究或撰写该文，并说明该文对相关领域的意义。
2. 文章的整体框架：说明文章的整体结构和框架，包括各个部分的顺序和关系，以及每个部分的主要内容和目标。
可以提供一个总览，概述文章的章节和段落的组织形式，帮助读者理解文章的脉络。
3. 各个章节的内容概述：对每个章节的主要内容进行简要介绍和概括。
洋葱伯克霍尔德菌（ Burkholderia cepacia ，BC）是院内感染的几种重要条件致病菌之一，通常对健康人体并不致病，多侵袭免疫力低下的个体，常定植于囊性纤维化和慢性肉芽肿患者的肺部，是一种高毒力、高致死性的病原菌。
近年来，该菌临床分离率不断增加，且对多种抗生素具有较高的耐药性，临床治疗存在困难。
生物学特性该菌为需氧非发酵、革兰阴性无芽孢杆菌，常见于潮湿土壤、水、植物等，能够在营养缺乏的水中生存和生长。
对营养要求不高，一般在普通培养基上生长良好，最适合生长温度为30-35℃，在4℃不生长，42℃生长不定。
绝大多数菌株能在麦康凯培养基上生长。
菌落正圆形，直径1mm以下，菌落中心因氧化乳糖而变成淡红色或红色。
一个菌株可产生一种或几种色素，与培养基的组成和培养温度有关。
该菌氧化酶弱阳或阴性，触酶延迟反应，动力、赖氨酸、枸橼酸盐、吲哚、H 2 S阳性，能氧化葡萄糖、麦芽糖，不还原硝酸盐。
标本类型洋葱伯克霍尔德菌存在于土壤及水中，是医院感染的常见病原菌之一，可从医院的自来水、体温表、喷雾器、导尿管等处分离到，同时可以从肺泡灌洗液、痰液、血液、穿刺组织、脓液等各种临床样本中检测到。
临床表现洋葱伯克霍尔德菌有特殊的黏附素，通过亲密接触或吸入带菌的气溶胶而传播，多侵袭免疫力低下的个体，在重症监护病房（ICU）患者中尤其多见。
ICU患者多有长期卧床、年龄大、免疫功能低下、意识障碍等表现，正常的吞咽、咳嗽等生理反射有不同程度的减弱和消失，痰、血和呕吐物不易排出，加上呼吸道侵入性操作的反复实施，如气管切开、气管插管、呼吸机使用等均是发生洋葱伯克霍尔德菌感染的危险因素。
所致病症主要有菌血症、尿路感染、化脓性关节炎、心内膜炎、脑膜炎和呼吸道感染等。
该菌有55%的分离菌株具有多重耐药性，耐药基因种类较多，包括β-内酰胺酶相关基因、氨基糖苷类修饰酶基因、消毒剂/磺胺耐药基因、喹诺酮类耐药基因、整合子及插入序列共同区携带的耐药基因等。
洋葱伯克霍尔德菌检验方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia complex，BCC）是一类常见的病原菌，被广泛认为是造成感染性疾病的重要原因之一。
BCC感染主要发生在免疫系统受损的患者，如囊肿纤维化、白血病和免疫抑制剂使用者等。
此外，BCC还是一种耐药性较强的细菌，对许多常规治疗药物具有抗药性。
洋葱伯克霍尔德菌检验方法的研究和发展对于提高感染疾病的诊断和治疗具有重要意义。
该检验方法可以快速而准确地检测出洋葱伯克霍尔德菌的存在，为临床医生提供指导性的依据，选择合适的治疗方案，并及时采取有效的预防措施。
本文的目的是系统地介绍洋葱伯克霍尔德菌检验方法的原理、实施步骤和注意事项，以及评估该方法的可行性和准确性。
同时，我们还将探讨洋葱伯克霍尔德菌检测的应用价值，以及未来进一步研究的方向和建议。
通过本文的阐述，希望能够提高人们对洋葱伯克霍尔德菌感染的认识，并促进检验方法的广泛应用，从而更好地保护患者的健康，减少感染疾病的发生和传播。
同时，加强对洋葱伯克霍尔德菌的研究，不断改进和完善检验方法，进一步推动感染疾病的防控工作。
1.2 文章结构本文将按照以下结构进行叙述：引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，将概述洋葱伯克霍尔德菌检验方法的重要性和研究现状，介绍文章的目的和意义。
同时，也会对本文的结构进行简要说明，帮助读者更好地理解文章内容的组织结构。
正文部分将分为三个小节来详细讨论洋葱伯克霍尔德菌的重要性、检验方法的原理以及实施步骤和注意事项。
在2.1 小节中，将介绍洋葱伯克霍尔德菌所具有的重要性，包括对洋葱产量和质量的影响，以及与人体健康的关联。
