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人类X染色质的制备与观察摘要：人类X染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
根据X染色体失活与Lyon假说，雌性哺乳动物的两条X染色体中，只有一条X染色体有转录活性，另一条X染色体无转录活性，呈固缩状，形成X染色质。
失活发生在胚胎发育早期，且失活是随机的。
本实验以人口腔颊部粘膜细胞、发根毛囊细胞为材料制备X染色质标本，通过硫瑾染色、压片等方法观察巴氏小体。
本次试验的目的是掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位，了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1.引言1.1巴氏小体人类有23对染色体，其中22对为常染色体，另一对为性染色体。
女性为XX，男性为XY。
X与Y染色体有一部分是同源的，在减数分裂时可以相互配对，其余部分则不同源。
Y 染色体含有很少的基因，而X染色体则含有大量的基因。
男性与女性的常染色体数目是一样的，所含有的基因数目也相等；但是女性含有两条X染色体，而男性一条X一条Y，因此女性性染色体所携带的基因剂量远高于男性，然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男性是大体相同的，其原因可以用剂量补偿效应解释。
剂量补偿效应(dosage compensation effect)的定义: 在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
也就是说，在雌性和雄性细胞里，由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。
剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)，只有一条X 染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是X染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性，但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。
实验九人类染色质体的检测
一、实验目的
1．了解X染色质体形成的机理；
2．观察巴氏小体的位置和形态并绘制几种巴氏小体；
3．观察男性Y小体的特征。
二、实验准备
（按每实验小组2人准备）
1．仪器
显微镜1台、倒置显微镜一台（通用）、冰箱1台（通用）、荧光显微镜一台（通用）干燥箱1台（通用）
2．器械（均放在小磁盘内）
镊子2、解剖针2、剪子2、玻片架1、
3．药品（4人一套）
醋酸洋红、1mol HCl、0.05%吖啶橙（通用）、二甲苯（通用）[均分装在60ml滴瓶]、蒸馏水10L（通用）
4．耗材
载玻片4、盖玻片6、滤纸2、牙签2、口杯1、擦镜纸1本（通用）、
5．材料
口腔上皮细胞
三、实验原理
Lyon假说：
1．哺乳动物雌性动物个体中的2条X染色体必定有一条失活，成异固缩状态——X染色质体；
2．失活的X染色体来源是随机的，可能来自父亲，也可能来自母亲；
3．失活发生在4000~6000个细胞时。
一旦X染色体失活，不再发挥作用。
四、实验步骤
1．X染色质体的鉴定
清水漱口→用牙签刮取少许口腔上皮细胞→涂于干净玻片上→洋红染色20~30min→盖盖玻片→覆滤纸→压片→吸去多余染液→低倍观察→高倍镜下绘图→计算女性中有X染色质体的数目和百分率。
另：可分别拔取男、女各一头发→将发根毛囊细胞涂与干净玻片上，其他方法同上。
2．Y小体的观察
清水漱口→用牙签刮取少许口腔上皮细胞→涂于干净玻片上→滴一滴吖啶橙染液→迅速在荧光显微镜下观察Y小体→绘图
五、作业
1．绘女性X染色质体图
2．计算正常女性具有X染色质体的数目
3．描述Y小体的结构和特征。
人类X染色质标本的制备与观察张皓予1533５20３一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
２、正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3、说明人体细胞中核内Ｘ染色体的数目与性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理Ｘ染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后,便可观察到染色较浓,多位于核膜内侧缘,呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形,直径约１μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40％~60%。
Baｒr与Berｔｒam首先(1949)在雌性猫的神经细胞核中发现,在多数核中部有一个小的深染的小体,而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体,此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类与灵长类等动物的多数组织细胞中存在,而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex ｃhｒomaｔin),或称为“巴氏小体”(Baｒｒboｄy)。
