抗坏血酸氧化酶活性测定试剂盒使用说明

货号：QS1303 规格：50管/48样抗坏血酸氧化酶（ascorbate oxidase ，AAO）活性测定试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。

细胞壁内的抗坏血酸和AAO 与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。

AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素b还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。

测定原理：AAO可直接氧化AsA，通过测定AsA的氧化量，可计算得AAO活力。

自备实验用品及仪器：低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。

粗酶液提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。

16000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

AAO测定操作：1. 分光光度计预热30 min，调节波长到265 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二在25℃水浴锅中预热30 min。

3. 依次在1 mL石英比色皿中加入100μL上清液、850μL预热的试剂二和50μL试剂三，迅速混匀后在265nm测定10 s和130 s光吸收A1和A2，△A =A1-A2。

AAO活性计算公式：(1). 按蛋白浓度计算AAO活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反总×109÷(Cpr×V样)÷T= 92.4×△A÷Cpr(2). 按样本质量计算AAO活性单位定义：25℃中每克样本每分钟氧化1nmol AsA 为1个酶活单位。

总抗氧化能力（FRAP 法）试剂盒说明书微量法100T/96S 注　意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

研究意义：测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。

在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理：在酸性环境下，抗氧化物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。

自备实验用品：恒温水浴锅、低温离心机、酶标仪、96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：提取液：液体120mL×1 瓶，使用前预冷。

试剂一：液体20 mL×1 瓶，避光保存。

试剂二：液体2 mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体2 mL×1 瓶，避光保存。

混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按10:1:1 的比例混合，使用前37℃预温。

样品的制备：(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。

血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。

(2) 组织样品按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

(3) 细胞样品按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；10000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

操作步骤：1、酶标仪预热30min，调节波长至593nm。

氧化酶试剂，氧化酶试纸产品使用参见华越洋随带产品包装随带纸质说明书氧化酶试剂，氧化酶试纸产品介绍:英文名称： Oxidase reagent产品用途：用于O157:H7菌氧化酶试验，以及其他病理类菌属检测鉴别。

氧化酶试剂，氧化酶试纸使用方法：取一条滤纸，沾取试验菌的菌落少许。

然后加一滴1%的四甲基对苯二胺试剂，仅使滤纸湿润，不可过湿，在10s内出现红色者为阳性，10—60s 呈现红色者为延迟反应，60s以上出现红色者，按阴性处理，铁可催化试剂，不能使用，可用白金丝或玻璃棒取菌。

保存：2-8℃避光保存氧化酶试剂，氧化酶试纸氧化酶（oxidase）过氧化物酶体中的主要酶类，氧化酶约占过氧化物酶体酶总量的一半，包括：尿酸氧化酶、D-氨基酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶和L-α-羟基酸氧化酶等。

各种氧化酶作用于不同的底物，其共同特征是氧化底物的同时，将氧还原成过氧化氢：RH2 + O2 →R + H2O2实验试剂：1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。

1%α-萘酚－乙醇溶液。

试验方法：取白色洁净滤纸沾取菌落。

加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。

阴性于两分钟内不变色。

以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。

氧化酶试验(oxidasetest)氧化酶又名细胞色素氧化酶、细胞色素氧化酶C或呼吸酶。

试验用于检测细菌/是否有该酶存在。

原理是氧化酶在有分子氧或细胞色素C存在时，可氧化四甲基对苯撑二胺出现紫色反应。

假单胞菌属、气单胞菌属等阳性，肠杆菌科阴性，可区别。

血浆凝固酶：由金黄色葡萄球菌致病性菌株产生。

能使含有抗凝剂的人或兔血浆发生凝固。

在感染部位由于凝固酶的产生，使体液中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白，沉积于细菌表面，可阻碍吞噬细胞对细菌的吞噬和杀灭作用。

凝固酶试验(coagulase test)原理：致病性葡萄球菌→凝固酶→血浆中纤维蛋白原(液态) 纤维蛋白(固态) →血浆凝固方法：①玻片法：检测结合凝固酶②试管法：检测游离凝固酶应用：作为鉴别葡萄球菌致病性的重要指标。

