人类性染色质检查与观察

⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）制备与观察⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）的制备与观察摘要巴⽒⼩体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染⾊体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染⾊⼩体，在遗传学、细胞观察⽅⾯有重要意义。

实验中作者取⼈⼝腔颊部上⽪细胞与发根⽑囊细胞进⾏硫瑾染⾊操作，通过显微观察对巴⽒⼩体进⾏识别与计数，描述巴⽒⼩体的形态，并统计其在不同性别⼈体细胞中的出现率。

引⾔在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除⼀条X染⾊体外，其余的X染⾊体失活并呈异固缩状态，此即为巴⽒⼩体。

⼜称X⼩体、性染⾊质，直径约1µm，通常位于间期核膜边缘。

1949年，加拿⼤学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现⼀种染⾊很深的⼩体，⽽在雄性猫中则极少出现[1]。

通常⼈类男性细胞核中很少或没有巴⽒⼩体，⽽⼥性有1个，性染⾊体异常的患者如XXY、XXYY、XXX、XXXY等，巴⽒⼩体的数量＝X染⾊体数量－1。

综合巴⽒⼩体与哺乳动物性染⾊体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染⾊体只有⼀条在遗传上有活性，另外⼀条失活；(2)X染⾊体失活是随机的。

因此表达是随机的，结果在杂合⼦中会出现嵌合现象（mosaic）。

例外：有袋类失活的X染⾊体全部是⽗⽅的。

(3)失活发⽣在胚胎发育的早期，如⼈在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。

⼀个细胞的⼀条染⾊体⼀旦失活，这个细胞的后代细胞中该染⾊体均失活。

Lyon假说虽然可以解释⼀些问题但不是全部，如⼈类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。

随着⽣物学和医学的发展⼈们已经认识到单条X染⾊体失活现象是普遍存在的，但失活的染⾊体上存在失活区和⾮失活的。

如⼈类中位于X染⾊体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶⾎第Ⅷ因⼦）等是⾮失活的，⽽Xg⾎型基因是失活的。

姓名班级同组人科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组一、研究背景1949年，美国人Barr发现，雌猫神经元细胞核中在间期有一个深染的小体，而雄猫没有。

以后在其他哺乳动物中发现同样现象。

称为Barr’s body，巴氏小体。

研究发现巴氏小体的数目＝x染色体数-11961年Mary Lyon提出巴氏小体是通过异固缩形成异染色体而失活的X染色体，是达到雌雄两性X染色体上活性基因剂量平衡的一种补偿方式。

巴氏小体也被称为性染色质体或 X染色质体。

Lyon假说的要点：1. X染色体失活发生在胚胎发育的早期（受精后的16天左右，胚胎的细胞数达到5000～6000左右，植入子宫壁时），一旦失活，其上的大部分基因也失去表达活性；2. 每一体细胞中哪一条x染色体失活是随机的；3. X染色体的失活状态可以通过有丝分裂传递，即一旦某条X染色体失活，在其所有子细胞中都是同样一条X染色体失活。

修正：失活的X染色体上并非全部基因都呈莱昂化（失活）：①呈莱昂化（失活）的基因如G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血Ⅷ因子）；这些基因表现了完全的失活，即XGXG≈XGY②非莱昂化基因：如Xg血型基因、MIC2抗原基因等，这些基因无论在有活性还是在无活性的X染色体上都能够表达。

即 XGXG≈XGY的2倍③不完全的剂量补偿效应：如 XSXS 的产物是 XSY 产物的1.3倍，而没有达到2倍。

二、研究目的1、确定巴氏小体的位置，观察巴氏小体的形态；2、尝试通过观察巴氏小体的有无进一步验证性别三、实验原理巴氏小体形态：在间期也表现为浓缩致密的、深染的结构，在DNA复制期表现为晚复制。

大小约1～1.5微米。

女性细胞中观察到的频率为13～39％，正常男性0～2％。

但是：1.生殖细胞中不发生X染色体失活。

2.失活的X染色体上有活性基因似乎是与失活基因相嵌存在。

因此，哺乳动物的雌性就X染色体上基因的作用来说是嵌合体。

四、实验器材1、女生的口腔上皮细胞2、载玻片姓名班级同组人科目遗传实验题目人类性染色质体观察组别第五组五、实验试剂95%乙醇水溶液、1 mol/L 的HCl、改良酚红液六、实验步骤1. 涂片(1) 清洁口腔:细胞提供者需重复两三次用水漱口,以便去掉松动的上皮细胞和细菌.(2) 然后用清洁灭菌的牙签或适当的刮片,从女性口腔两颊刮取上皮黏膜细胞, 涂抹在干净载玻片上,每次可涂1～3 片,涂抹范围大约1～2 张盖玻片大小.2. 滴加1 mol/L 的HCl水解10 min。