这种小体常位于核膜的内表面,呈Fｅｕlｇe ｎ阳性反应,表明就是DNA的成分,有证据表明,性染色质的存在就是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体,其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体,那就会有一个性染色质,虽然表现为男性。
同样,ＸXＸ的三体应当有两个巴氏小体。
因此,性染色质实质上就是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来？目前,已有许多证据证明,在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化,成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明,失活的X染色体的固缩周期与其它染色体就是不同步的,它在S期就是晚复制的。
此外,人们也已发现,晚复制的这根X染色体常位于核的边缘,这个位置也正好就是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂１.仪器与用具显微镜,水浴锅,牙签,载玻片,盖玻片,镊子,吸水纸。
人类X染色质的制备与观察摘要：本实验旨在掌握鉴定人类X染色质的方法，通过将人体口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞解离、染色等步骤制片，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位。
同时了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1引言：1949年加拿大学者Barr和Bertram在一些雌猫神经原细胞核中, 发现在核膜内缘有一个染色较深的近似三角形的小体, 在雄猫中没有发现。
根据后来的深入研究发现，这个染色较深的小体和性别有关。
直到1971年巴黎会议上正式被命名为X 染色质。
以后的研究表明巴氏小体是一个异染色质化的失活的x 染色体。
在正常的男性细胞中只有一个X 染色体,是正常有活性的, 因此男性细胞中没有巴氏小体。
而在正常女性细胞中有二个X 染色体, 其中一个正常, 另一个异染色质化因此在女性细胞中可见到一个巴氏小体。
巴氏小体的个数= X 染色体个数一1 ，大都出现在核膜边缘。
性染色质在人类中，正常男性个体出现的比例约为1%，正常女性约为17-39%，在由性染色体数目异常而引起的性别畸型( X O 除外) 患者的细胞中, 可见到一个或一个以上巴氏小体。
因而通过巴氏小体检查可鉴别胎儿的性别和诊断性染色体异常引起的遗传疾病。
1961 年, 英国遗传学家Lyon 根据前人和自己的研究发表了莱昂假说, 明确提出了单个X染色体随机失活从而在两性间保证X 连锁基因转录水平一致的论点, 并为现在的科学家所普遍接受。
普遍认为, 巴氏小体的形成是与一个非编码RNA XIST 的大量且特异表达有关, 大量的XIST 顺式作用在其中一条X染色体上, 引发了该条染色质的广泛甲基化从而导致异染色质的形成, 使其上的基因出现表达沉默现象。
2 实验材料和方法：2.1实验材料和仪器：1）显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、牙签；2）硫瑾染液；3）1mol/L的HCl、蒸馏水；4）口腔颊部粘膜细胞和毛囊细胞。
实验三人类染色质体的检测一、实验目的1．通过人口腔粘膜细胞性染色质的观察学习有关异染色质、功能性异染色质、x 染色体失活等有关知识，2.学习性染色质制备、观察与分析的方法。
二、实验原理早在六十年代，Barr和Bertram在雌性猫的神经细胞核中发现，在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin)，或称为“巴氏小体”(Barr body)。
这种小体常位于核膜的内表面，呈Feulgen阳性反应，表明是DNA的成分(图1)，有证据表明，性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体，其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质．但如果一个男人有XXY染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。
同样，XXX的三体应当有两个巴氏小体。
因此，性染色质实质上是一个失活的X染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化，成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明，失活的X染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的，它在S期是晚复制的。
此外，人们也已发现，晚复制的这根X染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。
三、实验准备1.器材：显微镜，镜油瓶，镊子，擦镜纸，漱口杯(灭菌)，压舌板(灭菌)，清洁玻片、盖玻片。
2.试剂：二甲苯，5N HCl，1％硫堇水溶液，蒸馏水、封固剂；酒精：50％，70％，95％，纯酒精。
四、实验步骤（一）材料的获得从自己的口腔粘膜取材，有两点需要特别注意的事项。
首先载片要绝对清洁，否则在操作过程中上皮细胞会脱落，导致实验失败。