植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定作者:《果蔬贮藏加工学实来源:华南农大浏览数:2949 录入:2007-6-16 14:53:40 验指导》植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定一、原理抗坏血酸氧化酶能利用空气中的氧氧化抗坏血酸成为脱氢抗坏血酸；多酚氧化酶可催化空气中的氧氧化多酚，成为相应的醌，形成的醌能被抗坏血酸还原。

因此，在酶提取液中加入抗坏血酸，可测定抗坏血酸氧化酶的活性，加入抗坏血酸及焦儿茶酚，可测定抗坏血酸及多酚氧化酶两者的活性，相减即可求出多酚氧化酶的活性。

抗坏血酸的消耗量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸。

碘酸钾在酸性条件下与碘化钾反应放出碘，放出的碘与抗坏血酸作用，将之氧化成脱氢抗坏血酸，多余的碘能使淀粉变为蓝色。

二、材料与设备材料：马铃薯块茎设备：水浴锅、台秤、离心机试剂：pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液、0.1％抗坏血酸、0.02mol/L焦儿茶酚、10％三氯乙酸、1％淀粉。

0.05mol/L碘液：碘化钾2.5g溶于200ml蒸馏水，加冰醋酸1ml，再加0.1mol/L碘酸钾12.5ml，定容至250ml。

三、试验步骤（一）酶液制备：称取马铃薯块茎10.0g，用预冷pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液，研磨匀浆，定容至50ml，在18-20℃水浴浸提30分钟，中间摇动数次，再于3000×g离心10分钟，取上清液，4℃保存备用。

（二）酶活性测定：１. 取6个三角瓶(50-100ml)，标上号码，分别加入下列试剂(ml)：┌──┬────┬───────┬─────────┬──┬─────┐│瓶号│ 蒸馏水│0.1％抗坏血酸│0.02mol/L焦儿茶酚│ 酶│煮5分钟酶│├──┼────┼───────┼─────────┼──┼─────┤│ 1 │ 4 │ 2 │ │ 2 │ ││ 1' │ 4 │ 2 │ │ 2 │ ││ 2 │ 4 │ 2 │ │ │ 2 ││ 3 │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ ││ 3' │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ ││ 4 │ 3 │ 2 │ 1 │ │ 2 │└──┴────┴───────┴─────────┴──┴─────┘1、3瓶各作一次重复，2、4瓶作空白将6个三角瓶放入18-20℃水浴反应5分钟,立即分别加入10％三氯乙酸1ml，摇匀，终止酶反应。

NADH氧化酶（NOX可见分光光度法货号：BC0630规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二液体5 mL×1瓶4℃保存试剂三液体0.5 mL×1支-20℃保存试剂四液体70 mL×1瓶4℃保存试剂五液体10 mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×2瓶-20℃保存溶液的配制：试剂六：临用前加入9 mL双蒸水，用不完的试剂-20℃分装保存。

产品说明：NOX（EC 1.6.99.3）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可在氧气存在下，直接将NADH氧化为NAD+。

该酶不仅参与NAD+的再生，而且与免疫反应密切相关。

NOX能够将NADH氧化为NAD+，NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝（DCPIP）的还原相偶联，蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP，在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1.准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10µL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2.将匀浆600g，4℃离心5min。

将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

3.将上清液转移至另一EP管中，即胞浆提取物，用于线粒体中泄露NOX活性测定。

4.沉淀即为线粒体，加入200µL试剂二和2µL试剂三，反复吹打充分混匀，用于NOX活性测定，并用于蛋白浓度测定。

sdgsdgs成都分行东风浩荡合法规和法规和土壤突然图腾甘油三酯（TG）试剂盒说明书（酶法）【产品名称】中文名称：甘油三酯（TG）试剂盒（酶法）英文名称：TR IGL Y CE RI DES RE AGE N T K I T（Enzymatic method）【包装规格】60ml/盒（R-1：45ml×1, R-2：15ml×1），280ml/盒（R-1：70ml×3，R-2：70ml×1），300ml/盒（R-1：45ml×5，R-2：15ml×5），360ml/盒（R-1：90ml×3，R-2：90ml×1），400ml/盒(R-1：60ml×5，R-2：20ml×5)，2000ml/盒（R-1：500ml×3，R-2：500ml×1）。

