硝酸盐还原实验试剂

硝酸还原酶（NR）活性测定试剂盒说明书硝酸还原酶（Nitrate Reductase，NR）活性测定试剂盒说明书微量法100管/96样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做预测定测定意义：NR（ EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。

测定原理：NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及α 萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：诱导剂储备液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体10mL×1瓶，20℃保存。

试剂二：液体5mL×1瓶，20℃保存；试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存（如出现结晶析出，60℃90℃水浴溶解后使用）；试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。

试剂五：标准储备液1mL，20℃保存。

诱导剂应用液的配制：用时将诱导剂储备液稀释10倍，即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水，充分混匀。

0.1umol/mL的标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取 0.1ml试剂五加9.9mL蒸馏水，充分混匀。

样本前处理：动植物组织样品的前处理:（1）取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可），浸泡2h，取出样本，滤纸吸干。

（2）按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

硝酸还原酶活性测定实验报告硝酸还原酶活性测定实验报告引言：硝酸还原酶是一种重要的酶类，在生物体内负责将硝酸盐还原为亚硝酸盐。

硝酸还原酶活性的测定对于研究生物体对硝酸盐的代谢和环境污染物的检测具有重要意义。

本实验旨在探究硝酸还原酶的活性测定方法，并通过实验验证其可行性和准确性。

材料与方法：1. 实验材料：- 0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）- 0.1 mol/L 硝酸钠溶液- 0.1 mol/L 硫酸铵溶液- 1% 硫胺素溶液- 10% 硝酸盐还原酶提取液- 10% 硝酸盐还原酶抑制剂- 2% 硝酸盐还原酶底物溶液- 0.1 mol/L 硫酸铵铵铁硫氰化物溶液- 0.1 mol/L 醋酸溶液- 蒸馏水2. 实验仪器：- 分光光度计- 定量移液器- 离心机- 恒温水浴槽- 试管架- 显微镜实验步骤：1. 提取硝酸盐还原酶：a. 取一定量的样品（如细胞或组织），加入磷酸盐缓冲液，用搅拌器充分破碎。

b. 将破碎后的样品转移至离心管中，以12000 rpm离心10分钟。

c. 取上清液，即为硝酸盐还原酶提取液。

2. 硝酸还原酶活性测定：a. 准备一组空白对照组，加入相同体积的磷酸盐缓冲液代替硝酸盐还原酶提取液。

b. 准备一组实验组，加入一定体积的硝酸盐还原酶提取液。

c. 分别加入一定体积的硝酸钠溶液、硫酸铵溶液、硫胺素溶液和硝酸盐还原酶底物溶液。

d. 在恒温水浴槽中，将反应体系恒温30分钟。

e. 加入硝酸盐还原酶抑制剂停止反应。

f. 加入硫酸铵铵铁硫氰化物溶液，使反应产生红色沉淀。

g. 加入醋酸溶液，混匀后离心10分钟。

h. 取上清液，以分光光度计测定其吸光度。

结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一组吸光度数据。

根据吸光度与硝酸还原酶活性之间的关系，我们可以计算出样品中硝酸还原酶的活性。

在本实验中，我们采用了硫酸铵铵铁硫氰化物法测定硝酸还原酶活性。

该方法利用硝酸还原酶将硝酸盐还原为亚硝酸盐，再与硫酸铵铵铁硫氰化物反应生成红色沉淀。

实验数据总结COD指标检测一、重铬酸钾法测定（CODCr）的原理在强酸性溶液中，准确加入过量的重铬酸钾标准溶液，加热回流，将水样中还原性物质（主要是有机物）氧化，过量的重铬酸钾以试亚铁灵作指示剂，用硫酸亚铁铵标准溶液回滴，根据所消耗的重铬酸钾标准溶液量计算水样化学需氧量。