在2.2 小节中，将详细解析检验方法的原理，包括使用的试剂和仪器设备，以及基本的操作步骤。
在2.3 小节中，将详细介绍实施该检验方法时需要注意的事项，如样品采集、保存和处理的要点，以及潜在的误差来源和如何解决。
伯克霍尔德氏菌Burkholderia contaminans B-1对玫瑰香葡萄采后病害生防潜力研究玫瑰香葡萄因其含糖量高、香味浓郁而深受消费者喜爱。
但是,由于皮薄、含汁量大等特点在采后贮藏中易被病原微生物侵染而发生腐烂,虽然目前使用的SO2熏蒸结合低温贮藏技术可以有效抑制葡萄采后病害发生,但是,会产生病原菌抗药性增加、环境污染、损害人体健康等一系列问题,因此需要寻找一种新的技术来逐渐取代它。
生物防治正是目前公认的采后贮藏极具潜力的保鲜方法。
本研究以玫瑰香葡萄为实验试材,研究伯克霍尔德氏菌(Burkholderia contaminans B-1)对葡萄采后病原菌体内外抑制效果,以及其可能的抑菌机理。
并对其培养基进行优化,研究结果表明:(1)在离体条件下,用处于对数生长末期的拮抗菌即24h培养液与灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea)在培养皿中进行对峙培养,抑菌圈最大可达2.81cm,说明该菌产生有抑菌活性的代谢产物。
拮抗菌和病原菌进行接触和非接触对峙时,发现只有接触时拮抗菌才体现抑菌效果。
用拮抗菌的不同处理液处理灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea),菌悬液和培养原液有很强的抑菌作用,无菌过滤液无明显抑菌效果,推测抑菌活性物质可能存在于胞内或胞壁。
此外拮抗菌对B.cinerea孢子萌发、芽管伸长和菌丝形态均有影响。
和果蔬采后常见病原菌对峙培养时,均可有效抑制其菌丝的正常生长,表明此菌及其代谢产物具有广谱抑菌作用。
(2)在活体条件下,采前给葡萄果穗喷淋拮抗菌可显著降低入库前果实表面带菌量,给果实伤口接种拮抗菌不同时间培养液和不同处理液时发现,24 h培养液和培养原液处现果实发病率和病斑直径最小。
用不同浓度培养液和不同处理液浸泡果实后,于26℃、16℃和0℃三个不同温度下贮藏,结果可知,三个不同温度下,拮抗菌均可有效抑制葡萄采后灰霉病的发生,而0℃条件下对葡萄贮藏的腐烂控制效果最好,三个不同温度下,5倍培养液和菌悬液贮藏效果显著好于其他处理液,将拮抗菌和病原菌同时接种于果实伤口发现,拮抗菌延缓了伤口处B.cinerea孢子萌发和菌丝伸长。
唐菖蒲伯克霍尔德菌引起败血症及全身多发脓肿1例【中图分类号】r72 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2013）03-0659-02唐菖蒲伯克霍尔德菌（b.gladidi）是一种较为少见的条件致病菌。
本院于2011年2月自一败血症患者血液中培养出一株。
因临床文献报道较少见，且该患者病情发展较为特殊，值得探讨。
作者现将病历报告如下与同行进行交流：1.病历摘要患者女性，51岁。
主诉（现病史）：2个多月前有发热并持续1个月，到过当地医院住院检查诊断不明确，治疗效果不佳。
于10天前又出现明显发热，左侧腮腺区肿大10天，右侧眼睑肿胀2天。
张口困难，不能进食干饭，左颈部僵硬；无咳嗽，畏寒，呕吐，腹痛，关节痛等。
在当地医院输液治疗未见好转于2011年2月5日，来本院住院治疗。
查体：t38.5℃（最高达42℃），r18，p80，bp110/80；左侧腮腺区触及肿块，大小约6×10cm质硬，表面皮肤稍红，压痛（+）。
左侧胸锁乳突肌肿大，质硬与肿块相连，双侧淋巴结肿大，张口受限。
左颈部肿块，颌下左颈部多发性肿大淋巴结。
左耳前后及颈部皮下混合性包块，右眼皮增厚水肿，精神差明显头痛，其它未见异常。
检查结果：血常规wbc20.1×109/l，n83.2，l10.4，hb94g/l，plt705×109/l，血沉105mm/h，生化：总蛋白59.0，白蛋白29.4。
胸片正常。
ct诊断：（1）口腔部，左颈部肿块。