【预期用途】本试剂用于测定人血清或血浆中甘油三酯（TG）的含量。

【检验原理】在第一反应中采用抗坏血酸氧化酶（AOD）消除抗坏血酸的影响；采用甘油激酶消去游离甘油的影响。

在第二反应中，通过甘油三酯生成的甘油与过氧化物酶（POD）作用生成醌系色素，由此可测得甘油三酯的含量。

第一反应：抗坏血酸氧化酶2抗坏血酸+ O2──────────→2脱氢抗坏血酸+ 2H2O甘油激酶游离甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2（用过氧化氢酶消去）第二反应：脂蛋白酯酶甘油三酯+ H2O ──────────→甘油+ 脂肪酸甘油激酶甘油+ ATP ──────────→甘油-3-磷酸+ ADP甘油-3-磷酸氧化酶甘油-3-磷酸+ O2 ──────────→磷酸二羟丙酮+ H2O2P0D2H2O2 + 4-AA+TOOS + H3+O ─────→醌系色素+ 5H2OTOOS: N-Ethyl-N-（2-hydroxy-3-solfopropyl）-3-methylaniline, sodiumsalt, dihydrate 【主要组成成份】━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━试剂成份含量─────────────────────────────────R-1 抗坏血酸氧化酶≥3000U/L甘油激酶≥1000U/L甘油-3-磷酸氧化酶≥8000U/LTOOS 1.17mmol/L过氧化氢酶≥3000U/L─────────────────────────────────R-2 脂蛋白酯酶≥2000U/LPOD ≥20000U/L4-AA 2.5mmol/L━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━脂类校准血清人血清详见标示量，━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━*1. 不同批号试剂盒中的各组份，经检验符合产品性能指标的，可以互换。

抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)产品：过氧化物酶(peroxisome ，POD)是以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢，氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)是叶绿体中的专一性清除过氧化氢的酶，能够催化抗坏血酸(又称维生素C ，Vitamin C 或AsA)与过氧化氢反应。

Leagene 抗坏血酸过氧化物酶(AsA-POD)检测试剂盒(AsA 比色法)检测原理是以AsA-POD 催化AsA 与H 2O 2的反应，使前者被氧化成单脱氢抗坏血酸(MDAsA)，随着AsA 被氧化，吸光度不断下降，处测定吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。

该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中过抗坏血酸过氧化物酶活性，尤其适用于测定植物中AsA-POD 活性。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 研钵或匀浆器3、 离心管或试管4、 低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取0.5g 水稻、小麦叶片，加入预冷的AsA-POD Lysis Buffer 研磨或匀浆， 离心，留取上清液，即为AsA-POD 粗提液，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。

编号 名称TE1123 50T Storage试剂(A): AsA-POD Lysis Buffer 250ml 4℃ 试剂(B): AsA-POD Assay Buffer 100ml 4℃ 试剂(C): AsA 氧化剂 2×1ml RT 试剂(D): AsA Buffer 5ml 4℃ 试剂(F): 蛋白标准(BSA) 20mg RT 试剂(G): G250染色液 100mlRT 使用说明书1份②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于抗坏血酸过氧化物酶的测定。

维生素C 检测试剂盒(铜氧化法)简介：维生素C(Vitamin C)又称L-抗坏血酸，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素。

在生物体内，维生素C 是一种抗氧化剂，为酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸内酯，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶，其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果。