二、仪器1、500ml 全玻璃回流装置。

2、加热装置（电炉）。

3、25ml 或50ml 酸式滴定管、锥形瓶、移液管、容量瓶等。

三、试剂1、重铬酸钾标准溶液（C1/6K2Cr2O7）；称取预先在120℃烘干2h 的基准或优质纯重铬酸钾12.258g 溶于水中，移入1000ml 容量瓶，稀释至标准线，摇匀。

2、试亚铁灵指示液：称取1.485g 邻菲啰啉（C12H8N2•H2O）、0.695g 硫酸亚铁（FeSO4•7H2O）溶于水中，稀释至100ml，储于棕色瓶内。

3、硫酸亚铁铵标准溶液（C(NH4)2 Fe(SO4)2•6H2O）：称取39.5g 硫酸亚铁铵溶于水中，边搅拌边缓慢加入20ml 浓硫酸，冷却后移入1000ml 容量瓶中，加水稀释至标线，摇匀。

临用前，用重铬酸钾标准溶液标定。

标定方法：准确吸取10.00ml 重铬酸钾标准溶液于500ml 锥形瓶中，加水稀释至110ml 左右，缓慢加入30ml 浓硫酸，混匀。

冷却后，加入3 滴试亚铁灵指示液（约0.15ml），用硫酸亚铁铵溶液滴定，溶液的颜色由黄色经蓝绿色至红褐色即为终点。

C=0.2500×10.00/V式中：C-----硫酸亚铁铵标准溶液的浓度（mol/L）；V-----硫酸亚铁铵标准溶液的用量（ml）。

4、硫酸-硫酸银溶液：于500ml 浓硫酸中加入5g 硫酸银。

放置1-2d，不时摇动使其溶解。

5、硫酸汞：结晶或粉末。

四、测定步骤1、移液管移水样5.00mL于消解罐中，加入5.00mL消解液（重铬酸钾），即时摇匀，再加入5.00mL催化剂（硫酸-硫酸银溶液），摇匀。

斐林试液原理一、引言斐林试液是一种常用于检测硝酸盐的试剂，其原理基于硝酸盐与铁离子之间的反应。

本文将详细介绍斐林试液的原理及其应用。

二、斐林试液的制备斐林试液的制备相对简单，一般由硝酸铁与硫酸组成。

首先，将适量硝酸铁溶解于水中，然后加入适量硫酸搅拌均匀即可。

制备好的斐林试液呈红褐色或深红色，可以长时间保存。

三、斐林试液的原理斐林试液的原理基于硝酸盐与铁离子之间的反应。

硝酸盐在斐林试液中，与其中的铁离子发生氧化还原反应。

具体反应方程式如下：2Fe3+ + NO3- + 6H+ → 2Fe2+ + NO + 3H2O通过这个反应，硝酸盐被还原成一氧化氮（NO），而铁离子则被氧化成Fe2+。