（2）颌下，左颈部多发肿大淋巴结。
住院期间患者病情变化情况：2月10日前额及顶部可触及约1.5×1.5cm及0.5×0.5cm肿块质地稍硬，轻压痛。
双上眼睑肿胀。
2月19日右手背面有一约4×5cm红肿块，质地稍硬无明显压痛，双下肢浮肿明显。
用药情况：先用阿莫西林/舒巴坦及头孢地嗪治疗，效果不佳改用加替沙星及哌拉西林/他唑巴坦抗感染。
出现抽搐，口吐白沫，考虑为颅内感染。
非发酵G-杆菌(nonfermentative G- Bacilli)1. 非发酵菌是一群需氧、无芽孢、不利用糖或仅能氧化分解糖类是做为能量来源的G-杆菌。
（1）通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧G-杆菌。
（2）非发酵菌与其它苛养或非糖发酵的G-杆菌之间的界限只是传统意义上的，并不是根据明确的遗传或表型特点来划分。
（3）多为条件致病菌，近年来日益增多，尤其是医院感染。
2. 分类与命名：主要的非发酵G-杆菌属被分成6个科：（1）假单胞菌科：根据rRNA-DNA同源性分为5个rRNA群①rRNAⅠ群/假单胞菌属；②rRNAⅡ群/伯克霍尔德菌属；③rRNAⅢ群/丛毛单胞菌属、食酸菌属；④rRNAⅣ群/短波毛单胞菌属；⑤rRNAⅤ群/窄食单胞菌属；⑥其它：鞘氨醇单胞菌属、希瓦菌属等（2）产碱杆菌科：产碱杆菌属；（3）黄杆菌科：华丽杆菌属（4）莫拉菌科：不动杆菌属、莫拉菌属；（5）甲基球菌科；（6）根瘤菌科3. 非发酵菌的基本鉴定要求（1）缺少糖发酵的证据，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。
（2）氧化酶+（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-杆菌都是非发酵菌。
（3）麦康凯上生长很差或不生长。
（4）动力：多为+，但多为专性需氧，故半固体培养基中不明显，宜用直接动力观察或染色法。
4. 重要的鉴定试验（1）葡萄糖利用（O/F试验）：O/F培养基:蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。
（2）氧化酶试验：（3）动力：半固体培养基:应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果,24和48小时后再次观察结果。
更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。
（4）色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。
（5）硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮的生化过程。
（6）吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等+。
1例感染洋葱伯克霍尔德菌肺炎的治疗分析【摘要】目的介绍院内感染洋葱伯克霍尔德菌肺炎的治疗新方法。
方法利用国内外文献分析与实际工作相结合,治疗多重耐药菌引起的感染。
结果在实际工作中取得较满意的效果。
结论利用时间差攻击疗法合理联用抗菌药物治疗洋葱伯克霍尔德菌肺部感染有效。
【关键词】洋葱伯克霍尔德菌;时间差攻击疗法;抗菌药物洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia, BC) (1950 年Burkholderia首次自洋葱根部分离)[1]因引起洋葱腐烂而得名,为不发酵糖革兰阴性杆菌,原归类假单胞菌属,定名为洋葱假单胞菌(pseudomonas cepacia)。
以前文献报道该菌主要从肺囊性纤维化(cystic fibrosis, CF)和慢性肉芽肿病(chronic granulomatous disease, CGD)患者中分离。
近年来,由于各种侵袭性操作及免疫功能低下患者的增多,该菌在非肺囊性纤维化患者中的分离日益增多。