Leagene 维生素C 检测试剂盒(铜氧化法)检测原理是维生素C 的分子结构中具有共轭双键，在酸性溶液中243nm 处有最大吸收峰，在中性或碱性条件下最大吸收峰转移至265nm 处，利用铜离子消除背景差异，可直接测定样品中的维生素C 含量。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 稀释组织匀浆液：按组织匀浆液(10×):蒸馏水=9:1的比例稀释，获得1×组织匀浆液，待用。

2、 样品制备：取待测材料如青菜、水果以及其他组织等，清洗擦干，准确称量5g ，加入研磨器内。

加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1×组织匀浆液研磨，最后一并倒入50ml 离心管，补充1×组织匀浆液至50ml 。

3、 制作标准曲线： 取Vitamin C 标准(1.2mg/ml)，用蒸馏水稀释至120μg/ml ，4℃保存备用。

取干净离心管或试管，按下表进行操作，检测265nm 处吸光度，以维生素C 浓度(μg/ml)为横坐标，吸光度为纵坐标作图得标准曲线。

编号 名称TC2035 50T Storage试剂(A): Vitamin C 标准(1.2mg/ml) 1ml -20℃ 避光试剂(B): 组织匀浆液(10×) 250ml 试剂(C): Cu 酸性缓冲液 100ml RT 避光 试剂(D): Vc Assay buffer 25mlRT 避光 使用说明书1份0 1 2 3 4 5 Vitamin C 标准(120μg/ml)/ml0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 蒸馏水/ml 0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25 Cu 酸性缓冲液/ml 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 Vc Assay buffer/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Vitamin C 浓度(ug/ml)1.22.43.64.86.04、Vitamin C测定：按下表进行操作，以蒸馏水为空白对照，检测265nm处吸光度。

尿酸测定标准操作程序1. 摘要本试剂盒适用于体外临床检验，用于测定人血清或尿液中尿酸的含量。

2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测新鲜血清或24h 尿液中的尿酸浓度。

3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定尿酸浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。

4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的尿酸（UA ）试剂盒采用的是氧化酶法。

5. 原理O H ESPAS O H CO O H O O H 2222222224+−−−→−+-+++−−→−++醌亚胺氨基安替比林尿囊素尿酸过氧化物酶尿酸酶ESPAS:N-乙基-N-(3-磺丙基)-间-茴香胺血清中的尿酸在尿酸酶的催化下和H2O 与O2反应生成尿囊素, H2O2和CO2,其中的H2O2与4-氨基安替比林和ESPAS 在过氧化物酶的催化下生成了红色化合物醌亚胺.由于醌亚胺在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 550nm 处吸光度的变化值与样本中尿酸的含量成正比6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：抗坏血酸氧化酶、过氧化物酶、氨基安替比林、尿酸酶、ESPAS7.3 试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。

试剂不可冰冻。

7.4 试剂准备：试剂为即用式。

8. 标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。

按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。

8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。

每日在测定前做一次质控。

该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。

抗坏血酸（Vc)测试盒说明书 （货号：HL009 50T/48样）一、试剂盒组成及配制（50T/48样）：试剂一：液体10ml ×1瓶，4℃保存6个月。

用时加水至150ml ，混匀，配成应用液。

试剂二：粉剂×1支，4℃保存6个月。

用时加1.8ml 的冰醋酸再加水至200ml ，4℃保存。

试剂三：白色结晶体的粉剂×1支，4℃保存6个月。

因较难溶解，在使用前2-4小时加95% 酒精或无水乙醇60ml 充分溶解，4℃保存。

试剂四：黄色贮备液10ml ×1瓶，冰箱4-8℃避光保存，贮存时间6个月。

每次测定时取 0.3ml 贮备液加水试剂五：液体6ml ×1瓶,4℃保存6个月。

维生素C 标准品：粉剂6mg ×3支，每瓶内含维生素C ，4℃避光保存6个月。

6μg/ml 标准品应用液的配制：将一支标准品溶于10ml 的1号试剂应用液中，混匀后取 0.1m 再加1号试剂应用液至10ml ，现用现配。

注：维生素C 标准品氧化，因此，最好在样本上清液制备好后再配标准，并在10分钟内 进行检测。

二、操作步骤：1、上清液制备：取样本0.15ml 加1号试剂0.45ml ，漩涡混匀，放置15分钟后离心，3500~ 4000转/分，离心10分钟，上层清凉液体为上清液。