由于反应生成的一氧化氮具有特殊的性质，可以通过颜色变化来进行检测。

四、斐林试液的应用斐林试液广泛应用于水质监测、环境科学、食品安全等领域。

以下是斐林试液的主要应用：1. 水质监测斐林试液可以用于检测水中的硝酸盐含量。

水体中过量的硝酸盐会给人体健康带来潜在风险，因此对水质中硝酸盐含量的监测至关重要。

通过斐林试液，可以快速、准确地检测水中硝酸盐的含量。

2. 食品安全斐林试液也可以用于检测食品中的硝酸盐含量。

某些食品中可能含有过量的硝酸盐，如腌制食品、一些肉制品等。

通过使用斐林试液，可以对食品中的硝酸盐含量进行快速检测，保障食品安全。

3. 环境科学研究斐林试液在环境科学研究中也有广泛的应用。

例如，通过斐林试液可以监测土壤中的硝酸盐含量，评估土壤肥力以及判断土壤污染程度。

此外，斐林试液还可以用于监测大气中的硝酸盐含量，评估空气质量。

五、斐林试液的优缺点斐林试液作为一种常用的硝酸盐检测试剂，具有以下优点：1. 使用方便：斐林试液制备简单，操作方便，可以在实验室和野外进行。

2. 检测灵敏：斐林试液对硝酸盐具有较高的灵敏度，可以检测到较低浓度的硝酸盐。

3. 快速可视化：斐林试液通过颜色变化来显示结果，可以快速判断样品中硝酸盐的含量。

硝酸盐还原试验
（1）原理：硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。

能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物。

但硝酸盐还原的过程因细菌不同而异，有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌等。

硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸。

（2）培养基：硝酸盐培养基。

（3）试剂：甲液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸lOOml；乙液（α-奈胺0.5g + 5mol/L醋酸lOOml）。

（4）方法：被检菌接种于硝酸盐培养基中，于35℃培养l～4d.将甲、乙液等量混合后（约0.1m1）加入培养基内，立即观察结
果。

（5）结果：出现红色为阳性。

若加入试剂后无颜色反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，
如出现红色则表明试验确实为阴性。

若仍不产生红色，表示试验
为假阴性。

若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小倒管，如有气
泡产生，表示有氮气生成。

（6）应用：本试验在细菌鉴定中广泛应用。

肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。

硝酸盐氮测定（硫酸肼还原法）一、原理：在碱性条件下，铜-锌催化剂存在时，硫酸肼将硝酸根定量地还原成亚硝酸根。

亚硝酸根离子在酸性条件下与对氨基苯磺酰胺生成重氮化合物，后者与盐酸萘乙二胺偶合，生成紫红色偶氮化合物，比色定量。

二、试剂配制铜-锌催化溶液：取0.080g五水硫酸铜（CuSO4·5H2O，249.8）和 1.76g七水硫酸锌（ZnSO4·7H2O，287.56），加水溶解至1L。

0.07%的硫酸肼溶液：取0.07g硫酸肼，加100mL水溶解。

0.1%的盐酸萘乙二胺溶液：取0.1g盐酸萘乙二胺，加100mL水溶解。

1%的磺胺溶液：取2g对氨基苯磺酰胺，溶于60mL盐酸（1.19g/mL）和80mL水中，溶解后加水至200mL。

10%的氢氧化钠溶液硝酸盐氮标准溶液：称取在105-110℃烘烤2h的硝酸钾（KNO3，101.10）0.7218g加水溶解，定容至1L，并加入2mL氯仿做保存剂，此溶液1mL含0.100mgNO3-N，临用时稀释成1µg/mL。

三、实验步骤标准曲线：取6支25mL具塞比色管，分别加入标准溶液（1µg/mL）0、1、2、3、4、5mL，加水至10mL，加入10%的氢氧化钠溶液0.5mL，混匀，再加铜-锌催化液和硫酸肼溶液各1mL，混匀，于恒温水浴（36±1）℃1h，取出放冷（或用冷水冷却），加入磺胺溶液1mL，摇匀，5min后加入盐酸萘乙二胺溶液1mL，加水至25mL刻度线，混匀。