洋葱伯克霍尔德菌具有多重耐药性,治疗难度大,本文就经临床药师会诊洋葱伯克霍尔德菌肺部感染患者治疗的经验,简述如下。
1 病例介绍患者男,81岁。
2009年3月4日因咳嗽、咳痰,气促2 d入院。
患者既往有20余年高血压病史,查体:双肺可闻及湿性啰音,呼吸急促,体温38.4℃;辅助诊断:白细胞(WBC)12.5×109/L,中性粒细胞(N)0.854 ×109/L;胸片示:双肺纹理增粗。
初步诊断为:①肺部感染;②脑梗死后遗症恢复期;③高血压病3级,极高危组。
多次因继发癫痫引起心衰而导管介入治疗。
肺部感染经治疗后症状一度改善。
8月2日痰培养结果为异型柠檬酸杆菌,对哌啦西林/他唑巴坦、阿米卡星、呋喃妥因、美洛培南、庆大霉素敏感。
按药敏给予哌啦西林/他唑巴坦和阿米卡星治疗。
8月9日,患者咳嗽、咳痰加重,痰液性状改变,伴发热,体温高达39.3℃、白细胞9.5×109/L,中性粒细胞0.686×109/L,病情呈加重起势,且患者大便潜血(+++),肝、肾功能均未见明显异常。
洋葱伯克霍尔德菌的知识解析与鉴定要点！洋葱伯克霍尔德菌的知识解析与鉴定要点！产品信息平台编号：bio-81749提供形式：斜⾯培养物拉丁属名 Burkholderia种名加词：cepacia (Palleroni and Holmes) Yabuuchi et al.其它中⼼编号：收藏时间*：2006-7-10来源历史：湖北林科院转原产国：中国资源归类编码：151********模式菌株：⾮模式菌株主要⽤途：研究；教学具体⽤途：防治松苗猝倒病特征特性：该菌属假单胞菌科，伯克霍尔德菌属。
菌落呈淡黄⾊，湿润、凸起、浑浊。
菌体杆状，具鞭⽑。
⾰兰⽒阴性，氧化酶阳性，接触酶阴性。
⽣物危害程度：四类寄主中⽂名称：寄主拉丁名称：致病对象：⽆分离基物：⼟壤采集地区：湖北荆门采集具体地点：彭场林场湿地松苗圃培养基信息：培养基编号: 33 培养基名称: LB培养基培养温度：28资源保护类型：培养物保藏⽅法：定期移植法共享⽅式：资源交换性共享实物状态：有实物⽤途：防治松苗猝倒病注意事项：仅⽤于科学研究或者⼯业应⽤等⾮医疗⽬的，不可⽤于⼈类或动物的临床诊断或治疗，⾮药⽤，⾮⾷⽤知识简介本菌属伯克霍尔德菌属，为⾮发酵菌，是医院感染的病原菌。
主要引起菌⾎症、尿路感染、化脓性关节炎等，还可导致⼈类肺囊肿性纤维化。
洋葱伯克霍尔德菌为⾮发酵⾰兰阴性杆菌，在⾎琼脂平板上35培养18-24H，形成中等⼤⼩、不透明、湿润、凸起的黄⾊菌落。
它为氧化酶试验阳性，分解葡萄糖、⽢露醇和麦芽糖，有动⼒、赖氨酸脱羧酶、柠檬酸盐和硝酸盐还原试验阳性，胆汁七叶苷、吲哚、H2S和精氨酸双⽔解酶试验均阴性。
1、形态与染⾊：⾰兰阴性杆菌，有3-8根丛⽑。
2、培养特性：在⾎琼脂平板上35培养18-24H，形成中等⼤⼩、不透明、湿润、凸起的黄⾊菌落。
在麦康凯琼脂平板上形成中等⼤⼩、湿润菌落，某些菌株可产⽣黄⾊、紫⾊、棕⾊等⾊素医`学教育⽹搜集整理。
3、⽣化反应：氧化酶试验阳性，分解葡萄糖、⽢露醇和麦芽糖，葡萄糖O/F为氧化型，动⼒、赖氨酸脱羧酶、枸橼酸盐和硝酸盐还原试验阳性，胆汁七叶苷、吲哚、H2S和精氨酸双⽔解酶试验均阴性。
泰国伯克霍尔德菌错误鉴定1例段梦;唱凯;王艺;黎敏;周道红;鲁卫平【摘要】目的鉴定1例曾被错误鉴定为类鼻疽伯克霍尔德菌的泰国伯克霍尔德菌.方法对1例肺脓肿合并败血症患者的痰液和血液标本进行细菌分离培养、生化鉴定、分子生物学鉴定和药敏试验鉴定.结果培养出革兰阴性短小杆菌;生化鉴定特征符合泰国伯克霍尔德菌;测序结果显示与泰国伯克霍尔德菌相似度达100％,与类鼻疽伯克霍尔德菌相似度为99％;全基因组测序结果显示该菌与泰国伯克霍尔德菌E444具有最近的亲缘关系.药敏试验结果显示该菌对亚胺培南、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感.结论成功鉴定了1例泰国伯克霍尔德菌.