2、上清液中Vc 的测定：空白管 标准管 测定管 试剂一（ml)0.4 6μg/ml Vc 标准应用液（ml)0.4 上清液（ml ） 0.4 试剂二（ml) 0.5 0.5 0.5 试剂三（ml ） 1 1 1 试剂四（ml ） 0.25 0.25 0.25 充分混匀，37℃水浴30分钟试剂五（ml ）0.10.10.1混匀放置10分钟,1cm 或者0.5cm 光径，双蒸水调零，536nm 处测各管的OD 值。

三、计算公式：1、血清（浆)的计算与举例：①、计算公式：)/g ml Vc （μ含量=值空白值标准值空白值测定OD OD OD OD --×)/g 6(ml μ标准浓度×倍）稀释倍数（样本前处理4②、计算举例：例1：取血清0.15ml ，按操作表操作，测得空白管OD 为0.031，标准管OD 为0.184，测 定管OD 为0.144，则计算结果为：）（μ含量ml Vc /g =值空白值标准值空白值测定OD OD OD OD --×)/g 6(ml μ标准浓度×倍）稀释倍数（样本前处理4 =031.0184.0031.0144.0--×6×4=17.725μg/ml。

货号：MS1301 规格：100管/96样脱氢抗坏血酸（dehydroascorbate，DHA）含量测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：AsA作为植物细胞一个重要生理指标，其AsA的含量、氧化还原状态(AsA/DHA 比率)及其合成与代谢相关酶类活性的变化涉及植物对一系列环境胁迫的响应。

DHA是AsA的可逆的氧化型，在生物体内，与抗坏血酸共同组成氧化还原系统，具有电子受体的作用。

测定原理：DTT还原DHA生成AsA，通过测定体系中AsA的生成速率，即可计算出DHA含量。

自备仪器和用品：低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体 100 mL×1 瓶，室温保存。

试剂二：液体 16mL×1 瓶，室温保存。

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。

临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。

标准品：粉剂×1 瓶，4℃保存。

临用前加入 5.743 mL 蒸馏水充分溶解；吸取 0.1 mL 上述溶液，加入 0.9 mL 蒸馏水，混匀，即为 100μmol/L DHA。

样品中DHA提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

12000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；12000g，4℃离心 10min，取上清液置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

DHA测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到265 nm，蒸馏水调零。

一、试剂配置 1、PBS 提取液:每 L 水依次加入 MES(195、2x0. 05=9、76g)、山梨糖醇(0、33x182. 2=60、126g). NaCl(0、010x58、5=0. 585g)、MgCI(0、002x95=0、19g)、EDTA(292. 25x0. 002=0. 5845g). KH2PO4(200x0. 0005=0. Ig)；使用时加入 ASA-Na(!98. 1x0. 002=0. 3962g);2、悬浮液:将 PBS 提取液中得 MES 换为 238、3x0、05=11、915g 得 HEPES(238、3x0、05=1 k 915g);3、80%PercoI;80ml 原液+20ml 水：40%Percol:40ml 原液+60ml 水;实际配制:PBS 提取液20001111（3个处理*2个品种*3个靈复*20m!*3次=1080ml ）.悬浮液1001111（3个处理*2个品种*3个重复次=54n 】l ）;80%Percol 200ml; 40%Percol 200nik (3 个处理*2 个品种*3 个重复*3ml*3 次=162ml)二、提取步骤 1、lOg 鮮样加 20ml 提取 PBS(50mM MES PH6、1,含O 、33M 山梨糖醇JOmM NaCL2mM MgCkfmM EDTA.O 、5 mMKH2POj ・2mM ASA ・Na ・ASA ・Na 使用前现配现加) 2、快速研曆，使叶片碎成绿豆粒大小4层纱布过滤，去除残渣（注意过滤时不可用力挤压，以免叶绿体膜破碎） 3、滤液2000g 3min •小心倒出上淸液，将离心管放入离心机后,使离心机得加速很快上升到预崔值（水平转头.加速度调到9）,约经30s 后很快使加下降停止，整个离心持续大约2・3min 左右完成;4、沉淀用1ml 提取液漂洗表面悬浮物;5、用 1ml 悬浮液（50mMHEPES pH7. 6•含0. 33 mM 山梨糖醇」0NaCl ・2mM MgCb2mM EDTA.O 、5 niMKH2PO4-2mM ASA-Na.ASA-Na 使用前现配现加）将沉淀悬浮，在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷，或者用手 握住离心管在冰块之间搅动，便叶绿体由于震动分散开来，不要用棉球吸滤，以防被膜压破。