20min后于550nm 波长10mm比色皿中比色。

以吸光度对硝酸盐氮绘制标准曲线。

样品测定：吸取一定量试样（0.5-5µg硝酸盐氮）置于25mL比色管中，其它同标准曲线。

硝酸盐还原试验
硝酸盐还原试验是一种化学检验方法，通过观察反应后的物质颜色变化来确定样品中是否存在硝酸盐。

硝酸盐还原试验由于其操作简单、准确、敏感等特点，广泛应用于环境、医药、工业等领域。

硝酸盐还原试验的原理是将硝酸盐还原成氮气。

在试验过程中，常用还原剂为亚硫酸钠或异硫氰酸铵，也可使用硫酸亚铁或亚硫酸氢钠等还原剂。

硝酸盐和还原剂经过反应后，产生的氮气可以通过气体收集管收集并测量体积，以确定反应的程度，从而判断硝酸盐是否存在。

硝酸盐还原试验具有以下优点：
1. 操作简便。

硝酸盐还原试验不需要复杂的实验设备，只需要简单的试剂和装置，操作简单方便。

2. 准确度高。

在试验中，亚硫酸钠或异硫氰酸铵都是高纯度的试剂，为了保证试验的准确，试剂的纯度要求非常高，因此试验准确度较高。

3. 敏感度高。

硝酸盐还原试验对于硝酸盐的检测十分敏感，只需极小的含量就可以被检测到。

4. 适用范围广。

硝酸盐还原试验适用于环境、医药、工业等领域。

例如，检测废水中硝酸盐浓度，检测食品中硝酸盐含量等。

硝酸盐还原试验可能存在的问题：
1. 试剂使用过程中易受环境影响。

如，试剂可能受到影响而影响准确度，例如与环境空气中的氮氧化物反应，导致无法正确检测到硝酸盐。

2. 小量检测难度大。

当样品中硝酸盐含量少时，检测的准确性会受到影响，因此需要多次重复试验以提高准确度和可信度。

总之，硝酸盐还原试验对于检测硝酸盐的含量和浓度具有良好的效果和应用前景，特别适用于农业、环境科学等领域。

细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。

生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。

本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。

二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。

三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。

四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。

结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。

若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。

2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。

3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。

结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。

4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。

结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。

硝酸盐还原试验••减少硝酸盐含量的测试可以帮助鉴定奈瑟氏球菌，并将其与莫拉氏菌和金氏菌等其他菌种区分开。

•它有助于区分淋病奈瑟氏球菌和反硝化克氏杆菌。

•它有助于识别棒状杆菌。

••被测生物具有强大的硝酸盐还原酶，可将硝酸盐进一步还原为氨或分子N2。

注意：仅需向培养物中添加少量锌粉，便需要进一步测试。

锌粉的作用是将硝酸盐还原为亚硝酸盐。

注意颜色的变化。

添加锌粉后，如果颜色变为红色，则表示硝酸盐未还原。

硝酸盐还原测试需要哪些材料？•用倒置的Durhams管专门培养基硝酸盐肉汤•试剂种类oα萘胺试剂o亚硫酸试剂o锌粉•刻录机•接种环•滴管•被测试的生物•保温箱2. 孵化。

3. 向肉汤中加入一滴磺胺酸和一滴α萘胺。

4. 如果颜色变为红色，则表示被测生物对硝酸盐还原测试呈阳性。

如果在添加必要的试剂后培养物未变红，则需要执行下一步，即添加锌粉。

仔细检查颜色是否变化。

如果颜色变为红色，则表示被测生物对硝酸盐还原测试呈阴性。

•亚硝酸盐。

但是，应执行另一步骤以确认结果是否为真阴性。

为什么？因为某些生物体具有将硝酸盐进一步还原为亚硝酸盐的另一个分子的能力。

因此，您需要在肉汤中添加少量锌粉。

锌的作用是它将催化硝酸盐还原为亚硝酸盐。

如果介质的颜色变为红色，则表示结果为真负片。

如果添加锌粉后颜色未发生变化，则表示结果为阳性。

•阳性–如果添加试剂后颜色变为樱桃红色，则硝酸盐还原测试为阳性。

如果采取了其他步骤（例如添加锌粉），则在添加锌粉后介质的颜色未变为红色的情况下，结果为肯定。

安全措施试剂α萘胺和亚硫酸是有毒的，吞咽时可能极为有害和致命。

这些试剂应具有良好的腐蚀性，因此应妥善处理，并且不应与皮肤，眼睛和呼吸道接触。

如果试剂与您的眼睛接触，应立即用水冲洗并寻求医疗帮助。

另一方面，锌粉与水接触后极易燃烧。

存放锌粉时，必须确保将其存放在密闭且干燥的容器中。

万一着火，请勿用水。

您可以使用沙子或二氧化碳灭火。