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2016(034)003【总页数】3页(P237-239)【关键词】泰国伯克霍尔德菌;类鼻疽伯克霍尔德菌;鉴定【作者】段梦;唱凯;王艺;黎敏;周道红;鲁卫平【作者单位】第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科,重庆400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科,重庆400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科,重庆400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科,重庆400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科,重庆400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科,重庆400042【正文语种】中文【中图分类】R446.5泰国伯克霍尔德菌(Burkholderia thailandensis，B.thailandensis)过去曾被认为是伯克霍尔德菌属中一种对人和动物无致病性的环境腐生菌，该菌与类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei，B.pseudomallei)在菌落形态、免疫原性和抗菌药物敏感谱等表型特征非常相似，难于区分，曾被划为B.pseudomallei的1个生物型[1]。
1988年，Brett等依据16S rRNA基因序列差异，将4株来源于环境的类鼻疽伯克霍尔德菌样菌种(B.pseudomallei-like specie)提议为1个新种，因最早分离自泰国而被命名为B.thailandensis。
世界上2个主要的类鼻疽流行区，即东南亚和澳大利亚北部，均已发现B.thailandensis，主要存在于以上地区的土壤中，特别是稻田。
2014年，我国学者郑霄等[2]首次报道从海南类鼻疽流行区的土壤和水源中发现B.thailandensis。
但由B.thailandensis引起的人类感染国内外鲜有报道[3]。
2013年10月我科从1例肺脓肿合并败血症患者的痰液和血液标本中，分离出1株曾被错误鉴定为B.pseudomallei的B.thailandensis，报告如下。
患者，男，76岁，系重庆市某区农民。
因“咳嗽、发热、气促等症状10余日”，曾就诊当地医院，给予静脉输液(具体用药不详)12 d未见明显缓解。
于2013年10月25日至我院就诊，X线胸部平片及胸腹部CT检查均提示：右肺上叶前段占位性病变，考虑肺脓肿可能性大，肺癌不能除外；双肺多发小片状及结节影，考虑感染性病变，肿瘤待排；右肺中叶部分性肺不张，双下胸膜增厚粘连。
血液学检查：WBC 37.16×109/L，PLT 661×109/L、N 29.73×109/L。
入院查体：体温39 ℃，脉搏89 次/分，呼吸25次/分，血压127/53 mmHg；神志清楚，精神较差，急性病面容，面部表情不安，全身浅表淋巴结未扪及肿大，听诊双肺呼吸音减弱，右肺可闻及湿性啰音，双下肢水肿。
无高血压及先天性心脏病史，无糖尿病史，无手术史及输血史，无近期外伤史，无不良嗜好。
2013年10月27日送检痰培养和血培养，均培养出B.thailandensis，编号为BPM。
期间患者使用亚胺培南/西司他丁钠抗炎治疗，10月30日下午患者主动要求出院返回居家治疗，病情时轻时重，意识时有不清醒，于11月2日病情加重而死亡。
取痰标本接种血平板、巧克力平板和麦康凯平板(均为赛默飞公司)，置5% CO2、35 ℃培养；无菌采集血液接种1套血培养瓶置Bact/ALERT 3D 120 全自动血培养仪(法国Bio Mérieux公司)检测。
血培养需氧瓶23.45 h报告阳性，直接涂片革兰染色显示革兰阴性杆菌，厌氧瓶培养5 d无细菌生长。
阳性需氧瓶培养液转种血平板及痰培养血平板均生长相同形态菌落：光滑、湿润、不透明、具有银灰色金属光泽；巧克力平板上菌落光滑、湿润、不透明、具有银色金属光泽；麦康凯平板上菌落淡红色、湿润、扁平、具有金属光泽。