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法79498抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）1、试剂的配制（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）14.5mM甲硫氨酸溶液：取2.1637g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至1000ml。

（3）30μM EDTA-Na2溶液：取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。

（4）60μM核黄素溶液：取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。

（5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.1840g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。

酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。

2、酶活性测定（1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液0.6ml，磷酸缓冲液5.4ml，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀；（2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中（3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min；同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。

多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC0190规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存粉剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂一液体40 mL×1瓶4℃保存试剂二液体10 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：临用前将粉剂一倒入提取液中，溶液为悬浊液，使用前需摇匀。

产品简介：PPO主要存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化产生醌，从而引起褐化，与果蔬加工、茶叶品质和组培等密切相关。

PPO能够催化邻苯二酚产生醌，后者在410nm有特征光吸收。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

2.称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

3.血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至410nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中依次加入下列试剂）试剂名称（μL）测定管对照管试剂一600600试剂二150150样本150煮沸的样本15037℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）中准确水浴10min后，迅速放入沸水中加热10min。

冷却后，5000g，常温离心10min，收集上清，410nm处检测测定管和对照管吸光度，计算ΔA=A测定-A对照。

植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)ELISA试剂盒说明书抗坏血酸过氧化物酶试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性。

ELISA原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)水平。

用纯化的植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)，再与HRP标记的抗坏血酸过氧化物酶(APX)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的抗坏血酸过氧化物酶(APX)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中植物抗坏血酸过氧化物酶(APX)浓度。

标本要求：1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤：1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为150 IU/ml，100 IU/ml，50 IU/ml，25 IU/ml ，12.5IU/ml)。