细菌革兰染色镜下形态：革兰阴性短小杆菌。
菌落及镜下形态分别见图1和图2。
采用Vitek 2 Compact 全自动微生物鉴定仪及配套GN卡(法国Bio Mérieux公司)进行细菌鉴定，结果为B.pseudomallei，生物编码为：0003451513500211，鉴定率为97%。
采用API 20NE鉴定系统(法国Bio Mérieux公司)进行复核菌种鉴定，结果仍为B.pseudomallei，生物编码为：1157577，鉴定率为50.5%，T值0.5，然而生化反应中阿拉伯糖(arabinose，ARA)为阳性，该特征符合B.thailandensis。
4.1 16S rRNA基因序列分析以细菌基因组DNA为模板，参照文献[4]合成16S rRNA 基因引物。
F：5′-GATCATGGCTCAGATTGAAC-3′，R：5′-CTACGGTTACCTTGTTACGA-3′，扩增产物长度为1 397 bp。
PCR反应采用宝生物公司PCR试剂盒。
50 μL反应体系：10×PCR buffer 5.0 μL，25 mmol/L MgCl2 2.0 μL，10 mmol/L dNTP 1.0 μL，20 μmol/L 上、下游引物各1.0 μL，5 U/μL ExTaq DNA聚合酶0.5 μL，模板1.0 μL，ddH2O 38.5 μL。
扩增条件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 45 s，58 ℃ 45 s，72 ℃ 90 s(35个循环)；72 ℃ 10 min。
PCR扩增产物由南京金斯瑞公司进行双向测序，测序结果与GenBank核酸数据库进行BLAST序列比对，显示该序列与B.thailandensis(GenBank No. CP000085.1和CP000086.1)相似度达100%，与B.pseudomallei(GenBank No. CP004379.1和CP004380.1)相似度为99%。
4.2 全基因组测序由深圳华大基因公司完成，通过Illumina Hiseq 2 000平台测序，基于测序数据组装得到该菌基因组大小为6 454 019 bp，GC含量67.88%，共76个scaffold，114个contig。
运用SOAPaligner(版本：2.21)序列比对软件，将测序得到的整条read序列和参考序列进行比对。
在比对时，每条read允许的最大错配数为5，如果1条read可以比对到参考序列的多个位置，则只选1个。
根据比对结果，计算出平均深度和覆盖度。
通过比较基因组学分析，该株菌序列与参考基因组序列B.thailandensis E264 GeneBank No. CP000085.1和CP000086.1同源性分别为96.5%和96.05%。
对该菌基因组进行了精细图测序，以该菌(BPM)DNA为参考序列，B.mallei ATCC 23344、B.pseudomallei 1106a、B.thailandensis 2002721723、B.thailandensis E264、B.thailandensis E444为比对菌株，采用TreeBeST软件 PHYML(最大似然法)算法构建系统进化树。
结果显示BPM与B.thailandensis E444具有最近的亲缘关系，系统进化树见图3。
采用Vitek 2 Compact 配套AST-GN13药敏卡(法国Bio Mérieux公司)进行抗菌药物敏感性试验，结果显示：该菌株对亚胺培南、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感；对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢替坦、头孢吡肟、氨曲南、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、环丙沙星耐药。