氧化应激检测试剂盒使用说明氧化应激检测试剂盒北京华越洋生物超氧化物歧化酶测试盒(SOD)超氧化物歧化酶测试盒(SOD)碱性磷酸酶检测试剂盒谷胱甘肽一还原酶测试盒总巯基测试盒/总脂酶测试盒总抗氧化能力检测试剂盒（FRAP法）总抗氧化能力检测试剂盒（ABTS快速法）总抗氧化能力检测试剂盒（ABTS法）总抗氧化能力测试盒（比色法）总谷胱甘肽检测试剂盒总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒总SOD活性检测试剂盒（WST法）总SOD活性检测试剂盒（NBT法）脂质氧化（MDA）检测试剂盒脂褐质测试盒游离脂肪酸测试盒抑制与产生超氧阴离子自由基测试盒（比色法）乙酰胆碱转移酶测试盒乙酰胆碱酯酶测试盒一氧化氮检测试剂盒（硝酸还原酶法）一氧化氮检测试剂盒（化学法）一氧化氮合成酶测试盒胃蛋白酶测试盒维生素C测试盒微量丙二醛测试盒/脂质过氧化物测试盒唾液酸测试盒（带SA标准）糖化血清蛋白测试盒（果糖胺法）（带标准）胎盘碱性磷酸酶检测试剂盒酸性磷酸酶检测试剂盒神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒神经氨酸酶检测试剂盒乳酸脱氢酶测试盒乳酸测试盒（测血清、组织等）乳酸测试盒（测全血）醛缩酶测试盒羟脯氨酸测试盒（消化法）（测培养细胞、培养液）羟脯氨酸测试盒（碱水解法）（测动物血清、组织、尿液）葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒抗氟离子酸性磷酸酶检测试剂盒肌酸激酶测试剂盒活性氧检测试剂盒活性氧（羟自由基）测试盒（比色法）琥珀酸脱氢酶测试盒红细胞NADH高铁血红蛋白还原酶测试盒过氧化氢酶测试盒（可见光比色法）过氧化氢定量分析试剂盒（脂兼容性）过氧化氢定量分析试剂盒（水兼容性）过氧化氢测试盒谷胱甘肽还原酶检测试剂盒谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒谷氨酰胺测试盒肝/肌糖元测试盒钙调神经磷酸酶测试盒蛋白去除试剂S蛋白去除试剂M胆碱酯酶测试盒超氧化物试剂盒超微量ATP酶测试盒（可测总ATPase）超微量ATP酶测试盒（测Na+ K-ATPase）超微量ATP酶测试盒（测Ca2+ Mg2+ ATPase）超微量ATP酶测试盒（测Ca2+ ATPase）超微量ATP酶测试盒（Na+ K+、Ca2+ Mg2+ ATPase）丙二醛测试盒/脂质过氧化物测试盒ROS活性氧检测试剂盒NF-κB激活－核转运检测试剂盒H5N1神经氨酸酶抑制剂鉴定试剂盒GSH试剂盒（谷胱甘肽测试盒）（比色法）GSH—PX测试盒GSH—ST测试盒Catalase（抗氧化酶）GSH和GSSG试剂盒CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒（WST法）ATP酶测试盒（组织及细胞膜需高速离心）ATP酶测试盒（组织及细胞膜不需高速离心）ATP检测试剂盒。

抗氧化酶测定1.试剂（1）提取液的配置:50 mmol/L Tris–HCl 缓冲液（pH 7.0）内含20 %甘油，1 mmol/L EDTA1 mmol/L ASA抗坏血酸1 mmol/L DTT二硫苏糖醇1 mmol/L GSH还原型谷胱甘肽5 mmol/L MgCl2（2）反应混合液A：50mmol/LTris- HCl 缓冲液（pH 7.8），内含0.1 mmol/L EDTA，0.1 mmol/L NBT(氯化硝基四氮唑兰817.60)，13.37 mmol/L 蛋氨酸。

（3）0.1 mmol/L 核黄素溶液(用内含0.1mmol/L EDTA 的pH为7.8的50 mmol/ L Tris - HCl 缓冲液配制)（4）反应混合液B:50 mmol/L Tris - HCl 缓冲液，pH 7. 0，内含0.1 mmol/L EDTA（5）750 mmol/L H2O2（6）反应混合液C:50 mmol/ LTris-HCl 缓冲液，pH 7.0，内含0.1 mmol/ L EDTA，10 mmol/L 愈创木酚，5 mmol/L H2O2.2.方法准确称取0.5 g鲜样，加入预冷的提取液3 mL，充分冰浴研磨后，转入离心管中，再用2 mL提取液清洗研钵，合并提取液并于4℃下10 000×g离心20 min，将上清液分装，于－70℃保存进行酶活性分析。

超氧化物歧化酶（SOD）的测定。

按照Giannopolitis等（1977）和李忠光的方法，测定时，反应混合液A和0.1 mmol/L 核黄素预先于25℃水浴中预热。

取反应混合液A2.88 ml(最大光还原管为2.9 ml，不加酶液)，加入酶液20μl ，再加入核黄素溶液100μl，终体积为3ml，25℃下距离120瓦(30瓦/管) 日光灯7cm(光强约1500 Lux) 进行光化还原反应30 min，到时用黑布蒙住，在无灯光照射的室内快速测定A560。