B.thailandensis与B.pseudomallei具有较近的亲缘关系，两者的差异主要表现在致病力和阿拉伯糖的代谢能力：B.thailandensis能够利用阿拉伯糖，毒力弱，极少对人致病；B.pseudomallei不能利用阿拉伯糖，毒力强，可引起人和动物的类鼻疽病[5]。
2006年美国CDC将B.pseudomallei列为B类病原体，“9.11”事件之后美国更视其为生物恐怖剂。
本研究中，我们从1例肺脓肿合并败血症患者的痰液和血液标本中分离出1株生物学特性与B.pseudomallei极其相似的菌株，且患者的临床症状、影像学检查与急性类鼻疽的临床表现相似。
经Vitek 2 Compact自动微生物鉴定系统、API 20NE细菌鉴定系统均报告为B.pseudomallei。
由于该菌主要分布在热带和亚热带地区，而本例患者久居重庆，无疫区居住史，无疫源、疫水接触史。
菌株生化反应结果显示，该菌株可利用阿拉伯糖，根据伯杰氏细菌手册该菌株应为B.thailandensis。
16S rRNA序列分析发现，该菌与B.thailandensis 同源性达100%。
为进一步验证结果，我们对该菌株进行了全基因组重测序，所得序列与B.thailandensis E264基因组序列同源性>96%。
因此从生物学和遗传学层面最终确认该患者的病原菌为B.thailandensis。
分析该菌株鉴定错误的主要原因：(1)B.thailandensis和B.pseudomallei有着极其相似的生化特征，常用的生化检测方法和检测系统易发生混淆。
(2)Vitek 2 Compact自动微生物鉴定系统GN鉴定卡中，没有设置阿拉伯糖，同时菌种数据库中无B.thailandensis的相关数据。
因此，只能根据现有的生化反应特征报告为B.pseudomallei。
(3)API 20NE细菌鉴定系统虽然包含阿拉伯糖，但其菌种数据库中同样没有B.thailandensis的相关信息。
因此，无论阿拉伯糖阴性还是阳性，分析系统均报告B.pseudomallei。
【相关文献】[1]Majerczyk CD, Brittnacher MJ, Jacobs MA, et al. Cross-species comparison of the Burkholderia pseudomallei, Burkholderia thailandensis, and Burkholderia mallei quorum-sensing regulons[J]. J Bacteriol, 2014, 196(22): 3862-3871.[2]郑霄, 陈海, 朱雄, 等. 海南省类鼻疽流行区分离出泰国伯克霍尔德菌[J]. 中华流行病学杂志, 2015, 36(1): 97-98.[3]Glass MB, Gee JE, Steigerwalt AG, et al. Pneumonia and septicemia caused by Burkholderia thailandensis in the united states[J]. J Clin Microbiol, 2006, 44(12): 4601-4604.[4]Drancourt M, Bollet C, Carlioz A, et al. 16S ribosomal DNA sequence analysis of a large collection of environmental and clinical unidentifiable bacterial isolates[J]. J Clin Microbiol, 2000, 38(10): 3623-3630.[5]Smith MD, Angus BJ, Wuthiekanun V, et al. Arabinose assimilation defines a nonvirulent biotype of Burkholderia pseudomallei[J]. Infect Immun, 1997, 65(10): 4319-4321.。
